專利名稱：：作為丙型肝炎病毒ns3絲氨酸蛋白酶抑制劑的硫化合物的制作方法作為丙型肝炎病毒NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑的硫化合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新的丙型肝炎病毒("HCV")蛋白酶抑制劑，含有一或多種此類抑制劑的藥用組合物，制備此類抑制劑的方法及使用此類抑制劑來(lái)治療丙型肝炎及相關(guān)病癥的方法。本發(fā)明另外公開作為HCVNS3/NS4a絲氨酸蛋白酶的抑制劑的新化合物。
背景技術(shù)：
：丙型肝炎病毒(HCV)為正義((+)-sense)單戚JRNA病毒，已暗示其為非曱非乙型肝炎(NANBH)，尤其是與血液相關(guān)的NANBH(BB-NANBH)中的主要病原體(參見，國(guó)際專利申請(qǐng)公布號(hào)WO89/04669及歐洲專利申請(qǐng)公布號(hào)EP381216)。NANBH與其它類型的病毒誘發(fā)的肝病，諸如甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、S型肝炎病毒(HDV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)及厄潑斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barrvirus;EBV)不同，也與諸如酒精中毒及原發(fā)性膽汁性肝石更化的其它形式肝病不同。近來(lái)，多肽加工及病毒復(fù)制所必需的HCV蛋白酶已被鑒別、克隆及表達(dá)(例如，參見美國(guó)專利第5,712，145號(hào))。這種約3000個(gè)氨基酸多蛋白自氨基末端至羧基末端含有核殼蛋白(C)、包膜蛋白(E1和E2)和若干非結(jié)構(gòu)性蛋白(NS1、2、3、4a、5a和5b)。NS3為由HCV基因組的約1893個(gè)核香酸編碼的約68kda蛋白，且具有兩個(gè)不同域(a)由約200個(gè)N末端氨基酸組成的絲氨酸蛋白酶域；和(b)在蛋白質(zhì)的C末端的RNA依賴性ATP酶域。由于蛋白質(zhì)序列、總體三維結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制的相似性，認(rèn)為NS3蛋白酶為胰凝乳蛋白酶家族的一成員。其它類胰凝乳蛋白酶為彈性蛋白酶、Xa因子、凝血酶、胰蛋白酶、纖溶酶、尿激22說(shuō)明書第2/91頁(yè)酶、tPA和PSA。HCVNS3絲氨酸蛋白酶負(fù)責(zé)多肽(多蛋白)于NS3/NS4a、NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接合點(diǎn)的蛋白水解，且因此負(fù)責(zé)在病毒復(fù)制期間產(chǎn)生四種病毒蛋白。這使得HCVNS3絲氨酸蛋白酶成為抗病毒化學(xué)療法的有吸引力的目標(biāo)。本發(fā)明化合物可抑制這樣的蛋白酶。其也可調(diào)節(jié)丙型肝炎病毒(HCV)多肽的加工。已確定NS4a蛋白(約6kda多肽)為NS3絲氨酸蛋白酶活性的輔因子。NS3/NS4a絲氨酸蛋白酶在NS3/NS4a接合點(diǎn)的自動(dòng)裂解發(fā)生于分子內(nèi)(即，順式)，而其它裂解位點(diǎn)在分子間進(jìn)行(即，反式)。HCV蛋白酶的天然裂解位點(diǎn)的分析揭示在P1處存在半胱氨酸且在P1'處存在絲氨酸，且這些殘基于NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接合處極其保守。NS3/NS4a接合點(diǎn)在Pl處含有蘇氨酸且在Pl'處含有絲氨酸。推測(cè)NS3/NS4a處的Cys—Thr取代解釋在此接合點(diǎn)需要順式而非反式加工。例如參見Pizzi等，H994)Proc.Natl.Acad.Sci(USA)￡1:888-892;Failla等，(1996)Folding&Design1:35-42。NS3/NS4a裂解位點(diǎn)也比其它位點(diǎn)更耐受突變。例如參見Kollykhalov等，(1994)J.Virol.68:7525-7533。也已發(fā)現(xiàn)有效裂解需要在裂解位點(diǎn)上游區(qū)域中的酸性殘基。例如參見Komoda等，"994)J.Virol.巡7351-7357。已報(bào)導(dǎo)的HCV蛋白酶抑制劑包括抗氧化劑(參見國(guó)際專利申請(qǐng)公布號(hào)WO98/14181)、某些肽和肽類似物(參見國(guó)際專利申請(qǐng)^^布號(hào)WO98/17679;Landro等，(1997)Biochem.36:9340-9348;Ingallinella等，(1998)Biochem.12:8906-8914;Llir^s-Brunet等，(1998)Bioorg.Med.Chem.Lett.且:1713-1718)、基于70個(gè)氨基酸多肽水蛭蛋白抑制劑c(eglinc)的抑制劑(Martin等，(1998)Biochem.37:11459-11468)、選自人胰腺分泌胰蛋白酶抑制劑(hPSTI-C3)和微型抗體譜(MBip)的抑制劑親和性(Dimasi等，(1997)J.Virol.21:7461-7469)、cVHE2("駱駝化(camelized)"可變域抗體片段)(Martin等(1997)ProteinEng.邊:607-614)和al-抗胰凝乳蛋白酶(ACT)(Elzouki等，(1997)J.Hepat.27:42-28)。近來(lái)已公開經(jīng)設(shè)計(jì)來(lái)選擇性破壞丙型肝炎病毒RNA的核酶(參見所o『orW7b^y9(217):4(1998年1l月10曰))。也參考1998年4月30日公布的PCT公布號(hào)WO98/17679(VertexPharmaceuticalsIncorporated);1998年5月28日公布的WO98/22496(F.Hoffmann-LaRocheAG);和1999年2月18日公布的WO99/07734(BoehringerIngelheimCanadaLtd.)。HCV涉及肝硬化和肝細(xì)胞癌的誘發(fā)中。患有HCV感染的患者的預(yù)后目前仍較差。HCV感染因缺乏與HCV感染相關(guān)的免疫性或癥狀緩解而比其它形式的肝炎更難以治療。目前資料表明肝硬化診斷后四年存活率小于50%。經(jīng)診斷患有可局部切除的肝細(xì)胞癌的患者具有10%-30%的五年存活率，而患有不可局部切除的肝細(xì)胞癌的患者具有小于1%的五年存活率。參考WO00/59929(US6，608，027，受讓人BoehringerIngelheim(Canada)Ltd.;2000年10月12日公布)，其公開下式的肽書亍生物參考A.Marchetti等，5>"/故，§1，1000-1002(l999),其描述HCVNS3蛋白酶抑制劑的雙環(huán)類似物的合成。其中所公開的化合物具有下式也參考W.Han等，所oo^a"/cc&Afe&"'"a/C7ze肌(2000)711-713,其描述含有烯丙基和乙基官能團(tuán)的某些a-酮酰胺、a-酮酯和a-二酮的制備。也參考WO00/09558(受讓人BoehringerIngelheimLimited;2000年2月24日公開)，其公開下式的肽衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中各種要素在本文中定義。該系列的示例性化合物為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>也參考WO00/09543(受讓人BoehringerIngelheimLimited;2000年2月24日公布)，其公開下式的肽衍生物其中各種要素在本文中定義。該系列的示例性化合物為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中各種部分在本文中定義。丙型肝炎的目前療法包括干擾素-a(INFJ和利巴韋林(ribavirin)與干擾素的組合療法。例如參見Beremguer等，"998)Proc.Assoc.Am.Physicians面2):98-112。這些療法具有持續(xù)性低反應(yīng)率和頻繁可見的副作用。例如參見Hoofnagle等，"997)N.Engl.J.Med.336:347。目前，尚無(wú)可用于HCV感染的疫苗。此外參考2001年10月11日公布的WO01/74768(受讓人:VertexPharmaceuticalsInc),其公開作為丙型肝炎病毒的NS3-絲氨酸蛋白酶PCT乂^布號(hào)WO01/77113;WO01/081325;WO02/08198;WO02/08256;WO02/08187;WO02/08244;WO02/48172;WO02/08251;和2002年1月18日提交的待審的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)10/052,386號(hào)公開作為丙型肝炎病毒的NS-3絲氨酸蛋白酶抑制劑的各種類型的肽和/或其它化合物。這些申請(qǐng)的公開內(nèi)容通過(guò)5)用結(jié)合到本文中。需要HCV感染的新的治療和療法。需要適用于治療或預(yù)防或改善丙型肝炎的一或多種癥狀的化合物。需要治療或預(yù)防或改善丙型肝炎的一或多種癥狀的方法。需要使用本文中提供的化合物來(lái)調(diào)節(jié)絲氨酸蛋白酶、尤其是HCVNS3/NS4a絲氨酸蛋白酶的活性的方法。需要使用本文中提供的化合物來(lái)調(diào)節(jié)HCV多肽的加工的方法。發(fā)明概述2005年2月24日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)11/064,673(其于2007年2月22日公開為US2007/0042968),其全部公開內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。在其許多實(shí)施方案中，本發(fā)明提供作為HCV蛋白酶抑制劑的新的化合物，含有一或多種所述化合物的藥用組合物，制備包含一或多種此類化合物的藥物制劑的方法，使用一或多種此類化合物或一或多種此類制劑來(lái)治療或預(yù)防HCV或改善丙型肝炎的一或多種癥狀的方法，和使用一或多種此類化合物或一或多種此類制劑來(lái)調(diào)節(jié)HCV多肽與HCV蛋白酶的相互作用的方法。本發(fā)明公開化合物，以及這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或酯，所述化合物選自下列結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>本發(fā)明化合物的前藥和溶劑合物也包括于本文中。如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)"前藥"表示在給予個(gè)體后經(jīng)歷代謝或化學(xué)過(guò)程的化學(xué)轉(zhuǎn)化而產(chǎn)生式I化合物或其鹽和/或溶劑合物的化合物，也即藥物前體。關(guān)于前藥的i寸i侖^是供于T.Higuchi和V.Stella，iV。-c/h/gsas7Vove/Z)e/Zv^yiSjAsfems(1987),A.CS.SymposiumSeries的14禾口萬(wàn)forevens77)/gCaw'ersi>wgDas一,(1987)EdwardB.Roche編，AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress中，兩者均通過(guò)引用結(jié)合到本文中。"溶劑合物"意謂本發(fā)明的化合物與一或多個(gè)溶劑分子的物理締合。這種物理締合涉及不同程度的離子鍵和共價(jià)鍵，包括氫鍵。在某些情況中，例如當(dāng)將一或多個(gè)溶劑分子并入結(jié)晶固體的晶格中時(shí)，將能夠分離溶劑合物。"溶劑合物"涵蓋溶液相和可分離的溶劑合物。適合的溶劑合物的非限制性實(shí)例包括乙醇合物、曱醇合物等。"水合物"為溶劑分子為H20的溶劑合物。"有效量"或"治療有效量"意欲描述有效抑制HCVNSS/NS化絲氨酸蛋白酶且因此產(chǎn)生所需的治療、改善、抑制或預(yù)防作用的本發(fā)明化合物或組合物的量。本發(fā)明化合物可形成也在本發(fā)明范圍內(nèi)的鹽。除非另外指出，否則本文中提及本發(fā)明化合物應(yīng)理解為包括其鹽。如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)"鹽"表示與無(wú)機(jī)酸和/或有機(jī)酸形成的酸性鹽，以及與無(wú)機(jī)堿和/或有機(jī)堿形成的堿性鹽。另外，當(dāng)本發(fā)明化合物含有堿性部分(例如但不限于吡，定或咪哇)和酸性部分(例如但不限于羧酸)時(shí)，可形成兩性離子("內(nèi)鹽")且其包括于如本文中所用的術(shù)語(yǔ)"鹽"中。盡管其它鹽也適用，但優(yōu)選藥學(xué)上可接受(也即無(wú)毒、生理學(xué)上可接受)的鹽。例如，可通量(例如等當(dāng)量)的酸或義威反應(yīng)，接著凍千來(lái)形成本發(fā)明化合物的鹽。示例性酸加成鹽包括乙酸鹽、抗壞血酸鹽、苯曱酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、曱烷磺酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、曱苯磺酸鹽(也稱為甲苯基磺酸鹽)等。另外，通常認(rèn)為適于由堿性藥用化合物形成藥學(xué)上有用的鹽的酸-淪述于例如以下文獻(xiàn)中P.Stahl等，CamilleG.(編)藥用鹽手冊(cè)，凈爭(zhēng)'l"生、選4奪禾口用途(ifowc^ooA:o/尸/wrmacewf/ca/戶ra/eW"5^/ec//owaw/t/w).(2002)Zurich:Wiley-VCH;S.Berge等，Jow/Tza/尸/wrwacew"'ca/5"".e"cas(1977)66(1)1-19;P.Gould,/wter"(^/owa/o/尸/2orwfleew"cs(1986)H201-217;Anderson等,T7ze尸ra",ceo/C7zew/s/77(1996)，AcademicPress,NewYork;和T7ze(9rawge萬(wàn)ooA:(Food&DrugAdministration,Washington,D.C.，在其網(wǎng)站上)。這些公開內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。示例性堿性鹽包括銨鹽；堿金屬鹽，例如鈉鹽、鋰鹽和鉀鹽；堿土金屬鹽，例如鈣鹽和鎂鹽；與有積J咸(例如有機(jī)胺，例如二環(huán)己胺、叔丁胺)形成的鹽；和與例如精氨酸、賴氨酸等氨基酸形成的鹽。堿性含氮基團(tuán)可經(jīng)例如以下試劑季銨化低級(jí)烷基卣化物(例如曱基、乙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二曱酯、硫酸二乙酯和硫酸二丁酯)、長(zhǎng)鏈卣化物(例如癸基、月桂基和硬酯?；穆然铩寤锖偷饣?、芳烷基卣化物(例如芐基溴和苯乙基溴)等。預(yù)期所有此類酸鹽和堿鹽均為處于本發(fā)明范圍內(nèi)的藥學(xué)上可接受的鹽，且認(rèn)為所有酸鹽和堿鹽與游離形式的本發(fā)明的相應(yīng)化合物等效。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的酯包括以下組別(l)通過(guò)酯化羥基獲得的羧酸酯，其中所述酯類的羧酸部分的非羰基部分選自直鏈或支鏈烷基(例如乙?；⒄?、叔丁基或正丁基)、烷氧基烷基(例如曱氧基曱基)、芳烷基(例如芐基)、芳氧基烷基(例如苯氧基曱基)、芳基(例如任選被例如囟素、CM烷基或CM烷氧基或氨基取代的苯基)；(2)磺酸酯，例如烷基磺?；蚍纪榛酋；?例如曱烷磺酰基)；(3)氨基酸酯(例如L-纈氨酰基或L-異亮氨?；?；(4)膦酸酯和(5)單磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯。磷酸酯可經(jīng)例如d-2。醇或其反應(yīng)性衍生物進(jìn)一步酯化或經(jīng)2,3-二(C6-24)?；视瓦M(jìn)一步酯化。本發(fā)明化合物和其鹽、溶劑合物、酯和前藥可以其互變異構(gòu)形式(例如作為酰胺或亞氨基醚)存在。所有此類互變異構(gòu)形式均作為本發(fā)明的部分涵蓋于本文中。本發(fā)明化合物(包括這些化合物的鹽、溶劑合物、酯和前藥以及這些前藥的鹽和溶劑合物)的所有立體異構(gòu)體(例如，幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體等)，例如可因各種取代基上的不對(duì)稱碳而存在的那些立體異構(gòu)體，包括對(duì)映異構(gòu)形式(其甚至可在不存在不對(duì)稱碳的情況下存在)、幾何異構(gòu)形式、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)形式，其均被包括于本發(fā)明的范圍內(nèi)，位置異構(gòu)體(例如4-吡啶基和3-吡p^S0也包括于本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物的各立體異構(gòu)體可例如基本上不含其它異構(gòu)體，或可例如以外消旋體形式混合，或與所有其它立體異構(gòu)體或其它選擇的立體異構(gòu)體混合。本發(fā)明的手性中心可具有如由/WWC1974推薦的標(biāo)準(zhǔn)(Recommendations)所定義的S或R構(gòu)型。預(yù)期術(shù)語(yǔ)"鹽"、"溶劑合物"、"前藥"等的使用同樣適用于本發(fā)明化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、位置異構(gòu)體、外消旋體或前藥的鹽、溶劑合物和前藥。本發(fā)明化合物和其鹽、溶劑合物、酯和前藥的多晶型意欲包括于本發(fā)明中。應(yīng)了解本文中所討論的本發(fā)明化合物對(duì)于治療應(yīng)用的效用可應(yīng)用于各化合物自身或例如緊接下一段落中所述的一或多種化合物的組合。相同的理解也適用于包含此種或這些化合物的藥用組合物和涉及此種或這些化合物的治療方法。本發(fā)明的化合物可具有藥理學(xué)性質(zhì)；特別是，本發(fā)明化合物可為HCV蛋白酶抑制劑，各化合物自身或與一或多種選自上文列出的本發(fā)明化合物的化合物組合。所述化合物可適用于治療例如HCV、HIV、50(AIDS,獲得性免疫缺陷綜合征)的疾病和相關(guān)病癥，以及用于調(diào)節(jié)丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶的活性，預(yù)防HCV或改善丙型肝炎的一或多種癥狀。本發(fā)明化合物可用于制備用于治療與HCV蛋白酶相關(guān)的病癥的藥物，例如，該方法包含使本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的載體緊密接觸。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含作為活性成分的一或多種本發(fā)明化合物的藥用組合物。這些藥用組合物通常另外包含至少一種藥學(xué)上可接受的載體稀釋劑、賦形劑或載體(在本文中統(tǒng)稱為載體物質(zhì))。的效用。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明公開用于制備包含作為活性成分的本發(fā)明化合物的藥用組合物的方法。在本發(fā)明的藥用組合物和方法中，活性成分通常與根據(jù)預(yù)期的給藥形式(即口服片劑、膠嚢(固體填充、半固體填充或液體填充)、用于重新構(gòu)成的粉末、口服凝膠、酏劑、可分散顆粒、糖漿、懸浮液等)且與常規(guī)醫(yī)藥實(shí)踐一致的、適當(dāng)選擇的合適載體物質(zhì)混合給予。例如，對(duì)于以片劑或膠嚢形式經(jīng)口給予而言，可將活性藥物組分與任何口服無(wú)毒的藥學(xué)上可接受的惰性載體(例如乳糖、淀粉、蔗糖、纖維素、^J旨酸鎂、磷酸二鈣、硫酸釣、滑石、甘露糖醇、乙醇(液體形式)等)組合。此外，當(dāng)需要時(shí)或必要時(shí)，也可將適合的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑摻入混合物中。散劑和片劑可包含約5%至約95%的本發(fā)明組合物。適合的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖、玉米甜味劑、天然和合成樹膠(例如阿拉伯膠)、海藻酸鈉、羧曱基纖維素、聚乙二醇和蠟。此類劑型可使用的潤(rùn)滑劑中可提及的有硼酸、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括淀粉、曱基纖維素、瓜爾膠等。適當(dāng)時(shí)也可包括甜^^未劑和調(diào)味劑和防腐劑。上文所述的一些術(shù)語(yǔ)(即崩解劑、稀釋劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑等)更詳細(xì)地論述于下文中。另外，本發(fā)明的組合物可配制為持續(xù)釋放形式，以便以控制的速率提供任一或多種組分或活性成分的釋放，以4吏治療效果(即HCV抑制活性等)最佳化。用于持續(xù)釋放的適合劑型包括含有不同崩解速率的層的層狀片劑；或浸漬有活性組分且呈片劑形狀的控制釋放聚合物基質(zhì)；或含有此類浸漬或包嚢的多孔聚合物基質(zhì)的膠嚢。液體形式制劑包括溶液、懸浮液和乳液。作為一實(shí)例可提及用于非經(jīng)腸注射的水或水-丙二醇纟容液，或添加鄰"味劑和調(diào)和劑(pacifiers)的口服溶液、懸浮液和乳液。液體形式制劑也可包括用于鼻內(nèi)給予的溶液。適于吸入的氣溶膠制劑可包括溶液和粉末形式的固體，其可與藥學(xué)上可接受的載體(例如惰性壓縮氣體，例如氮?dú)?組合。就制備栓劑而言，首先將例如脂肪酸甘油酯混合物(例如可可油)的低熔點(diǎn)蠟熔融，且通過(guò)攪拌或類似的混合將活性成分均勻地M于其中。隨后將熔融的均質(zhì)混合物傾入適宜尺寸的模具中，使其冷卻且進(jìn)而固化。也包括意欲在即將使用前轉(zhuǎn)化為經(jīng)口或非經(jīng)腸給予的液體形式制劑的固體形式制劑。此類液體形式包括溶液、懸浮液和乳液。本發(fā)明化合物也可經(jīng)皮傳遞。經(jīng)皮組合物可采用乳膏、洗劑、氣溶膠和/或乳液的形式，且就此目的而言可包括于本領(lǐng)域常用的基質(zhì)或貝i庫(kù)型經(jīng)皮貼片中。本發(fā)明化合物也可經(jīng)口、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)或皮下給予。本發(fā)明化合物也可包含呈單位劑型的制劑。在此劑型中，將制劑再分成含有適當(dāng)量(例如達(dá)成所需目的的有效量)活性組分的適宜大小的單位劑量。根據(jù)特定應(yīng)用，單位劑量制劑中本發(fā)明活性組合物的量通?？稍诩s1.0毫克至約1，000毫克、優(yōu)選約1.0毫克至約950毫克、更優(yōu)選約l.O毫克至約500毫克且通常約1毫克至約250毫克內(nèi)變化或調(diào)節(jié)。所用實(shí)際劑量可一見患者的年齡、性別、體重和所治療病狀的嚴(yán)重性而變化。此類技術(shù)已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。一般而言，含有活性成分的人口服劑型可每天給藥1次或2次。給藥量和頻率將根據(jù)主治臨床醫(yī)師的判斷進(jìn)行調(diào)節(jié)?？诜囊话阃扑]每曰劑量方案可在每天約1.0毫克至約1,000毫克的范圍內(nèi)，以單一或多個(gè)分劑量給藥。以下描述一些有用的術(shù)語(yǔ)膠嚢-指由曱基纖維素、聚乙烯醇或變性明膠或淀粉所制成的特殊容器或封閉物(enclosure),用于保持或容納包含活性成分的組合物。硬殼膠嚢通常由具有相對(duì)較高凝膠強(qiáng)度的骨架和豬皮明膠的摻合物制成。膠嚢本身可含有少量染料、遮光劑、增塑劑和防腐劑。片劑-指含有活性成分和適合稀釋劑的壓縮或模制固體劑型?？赏ㄟ^(guò)壓縮由濕法造粒、干法造?；蛲ㄟ^(guò)壓實(shí)所獲得的混合物或顆粒來(lái)制備片劑?？诜z劑-指分散或溶解于親水性半固體基質(zhì)中的活性成分。供重新構(gòu)成的粉末指含有活性成分和適合稀釋劑的粉末摻合物，其可懸浮于水或汁液中。稀釋劑-指通常組成組合物或劑型的主要部分的物質(zhì)。適合的稀釋劑包括糖，例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇；源自小麥、玉米、稻米和馬鈴薯的淀粉；和纖維素例如微晶纖維素。組合物中稀釋劑的量可在占總組合物的約10%重量至約90°/。重量、優(yōu)選約25%重量至約75%重量、更優(yōu)選約30%重量至約60%重量、甚至更優(yōu)選約12%重量至約60%重量的范圍內(nèi)。崩解劑-指添加至組合物中以幫助其分解(崩解)且釋放藥物的材料。適合的崩解劑包括淀粉；"冷水可溶性"改性淀粉，例如羧甲基淀粉鈉；天然和合成樹膠，例如刺槐豆膠、刺梧桐樹膠、瓜爾膠、黃蓍膠和瓊脂；纖維素衍生物，例如曱基纖維素和羧曱基纖維素鈉；微晶纖維素和交聯(lián)微晶纖維素，例如交聯(lián)羧曱基纖維素鈉；海藻酸鹽，例如海藻酸和海藻酸鈉；粘土，例如膨潤(rùn)土；和起泡混合物。組合物中崩解劑的量可在占組合物約2°/。重量至約15%重量、更優(yōu)選約4%重量至約10%重量的范圍內(nèi)。粘合劑-指將粉末粘合或"膠著"在一起且通過(guò)形成顆粒而使其粘著的物質(zhì)，這些物質(zhì)因此在制劑中充當(dāng)"粘著劑"。粘合劑使稀釋劑或膨化劑中已獲得的粘結(jié)強(qiáng)度增加。適合的粘合劑包括糖，例如蔗糖；源自小麥、玉米、稻米和馬鈴薯的淀粉；天然樹膠，例如阿拉伯膠、明膠和黃蓍膠；海藻衍生物，例如海藻酸、海藻酸鈉和海藻酸銨鈣；纖維素材料，例如曱基纖維素和羧甲基纖維素鈉和羥丙基曱基纖維素；聚乙烯吡咯烷酮；和無(wú)機(jī)物，例如硅酸鋁鎂。組合物中粘合劑的量可在占組合物的約2°/。重量至約20%重量、更優(yōu)選約3%重量至約10%重量、甚至更優(yōu)選約3°/。重量至約6%重量的范圍內(nèi)。潤(rùn)滑劑-指添加至劑型中以使片劑、顆粒等在壓縮后能夠通過(guò)減小摩擦或磨損而自模具或沖模中釋出的物質(zhì)。適合的潤(rùn)滑劑包括金屬硬脂酸鹽，例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸鉀；硬脂酸；高熔點(diǎn)蠟；和水溶性潤(rùn)滑劑，例如氯化鈉、苯曱酸鈉、乙酸鈉、油酸鈉、聚乙二醇和d'i—亮氨酸。因?yàn)闈?rùn)滑劑必須存在于顆粒表面上和顆粒與壓片機(jī)的零件之間，所以通常在壓縮前最后一個(gè)步驟添加潤(rùn)滑劑。組合物中潤(rùn)滑劑的量可在占組合物的約0.2%重量至約5%重量、優(yōu)選約0.5%重量至約2%重量、更優(yōu)選約0.3%重量至約1.5°/。重量的范圍內(nèi)。助流劑-防止結(jié)塊且改良顆粒的流動(dòng)特征以使得流動(dòng)流暢且均一的材料。適合的助流劑包括二氧化硅和滑石。組合物中助流劑的量可在占總組合物的約0.1%重量至約5%重量、優(yōu)選約0.5%重量至約2%重量的范圍內(nèi)。著色劑-向組合物或劑型提供著色的賦形劑。此類賦形劑可包括食品級(jí)染料和吸附于適合的吸附劑(例如粘土或氧化鋁)上的食品級(jí)染料。著色劑的量可在占組合物的約0.1%重量至約5%重量、優(yōu)選約0.1%重量至約1%重量的范圍內(nèi)變化。生物利用度-指當(dāng)與標(biāo)準(zhǔn)物或?qū)φ瘴锵啾葧r(shí)將活性藥物成分或治療部分自所給予的劑型吸收至全身循環(huán)中的速率和程度。已知用于制備片劑的常規(guī)方法。此類方法包括干法，例如直接壓縮和壓縮經(jīng)壓實(shí)所產(chǎn)生的顆粒；或濕法或其它特殊程序。制備其它給藥形式例如膠嚢、栓劑等的常規(guī)方法也是熟知的。本發(fā)明的另一實(shí)施方案公開上文中所公開的本發(fā)明化合物或藥用組合物治療例如丙型肝炎等疾病的用途。該方法包括將治療有效量的本發(fā)明化合物或藥用組合物給予患有所述疾病且需要此治療的患者。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物可以采用單一療法模式或組合療法(例如雙重組合、三重組合等^莫式(例如抗病毒劑和/或免疫調(diào)節(jié)劑的組合)治療人類HCV。此類抗病毒劑和/或免疫調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括利巴韋林(來(lái)自Schering-PloughCorporation,Madison,NewJersey)和Levovirin(來(lái)自ICNPharmaceuticals,CostaMesa,California)、VP50406(來(lái)自Viropharma,Incorporated,Exton,Pennsylvania)、ISIS14803(來(lái)自ISISPharmaceuticals,Carlsbad,California),Heptazyme(來(lái)自RibozymePharmaceuticals,Boulder,Colorado)、VX497(來(lái)自VertexPharmaceuticals,Cambridge,Massachusetts)、Thymosin(來(lái)自SciClonePharmaceuticals,SanMateo,California)、Maxamine(來(lái)自MaximPharmaceuticals,SanDiego，Califomia)、麥考酚酸口馬乙酉旨(來(lái)自Hoffman-LaRoche,Nutley，NewJersey)、干擾素(例如干擾素-a、PEG-干擾素a軛合物)等。"PEG-干擾素a輒合物"為共價(jià)連接PEG分子的干擾素a分子。示例性PEG-干擾素a輒合物包括呈聚乙二醇化干擾素a-2a形式(例如，以商標(biāo)名PegasysTM銷售)的干擾素a-2a(Roferon,來(lái)自HoffmanLa-Roche,Nutley,NewJersey)、呈聚乙二醇化干擾素a-2b形式(例如，以商標(biāo)名PEG-IntronTM銷售)的干擾素a-213(Intron,來(lái)自Schering-PloughCorporation)、干擾素a畫2c(BeroforAlpha,來(lái)自BoehringerIngelheim,Ingelheim,Germany)或3口通過(guò)觀J定天'然存在干牙尤素a的一致序列所界定的復(fù)合干擾素(InfergenTM,來(lái)自Amgen,ThousandOaks,California)。如先前所述，本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物的互變異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和其它立體異構(gòu)體。因此，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解的，一些本發(fā)明化合物可以適合的異構(gòu)形式存在。此類變體包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的另一實(shí)施方案公開一種制備本文中所公開的化合物的方法?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的幾項(xiàng):汰術(shù)來(lái)制備這些化合物。示例性程序概述于以下反應(yīng)流程中。不應(yīng)將這些示例性說(shuō)明理解為對(duì)所附權(quán)利要求所界定的本發(fā)明范疇的限制。替代的機(jī)制路徑和類似結(jié)構(gòu)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的。應(yīng)了解盡管下列示例性流程描述一些代表性的本發(fā)明化合物的制備，但任何天然氨基酸與非天然氨基酸的適合的取代作用將導(dǎo)致基于此取代作用形成所需化合物。此類變體包括于本發(fā)明的范圍內(nèi)。對(duì)于下述程序，使用以下縮寫THF:四氬呋喃DMF:N,N-二曱基曱酰胺EtOAc:乙酸乙酯DCM:二氯甲烷HATU:六氟磷酸0-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四曱脲鏡MeOH:曱醇TLC:薄層層析pH:氫百分比Sat.:飽和n-BuLi:正丁基鋰RT:室溫DPPA:二苯基磷?；B氮化物制備目標(biāo)化合物的通用流程使用進(jìn)行如下所述的制備實(shí)施例1200和1261的制備的所述通用流程來(lái)合成本發(fā)明化合物。56制備實(shí)施例1200:步驟l:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>2-曱基-丙烷-2-亞磺酸亞環(huán)己基酰胺(1200-B):在氮?dú)鈿夥障?，將四乙醇鈥(2當(dāng)量，3.56mL，d1.088)加入到環(huán)己酮(1.2當(dāng)量，1.0g,1.05mL,d0.947)于20mL無(wú)水THF中的溶液中。5分鐘后，逐滴加入于IOmLTHF中的OS)-叔丁烷亞磺酰胺(1200-A,1.028g)。將混合物加熱至60"隔夜。在迅速攪拌下將反應(yīng)混合物傾入等體積的飽和碳酸氫鈉水溶液中且立即經(jīng)由硅藻土過(guò)濾。用乙酸乙酯(50mL)洗滌濾餅。分離濾液中的各層且用乙酸乙酯(30mL)萃取水層。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸^:干燥，過(guò)濾并濃縮。將殘余物經(jīng)硅膠層析(梯度乙醚/己烷；1:9至1:1),得到無(wú)色油狀的產(chǎn)物1200-B(1.3g;76°/。)。將產(chǎn)物保持在-20。C惰性氣氛下。步驟2:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>N，N-二甲基-C-[1-(2-曱基-丙烷-2-亞磺?；被?-環(huán)己基-甲烷磺酰胺(1200-C):在無(wú)水氣氛下，將正丁基鋰(1.3當(dāng)量，8.07mL的于己烷中的1.6M溶液)逐滴加入到N,N-二曱基曱烷磺酰胺(1.35當(dāng)量，1.65g)于100mL無(wú)水THF中的冷卻(-78。C)溶液中。將混合物在該溫度下攪拌30分鐘，隨后經(jīng)由套管轉(zhuǎn)移至在-78。C下的亞磺?；鶃啺?200-B(2.0g)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage58</formula>C-(l-氨基-環(huán)己基)-N，N-二甲基-甲烷磺酰胺鹽酸鹽(1200-D):將亞磺酰胺(sulfinamide)1200-C(1.3g)溶解于40mL曱醇中并用10mL于二氧六環(huán)中的4MHC1溶液處理。將混合物攪拌約30分鐘，直至如通過(guò)TLC(于二氯曱烷/己烷1:1中的20%丙酮)所測(cè)定，所有起始原料已消耗。將混合物蒸發(fā)至干。加入二氯甲烷(15mL)，得到混濁溶液。在加入l00mL乙醚后，形成白色沉淀物。通過(guò)^^用濾紙Whatman弁l過(guò)濾來(lái)回收產(chǎn)物1200-D(1.02g;98%)。步驟4:1200-D1200-EC-(l-異氰酸根合(isocyanato)-環(huán)己基)-N，N-二曱基-曱烷磺酰胺(1200-E):將胺鹽酸鹽1200-D(520mg)于40mL二氯曱烷中的溶液用20mL飽和碳酸氫鈉水溶液處理且在O。C下劇烈攪拌1O分鐘。停止攪拌且使各層分離。向有機(jī)層(下層)中一次性加入碳酰氯(IOmL于曱苯中的20%溶液)。在加入后立即在0。C下將混合物劇烈攪拌10分鐘且在室溫下進(jìn)一步攪拌3小時(shí)。用IOOmL二氯曱烷稀釋混合物且分離各層。將于IOOmL無(wú)水THF中的溶液中。在加入完成后，將反應(yīng)混合物攪拌l小時(shí)。通過(guò)在-78。C下加入20mL飽和氯化銨水溶液來(lái)中止反應(yīng)。使混合物達(dá)到室溫且隨后在二氯曱烷(300mL)與飽和碳酸氫鈉水溶液(300mL)之間分配。用二氯曱烷(2x200mL)反萃取水層。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠層析(梯度二氯甲烷/己烷1:1至于二氯曱烷/己烷1:1中的30%丙酮)，得到無(wú)色油狀的產(chǎn)物1200-C(1.36g;42%)。步驟3:c-c58有機(jī)層用50mL冷飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌且經(jīng)碌^酸鎂干燥。將有機(jī)層過(guò)濾并用15mL曱苯稀釋。將所得溶液在減壓下濃縮且產(chǎn)物1200-E保持為0.2M溶液。步驟5:H3,N、H3C"40'oN=C=01200-EOMe1200-3-{2-[3-(1-二曱基氨磺?；鶗趸?環(huán)己基)-脲基-3，3-二曱基-丁?；鶀-6，6-二甲基-3-氮雜-雙環(huán)[3.1.0己烷-2-甲酸曱酯(1200-F):將先前所述的P2-P3胺鹽酸鹽20.07(美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)11/064,673,中間體20.07)(1.2當(dāng)量，1.0g)于30mL二氯曱烷中的溶液冷卻至0。C并用N-曱基嗎啉(2.5當(dāng)量，0.72mL,d0.920)處理。5分鐘后，也加入異氰酸酯1200-E的溶液(13.0mL的于曱苯中的0.2M溶液)。將反應(yīng)混合物再攪拌3小時(shí)(溫度為(TC至25。C)。用1MHC1水溶液(50mL)處理混合物且將產(chǎn)物溶于乙酸乙酯(300mL)中。將有機(jī)層用鹽水(50mL)洗滌且經(jīng)硫酸鎂干燥。將混合物過(guò)濾且在減壓下濃縮。將殘余物經(jīng)硅膠層析(梯度丙酮/己烷；l:9至4:6)，得到白色固體狀的產(chǎn)物1200-F(850mg;62%)。步驟6:1200-F1200-G3-{2-[3-(1-二曱基氨磺酰基曱基-環(huán)己基)-脲基-3，3-二甲基-丁酰基)-6，6-二甲基-3-氮雜-雙環(huán)[3.1.0己烷-2-甲酸(1200-G):將甲酯1200-F(840mg)于30mL的THF/水的2:l混合物中的溶液冷卻至0。C并用單水合氫氧化鋰(2.5當(dāng)量，166mg)處理。將混合物攪拌10分鐘且移除冷卻浴。在室溫下攪拌反應(yīng)物，直至如根據(jù)TLC(丙酮/己烷；3:7)所測(cè)定，所有起始原料已消耗。2小時(shí)后，用lMHCl水溶液(約50mL)處理混合物，使混合物變?yōu)樗嵝?pH2)。用二氯曱烷(3x50mL)萃取混合物。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸4美干燥，過(guò)濾且在減壓下濃縮，得到白色固體狀的產(chǎn)物1200-G(815mg;98%)。步驟7:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula>Yo、1200-H3-{2-3-(1-二甲基氨磺?；鶗趸?環(huán)己基)-脲基-3，3-二曱基-丁?；鶀-6，6-二曱基-3-氮雜-雙環(huán)[3.1.0己烷-2-曱酸[l-(環(huán)丙基氨基甲?；?羥基-甲基)-戊基-酰胺(1200-H):在0。C下攪拌酸1加0-G(250mg)于5mL無(wú)水二氯曱烷和5mL無(wú)水DMF中的溶液并用HATU(1.4當(dāng)量，259mg)處理。加入胺鹽酸鹽8371(先前描述于美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)11/064,673,實(shí)施例837，步驟H中)(1.3當(dāng)量，149mg)，接著加入N-曱基嗎啉(4當(dāng)量，0.21mL,d0.920)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜(溫度O。C至25。C)。于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中移除所有揮發(fā)物且將殘余物溶解于80mL乙酸乙酯中。將有機(jī)層用水(15mL)、1MHCl水溶液(15mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(15mL)和鹽水(15mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮。產(chǎn)物1200-H不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。步驟8:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula>3-{2-[3-(1-二曱基氨磺酰基曱基-環(huán)己基)-脲基卜3，3-二曱基-丁?；鶀-6，6-二曱基-3-氮雜-雙環(huán)[3.1.0己烷-2_曱酸(l-環(huán)丙基氨基乙二?；?戊基)-酰胺(1200):用Dess-Martin過(guò)石典烷(Dess-Martinperiodinane)(1.3當(dāng)量，267mg)處理羥基酰胺1200-H(0.485mmol)于5mL二氯曱烷中的溶液。將混合物在室溫下攪拌30分鐘。通過(guò)加入飽和辟u代硫酸鈉水溶液(10mL)來(lái)中止反應(yīng)。將混合物攪拌10分鐘，接著加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)。將混合物再攪拌10分鐘。用二氯曱烷(3x20mL)萃取混合物。將經(jīng)合并有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮。將殘余物經(jīng)硅膠層析(Biotage25-S柱；梯度于己烷中的10%至50%丙酮)純化，得到白色固體狀的產(chǎn)物1200(330mg;98%)。制備實(shí)施例1261:3-[2-(3-{1-[(環(huán)丙基-曱基-氨磺?；?-甲基]-環(huán)己基}-脲基)-3，3-二甲基-丁酰基-6，6-二甲基-3-氮雜-雙環(huán)[3.1.01己烷_2_曱酸(l-環(huán)丙基氨基乙二?；?戊基)-酰胺(1261)步驟l:l-硪代甲基-環(huán)己烷甲酸曱酯(1261-B):向-78。C的于THF(100mL)中的二異丙胺(132mmol,18.65mL)中加入n-BuLi(120mmol,75mL)。移除冷浴且在30分鐘后移回。逐滴加入于THF(50mL)中的環(huán)己烷曱酸甲酯1261-A(15.57g，109mmo1)。l小時(shí)后，加入二碘曱烷(109mmol,8.78mL)，同時(shí)保持溫度低于IO。C。在加入后，將反應(yīng)物升溫至室溫且攪拌過(guò)夜。18小時(shí)后，將反應(yīng)用NH4Cl猝滅并用EtOAc萃取。將其用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并濃縮，得到35g產(chǎn)物1261-B。1261-B1261-Cl-乙?；蚧鶗趸?環(huán)己烷曱酸甲酯(1261-C):向粗物質(zhì)1261-B(109mmol)于DMF(90mL)中的冷溶液中加入硫代乙酸鉀(1.2當(dāng)量，131mmol，15g),保持溫度低于3(TC。將反應(yīng)物攪拌18小時(shí)，隨后冷卻至1(TC且加入水(160mL)。將反應(yīng)物用EtOAc萃取且依次用飽和NaHC03和鹽水洗滌。將深色有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并濃縮為深色油。純化-HPFC(高壓快速層析)75+]\4預(yù)填充的二氧化硅柱(1%至5°/0EtOAc)，UV收集。濃縮后，獲得20.43g產(chǎn)物1261-C。步驟3:o1261-C1261-Dl-氯磺酰基甲基-環(huán)己烷曱酸甲酯(1261-D):向硫代酸酯1261-C(53mmol,12.23g)于乙酸(55mL)中的攪拌溶液中加入水(212mmol，3.8g)。隨后，用氯氣(11.3g,于通風(fēng)櫥中平衡，159mmol)輕微鼓泡約15-20分鐘。當(dāng)停止鼓泡時(shí)，平衡指示約11.5g。內(nèi)部溫度升高至55。C。冷卻反應(yīng)。TLC指示轉(zhuǎn)化為極性稍微更強(qiáng)的光點(diǎn)。也可見極少量極性更強(qiáng)的第二光點(diǎn)。稀釋于DCM中，依次用水(兩次)、NaOH(0.5N)和鹽水洗滌。將DCM層經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并濃縮，得到12g淺黃色油狀的1261畫D。1261-D1261-1l-[(環(huán)丙基-曱基-氨磺?；?-曱基-環(huán)己烷曱酸甲酯(1261-E):向含有磺酰氯1261-D(4mmol,1g)的DCM(10mL)的室溫溶液中加入環(huán)丙胺(1.5當(dāng)量，6mmo1，0.36g)，接著加入Et3N(2mL)。5小時(shí)后，將反應(yīng)物傾入EtOAc中并用NaHC03、HC11.0N和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并濃縮，得到1.28g(99。/。)環(huán)丙基石黃酰胺中間體。向石黃酰胺(4mmol)于DMF(10mL)中的0。C溶液中加入Cs2CO3(1.5當(dāng)量，6mmol，2g),接著加入Mel(1.8當(dāng)量，7.2纖o1,0.45mL)。將反應(yīng)攪拌過(guò)夜。用EtOAc稀釋并用水(2x50mL)、NH4C1和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并濃縮，得到淺黃色油狀物1261-E(1.15g)。步驟5:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>l-[(環(huán)丙基-曱基-氨磺?；?-甲基卜環(huán)己烷甲酸(1261-F):向含有酯1261-E(4mmol,1.1g)的MeOH(30mL)的室溫溶液中加入KOH水溶液(17.6mL，61.7mmol)且使反應(yīng)達(dá)到55。C經(jīng)18小時(shí)。在真空下移除揮發(fā)物并用HC11.0N將殘余物酸化至pH4。用EtOAc稀釋并用水(2x20mL)和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，過(guò)濾并濃縮，得到酸1261-F(l,09g，96%)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>N-環(huán)丙基-C-(l-異氰酸根合-環(huán)己基)-N-曱基-曱烷磺酰胺(1261-G):向含有酸1261-F(3.96mmol,1.09g)的甲苯(15mL)的室溫溶液中加入DPPA(0.85mL，3.96讓ol)，接著加入Et3N(0.56mL,3.96mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌10分鐘，隨后回流2小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至室溫并用DCM(50mL)稀釋。用NaHC03、鹽水洗滌且將有機(jī)層經(jīng)MgS04千燥。移除揮發(fā)物并用DCM(15mL)稀釋殘余物，得到1261-G的0.26M溶液。W、1261-GH一N、'N、OOHH,rt丫,。u0:12613-2-(3-{1-[(環(huán)丙基-曱基-氨磺?；?-曱基卜環(huán)己基}-脲基)-3，3-二甲基-丁?；?6，6-二曱基-3-氮雜-雙環(huán)[3.1.0己烷-2-曱酸(l-環(huán)丙基氨基乙二?；?戊基)-酰胺(1261):使用上述程序(與制備實(shí)施例1200類似)，自異氰酸酯1261-G獲得所需產(chǎn)物1261。實(shí)施例1200和1261),使用適當(dāng)?shù)男揎梺?lái)制備。表1列出本發(fā)明化合物和如由后文描述的測(cè)定法所測(cè)定的其HCV絲氨酸蛋白酶抑制活性范圍。該活性顯示為KP范圍(納摩爾)，其為(Ki承范圍A〈75nM,B=75nM-250nM;O250nM)。表l制備實(shí)施例化合物Ki*范圍1200風(fēng)HYcAi-/A<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage87</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage91</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage97</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage99</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage101</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage102</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage103</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage104</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage105</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage106</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table>本發(fā)明涉和新的HCV蛋白酶抑制劑。此效用可以其抑制HCVNS2/NS4a絲氨酸蛋白酶的能力來(lái)證實(shí)。用于此證實(shí)的通用程序由以下活體外纟企測(cè)來(lái)說(shuō)明。HCV蛋白酶抑制活性的測(cè)定分光光度測(cè)定可按照R.Zhang等，v^^yrica/B/oc/^m&^y,270(1999)268-275所述的方法對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行HCV絲氨酸蛋白酶的分光光度測(cè)定，該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。該基于顯色酯基質(zhì)的蛋白水解的測(cè)定適用于連續(xù)監(jiān)測(cè)HCVNS3蛋白酶活性。這些基質(zhì)衍生自NS5A-NS5B接合序列(Ac-DTEDVVX(Nva),其中X二A或P)的P側(cè)，該序列的C末端羧基被四種不同顯色醇(3-硝基酚或4-硝基酚、7-羥基_4-曱基-香豆素或4-苯基偶氮酚)中之一酯化。下文說(shuō)明這些新的分光光度酯基質(zhì)的合成、表征和其在高通量篩檢上的應(yīng)用和HCVNS3蛋白酶抑制劑的詳細(xì)動(dòng)力學(xué)評(píng)估。材料和方法材料測(cè)定相關(guān)緩沖液的化學(xué)試劑系獲自SigmaChemicalCompany(St.Louis,Missouri)。用于肽合成的i式劑來(lái)自AldrichChemicals、Novabiochem(SanDiego,California)、AppliedBiosystems(FosterCity,California)和PerseptiveBiosystems(Framingham,Massachusetts)。肽由人工合成或通過(guò)自動(dòng)ABI431A型合成儀(來(lái)自AppliedBiosystems)來(lái)合成。UV/VIS分光計(jì)LAMBDA12型來(lái)自PerkinElmer(Norwalk，Connecticut)和96孑LUV才反獲自Corning(Corning,NewYork)。預(yù)熱塊(block)可來(lái)自USAScientific(Ocala，F(xiàn)lorida)和96孔板渦流器(vortexer)來(lái)自LablineInstruments(MelrosePark,Illinois)。具有單色4義的SpectramaxPlus孩i量滴定才反讀出4義獲自MolecularDevices(Sunnyvale,California)。酶制備通過(guò)使用先前公開的方法(D.L.Sali等，所0c/2ew&^y,12(1998)3392-3401)來(lái)制備重組雜二聚HCVNS3/NS4A蛋白酶(品系la)。通過(guò)使用先前由氨基酸分析所定量的重組HCV蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品的Biorad染色法來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。在測(cè)定開始前，利用BioradBio-SpinP-6預(yù)填充柱將酶儲(chǔ)存緩沖液(50mM磷酸鈉pH8.0、300mMNaCl、10°/。甘油、0.05%月桂基麥芽糖苷和10mMDTT)交換為測(cè)定緩沖液(25mMMOPSpH6.5、300mMNaCl、10%甘油、0.05%月桂基麥芽糖苷、5pMEDTA和5一DTT)。基質(zhì)合成和純化如R.Zhang等(同上)所報(bào)導(dǎo)來(lái)進(jìn)行基質(zhì)的合成且使用標(biāo)準(zhǔn)方案(K.Barlos等，>/PepAiVofe/"22(1991),513-520)將Fmoc-Nva-OH錨定至2-氯三苯曱基氯樹脂上，開始進(jìn)行該合成法。隨后人工地或通過(guò)自動(dòng)ABI431型肽合成儀，使用Fmoc化學(xué)反應(yīng)來(lái)裝配這些肽。由含10%乙酸(HOAc)和10%三氟乙醇(TFE)的二氯曱烷(DCM)經(jīng)30分鐘或由含2°/。三氟乙酸(TFA)的DCM經(jīng)10分鐘，自樹脂上裂解N-乙?；彝耆Ｗo(hù)的肽片段。合并濾液與DCM洗滌液，經(jīng)共沸蒸發(fā)(或以Na2C03水溶液重復(fù)萃取)以除去裂解中所用的酸。將DCM相經(jīng)Na2S04干燥且蒸發(fā)。使用標(biāo)準(zhǔn)酸-醇偶合方法(K.Holmber等，O^m.Sca"d，旦H(1979)410-412)將酯基質(zhì)裝配。將肽片段溶解于無(wú)水吡啶(30-60mg/ml)中，向其中加入10摩爾當(dāng)量的發(fā)色團(tuán)和催化量(O.l當(dāng)量)的對(duì)甲苯磺酸(pTSA)。加入二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC，3當(dāng)量)以啟動(dòng)偶合反應(yīng)。由HPLC監(jiān)測(cè)產(chǎn)物形成且在室溫下反應(yīng)12-72小時(shí)后可發(fā)現(xiàn)反應(yīng)完成。在真空下蒸發(fā)吡啶溶劑且通過(guò)與曱苯共沸蒸發(fā)將其進(jìn)一步除去。用DCM中95%TFA將肽酯去保護(hù)兩小時(shí)并用無(wú)水乙醚萃取三次來(lái)移除過(guò)量發(fā)色團(tuán)。通過(guò)具有30%至60%乙腈梯度(使用6個(gè)柱體積)的C3或C8柱上的反相HPLC來(lái)純化去保護(hù)的基質(zhì)。HPLC純化后的總產(chǎn)率可為約20%-30%。可通過(guò)電噴霧離子化質(zhì)鐠來(lái)確認(rèn)分子質(zhì)量。在干燥狀態(tài)下將這些基質(zhì)以干燥粉末形式儲(chǔ)存?；|(zhì)和產(chǎn)物的光譜于pH6.5測(cè)定緩沖液中獲得基質(zhì)和相應(yīng)發(fā)色團(tuán)產(chǎn)物的光譜。使用多個(gè)稀釋度于l-cm比色皿中在最佳非峰值(off-peak)波長(zhǎng)下(對(duì)于3-Np和HMC為340nm,對(duì)于PAP為370nm和對(duì)于4-Np為400nm)測(cè)定消光系數(shù)。最佳非峰值波長(zhǎng)^皮定義為基質(zhì)與產(chǎn)物之間的吸光度產(chǎn)生最大分?jǐn)?shù)差異(產(chǎn)物OD-基質(zhì)OD)/基質(zhì)OD)的波長(zhǎng)。蛋白酶測(cè)定在30。C下在96孔微量滴定板中使用200]il反應(yīng)混合物進(jìn)行HCV蛋白酶測(cè)定。將測(cè)定緩沖液條件(25mMMOPSpH6.5、300mMNaCl、10%甘油、0.05%月桂基麥芽糖苷、5)iMEDTA和5DTT)對(duì)NS3/NS4A雜二聚體進(jìn)行最優(yōu)化(D.L.Sali等，同上)。通常將緩沖液、基質(zhì)與抑制劑的150pl混合物置于孔中(DMSO的最終濃度S4%v/v)且使其在30。C下預(yù)培育約3分鐘。隨后使用測(cè)定緩沖液中的50pl預(yù)熱蛋白酶(12nM，30。C)來(lái)啟動(dòng)反應(yīng)(最終體積為200pl)。使用配備有單色儀的SpectromaxPlus微量滴定板讀出儀來(lái)監(jiān)測(cè)這些培養(yǎng)板在測(cè)定期間(60分鐘)于適當(dāng)波長(zhǎng)(對(duì)于3-Np和HMC為340nm，對(duì)于PAP為370nm，且對(duì)于4-Np為400nm)下的吸光度的變化(可利用截止(cutoff)過(guò)濾器的培養(yǎng)板讀出^l獲得可接受的結(jié)果)。在適當(dāng)波長(zhǎng)下監(jiān)測(cè)Nva與發(fā)色團(tuán)之間的酯鍵的蛋白水解裂解，將無(wú)酶空白樣品作為非酶促水解的對(duì)照物。于30倍基質(zhì)濃度范圍(約6nM-200(iM)內(nèi)進(jìn)行基質(zhì)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的評(píng)估。使用線性回歸來(lái)測(cè)定起始速度且通過(guò)使用非線性回歸分析(MacCurveFit1.1,K.Raner)使數(shù)據(jù)擬合為Michaelis-Menten方程式來(lái)獲得動(dòng)力學(xué)常數(shù)。假定酶具有充分活性來(lái)計(jì)算轉(zhuǎn)換(Tumover)數(shù)(&at)。抑制劑和滅活劑的評(píng)估通過(guò)根據(jù)關(guān)于竟?fàn)幮砸种苿?dòng)力學(xué)的重排Michaelis-Menten方程式繪制v。/Vi與抑制劑濃度([I]o)的曲線，在固定濃度的酶和基質(zhì)下經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定竟?fàn)幮砸种苿〢c-D-(D-Gla)-L-I-(Cha)-C畫OH(27)、Ac誦DTEDWA(Nva)-OH和Ac-DTEDVVP(Nva)-OH的抑制常數(shù)(Kj):v。/Vi=l+[I]。/(Ki(1+[S]。/Km》，其中v。為未經(jīng)抑制的起始速度，Vi為在任何給定抑制劑濃度([I]o)的抑制劑存在下的起始速度和[S]o為所用基質(zhì)濃度。使用線性回歸來(lái)擬合所得數(shù)據(jù)且將所得斜率，1/(Kj(l+[S]。/Km)用于計(jì)算Ki值。本發(fā)明的幾個(gè)化合物的活性一般示于表l中。下面表2列出一些特定本發(fā)明化合物的KiM直(以微摩爾計(jì))。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage112</column></row><table>盡管已結(jié)合上文所述的具體實(shí)施方案來(lái)描述本發(fā)明，但其許多替代、修飾和其它變化對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言將是顯而易見的。所有此類替代、修飾和變化均欲落在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物選自具有以下列出的結(jié)構(gòu)的化合物2.—種藥用組合物，其包含治療有效量的作為活性成分的至少一種權(quán)利要求l的化合物。3.權(quán)利要求2的藥用組合物，其用于治療與丙型肝炎病毒("HCV")相關(guān)的病癥。4.權(quán)利要求2的藥用組合物，其還包含至少一種藥學(xué)上可接受的載體。5.權(quán)利要求4的藥用組合物，其還包含至少一種抗病毒劑。6.權(quán)利要求5的藥用組合物，其還包含至少一種干擾素。7.權(quán)利要求6的藥用組合物，其中所述至少一種抗病毒劑為利巴韋林和所述至少一種干擾素為a-干擾素或聚乙二醇化干擾素。8.包含治療有效量的至少一種權(quán)利要求1的化合物的藥用組合物在制備用于治療與HCV相關(guān)的病癥的藥物中的用途。9.權(quán)利要求8的用途，其中所述給藥為口服或皮下給藥。10.—種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)11.一種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)12.—種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)13.—種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>14.一種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>15.—種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>16.—種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)17.—種顯示HCV蛋白酶抑制活性的化合物，或所述化合物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體，或所述化合物或所述對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或外消旋體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或酯，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>18.權(quán)利要求l的化合物，其為純化的形式。全文摘要本發(fā)明公開具有HCV蛋白酶抑制活性的新的化合物以及用于制備此類化合物的方法。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明公開包含此類化合物的藥用組合物及所有它們治療與HCV蛋白酶相關(guān)的病癥的方法。文檔編號(hào)C07K5/08GK101679484SQ200880019227公開日2010年3月24日申請(qǐng)日期2008年4月8日優(yōu)先權(quán)日2007年4月10日發(fā)明者A·阿蘿莎龐,F·G·杰洛治,F·維拉奎斯,S·L·伯金,S·凡卡楚曼,石南陽(yáng)申請(qǐng)人:先靈公司