蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物的合成方法，通過將式IV表示的二肽中間體，脫保護(hù)后與式VIII表示的肽末端環(huán)氧酮片段反應(yīng)后制備獲得。本發(fā)明提供的方法合成蛋白酶體抑制劑Oprozomib，將二肽中間體和肽末端環(huán)氧酮片段分別制備，最后再進(jìn)行縮合得到目標(biāo)化合物，其合成收率為42％，避免了氨基酸的消旋化，同時(shí)省去對最后終產(chǎn)物的HPLC提純，大大縮短了反應(yīng)周期，降低了生產(chǎn)成本，提高了產(chǎn)品的收率和純度。結(jié)構(gòu)通式：
【專利說明】
蛋白酶體抑制劑Oprozomi b及其類似物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[000?]本發(fā)明屬于化學(xué)合成方法，具體涉及蛋白酶體抑制劑oprozomib及其類似物的制 備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] Oprozomib的分子式為：0-甲基-N-[ (2-甲基噻唑-5-基）羰基]-L-絲氨?；?0-甲 基-N_{ (1S)_1_芐基_2_[ (2R)_2_甲基環(huán)氧乙燒_2_基]_2_氧乙燒}_L_絲氨酰胺，化學(xué)結(jié)構(gòu) 式為：
[0004] 0prozomib(0NX 0912)是由美國安進(jìn)和日本0no制藥公司共同開發(fā)的可口服、具高 選擇性26S蛋白酶體糜蛋白酶樣活性的抑制劑，其抑制20S蛋白酶的CT-L活性， IC50為36nM/82nM。目前該化合物已進(jìn)入臨床II期研究，用于治療骨髓瘤和套細(xì)胞淋巴瘤。
[0005] 當(dāng)前報(bào)道合成Oprozomib及其類似物的路線有兩條，其區(qū)別主要在于關(guān)鍵中間體 的不同。
[0006] 合成路線之一以N端保護(hù)的0-甲基-L-絲氨酸為原料，依次經(jīng)氯甲酸芐酯保護(hù)羧 基，脫保護(hù)基得到中間體氨基芐酯片段，再與一分子〇-甲基絲氨酸縮合得到二肽片段，然后 脫芐基與氨基環(huán)氧酮片段縮合，再N端脫保護(hù)得到肽片段，進(jìn)一步與噻唑甲酸片段進(jìn)行縮 合，合成Oprozomib及其類似物。
[0008] 分析Oprozomib的這一傳統(tǒng)合成路線，手性環(huán)氧酮片段在合成早期引入，提高了終 產(chǎn)品oprozomib的成本；同時(shí)，環(huán)氧酮片段不穩(wěn)定，早期引入會(huì)增加環(huán)氧酮片段參與反應(yīng)的 時(shí)間并導(dǎo)致雜質(zhì)生成的風(fēng)險(xiǎn)，不利于產(chǎn)品的純度，也增加了后處理的難度和時(shí)間。另外，在 脫芐基保護(hù)反應(yīng)中，二肽絲氨酸結(jié)構(gòu)中的手性部分容易發(fā)生消旋，使得終產(chǎn)物Opzozomib需 要經(jīng)HPLC提純（J · Med · Chem · 2009，52，3028- 3038) 〇
[0009] 合成路線二中N-Fmoc 0-甲基絲氨基酸采用固相合成得到相應(yīng)二肽片段，再與異 惡唑甲酸縮合得到關(guān)鍵中間體，如PCT專利申請W02008140782，經(jīng)脫保護(hù)再與環(huán)氧酮片段縮 合完成Oprozomib類似物骨架的構(gòu)造，常用的反應(yīng)路線如下：
[0011]固相合成方法中，羥甲基樹脂和Fmoc-氨基酸用Η0ΒΤ及HBTU縮合劑縮合得到Fmoc-氨基酸的固相甲酯。但是，這種甲酯結(jié)構(gòu)在固相肽合成反應(yīng)中可能出現(xiàn)兩方面的問題。一是 在每次循環(huán)中用酸脫除α氨基的保護(hù)基以延長肽鏈時(shí)，總是伴隨著少量肽鏈與樹脂間連接 的芐酯鍵被酸解斷裂，出現(xiàn)所謂"連根枝"現(xiàn)象，造成已合成肽鏈的嚴(yán)重?fù)p失。二是將肽鏈從 樹脂上切落下來時(shí)，需要用HF、TFA等較為強(qiáng)烈的酸性條件，這也同樣會(huì)帶來一些副反應(yīng)，使 得操作變得繁雜。
[0012] 無論是路線一還是路線二，兩個(gè)氨基酸縮合過程中容易造成氨基酸的手性部分消 旋，使得在最后一步反應(yīng)中都需制備HPLC分離純化，導(dǎo)致了生產(chǎn)周期的延長及成本的提高。 因此，提供一種工藝操作簡單、成本低、產(chǎn)品純度高的Oprozomib及其類似物的制備方法，對 于Oprozomib在工業(yè)化生產(chǎn)具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的目的是提供一種Oprozomib及其類似物的新制備方法，對傳統(tǒng)的反應(yīng)條 件進(jìn)行了一系列的改造，以避免傳統(tǒng)合成方法中的諸多弊端。
[0014]本發(fā)明提供的一種Oprozomib及其類似物式IX的制備方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：
[0016]將R3取代的N保護(hù)氨基酸I保護(hù)羧基后得N-保護(hù)的氨基酸酯II，脫除N保護(hù)基團(tuán)與R2 取代羧酸縮合得式IV表示的二肽中間體，同時(shí)將R4取代的N保護(hù)氨基酸VI與環(huán)氧酮片段縮 合反應(yīng)得VII，經(jīng)脫去氨基保護(hù)基團(tuán)得式VIII表示的肽末端環(huán)氧酮片段。最后式IV表示的二 肽中間體脫保護(hù)后得到的V與式VIII表示的肽末端環(huán)氧酮片段反應(yīng)后制備獲得IX。反應(yīng)式：
[0018] 其中心代表甲基、乙基、叔丁基、芐基;辦代表甲基、苯基、叔丁氧基、芐氧基、2-甲基 噻唑基、2，4-二氯苯基、1，2-二氯苯基、2-吡嗪基、吡唑、5-乙氧基異惡唑、5-甲基異惡唑;R 3 代表甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、單氟甲氧基或其他天然或非天然氨基酸殘基;R4代 表甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、單氟甲氧基;Rs代表如亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨 酸、萘丙氨酸的殘基。
[0019 ] 上述路線中涉及的縮合反應(yīng)中采用EDC、DCC、HOBt、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或 PyBOP中的一種或兩種以上的混合物的縮合催化劑。以二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、苯、乙腈 或二氧六環(huán)為溶劑。
[0020] 所述縮合反應(yīng)的催化劑，更優(yōu)選為HBTU和HOBt，以四氫呋喃為溶劑，室溫反應(yīng)得到 的產(chǎn)物，經(jīng)柱層析分離得到目標(biāo)化合物。
[0021] 上述路線中涉及的脫保護(hù)反應(yīng)，當(dāng)脫除氨基保護(hù)基團(tuán)時(shí)使用HC1飽和的乙酸乙酯 溶液、二氧六環(huán)或三氟甲酸溶液。脫除羧基的保護(hù)基團(tuán)使用無機(jī)鹽LiOH在水和甲醇溶液中 進(jìn)行。
[0022] 在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，Ri代表叔丁基，R2代表2-甲基噻唑，R3代表甲氧基時(shí) 式IV表示的二肽中間體的結(jié)構(gòu)為：
[0024]在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，R4代表甲氧基，R5代表苯基時(shí)式VIII的結(jié)構(gòu)為：
[0026]在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，辦為2-甲基噻唑，R3、R4均為甲氧基，R5為苯基時(shí)合成 得到的化合物為以下結(jié)構(gòu)：
[0028] 即為蛋白酶體抑制劑Oprozomib。
[0029] 在本發(fā)明提供的方法中，式IV表示的二肽中間體按照如下方法合成：
[0030] (1)N-保護(hù)氨基酸酯包括N-保護(hù)氨基酸甲酯、N-保護(hù)氨基酸乙酯N-保護(hù)的氨基酸 芐酯和N保護(hù)的氨基酸叔丁酯的合成：
[0031] a)N_保護(hù)氨基酸甲酯的合成:將R3取代的N-保護(hù)氨基酸于-10°C加入甲醇和二氯 亞砜，再回流10小時(shí)反應(yīng)；
[0032] b)N_保護(hù)氨基酸乙酯的合成：將R3取代的N-保護(hù)氨基酸于-10°C加入乙醇和二氯 亞砜，再回流10小時(shí)反應(yīng)。
[0033] C)N-保護(hù)氨基酸芐酯的合成:將R3取代的N-保護(hù)氨基酸于N2保護(hù)下溶于保護(hù)碳酸 鈉溶液中，冰浴下逐滴加入氯甲酸芐酯，升至室溫反應(yīng)4小時(shí)。
[0034] d)N_保護(hù)氨基酸叔丁基酯的合成：將R3取代的N-保護(hù)氨基酸溶于乙酸乙酯中，將 叔丁基三氯乙酰亞胺酯溶液正己烷中，然后將上述溶液緩慢滴加到乙腈溶液中，室溫反應(yīng) 18小時(shí)；
[0035]其中R3的定義同權(quán)利要求1
[0036] (2)R2取代的羧酸與N-保護(hù)氨基酸酯縮合反應(yīng):將步驟（1)的產(chǎn)物溶于四氫呋喃 中，加入HBTU、Η0ΒΤ和R 2取代的酸反應(yīng)即得到二肽中間體（IV)。
[0037] 其中，步驟(1)所述N-保護(hù)氨基酸酯的合成路線：
[0039] R3的定義同權(quán)利要求1，R6代表N保護(hù)基，包含叔丁氧羰基、芐氧羰基、芴甲氧羰基、 三氟乙酰基、對甲苯磺?；?，優(yōu)選叔丁氧羰基。
[0040]其中，步驟(2)取代羧酸與氨基脫保護(hù)后的氨基酸縮合反應(yīng)式：
[0042] 1^、1?2、1?3、1?6的定義同前。
[0043]在本發(fā)明提供的方法中，式VIII表示的肽末端環(huán)氧片段通過以下步驟合成：
[0045]以環(huán)氧酮片段為原料，經(jīng)me、DCC、HOB t、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或Py Β0Ρ 中的 一種或兩種以上的混合物為縮合催化劑，同R4取代的氨基酸酸縮合，以二氯甲烷、四氫呋 喃、甲苯、苯、乙腈或二氧六環(huán)為溶劑，在0°C至25°C下反應(yīng)得到相應(yīng)中間體，然后經(jīng)脫去氨 基保護(hù)基團(tuán)得到式VIII所示化合物，其中R4、R5的定義同上。
[0046] 優(yōu)選是以H0Bt、HBTU為縮合劑，四氫呋喃為溶劑，室溫下反應(yīng)，得到的相應(yīng)二肽環(huán) 氧酮片段。
[0047] 其中，我們重復(fù)了文獻(xiàn)報(bào)道Oprozomib的合成路線，其合成收率為18.6%，通過液 相及LC-MS驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)所得終產(chǎn)物含有兩個(gè)同分異構(gòu)體，需制備HPLC分離。
[0048]本發(fā)明提供的方法合成蛋白酶體抑制劑Oprozomib，將二肽中間體和肽末端環(huán)氧 酮片段分別制備，最后再進(jìn)行縮合得到目標(biāo)化合物，其合成收率為42%，避免了氨基酸的消 旋化，同時(shí)省去對終產(chǎn)物的HPLC提純，大大縮短了反應(yīng)周期，降低了生產(chǎn)成本，提高了產(chǎn)品 的收率和純度。
【具體實(shí)施方式】
[0049] 本發(fā)明結(jié)合具體的實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。
[0050] 以下實(shí)施例中的縮略語說明：
[0051 ] TFA:三氟甲酸，
[0052] DEA:二乙胺，
[0053] EDC: 1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基羰二亞胺，
[0054] HOBt: 1-羥基苯并三唑，
[0055] HBTU:苯并三氮唑-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸鹽，
[0056] TBTU:〇-苯并三氮唑-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟硼酸鹽，
[0057] DCC:二環(huán)己基碳二亞胺，
[0058] HCTU: 6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲四氟磷酸鹽，
[0059] TCTU:0-(6-氯苯并三氮唑-1-基)-N，N，N'，N'_四甲基脲四氟硼酸鹽，
[0060] HATU:2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯，
[0061 ] PyBOP:六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，
[0062] DIPEA:N，N_ 二異丙基乙胺。
[0063] 以O(shè)prozomib為例其合成路線如下：
[0065] 實(shí)施例1 N-Fmoc-Ο-甲基-L-絲氨酸叔丁醇酯
[0067] 將N-Fmoc-Ο-甲基-L-絲氨酸（lg，2.93mmol)溶于15mL乙酸乙酯，通過分液漏斗緩 慢滴加溶于6mL正己烷的叔丁基三氯乙酰亞胺酯（1.28g，5.87mmol)，混合物于25°C下攪拌 18小時(shí)，飽和碳酸鈉(20mL)淬滅反應(yīng)，分出有機(jī)層，有機(jī)層再用飽和食鹽水洗滌2次，無水硫 酸鈉干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，經(jīng)柱層析分離得白色固體1.13g。
[0068] 收率：97% JH MMR(500MHz，CDC13) :δ7.76((1, J = 7.5Hz，2H)，7.62(q，J = 4.0Hz， 2H) ,7.40(t,J = 7.5Hz,2H),7.31 (t,J = 7.4Hz,2H) ,5.66(d,J = 8.0Hz,lH) ,4.417-4.331 (m,3H),4.24(t ,J = 7.5Hz,lH),3.78(dd ,J = 9.5,3.5Hz,lH),3.65(dd ,J = 9.0,3.0Hz,lH), 3.37(s,3H),1.48(s,9H).ESI-MS：m/z = 398[M+l] + 〇
[0069] 實(shí)施例2 0-甲基-L-絲氨酸叔丁醇酯
[0071 ] 將實(shí)施例1所得的N-Fmoc-Ο-甲基-L-絲氨酸叔丁醇酯（lg, 2.52mmol),溶于9mL乙 腈，冰浴下加入二乙胺lmL，薄層層析檢測，反應(yīng)完畢，減壓回收溶劑，白色固體粗品440mg， 直接用于下步。
[0072]收率：100% JH 匪R(500MHz，CDC13) :S4.24(t，J = 7.5，lH)，3.81(dd，J = 9.5， 3.5Hz,lH),3.56(s,lH),3.67(dd,J=9.0,3.0Hz,lH),3.37(s,3H),3.12(s,lH),1.47(s, 9H)〇
[0073] 實(shí)施例3 0-甲基-N_(2-甲基-5-噻唑)-L_絲氨酸叔丁酯
[0075] 冰浴下，將實(shí)例2所得胺(440mg，2 · 5mmo 1)和2-甲基噻唑-5-甲酸(429mg，3mmo 1)溶 于四氫呋喃（1 OmL)，加入HOBt (135mg，3mmo 1)和HBTU(1 · 1 g，3mmo 1)逐滴緩慢加入N，N-二異 丙基乙胺（（lmL，6mmol)，升至室溫反應(yīng)4小時(shí)。加入乙酸乙酯20mL，充分靜置后分得有機(jī)層， 依次用飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過 濾，減壓回收溶劑得殘余物，用硅膠柱層析純化得白色固體〇.6g。
[0076] 收率：80%;1!1匪1?(50010^，0)(：13)38.04(8，1!1)，6.74((1，了 = 7.5取，1!〇,4.74-4.72(m，lH)，3.81(dd，J = 9.5,3.0Hz，lH)，3.71(dd，J = 9.5,3.0Hz，lH)，3.35(s，3H)，2.72 (s,3H),1.48(s,9H).ESI-MS：m/z = 301[M+l] + 〇
[0077] 實(shí)施例4 0-甲基-N_(2-甲基-噻唑)-L_絲氨酸
[0079] 將實(shí)施例3的0-甲基-N-(2-甲基-5噻唑）-L-絲氨酸叔丁酯(0.458，1.5111111〇1)溶于 3mL二氯甲烷中，將體系冷卻至0°C，緩慢逐滴加入三氟乙酸1.5mL，保持0°C下反應(yīng)1小時(shí)。減 壓蒸除溶劑得無色油狀物，無需純化直接用于下步反應(yīng)。
[0080] 咕匪1?(5001〇^，0150-(16)^8.96(8，1!〇,8.42(8，1!1)，4.60-4.57(111，1!1)，3.75-3.92(m,lH),3.66-3.63(m,lH),3.27(s,3H),3.15(s,3H).ESI-MS：m/z=345[M+l] +〇
[0081] 實(shí)施例5 N-Boc-L-0-甲基絲氨酰-L-苯丙胺酰環(huán)氧酮
[0083] 冰浴下，將N-Boc保護(hù)的L-苯丙酰環(huán)氧酮（2.5g，12mmol)溶于25mL二氯甲烷中，緩 慢逐滴加入三氟乙酸1.5mL保持0°C反應(yīng)1小時(shí)。減壓蒸除溶劑得無色油狀物，直接用于下步 反應(yīng)。將上述油狀物溶于40mL四氫呋喃，加入原料N-Boc-Ο-甲基-L-絲氨酸（2.2g，lOmmol) 同時(shí)加入HOBt(1 · 6g，12mmol)和HBTU(4 · 5g，12mmol)并逐滴緩慢加入N，N-二異丙基乙胺 (5.2mL，30mmol)，升至室溫反應(yīng)4小時(shí)。加入乙酸乙酯100mL，充分靜置后分得有機(jī)層，依次 用飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓回收 溶劑得殘余物，硅膠柱層析純化得無水油狀物3. lg。
[0084]收率：77% /Η NMR(400MHz，CDC13)S7.3卜7.28(m，2H)，7.26-7.22(m，lH)，7· 15- 7.13(m,2H),7.01(br,lH),5.26(br,lH),4.85-4.80(m,lH),4.17-4.13(m,lH),3.72(d,J= 5.7Hz,lH),3.40-3.26(m,5H),3.13(dd,J=14.0,5.2Hz,lH),2.91-2.83(m,2H),1.50(s, 3H),1.43(s,9H)〇
[0085] 實(shí)施例6 L-0-甲基絲氨酰-L-苯丙胺酰環(huán)氧酮三氟乙酸鹽
[0087] 將實(shí)施例5所得N-Boc-L-0-甲基絲氨酰-L-苯丙胺酰環(huán)氧酮（0.81g，2mmol)溶于 6mL二氯甲烷中，將體系冷卻至0°C，緩慢逐滴加入三氟乙酸2mL保持0°C反應(yīng)3小時(shí)。減壓蒸 除溶劑得無色油狀物，直接投于下步反應(yīng)。
[0088] 實(shí)施例7 0-甲基-N-[(2-甲基噻唑-5-基)羰基]-L-絲氨?；?0-甲基-N-{(1S)-1-芐基-2-[(2R)-2-甲基環(huán)氧乙烷-2-基]-2-氧乙烷}-L-絲氨酰胺(Oprozomib)
[0090] 將實(shí)施例3的0-甲基-N-(2-甲基-5-噻唑)-L-絲氨酸叔丁酯(0.45g，1.5mmol)溶于 3mL二氯甲烷中，將體系冷卻至0°C，緩慢逐滴加入三氟乙酸1.5mL保持0°C反應(yīng)1小時(shí)。減壓 蒸除溶劑得無色油狀物，直接用于下步反應(yīng)。將該化合物溶于3mL四氫呋喃中，于冰浴下加 入實(shí)施例 5 的環(huán)氧酮片段（0.5g，1.25mmol)、H0Bt(0.2g，1.5mmol)&HBTU(0.57g，1.5mmol) 并緩慢滴加 DIPEA(0.65mL，3.75mmol)體系溫度緩慢升至室溫反應(yīng)4小時(shí)。加入乙酸乙酯 20mL，充分靜置后分得有機(jī)層，分別用飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液及飽和食鹽水溶 液洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑得殘余物，最后柱層析純化。
[0091] 收率：85% </H NMR(500MHz，CDCl3)j8.04(s，lH) ,7.07-7.30(m，7H)，6.89(dd，J = 6Hz，lH)，4.87(td，J=5.5，8Ηζ，1Η),4.67-4.70(m，lH),4.46-4.49(m，lH),3.79-3.82(m， 2H),3.55(t ,J = 9Hz,lH) ,3.41 (dd ,J = 6,9Hz, 1H), 3.33(d ,J = 8Hz ,6H) ,3.28(d ,J = 4.5Hz, 1H) ,3.14(dd,J = 5,14Hz, 1H) ,2.86-2.92(m,2H) ,2.74(s,3H), 1.50 (s , 3H) ； 13C NMR (126MHz,CDC13)5207.25,170.82,169.67,169.50,160.56,143.79,135.83,133.30, 129.64,128.61,127.18,71.61,71.33,59.44,59.34,59.24,53.07,53.04,52.66,52.63, 37.25,19.79,16.71.ESI-MS：m/z = 533[M+l] + 〇
[0092] 實(shí)施例8 0-甲基-N-[ (5-乙氧基異噁唑-3-基）羰基]-L-絲氨酰基-0-甲基-N-Kis)-1-芐基-2-[(2R)-2-甲基環(huán)氧乙烷-2-基]-2-氧乙烷}-L-絲氨酰胺
[0094] 采用5-乙氧基異惡唑-3-甲酸代替2-甲基噻唑-5-甲酸為原料按實(shí)施例（1-7)的方 法制備得到。
[0095] 咕 NMR(500MHz，CDCl3)J7.52(d，J= 11.5Hz，1H) ,7.03-7.29(m，5H)，7.05((1, J = 13.5Ηζ,1Η),7.01(d,J=12Hz,lH),5.65(s,lH),4.80-4.86(m,lH),4.64-4.69(m,lH), 4.45-4.49(m，lH) ,4.25-4.28(m，2H) ,3.82(dd，J = 2.0,7 .0Hz,ΙΗ) ,3.80((1, J= 15.5Hz, 1H) ,3.55(dd,J=13.5,15.5Hz,lH) ,3.40(dd,J=10,15Hz,lH),3.33(s,3H) ,3.31(s,3H), 3.28(d,J = 8.0Hz,lH),3.12(dd,J = 8.5,13.5Hz,lH),2.90(d,J = 7.5Hz,lH) ,2.88(dd,J = 10.5,22.5Hz,lH),1.51(s,3H),1.48(t ,J = 11.5Hz,3H)；ESI-MS：m/z = 547[M+l] + 〇
[0096] 實(shí)施例9 0-甲基-N-[(5-甲基異噁唑-3-基)羰基]-L-絲氨?；?0-甲基-N-K1S)-1-芐基-2-[(2R)-2-甲基環(huán)氧乙烷-2-基]-2-氧乙烷}-L-絲氨酰胺
[0098] 采用5-甲基異惡唑-3-甲酸代替2-甲基噻唑-5-甲酸，L-亮氨酰環(huán)氧酮代替L-苯丙 酰環(huán)氧酮按實(shí)施例（1-7)的方法制備得到。
[0099] 4 NMR(500MHz，CDCl3)J7.57(d，J= 11.5Hz，1H)，7.05(d，J = 12·5Ηζ，1Η)，7· 00 (d,J = 14.5Hz, 1H) ,6.39(t,J = 2.5Hz,lH),4.73-4.79(m,lH),4.58-4.63(m,lH),4.50-4.53(m,lH),3.80-3.85(m,lH),3.82(dd ,J = 5.5,15.5Hz,lH),3.62(dd ,J=12.0,15.5Hz, 1H) ,3.41(s,3H) ,3.40(dd,J=10,15.5Hz,lH) ,3.34(s,3H),3.30(d,J = 8.5Hz,lH) ,2.83 (d ,J = 8.5Hz,lH),2.47(d ,J=1.00 Hz , 3H), 1.59(m, 1H), 1.51 (m, 1H), 1.48(s, 3H), 1.24 (m,lH),0.89(d ,J = 10.5 Hz,6H) ；ESI-MS：m/z = 517[M+l] + 〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法，其特征在于，通過以下 步驟實(shí)現(xiàn)：將R3取代的N保護(hù)氨基酸I保護(hù)羧基后得N-保護(hù)的氨基酸酯II，脫除N保護(hù)基團(tuán)與R2取代 羧酸縮合得式IV表示的二肽中間體，同時(shí)將R4取代的N保護(hù)氨基酸VI與環(huán)氧酮片段縮合反 應(yīng)得VII，經(jīng)脫去氨基保護(hù)基團(tuán)得式VIII表示的肽末端環(huán)氧酮片段，最后式IV表示的二肽中 間體脫保護(hù)后得到的V與式VIII表示的肽末端環(huán)氧酮片段反應(yīng)后制備獲得IX;反應(yīng)式如下：其中辦代表甲基、乙基、叔丁基、芐基;此代表甲基、苯基、叔丁氧基、芐氧基、2-甲基噻唑 基、2，4_二氯苯基、1，2_二氯苯基、2-吡嗪基、吡唑、5-乙氧基異惡唑、5-甲基異惡唑;R3代表 甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、單氟甲氧基;R4代表甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、單 氟甲氧基;R 5代表如亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、萘丙氨酸的殘基； 其中縮合反應(yīng)的催化劑為 EDC、DCC、HOBt、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU 或 PyBOP 中的一 種或兩種以上的混合物，以二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、苯、乙腈或二氧六環(huán)為溶劑。 其中脫保護(hù)反應(yīng)中，當(dāng)脫除氨基保護(hù)基團(tuán)時(shí)使用HC1飽和的乙酸乙酯溶液、二氧六環(huán)或 三氟甲酸溶液。脫除羧基的保護(hù)基團(tuán)使用無機(jī)鹽LiOH在水和甲醇溶液中進(jìn)行。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，其中所述縮合反應(yīng)的催化劑為H)C/H0Bt或HBTU/HOBt，以二氯甲烷或四氫呋喃 為溶劑，室溫反應(yīng)后得到的產(chǎn)物IX。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，其中心代表叔丁基，R 2代表2-甲基噻唑，R3代表甲氧基的式IV脫除叔丁基保護(hù)后與R4代表甲氧基，R5代表苯基的式VIII化合物I ￥111 縮合反應(yīng)得到的式IX化合物為OprozomibXXX 〇.4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，式IV表示的二肽中間體按照如下方法合成： (1) N-保護(hù)的氨基酸酯包括N-保護(hù)氨基酸甲酯、N-保護(hù)氨基酸乙酯、N-保護(hù)氨基酸芐酯 和N-保護(hù)氨基酸叔丁酯的合成： a) N-保護(hù)氨基酸甲酯的合成:將R3取代的N保護(hù)氨基酸于-10°C加入甲醇和二氯亞砜，再 回流10小時(shí)反應(yīng)； b) N-保護(hù)氨基酸乙酯的合成:將R3取代的N保護(hù)氨基酸于-10°C加入乙醇和二氯亞砜，再 回流10小時(shí)反應(yīng)； c) N-保護(hù)氨基酸芐酯的合成:將R3取代的N-保護(hù)氨基酸于N2保護(hù)下溶于飽和碳酸鈉溶 液中，冰浴下逐滴加入氯甲酸芐酯，升至室溫反應(yīng)4小時(shí)； d) N-保護(hù)氨基酸叔丁基酯的合成:將R3取代的N-保護(hù)氨基酸溶于乙腈中，將叔丁基三氯 乙酰亞胺酯溶于正己烷中，然后將上述正己烷溶液緩慢滴加到乙酸乙酯溶液中，室溫反應(yīng) 18小時(shí)； 其中R3的定義同權(quán)利要求1; (2) R2取代的羧酸與N-保護(hù)氨基酸酯縮合反應(yīng):將步驟(1)的產(chǎn)物溶于四氫呋喃中，加入 HBTU、H0BT和R2取代的羧酸反應(yīng)即得到二肽中間體IV。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，其中步驟(l)a)所述N-保護(hù)氨基酸甲酯的合成反應(yīng)式如下：R3的定義同權(quán)利要求1，R6代表N-保護(hù)基，包含叔丁氧羰基、芐氧羰基、芴甲氧羰基、三氟 乙酰基或?qū)妆交酋；?. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，R6選用芴甲氧羰基。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，其中步驟(l)b)所述N-保護(hù)氨基酸乙酯的合成反應(yīng)式：步驟(l)c)所述N-保護(hù)氨基酸芐酯的合成反應(yīng)式： π 0" 〇 步驟(1 )d)所述Ν-保護(hù)氨基酸叔丁酯酯的合成反應(yīng)式：其中R3的定義同權(quán)利要求1，R6的定義同權(quán)利要求5。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，其中步驟(2)所述取代羧酸與氨基脫保護(hù)后的氨基酸縮合反應(yīng)式：Ri、R2、R3、同權(quán)利要求1; R6的定義同權(quán)利要求5;將步驟（1)所得N-保護(hù)氨基酸酯在HC1飽 和的乙酸乙酯溶液、二氧六環(huán)或三氟甲酸溶液中脫保護(hù)后，溶于二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、 苯、乙腈或二氧六環(huán)的溶劑，冰浴下加入取代羧酸、HOBt/EDC或HOBt/HBTU的縮合劑，反應(yīng)體 系升至室溫進(jìn)行反應(yīng)。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白酶體抑制劑Oprozomib及其類似物式IX的制備方法， 其特征在于，式VIII表示的肽末端的環(huán)氧酮片段的合成反應(yīng)式為：以環(huán)氧酮片段為原料，經(jīng) EDC、DCC、HOBt、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或PyBOP中的一種 或兩種以上的混合物為縮合催化劑同R4取代的氨基酸酸縮合，以二氯甲烷、四氫呋喃、甲 苯、苯、乙腈或二氧六環(huán)為溶劑，在〇°C至25°C下反應(yīng)得到相應(yīng)中間體，然后經(jīng)脫去氨基保護(hù) 基團(tuán)得到式VIII所示化合物，其中R 4、R5的定義同上。
【文檔編號(hào)】C07K1/06GK105949279SQ201610273652
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月27日
【發(fā)明人】劉滔, 傅利萍, 胡永洲, 董曉武, 李大強(qiáng), 何若愚
【申請人】浙江大學(xué)