技術(shù)特征：
1.一種從宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出重組蛛絲蛋白的方法，其包括：a.獲得細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物包含宿主細(xì)胞和生長培養(yǎng)基，其中所述宿主細(xì)胞表達(dá)重組蛛絲蛋白；b.收集所述細(xì)胞培養(yǎng)物的包含所述重組蛛絲蛋白的部分；c.在堿性條件下在水溶液中孵育所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分，從而在所述水溶液中增溶所述重組蛛絲蛋白；以及d.從所述水溶液中分離出所述重組蛛絲蛋白，從而產(chǎn)生分離的重組蛛絲蛋白樣品。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述堿性條件包括從9至14的堿性ph值。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述堿性ph值是從11至12。4.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述分離的重組蛛絲蛋白是全長重組蛛絲蛋白。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述分離的重組蛛絲蛋白樣品包含相對于總的分離的重組蛛絲蛋白的至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的全長重組蛛絲蛋白。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中全長重組蛛絲蛋白的百分比是使用蛋白質(zhì)印跡法測量的。7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中全長重組蛛絲蛋白的百分比是用尺寸排阻色譜法測量的。8.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述分離的重組蛛絲蛋白的純度為5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％、30-35％、35-40％、45-50％、50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％、75-80％、80-85％、85-90％、90-95％或95-100％。9.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述分離的重組蛛絲蛋白的收率相對于通過尿素或硫氰酸胍法分離的重組蛛絲為至少50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％、75-80％、80-85％、85-90％、09-95％或95-100％。10.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中分離所述重組蛛絲蛋白包括通過改變所述水溶液的所述堿性條件來沉淀所述重組蛛絲蛋白。11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中改變所述堿性條件包括將所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分的所述堿性ph值調(diào)節(jié)至從4至10的降低的ph值。12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述降低的ph值為4、5、6、7、8、9或10的ph值。13.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述降低的ph值是從6至7的ph值。14.如權(quán)利要求10-13中任一項所述的方法，其中調(diào)節(jié)所述堿性ph值包括添加酸到所述水溶液中。15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述酸為h2so4。16.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分包含上清液、全細(xì)胞肉湯或細(xì)胞團(tuán)塊。17.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中收集所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分包括從所述生長培養(yǎng)基中移出所述宿主細(xì)胞，并在所述水溶液中重構(gòu)所述宿主細(xì)胞。18.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中收集所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分包括
裂解所述宿主細(xì)胞。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中裂解包括熱處理、剪切破壞、物理勻質(zhì)化、超聲或化學(xué)勻質(zhì)化。20.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分包含來自所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述宿主細(xì)胞和所述生長培養(yǎng)基。21.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述水溶液包含稀釋的生長培養(yǎng)基。22.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在堿性條件下孵育所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分被執(zhí)行10至120分鐘。23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中在堿性條件下孵育所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分被執(zhí)行至少10分鐘、至少15分鐘、至少30分鐘、至少45分鐘、至少60分鐘、至少75分鐘、至少90分鐘、至少105分鐘或至少120分鐘。24.如權(quán)利要求22所述的方法，其中在堿性條件下孵育所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分被執(zhí)行15至30分鐘。25.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在堿性條件下孵育所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分進(jìn)一步包括攪拌所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分。26.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括在堿性條件下從所述水溶液中除去未被增溶的生物質(zhì)。27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中除去所述未被增溶的生物質(zhì)包括過濾、離心、重力沉降、吸附、透析或相分離。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述過濾是超濾、微量過濾或透析過濾。29.如權(quán)利要求26-28中任一項所述的方法，其中除去所述未被增溶的生物質(zhì)被重復(fù)至少一次。30.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括在分離所述重組蛛絲蛋白之前或者在分離所述重組蛛絲蛋白之后除去雜質(zhì)。31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中除去雜質(zhì)包括過濾、離心、重力沉降、吸附、透析或相分離。32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述過濾是超濾、微量過濾或透析過濾。33.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述離心是超速離心或透析離心。34.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述吸附是炭吸附。35.如權(quán)利要求31-34中任一項所述的方法，其中去除雜質(zhì)被重復(fù)至少一次。36.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括濃縮所述分離的重組蛛絲蛋白以產(chǎn)生濃縮的蛛絲蛋白。37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中濃縮包括沉淀、過濾、超濾、離心、透析、蒸發(fā)或凍干。38.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括干燥所述分離的重組蛛絲蛋白。39.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括由所述分離的重組蛛絲產(chǎn)生絲纖維。40.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述絲纖維包括至少19cn/tex的韌性。
41.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述重組蛛絲蛋白為18b或p0。42.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物包含真菌細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞或酵母細(xì)胞。43.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述酵母細(xì)胞為巴斯德畢氏酵母細(xì)胞。44.一種分離重組蛛絲蛋白的方法，所述方法包括a.獲得細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物包含宿主細(xì)胞和生長培養(yǎng)基，其中所述宿主細(xì)胞表達(dá)重組蛛絲蛋白；b.收集所述細(xì)胞培養(yǎng)物的包含所述重組蛛絲蛋白的部分；c.在堿性條件下在水溶液中孵育所述細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分，從而在所述水溶液中增溶所述重組蛛絲蛋白；d.調(diào)節(jié)所述水溶液至非堿性ph值，從而沉淀所述被增溶的重組蛛絲蛋白；以及e.從細(xì)胞培養(yǎng)物的所述部分中分離出所述重組蛛絲蛋白，從而產(chǎn)生分離的重組蛛絲蛋白。45.一種組合物，其包含通過前述權(quán)利要求中任一項所述的方法產(chǎn)生的重組蛛絲蛋白。46.如權(quán)利要求45所述的組合物，其中所述重組蛛絲包含至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的全長重組蛛絲。47.一種絲纖維，其包含通過權(quán)利要求1-44中任一項所述的方法產(chǎn)生的重組蛛絲蛋白。48.如權(quán)利要求47所述的絲纖維，其中所述絲纖維包括至少19cn/tex的韌性。49.一種組合物，其包含在堿性緩沖液中的細(xì)胞培養(yǎng)物，所述細(xì)胞培養(yǎng)物包含生長培養(yǎng)基和宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含重組蛛絲蛋白。50.如權(quán)利要求45-49中任一項所述的組合物，其中所述堿性緩沖液具有從9至14的ph值。51.如權(quán)利要求50所述的組合物，其中所述ph值是從11至12。52.如權(quán)利要求49-51中任一項所述的組合物，其中所述蛛絲蛋白為18b或p0。53.如權(quán)利要求49-52中任一項所述的組合物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物包含真菌細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞或酵母細(xì)胞。54.如權(quán)利要求53所述的組合物，其中所述細(xì)菌細(xì)胞是大腸埃希菌細(xì)胞。55.如權(quán)利要求53所述的組合物，其中所述酵母細(xì)胞是巴斯德畢氏酵母細(xì)胞。

技術(shù)總結(jié)
本公開涉及生產(chǎn)和純化合成嵌段共聚物蛋白的方法、用于分泌所述合成嵌段共聚物蛋白的表達(dá)構(gòu)建體、用于生產(chǎn)所述合成嵌段共聚物蛋白的重組微生物以及包含這些蛋白的合成纖維，所述合成纖維再現(xiàn)了天然絲的許多特性。述合成纖維再現(xiàn)了天然絲的許多特性。述合成纖維再現(xiàn)了天然絲的許多特性。


技術(shù)研發(fā)人員：梅嘉恒 R
受保護(hù)的技術(shù)使用者：保爾特紡織品公司
技術(shù)研發(fā)日：2019.11.26
技術(shù)公布日：2022/4/26