一種苯丙素類化合物在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種苯丙素類化合物在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應(yīng)用。所述苯丙素類化合物顯示出可以抑制細(xì)胞炎癥因子TNF?α，IL?1β，IL?6的表達(dá)作用，進(jìn)而具有抗炎活性，為炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關(guān)節(jié)炎等疾病的治療藥物的開發(fā)提供方向。
【專利說明】
一種苯丙素類化合物在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種苯丙素類化合物在制備治療炎癥性疾病的藥 物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 從天然藥物中提取分離得到的成分結(jié)構(gòu)多樣、活性顯著，對(duì)其進(jìn)行分離純化、結(jié)構(gòu) 修飾、改造和全合成，一直是新藥研發(fā)的一個(gè)主要思路。
[0003] TNF-α:是一種能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常細(xì)胞無明顯毒性的細(xì)胞因子，是迄 今為止所發(fā)現(xiàn)的直接殺傷腫瘤作用最強(qiáng)的生物活性因子之一，然而其毒副作用也非常嚴(yán) 重。
[0004] IL-Ιβ:在局部低濃度時(shí)協(xié)同刺激APC和T細(xì)胞活化，促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體，進(jìn) 行免疫調(diào)節(jié)。大量產(chǎn)生時(shí)有內(nèi)分泌效應(yīng):誘導(dǎo)肝臟急性期蛋白合成，引起發(fā)熱和惡病質(zhì)。
[0005] IL-6:人類IL-6基因位于第7號(hào)染色體上；IL-6分子量在21~30KD之間。主要由單 核巨噬細(xì)胞、Th2細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞產(chǎn)生。能夠刺激活化B細(xì)胞增殖，分泌抗 體;刺激T細(xì)胞增殖及CTL活化;刺激肝細(xì)胞合成急性期蛋白，參與炎癥反應(yīng);促進(jìn)血細(xì)胞發(fā) 育。
[0006] IL-6可由多種細(xì)胞合成，包括活化的T細(xì)胞和B細(xì)胞、單核一巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、 上皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞等。IL-6作用的靶細(xì)胞很多，包括巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞、靜止的T細(xì) 胞、活化的B細(xì)胞和漿細(xì)胞等;其生物效應(yīng)也十分復(fù)雜。
[0007] 因此，尋求新的化合物，以抑制細(xì)胞炎癥因子TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的表達(dá)作用，應(yīng) 用于炎癥性疾病的治療，是非常有必要的。
[0008] 千斤拔藥材為豆科（Leguminosae)千斤拔屬（Flemingl .Roxb.或Moghania)植 物大葉千斤拔（logAa/jia (Willd.) O.Kuntze)的干燥根，在我國(guó)主要分布 于東南部地區(qū)。該植物在中國(guó)植物志（1995，41:313)、中國(guó)臺(tái)灣植物志（1977，3:258)、海 南植物志（1965，2: 311 )、《中國(guó)高等植物圖鑒》（1972，2:510)、中國(guó)主要植物圖說（1955， pp707)和廣州植物志（1956，pp361)中均有收錄。千斤拔藥材為廣西地區(qū)的道地藥材，史 載于《植物名實(shí)圖考》，有著廣泛的民間用藥基礎(chǔ)。其性味甘，微澀，平，具有清熱除濕等功 效，主要用于治療風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、慢性腎炎、痛經(jīng)和白帶多等婦科疾病。該藥材目前已 收載入2005年版《中國(guó)藥典》附錄。
[0009] 大葉千斤拔已報(bào)道的成分主要有黃酮類、甾類、萜類、蒽醌類、揮發(fā)油類成分，均具 有一定的藥理活性，其藥理活性多樣，報(bào)道較多的有神經(jīng)保護(hù)作用，抗炎、抗氧化作用，對(duì)病 原微生物的驅(qū)蟲作用、類激素作用、細(xì)胞毒作用，抗菌作用以及免疫增強(qiáng)作用、抗疲勞作用。
[0010] 千斤拔目前廣泛應(yīng)用于婦科、風(fēng)濕痹痛等類型的中成藥生產(chǎn)，如婦科千金片、婦科 千金膠囊、金雞沖劑、金雞膠囊等，此類中成藥主要用于婦科病（痛經(jīng)、子宮寒冷不孕、子宮 下垂、盆腔炎、乳腺炎、白帶多、產(chǎn)后血虛、關(guān)節(jié)痛、產(chǎn)后腰膝痛、缺乳和乳瘡等），虛弱貧血 (婦女貧血，氣血虛弱和病后氣虛等）。近年來，臨床報(bào)道較多的是婦科千金片在治療婦科炎 癥方面的作用。
[0011]目前，在千斤拔的文獻(xiàn)中，報(bào)道苯丙素類化合物的文獻(xiàn)極少，尋找有效的苯丙素類 新化合物，對(duì)其進(jìn)行分離純化、結(jié)構(gòu)修飾和合成，開發(fā)新藥，應(yīng)用于炎癥性疾病的治療，意義 重大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，尋找一種有效成分，其能抑制細(xì)胞炎癥因子TNF-a， IL-li3，IL_6的表達(dá)作用，能應(yīng)用于制備治療炎癥性疾病的藥物中。本發(fā)明提供一種苯丙素 類化合物，其可以抑制細(xì)胞炎癥因子TNF-a，IL-liUL_6的表達(dá)作用，進(jìn)而具有抗炎活性，為 抗炎藥物的開發(fā)提供方向，用于治療相關(guān)炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、乳腺 炎、咽喉炎和/或關(guān)節(jié)炎等。
[0013] 本發(fā)明的目的是提供一種苯丙素類化合物的醫(yī)藥應(yīng)用。
[0014] 提供一種苯丙素類化合物作為制備治療炎癥性疾病的藥物中的應(yīng)用，所述苯丙素 類化合物的結(jié)構(gòu)式如式（I)所示： (I)0
[0015]優(yōu)選地，所述苯丙素類化合物在制備抑制細(xì)胞炎癥因子TNF-a，IL-Ιβ，IL-6表達(dá) 的藥物中的應(yīng)用，應(yīng)用于治療炎癥性疾病的藥物中。
[0016] 優(yōu)選地，所述炎癥性疾病為宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關(guān) 節(jié)炎。
[0017] 所述藥物包含有藥學(xué)上允許的輔料和/或載體。
[0018] 優(yōu)選地，所述藥物還含有其他藥效成分。
[0019] 優(yōu)選地，所述藥物還含有金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當(dāng)歸、黨參中的 一種或幾種。
[0020] 優(yōu)選地，所述藥物還含有金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當(dāng)歸、黨參中的 一種或幾種的提取物。
[0021] 所述提取物為按專利公告號(hào) CN1078079C、CN1170549C、CN1158087C、CN1330335C、 〇附296071(：、0附321631(：、0附296072(：、0價(jià)296073(：的任意一件或幾件專利文件中所述的提 取方法制備得到。
[0022] 所述藥物的劑型為片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、注 射劑、軟膏劑、栓劑或噴霧劑。
[0023] 本發(fā)明的目的是從傳統(tǒng)的中藥處方中，通過從婦科千金片及婦科千金膠囊的處方 中，通過溶劑提取、柱層析分離、制備液相分離、純化制得一種新化合物，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)， 其可以應(yīng)用于炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關(guān)節(jié)炎等 疾病的治療。
[0024]具體地，發(fā)明人通過從婦科千金片、婦科千金膠囊的處方中，選取大葉千斤拔的干 燥根，通過溶劑提取、柱層析分離、制備液相分離、純化，得到本發(fā)明所述苯丙素類化合物， 然后對(duì)該化合物進(jìn)行細(xì)胞試驗(yàn)，測(cè)定其對(duì)細(xì)胞炎癥因子TNF-α，IL-Ιβ，IL-6的抑制程度，實(shí) 驗(yàn)表明，該化合物在濃度(7.50-13.5(^ 8/1^)范圍內(nèi)對(duì)1^5刺激引起的1^界264.7細(xì)胞炎癥因 子TNF-a含量有明顯的抑制作用(p < 0.05 )，并且表現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系;在濃度13.50 yg/mL下對(duì)炎癥因子IL-Ιβ含量有明顯的抑制作用（p<0.05);在濃度（10.50-13.50yg/mL) 范圍內(nèi)對(duì)炎癥因子IL-6含量均有明顯的抑制作用(p<0.05)，表現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系。 [0025]本發(fā)明的有益效果： 本發(fā)明從傳統(tǒng)中藥處方角度出發(fā)，從傳統(tǒng)中藥婦科千金片、婦科千金膠囊中提取、分 離、純化得到一種苯丙素類化合物，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，該化合物顯示出可以抑制細(xì)胞炎癥因子 TNF-a，IL-li3，IL_6的表達(dá)作用，為炎癥性疾病，如宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽 喉炎和/或關(guān)節(jié)炎等疾病的治療藥物的開發(fā)提供了方向。
[0026] 本發(fā)明提供的新的苯丙素化合物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、純度高，且提取分離方法簡(jiǎn)便、易于合 成，可適應(yīng)新藥的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
【附圖說明】
[0027] 圖1為本發(fā)明所述苯丙素類化合物的核磁共振氫譜圖。
[0028] 圖2為本發(fā)明所述苯丙素類化合物的核磁共振碳譜圖。
[0029]圖3為本發(fā)明所述苯丙素類化合物對(duì)細(xì)胞活性的影響圖。
[0030]圖4為本發(fā)明所述苯丙素類化合物對(duì)NO的抑制作用圖。
[0031]圖5為本發(fā)明所述苯丙素類化合物對(duì)TNF-a的抑制作用圖。
[0032]圖6為本發(fā)明所述苯丙素類化合物對(duì)IL-I邱勺抑制作用圖。
[0033]圖7為本發(fā)明所述苯丙素類化合物對(duì)IL-6的抑制作用圖。
[0034]圖8為本發(fā)明所述苯丙素類化合物對(duì)OH的抑制作用圖。
【具體實(shí)施方式】
[0035]以下結(jié)合說明書附圖和具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明 做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試 劑、方法和設(shè)備。除非特別說明，本實(shí)施例所用的原料和設(shè)備均為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)市購的原 料和設(shè)備。
[0036]本發(fā)明的化合物是所述式（I)所示的苯丙素類化合物。該化合物可以采用本發(fā)明 提供的以大葉千斤拔為原料提取的方法制備得到，也可以根據(jù)本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式結(jié)合采 用本領(lǐng)域的化學(xué)合成等方法制備得到。
[0037] 本發(fā)明化合物，可用作如宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關(guān)節(jié) 炎等炎癥性疾病的治療藥物。
[0038] 本發(fā)明化合物可以與藥學(xué)上允許的輔料和/或載體一起用作藥物組合物，也可以 在加入藥學(xué)上允許的輔料和/或載體的情況下與金櫻根、單面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、 當(dāng)歸、黨參中的一種或幾種中藥材或提取物的組合用作藥物組合物，本發(fā)明化合物還可以 與其他藥學(xué)上可接受的藥效成分一起用作藥物組合物。
[0039] 作為藥物組合物，可以是片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿 劑、注射劑、軟膏劑、栓劑、噴霧劑等。
[0040] 進(jìn)一步地，片劑可以是在添加藥學(xué)上允許的輔料和/或載體的情況下制成的糖衣 片、薄膜衣片、腸溶性包衣片或雙層片、多層片。
[0041 ]本發(fā)明的輔料和/或載體可以如下： 制成固體制劑，可以使用添加劑，例如蔗糖、乳糖、纖維素糖、麥芽糖醇、葡萄糖、淀粉 類、瓊脂、海藻酸鹽類、甲殼素、殼聚糖類、果膠類、阿拉伯樹膠類、明膠類、膠原類、酪蛋白、 白蛋白、磷酸鈣、山梨糖醇、甘氨酸、甘油、聚乙二醇、碳酸氫鈉、滑石等。
[0042]制成半固體制劑，可以使用動(dòng)植物性油脂(橄欖油、玉米油、蓖麻油等）、礦物性油 月旨(凡士林、白凡士林、固態(tài)石蠟等）、蠟類(霍霍巴油、巴西棕櫚蠟、蜂蠟等）、部分合成或全 合成的甘油脂肪酸酯（月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸等)等。
[0043]制成液體制劑，可使用添加劑，例如氯化鈉、葡萄糖、山梨糖醇、甘油、橄欖油、丙二 醇、乙醇等。尤其制成注射劑的情況下，可以使用無菌水溶液，例如生理鹽水、等滲液、油性 液，如麻油、大豆油。另外，還可以根據(jù)需要，并用適當(dāng)?shù)闹鷳覄玺燃谆w維素鈉，非離子 表面活性劑、助溶劑，如苯甲酸芐酯、苯甲醇等。
[0044]這些制劑的有效成分的量為制劑的0.01~80重量％，適宜為1~50重量％，給藥量根據(jù) 患者的癥狀、體重、年齡等不同而變化。
[0045] 實(shí)施例1苯丙素類化合物的制備 本實(shí)施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟： 51. 取大葉千斤拔50kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。經(jīng)8倍量60%的乙醇回流提取3 次，每次2小時(shí)，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用； 52. 將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于IOL水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對(duì)其進(jìn)行洗脫， 洗脫劑為水，洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用； 53. 將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進(jìn)行洗脫，洗脫劑為甲醇-水系統(tǒng)， 其體積比為25:75，洗脫18個(gè)柱體積，按每3個(gè)柱體積收集一個(gè)流分的洗脫液，按順序收集6 個(gè)流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用； 54. 將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇:水：乙酸的體積比為25:75:0.01， 按出峰順序收集洗脫液，共收集7個(gè)流分，分別命名為MM-121，MM-122,麗-123，MM-124,麗-125，麗-126，麗-127，備用； 55. 將步驟S4中收集到的流分MM-122用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85:0.01， 收集洗脫液，重結(jié)晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0046] 實(shí)施例2苯丙素類化合物的制備 本實(shí)施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟： Sl.取大葉千斤拔40kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。經(jīng)6倍量50%的乙醇回流提取2 次，每次1小時(shí)，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用； 52. 將步驟SI中濃縮后的浸膏溶于5L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對(duì)其進(jìn)行洗脫，洗 脫劑為乙醇與水的體積比為15:85,洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用； 53. 將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進(jìn)行洗脫，洗脫劑為甲醇-水系統(tǒng)， 其體積比為20:80，洗脫18個(gè)柱體積，按每3個(gè)柱體積收集一個(gè)流分的洗脫液，按順序收集6 個(gè)流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用； 54. 將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇：水：乙酸的體積比為35 : 65 : O . 01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個(gè)流分，分別命名為MM-121，麗-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,備用； 55. 將步驟S4中收集到的流分MM-122用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85:0.0 l， 收集洗脫液，重結(jié)晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0047]實(shí)施例3苯丙素類化合物的制備 本實(shí)施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟： 51. 取大葉千斤拔60kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。7倍量70%的乙醇回流提取4次， 每次3小時(shí)，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用； 52. 將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于8L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對(duì)其進(jìn)行洗脫，洗 脫劑為乙醇與水的體積比為10:90，洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用； 53. 將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進(jìn)行洗脫，洗脫劑為甲醇-水系統(tǒng)， 其體積比為30:70，洗脫18個(gè)柱體積，按每3個(gè)柱體積收集一個(gè)流分的洗脫液，按順序收集6 個(gè)流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用； 54. 將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇：水：乙酸的體積比為30 : 70 : O . 01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個(gè)流分，分別命名為MM-121，麗-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,備用； 55. 將步驟S4中收集到的流分MM-122用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85:0.0 l， 收集洗脫液，重結(jié)晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0048]實(shí)施例4苯丙素類化合物的制備 本實(shí)施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟： 51. 取大葉千斤拔50kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。8倍量60%的乙醇回流提取2次， 每次1.5小時(shí)，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用； 52. 將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于6L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對(duì)其進(jìn)行洗脫，洗 脫劑為乙醇與水的體積比為5:95,洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用； 53. 將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進(jìn)行洗脫，洗脫劑為甲醇-水系統(tǒng)， 其體積比為25:75，洗脫18個(gè)柱體積，按每3個(gè)柱體積收集一個(gè)流分的洗脫液，按順序收集6 個(gè)流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用； 54. 將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇：水：乙酸的體積比為25 : 75 : O . OI，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個(gè)流分，分別命名為MM-121，麗-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,備用； S5.將步驟S4中收集到的流分MM-122用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85:0.01， 收集洗脫液，重結(jié)晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0049] 實(shí)施例5苯丙素類化合物的制備 本實(shí)施例提供式(I)所示苯丙素類化合物的一種制備方法，包括如下步驟： 51. 取大葉千斤拔50kg，以根部為原料，干燥，切成小塊。8倍量80%的乙醇回流提取2次， 每次1.5小時(shí)，將提取液合并，濃縮至無醇味，得浸膏備用； 52. 將步驟Sl中濃縮后的浸膏溶于6L水中，采用DlOl大孔吸附樹脂柱對(duì)其進(jìn)行洗脫，洗 脫劑為乙醇與水的體積比為10:90，洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液，命名為MM-I，備用； 53. 將步驟S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱層析進(jìn)行洗脫，洗脫劑為甲醇-水系統(tǒng)， 其體積比為28:72，洗脫18個(gè)柱體積，按每3個(gè)柱體積收集一個(gè)流分的洗脫液，按順序收集6 個(gè)流分，分別命名為:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用； 54. 將步驟S3中的收集到的流分MM-12用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇：水：乙酸的體積比為10 : 90 : O . 01，按出峰順序收集洗脫液，共收集7個(gè)流分，分別命名為MM-121，麗-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,備用； 55. 將步驟S4中收集到的流分MM-122用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85:0.0 l， 收集洗脫液，重結(jié)晶后得到所述苯丙素類化合物。
[0050] 將實(shí)施例1至實(shí)施例5制備得到的化合物進(jìn)行質(zhì)譜、核磁共振氫譜、核磁共振碳譜 的檢測(cè)，結(jié)果證明所得化合物為:4_葡萄糖基-11-甲基-8,9-苯己烯。其結(jié)構(gòu)式如式（I)所 示： (I)0
[0051 ]其質(zhì)譜、核磁共振氫譜、核磁共振碳譜的譜圖數(shù)據(jù)如下： HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z 375.1984，結(jié)合核磁特征，可得分子式為C19H28O6，不飽和 度為6。
[0052] 1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.89(d，/= 1.8 Hz，2H)，5.82(d，/= 1.8Hz，2H)， 4.94 (d，/=7.6Hz，lH)，4.86(d，2H)，2.71 (t，/=7.0 Ηζ，2Η)，2·44 (t，/=7.0 Hz， 2H)，2.40(s， 3H), 1.95 (m，lH)，1.17(s，3H)，3.30-4.00 (glc-H)。
[0053] 13C-NMR (150MHz，CD3OD): 141.4 (C-4)，130.2(C-1)，119.6(02)，115.4 (C- 3)，114.4(C-5)，111.3(C-6)，101.3(C-1'），109.3(C-9)，102.5(C-8)，61.5-77.8(C2''-C6' '），45.0(C-7)，28.8(C-10)，18.7(C-11)，17.3(C-12)，14.5(-CH3)。
[0054]實(shí)驗(yàn)例6應(yīng)用試驗(yàn) 本發(fā)明所述化合物對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激與炎癥的影響。（為了實(shí) 驗(yàn)過程中記錄方便，以下將本發(fā)明式（I)所示的苯丙素類化合物標(biāo)號(hào)為:藥物MM-122,即本 發(fā)明中所述的藥物MM-122即是指本發(fā)明式(I)所示苯丙素類化合物。） 1材料與方法 1.1藥品及儀器 脂多糖（lipopolysaccharide，LPS)，MTT購自 Sigma公司；小鼠巨細(xì)胞Raw 264 · 7購 自湘雅細(xì)胞庫;PBS; DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素與鏈霉素;全自動(dòng)酶標(biāo)儀;恒溫C02 培養(yǎng)箱。
[0055] 小鼠白介素 l-f3(IL-1-f3)ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：2014/06(96T);小鼠白介素6 (IL-6)ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：2014/06(96T);小鼠腫瘤壞死因子-a(TNF-a)ELISA檢測(cè)試 劑盒，批號(hào)：2014/06(96T);小鼠一氧化氮(NO) ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：2014/10(96T);小 鼠羥基自由基(OH) ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào):2014/10(96T)。
[0056] 1.2藥物制備 首先用少量DMSO溶解，然后用DMEM稀釋至一定的濃度，使終濃度中DMSO含量少于1%〇。 [0057] 1.3細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠巨噬細(xì)胞Raw 264.7培養(yǎng)于含10%熱滅活(56°(：，3〇1^11)的胎牛血清汗83)、101]/11^ 青霉素鈉、I〇〇yg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，37°C、5%C02恒溫培養(yǎng)箱中孵育生長(zhǎng)。
[0058] 1.4細(xì)胞活力測(cè)定 細(xì)胞活力通過MTT法來測(cè)定。將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液接種于96孔板（I X 104個(gè)/孔)孵育 24h，再同步化24h，然后將不同濃度的藥物作用于細(xì)胞2h，然后再加入LPS(30yg/mL)刺激 24h，吸棄原培養(yǎng)基，每孔加入IOOyL的MTT(0.5mg/mL)繼續(xù)孵育4h，吸棄培養(yǎng)基，每孔加入 150yL的DMSO，搖床振搖IOmin，在490nm處測(cè)定吸光度。
[0059] 1.5 NO含量測(cè)定 Raw 264.7細(xì)胞接種于96孔板24h，再同步化24h，然后將不同濃度的藥物作用于細(xì)胞 2h，然后再加入LPS(30yg/mL)刺激24h，最后收集上清液，并于1000 Orpm離心5min，分裝上清 并置于-80°C保存?zhèn)溆?。通過小鼠 NO試劑盒測(cè)定NO含量。
[0060] 1.6 炎癥因子TNF-a, IL-Ιβ, IL-6測(cè)量 樣品取1.5制備好的樣品用于后續(xù)炎癥因子測(cè)定。細(xì)胞產(chǎn)生TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的量 通過小鼠 TNF-a，IL-Ιβ，IL-6試劑盒來測(cè)定。
[0061] 1.7 OH含量測(cè)定 樣品取1.5制備好的樣品用于OH因子測(cè)定。通過OH試劑盒測(cè)定含量。
[0062] 1.8統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS17.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示;所得數(shù)據(jù)通過用單因素方差分析，方差齊性 用LSD檢驗(yàn)，方差不齊用Dunnett T3檢驗(yàn)。
[0063] 2實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.1細(xì)胞活力 藥物對(duì)細(xì)胞活力的影響通過MTT法來評(píng)價(jià)。如圖3所示，藥物MM-122在1.50-13.50yg/mL 濃度范圍內(nèi)對(duì)Raw 264.7細(xì)胞活力沒有顯著影響；因此在此范圍濃度下的藥物濃度對(duì)于后 續(xù)實(shí)驗(yàn)是合適的。
[0064] 2.2藥物抑制NO的產(chǎn)生 如圖4所示，通過LPS刺激Raw 264.7細(xì)胞，其產(chǎn)生NO (65.81±2.93 IU/mL)含量與正常 組N0(33.61±2.19IU/mL)相比明顯升高(p<0.01)。藥物MM-122在該濃度下對(duì)LPS引起的炎 癥模型中，對(duì)NO含量升高沒有明顯的抑制作用。
[0065] 2.3 藥物抑制TNF-a, IL-Ιβ, IL-6的產(chǎn)生 如圖5至圖7所示，通過LPS刺激Raw 264.7細(xì)胞，Raw 264.7細(xì)胞炎癥因子TNF-a (132.16±5.28pg/mL)，IL-10 (358·80±24·64 pg/mL)，IL-6 (198·39±5·97 pg/mL)含 量與正常組TNF-a(65.41±6.29 pg/mL), IL-10(172.67±lO.O6pg/mL), IL-6(103.34土 2.88pg/mL)相比含量明顯升高(p<0.01);說明LPS能夠刺激Raw 264.7細(xì)胞產(chǎn)生大量炎癥 因子。
[0066] 藥物MM-122在濃度(7.50-13.50yg/mL)范圍內(nèi)對(duì)LPS刺激引起的Raw 264.7細(xì)胞炎 癥因子TNF-α含量有明顯的抑制作用(p<0.05)，并且表現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系；在濃度 13.50yg/mL下對(duì)炎癥因子IL-Ιβ含量有明顯的抑制作用(p<0.05);在濃度（10.50-13.50μ g/mL)范圍內(nèi)對(duì)炎癥因子IL-6含量有明顯的抑制作用(ρ<0.05)，表現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān) 系。
[0067] 2.4藥物抑制OH的產(chǎn)生 如圖8所示，通過LPS刺激Raw 264.7細(xì)胞，其產(chǎn)生0H( 113.58±6.03 ng/mL)含量與正常 組0Η(63·40±1 · 19ng/mL)相比明顯升高（ρ<0·01)。
[0068] 藥物ΜΜ-122在各濃度下對(duì)LPS引起的OH含量升高沒有明顯的抑制作用。
[0069] 本實(shí)驗(yàn)經(jīng)體外培養(yǎng)，研究了藥物ΜΜ-122對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞NO, TNF-a，IL-Ιβ，IL-6, OH生成的影響。
[0070] 藥物麗-122對(duì)因子NO的產(chǎn)生無明顯抑制作用，但在中高濃度下顯著抑制TNF-a， IL-Ιβ，IL-6含量，說明其主要影響的是TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的途徑，從而發(fā)揮抗炎效果， 其對(duì)OH無抑制效果明顯，說明其基本無抗氧化活性。
[0071] 實(shí)施例7 片劑的制備:按實(shí)施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素類化合物，按其與賦形劑重量 比為1:10的比例加入賦形劑，制粒壓片。
[0072] 實(shí)施例8 散劑的制備:按實(shí)施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素類化合物，按常規(guī)散劑制法制 成散劑。
[0073] 實(shí)施例9 膠囊劑或顆粒劑的制備:按實(shí)施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素類化合物，按其與 賦形劑重量比為1:10的比例加入賦形劑，制成膠囊劑或顆粒劑。
[0074] 實(shí)施例10 注射劑的制備:按實(shí)施例1方法先制得式(I)所示的苯丙素類化合物，按常規(guī)注射用水， 精濾，灌封滅菌制成注射劑。
[0075] 實(shí)施例12 一種藥物組合物，含有實(shí)施例1方法制得式(I)所示的苯丙素類化合物，以及金櫻根、單 面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當(dāng)歸、黨參制成的粉末，和輔料。
[0076] 實(shí)施例13 一種藥物組合物，含有實(shí)施例1方法制得式(I)所示的苯丙素類化合物，以及金櫻根、單 面針、雞血藤、功勞木、穿心蓮、當(dāng)歸、黨參的提取物，和輔料。提取物是按專利公告號(hào) CN1078079C、CN1170549C、CN1158087C、CN1330335C、CN1296071C、CN1321631C、CN1296072C、 CN1296073C的任意一件或幾件專利文件中提取方法制備得到。
[0077]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)。本領(lǐng)域的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這對(duì)本 領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā) 明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種苯丙素類化合物在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應(yīng)用，所述苯丙素類化合物 的結(jié)構(gòu)式如式(I)所示：(I)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于，是在制備抑制細(xì)胞炎癥因子TNF-a，^-ie, IL-6表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于，所述炎癥性疾病為宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔 炎、乳腺炎、咽喉炎和/或關(guān)節(jié)炎。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物含有藥學(xué)上允許的輔 料和/或載體。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物還含有金樓根、單面針、雞血藤、 功勞木、穿屯、蓮、當(dāng)歸、黨參中的一種或幾種。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物還含有金樓根、單面針、雞血藤、 功勞木、穿屯、蓮、當(dāng)歸、黨參中的一種或幾種的提取物。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的劑型為片劑、膠囊劑、散劑、顆 粒劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、注射劑、軟膏劑、栓劑或噴霧劑。
【文檔編號(hào)】A61P15/00GK106074579SQ201610153537
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年3月17日 公開號(hào)201610153537.0, CN 106074579 A, CN 106074579A, CN 201610153537, CN-A-106074579, CN106074579 A, CN106074579A, CN201610153537, CN201610153537.0
【發(fā)明人】龔云, 劉逆夫, 夏博候, 彭開鋒, 李亞梅, 佘娜, 白璐
【申請(qǐng)人】株洲千金藥業(yè)股份有限公司