一種氨基葡萄糖-山崳酸嫁接物及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種氨基葡萄糖?山崳酸嫁接物，由氨基葡萄糖和山崳酸作為原料，在EDC·HCl催化下通過酰胺化反應(yīng)制得。本發(fā)明提供的氨基葡萄糖?山崳酸嫁接物可以通過膠束的形式包載疏水性藥物，得到高載藥量的載藥膠束，并增強(qiáng)疏水性藥物在水中的溶解度和穩(wěn)定性，可在制備高載藥量的載藥膠束中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的氨基葡萄糖?山崳酸嫁接物有理想的生物相容性和生物可降解性，對人體無毒害。氨基葡萄糖與山崳酸反應(yīng)形成的嫁接物能在水中自組裝成膠束，而且合成方法、處理過程簡單；對環(huán)境無污染。
【專利說明】
-種氨基葡萄糖-山嶄酸嫁接物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及給藥系統(tǒng)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種能在水中W膠束形態(tài)包載疏水性藥物， 尤其設(shè)及一種氨基葡萄糖-山齋酸嫁接物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 很多藥物水溶性差，生物利用度低，因此在臨床應(yīng)用時(shí)需要合適的給藥系統(tǒng)來增 加運(yùn)些難溶性藥物的水溶性。如今納米制劑越來越受到學(xué)者們的關(guān)注。納米顆粒體積小，可 W防止被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)所吞隧，目前相關(guān)制劑的研究已經(jīng)有許多。膠束是一種新型的藥物 載體，疏水性內(nèi)核是藥物的儲(chǔ)存庫，而親水性外殼能有效延長在血液中的循環(huán)時(shí)間，在疏水 性藥物增溶和保持藥效穩(wěn)定性方面具有重要的研究價(jià)值（Xu JP，Ji J，Chen WD，et al.Novel biomimetic polymersomes as polymer therapeutics for drug delivery [J].Journal of con化oiled release.2005,107(3):502-512.)。膠束給藥系統(tǒng)與傳統(tǒng)給 藥系統(tǒng)相比，具有許多優(yōu)勢：由于粒徑小而均勻，具有優(yōu)良的組織透過性，尤其是可在具有 滲漏性血管的組織（如腫瘤、炎癥區(qū)或梗死區(qū)）聚集，即所謂增強(qiáng)透過和滯留效應(yīng)化PR)，運(yùn) 使膠束具有天然的被動(dòng)祀向作用。膠束具有克服血-腦屏障(blood brain barriers，BBB) 的功能，由于其外殼的親水結(jié)構(gòu)(如PEG)不易被蛋白或吞隧細(xì)胞識別，膠束在血液和組織內(nèi) 的滯留時(shí)間長，延長藥物的作用時(shí)間，提高了藥物的生物利用度(顏淑蓉，辛建娟，黃奠稻， 等.聚合物膠束聯(lián)合給藥系統(tǒng)的構(gòu)建及體外釋藥研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào).2011,27(5): 450-454.)〇
[0003] 氨基葡萄糖是葡萄糖的一個(gè)徑基被一個(gè)氨基取代的化合物，分子式C6出3〇sN，廣泛 存在于自然界，W2-氨基-2-脫氧-D-葡萄糖通常WN-乙酷基衍生物(如甲殼素)或WN-硫酸 醋和N-乙酷-3-0-乳酸酸(胞壁酸)形式存在于微生物、動(dòng)物來源的多糖和結(jié)合多糖中。氨基 葡萄糖，是形成軟骨細(xì)胞的重要營養(yǎng)素，是健康關(guān)節(jié)軟骨的天然組織成份。隨著年齡的增 長，人體內(nèi)的氨基葡萄糖的缺乏越來越嚴(yán)重，關(guān)節(jié)軟骨不斷退化和磨損。美國、歐洲和日本 的大量醫(yī)學(xué)研究表明：氨基葡萄糖可W幫助修復(fù)和維護(hù)軟骨，并能刺激軟骨細(xì)胞的生長(吳 文堅(jiān)，曾炳芳.硫酸氨基葡萄糖治療骨關(guān)節(jié)炎新進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué):骨科學(xué)分冊.2005，26 (1): 22-24.)。市售的氨基葡萄糖鹽酸鹽和硫酸鹽都具有較好的療效和安全性(邱貴興，翁 習(xí)生，張克.鹽酸/硫酸氨基葡萄糖治療骨關(guān)節(jié)炎的平行對照臨床研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志 .2005,85(43):3067-3070.)。
[0004] 山齋酸是含有22個(gè)碳的直鏈脂肪酸，存在于菜巧油及芥子油中，可W由芥酸氨化 制備得到，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于表面活性劑及洗涂劑，食品及其添加劑，化妝品及醫(yī)藥行業(yè) (秦振平.采用NP催化劑的芥酸氨化制備山齋酸工藝研究[J].延安大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版 .1998，17(1): 49-53;朱培基.工業(yè)硬脂酸，油酸，芥酸，山齋酸及其衍生物原料，用途，市場 狀況[J].糧食與油脂.1997，3:009.)。山齋酸本身無毒，穩(wěn)定，用于合成藥物載體，生物安全 性比較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種氨基葡萄糖-山齋酸嫁接物，具有式I的結(jié)構(gòu)：
[0006]
[0007]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述的氨基葡萄糖-山齋酸嫁接物的制備方法，通過 W下步驟實(shí)現(xiàn)：
[000引（1)將鹽酸氨基葡萄糖置于燒杯中，再加入Ξ乙胺，室溫下6(K)rpm攬拌反應(yīng)化。然 后雙層濾紙過濾，收集固體，再用無水乙醇洗至無氨味，自然干燥，得到氨基葡萄糖。
[0009] (2)把上述氨基葡萄糖加入到去離子水中，攬拌溶解。把山齋酸加入到無水乙醇 中，再加入邸C .肥1，60°C攬拌30分鐘。混合上述兩種溶液，400巧m，8(TC條件下密閉攬拌反 應(yīng)化。
[0010] (3)反應(yīng)結(jié)束后，將所有反應(yīng)液移至分子量3500的透析袋中透析48小時(shí)，水量為 5L。前24h每隔一小時(shí)換一次水，后24h每隔2小時(shí)換一次水。然后將反應(yīng)液從透析袋中移入 塑料燒杯中，先在-80 °C預(yù)冷化，然后移入凍干機(jī)凍干。
[00川反應(yīng)式如下：
[0012]
[0013] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供所述的氨基葡萄糖-山齋酸嫁接物在制備高載藥量的 載藥膠束中的應(yīng)用。本發(fā)明可W通過膠束的形式包載疏水性藥物，得到高載藥量的載藥膠 束，并增強(qiáng)疏水性藥物在水中的溶解度和穩(wěn)定性。
[0014] 本發(fā)明利用氨基葡萄糖與山齋酸合成藥物載體有許多優(yōu)勢，有理想的生物相容性 和生物可降解性，對人體無毒害。氨基葡萄糖與山齋酸反應(yīng)形成的嫁接物能在水中自組裝 成膠束，而且合成方法、處理過程簡單;對環(huán)境無污染。
【附圖說明】
[0015] 圖1是空白膠束數(shù)均粒徑分布圖。
[0016] 圖視載藥膠束-1數(shù)均粒徑分布圖（丙戊酸:嫁接物=1:5，w/w)。
[0017] 圖3是載藥膠束-2數(shù)均粒徑分布圖（丙戊酸:嫁接物=1:2，w/w)。
[0018] 圖4是載藥膠束-3數(shù)均粒徑分布圖（丙戊酸:嫁接物=1:1，w/w)。
[0019] 圖5是載藥膠束-4數(shù)均粒徑分布圖（丙戊酸:嫁接物=3:2，w/w)。
[0020] 圖6是載藥膠束-4藥物體外釋放曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 本發(fā)明結(jié)合附圖和實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。運(yùn)些實(shí)施例的目的只是為了解釋而不 是W任何方式限制本發(fā)明。
[0022] 實(shí)施例1
[0023] 精密稱取5mg本發(fā)明提供的氨基葡萄糖-山齋酸嫁接物，加入到5mL去離子水中，水 浴超聲溶解，得到氨基葡萄糖-山齋酸嫁接物膠束溶液，用馬爾文激光粒徑電位儀測定數(shù)均 粒徑為55nm，參見圖1。
[0024] 實(shí)施例2
[0025] 精密稱取4mg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡萄 糖-山齋酸嫁接物，水浴超聲溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固體用20mL水超聲溶解，即載藥膠 束-1。用馬爾文激光粒徑電位儀測定數(shù)均粒徑為29nm，參見圖2。
[00%] 實(shí)施例3
[0027] 精密稱取lOmg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡 萄糖-山齋酸嫁接物，水浴超聲溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固體用20mL水超聲溶解，即載藥 膠束-2。用馬爾文激光粒徑電位儀測定數(shù)均粒徑為102nm，參見圖3。
[0028] 采用高效液相色譜測定其包封率與載藥量，色譜條件如下:流動(dòng)相：（四下基漠化 錠巧mmol/L)-憐酸二氨鐘(20mmol/L)):甲醇=25:75，pH = 3.6;柱溫40°C ;檢測波長216nm; 進(jìn)樣體積20化。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定丙戊酸含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法如下：用流動(dòng)相配制 500yg/mL的丙戊酸溶液，然后用流動(dòng)相稀釋成一系列濃度，通過高效液相色譜檢測其色譜 峰面積，W色譜峰面積為縱坐標(biāo)，丙戊酸濃度為橫坐標(biāo)，繪制得到丙戊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0029] 移取所得到的載藥膠束-2適量，用甲醇稀釋10倍，20000rpm轉(zhuǎn)速超濾離屯、30min， 取下清液，用流動(dòng)相稀釋10倍，高效液相色譜測定峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算丙戊酸濃度， 根據(jù)下列公式計(jì)算包封率與載藥量：
[0030] 包封率化 E%) = (C〇-Ci)/C〇X100%
[0031] 載藥量(DL% ) =Co X?。?載藥膠束總量X 100%
[0032] 其中Co為投藥量，Cl為上清液中藥物量。
[0033] 測得載藥膠束-2的包封率為77.63%，載藥量為25.88%。
[0034] 實(shí)施例4
[0035] 精密稱取20mg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡 萄糖-山齋酸嫁接物，水浴超聲溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固體用20mL水超聲溶解，即載藥 膠束-3。用馬爾文激光粒徑電位儀測定數(shù)均粒徑為42nm，參見圖4。
[0036] 采用高效液相色譜測定其包封率與載藥量，色譜條件如下:流動(dòng)相：（四下基漠化 錠巧mmol/L)-憐酸二氨鐘(20mmol/L)):甲醇=25:75，pH = 3.6;柱溫40°C ;檢測波長216nm; 進(jìn)樣體積20化。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定丙戊酸含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法如下：用流動(dòng)相配制 500yg/mL的丙戊酸溶液，然后用流動(dòng)相稀釋成一系列濃度，通過高效液相色譜檢測其色譜 峰面積，W色譜峰面積為縱坐標(biāo)，丙戊酸濃度為橫坐標(biāo)，繪制得到丙戊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0037] 移取所得到的載藥膠束-3適量，用甲醇稀釋10倍，20000rpm轉(zhuǎn)速超濾離屯、30min， 取下清液，用流動(dòng)相稀釋10倍，高效液相色譜測定峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算丙戊酸濃度， 根據(jù)下列公式計(jì)算包封率與載藥量：
[003引包封率化 E%) = (C0-Ci)/C0X100%
[0039] 載藥量(DL%)=C日X?。?載藥膠束總量X100%
[0040] 其中Co為投藥量，Cl為上清液中藥物量。
[0041] 測得載藥膠束-3的包封率為71.15%，載藥量為35.58%。
[0042] 實(shí)施例5
[0043] 精密稱取30mg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡 萄糖-山齋酸嫁接物，水浴超聲溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固體用20mL水超聲溶解，即載藥 膠束-4。用馬爾文激光粒徑電位儀測定數(shù)均粒徑為62nm，參見圖5。
[0044] 采用高效液相色譜測定其包封率與載藥量，色譜條件如下:流動(dòng)相：（四下基漠化 錠巧mmol/L)-憐酸二氨鐘(20mmol/L)):甲醇=25:75，pH = 3.6;柱溫40°C ;檢測波長216nm; 進(jìn)樣體積20化。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定丙戊酸含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法如下：用流動(dòng)相配制 500yg/mL的丙戊酸溶液，然后用流動(dòng)相稀釋成一系列濃度，通過高效液相色譜檢測其色譜 峰面積，W色譜峰面積為縱坐標(biāo)，丙戊酸濃度為橫坐標(biāo)，繪制得到丙戊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0045] 移取所得到的載藥膠束-4適量，用甲醇稀釋10倍，20000rpm轉(zhuǎn)速超濾離屯、30min， 取下清液，用流動(dòng)相稀釋10倍，高效液相色譜測定峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算丙戊酸濃度， 根據(jù)下列公式計(jì)算包封率與載藥量：
[0046] 包封率化 E%) = (C〇-Ci)/C〇X100%
[0047] 載藥量(DL%)=C()X?。?載藥膠束總量X100%
[004引其中Co為投藥量，Cl為上清液中藥物量。
[0049] 測得載藥膠束-4的包封率為86.00 %，載藥量為51.60 %。
[0050] 取所得到的載藥膠束-4 2血，放在3500分子量的透析袋中，把透析袋放入20mLPBS (抑=7.4)中，37°C恒溫震蕩，分別在0.5、l、2、4、6、24h取樣。每次取樣時(shí)，把20血PBS全部取 出，然后用高效液相色譜測定PBS(pH = 7.4)中丙戊酸濃度，并且加入新的PBS(pH= 7.4) 20mL。計(jì)算丙戊酸的累積釋放百分率，并對時(shí)間作圖，參見圖6。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種氨基葡萄糖-山崳酸嫁接物，其特征在于，結(jié)構(gòu)式(I)所述：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氨基葡萄糖-山崳酸嫁接物的制備方法，其特征在于，通 過以下步驟實(shí)現(xiàn)： (1) 將鹽酸氨基葡萄糖置于燒杯中，再加入三乙胺，室溫下600rpm攪拌反應(yīng)5h。然后雙 層濾紙過濾，收集固體，再用無水乙醇洗至無氨味，自然干燥，得到氨基葡萄糖。 (2) 把上述氨基葡萄糖加入到去離子水中，攪拌溶解。把山崳酸加入到無水乙醇中，再 加入EDC · HC1，60°C攪拌30分鐘?；旌仙鲜鰞煞N溶液，400rpm，80°C條件下密閉攪拌反應(yīng)8h。 (3) 反應(yīng)結(jié)束后，將所有反應(yīng)液移至分子量3500的透析袋中透析48小時(shí)，水量為5L。前 24h每隔一小時(shí)換一次水，后24h每隔2小時(shí)換一次水。然后將反應(yīng)液從透析袋中移入塑料燒 杯中，先在_80°C預(yù)冷3h，然后移入凍干機(jī)凍干； 反應(yīng)式如下所示：3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基葡萄糖-山崳酸嫁接物在制高載藥量的載藥膠束中的應(yīng) 用。
【文檔編號】A61K31/7008GK105920612SQ201610409018
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月12日
【發(fā)明人】掲麗勇, 應(yīng)曉英, 鄔嘉暉, 杜永忠
【申請人】浙江大學(xué)