虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中的應用和藥物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及藥物領域，更具體地，設及一種虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中 的應用，W及W該虛擬篩選化合物作為活性組分的藥物，該藥物能夠預防和/或治療激酶介 導的疾病。
【背景技術】
[0002] 與人類重大疾病相關的藥物祀標的發(fā)現(xiàn)及其藥物的研發(fā)是祀向治療研究中的重 要環(huán)節(jié)。蛋白激酶(protein kinase，ΡΚ)是細胞內最大的蛋白家族之一，參與細胞生長、分 裂和調亡等多種生理過程。在真核細胞信號轉導中蛋白激酶扮演重要的角色。蛋白激酶是 一類憐酸轉移酶，其作用是將ΑΤΡ分子的γ憐酸基轉移到底物蛋白特定的氨基酸殘基上，使 底物蛋白憐酸化。人類基因組內共含有518個蛋白激酶基因，約占真核生物基因的1.7%。蛋 白激酶活性異常通常會引發(fā)包括癌癥、糖尿病、炎癥在內的許多重大疾病。超過400種人類 疾病與蛋白激酶有直接或間接的關系。因此蛋白激酶己成為繼G蛋白偶聯(lián)受體之后的第二 大藥物治療祀標。據(jù)統(tǒng)計，目前全世界藥物在研或開發(fā)項目中約Ξ分之一均與蛋白激酶相 關。
[0003] 蛋白激酶抑制劑(protein kinase inhibitor,ΡΚΙ)可用于多種疾病的治療，其中 ATP-競爭性蛋白激酶抑制劑研究得最多，運類抑制劑已被研究和開發(fā)成為治療多種復雜性 疾病的新藥。目前ATP-競爭性蛋白激酶抑制的研究主要集中在新骨架類型先導化合物的設 計和發(fā)現(xiàn)，W及選擇性抑制劑和多祀點抑制劑開發(fā)等方面。目前，計算機輔助藥物設計 (computer-aided drug design,CADD)作為藥物研發(fā)中的重要技術和工具，被應用于蛋白 激酶抑制劑的研究中，推動了運一研究領域的長足發(fā)展。定量構效關系、分子對接、藥效團、 同源模建和分子動力學模擬等多種分子模擬方法，W及量子化學等多種CADD方法均被應用 于蛋白激酶抑制劑的設計和發(fā)現(xiàn)。
[0004] 因此，通過運用計算機輔助的藥物設計技術，對蛋白激酶結構與功能進行模擬研 究，在充分了解祀標活性口袋Ξ維結構的基礎上，對小分子抑制劑提出合理的結構修飾，研 發(fā)出高效專一的蛋白激酶抑制劑具有重要意義。

【發(fā)明內容】

[000引本發(fā)明的目的是提供虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中的新用途，W及提供一 種藥物。
[0006] 具體地，本發(fā)明提供一種虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中的應用，該虛擬篩 選化合物為具有式I、式II、式III或式IV所示結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、醋、溶 劑合物；
[0007]
[0008] 其中，Ri和R2不同，且關
；4、Rs和Rs各自獨立地為H、Ci-C3的 烷基、或芳基;R3和R?各自獨立地為H、Ci-C3的烷基、或共同形成飽和或不飽和的五元控環(huán)或 六元控環(huán)；
[00川優(yōu)選地，式I中，R4、Rs和R6各自獨立地為Η或C1-C3的烷基;或者，R4和R6之一為芳基， 其余兩個基團為Η。
[0012]進一步優(yōu)選地，式I所示的化合物為W下式V、式VI、式νΠ 或式VIII所示的化合物；
[0013]
[0014] 本發(fā)明中所述虛擬篩選是從Molpo;rt(5*109)和Vitas-M( 1.2*109)化合物庫進行 SVM篩選，篩選具有W下確定祀點的化合物:皿R2、VEGFR2、FGFR1、B-raf或SRC。因此，本發(fā)明 中所述激酶優(yōu)選為肥R2、VEGFR2、FGFR1、B-raf或SRC。
[0015] 本發(fā)明還提供一種藥物，該藥物能夠預防和/或治療激酶介導的疾病，該藥物的活 性組分為具有式I、式II、式ΠΙ或式IV所示結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、醋、溶劑 合物。所述具有式I、式II、式III或式IV所示結構的化合物的限定與上述相同，在此不再寶 述。
[0016] 本發(fā)明中，所述激酶介導的疾病選自W下疾病中的至少一種：屯、血管疾病、炎癥、 乳腺癌、肝癌、膜腺癌、肺癌、腦癌、卵巢癌、子宮癌、睪丸癌、皮膚癌、胃癌、鼻咽癌、結腸癌、 膀脫癌和直腸癌。優(yōu)選為乳腺癌、肝癌、肺癌和膀脫癌中的至少一種。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明，所述藥物可W制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、 霜劑等多種形式;上述各種劑型的藥物均可W按照藥學領域的常規(guī)方法制備。所述藥物可 通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內、皮 下、靜脈、粘膜組織;或是被其他物質混合或包裹后導入機體。
[0018] 需要的時候，在上述藥物中還可W加入一種或多種藥學上可接受的載體;所述載 體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面 活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
[0019] 本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將在隨后的【具體實施方式】部分予W詳細說明。
【附圖說明】
[0020] 通過結合附圖對本發(fā)明示例性實施方式進行更詳細的描述。
[0021 ] 圖1為50μΜ ATP/ADP轉化率標準曲線。
[0022] 圖2為FGFR1激酶滴定曲線(50μΜ ΑΤΡ)。
【具體實施方式】
[0023] 通過ADP-Glo?激酶實驗進行體外激酶抑制劑實驗，ADP-Glo?激酶實驗原理:在激 酶反應過程中形成的ADP能通過巧光檢測，從而知道其激酶活性。首先，ADP-Glo?試劑會終 止激酶反應，殘留的ATP被廢除。反應過程中產生的ADP隨即被轉化為ATP并且在叫tra-Glo? 雙巧光素酶存在的條件下顯示巧光，通過巧光分光光度計即可檢測。巧光信號代表激酶反 應過程中產生的ADP濃度及其對應的激酶活性。
[0024] ADP-Glo?激酶實驗由于能夠檢測化合物對大范圍激酶的作用，同時還能檢測高信 號背景下低濃度的ADP，因此適用于體外激酶抑制劑實驗。
[0025] 實施例中所用的ADP-Glo?激酶購自Promega公司。
[0026] 1、樣品準備
[0027] 凍干樣品用一定體積的二甲基亞諷(DMS0)溶解，終濃度為1 Ommo 1 /L，冰箱保存?zhèn)?用。
[002引 2、ATP轉化ADP標準曲線制作
[0029] 參照Promega的說明，檢測各種激酶反應中的ATP濃度，用于制作各個激酶的標準 曲線。運些曲線代表ATP/ADP的轉化率，并且能直觀顯示ADP對應的濃度。因此，根據(jù)標準曲 線，可W檢測激酶反應過程中產生的ADP。ATP在各個激酶反應中的濃度分別為：1 ΟμΜ化ER2) 和50μM(VEGFR2、FGFRl、B-raf和SRC)。10mMATP和ADP母液加入一定體積的去離子水得到10 X ΑΤΡ (ADP)溶液。不同體積的10 X ΑΤΡ和10 X ADP配成不同濃度的10 X ATP-ADP混