取自油棕基材料的新型生物活性化合物的分離的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明總體設及生物活性化合物，并且更具體地設及分離、純化和鑒定取自植物 和植物基材料的酪類化合物，其中所述化合物表現出高度顯著的生物活性性質。
【背景技術】
[0002] 生物活性化合物是必需的，運是因為其在W下方面的重要性：與人體中的任意細 胞組織相互作用或者對人體中的任意細胞組織產生作用，并且在治療疾病方面提供有益的 藥理活性。鑒于各種疾病爆發(fā)并且使死亡率死亡率飛漲，對于此類生物活性化合物的需求 不斷增長。
[0003] 因此，本發(fā)明的目的是提供具有生物活性性質的植物基化合物。
[0004] 本發(fā)明著重于實現來自棟桐油研磨的植物液和油棟基材料W及棟桐油研磨廢液 (P0M巧作為生物活性化合物來源的價值和潛力。
[0005] 本發(fā)明要求馬來西亞棟桐油總署（MP0B)馬來西亞專利申請PI2012700505的優(yōu)先 權，其中所述專利公開了分子量為482的生物活性化合物。本發(fā)明還公開了所述化合物的 特性（identity)和所述化合物的化學結構鑒定。
[0006] 參照如附圖所示并且如W下說明中所描述的本發(fā)明優(yōu)選實施例，本發(fā)明的其他目 的和優(yōu)點可變得顯而易見。

【發(fā)明內容】

[0007] 在一個方面，提供了一種包含取自油棟基材料的化合物的組合物，其中所述化合 物是嗎I噪乙酸衍生物。所述組合物可用于提供生物活性性質。所述化合物包含具有至少一 種變體的基團，由此所述基團源自但不限于徑基和酷胺基。所述化合物中的所述基團優(yōu)選 地是徑基分子（-0H)和酷胺基分子（-NH2)。本發(fā)明中的組合物所包含的基團的兩種變體在 生物活性化合物中比率為1:1。
[0008] 本發(fā)明還公開了一種分離取自油棟基材料的生物活性化合物的方法，所述方法包 括W下步驟：提取所述油棟基材料W獲得油棟酪類物質（0P巧，制備化合物W供高效液相 色譜0PLC)分析，對化合物進行HPLC分析，分離化合物W獲得所關注的級分，對所述級分 進行分析性的HPLC分析，量化和確定所關注級分的特性，對級分進行基質輔助激光解吸電 離飛行時間光譜（MALDI-TCF)分析，W及對級分進行核磁共振（NMR)分析。
【附圖說明】
[0009] 將參照附圖，通過本發(fā)明的非限制實施例來描述本發(fā)明，其中：
[0010] 圖1示出CSA和具有峰482的化合物的HPLC色譜圖；
[0011] 圖2示出從油棟酪類物質（0P巧分離的級分的HPLC色譜圖；
[001引圖3示出分離級分21的HPLC色譜圖；
[0013] 圖4示出分離級分22的HPLC色譜圖；
[0014] 圖5示出ΜΡΟΒ峰1的HPLC色譜圖；
[0015] 圖6示出在級分21和級分22之間的孤立峰482的HPLC色譜圖；
[001引 圖7示出MP0B峰1的分析性HPLC色譜圖；
[0017]圖8a和圖8b分別示出MYB(峰482)的分析性HPLC色譜圖和光譜；
[001引 圖8c和圖8d分別示出MYC(3-CSA)的分析性HPLC色譜圖和光譜；
[0019] 圖9示出孤立峰482的MALDI光譜；
[0020] 圖10示出化合物A的所選HMBC相關性；W及
[0021] 圖11示出峰值為482的化合物的化學結構。
【具體實施方式】
[0022] 現將參照附圖詳細描述本發(fā)明。
[0023] 本發(fā)明公開了關于生物活性化合物及其組合物和方法的描述和實例，由此從油棟 和/或油棟基材料提取分子量為482的生物活性化合物。
[0024] 可用于本發(fā)明的棟桐植物液的生物活性提取物為根據各種常規(guī)的合適方法和工 藝取自棟桐油研磨過程的植物液的那些提取物。
[00巧]盡管提取物可包含包括酪類化合物、果酸、果糖和甘油、淀粉、纖維素和半纖維素 在內的各種化合物，但出于標準化目的，所用提取物的濃度是根據酪含量（即，沒食子酸當 量）來進行測量。
[0026] 本發(fā)明的實施例設及一種組合物，其包含取自油棟的任意部分、油棟基材料（包 括棟桐油加工的植物液和棟桐油研磨廢液（POME))的生物活性化合物和其它主要酪類化 合物。本發(fā)明的組合物可基于可用的或標準的方法來制備。預期所述制備是安全的并且所 述組合物適用于但不限于包括飲食補充劑、營養(yǎng)制品和促進健康目的在內的日常消耗。還 應注意的是，基于本發(fā)明的優(yōu)選實施例獲得的生物活性化合物及其衍生物被認為表現出抗 病毒和抗微生物效應。
[0027] 對本領域中的技術人員來說顯而易見的是，出于本發(fā)明的目的，取自油棟的任意 部分或油棟基材料（包括來自棟桐油研磨的植物液和棟桐油研磨廢液）的粗提取物除了包 含新型生物活性化合物之外還可包含多種其它酪類化合物。
[0028] 已發(fā)現取自油棟基材料（并且對于本公開而言更具體地為來自棟桐油研磨的植 物液和棟桐油研磨廢液）的提取物在經歷根據本發(fā)明的方法的分離和純化階段時包含新 型生物活性化合物或其衍生物。
[0029] 本發(fā)明因此擴及新型生物活性化合物；及其方法，由此所述方法的主要步驟為對 取自油棟的任意部分、來自棟桐油研磨的植物液和棟桐油研磨廢液的粗提取物進行預處 理。對所提取的0PP的LCMS分析已經發(fā)現級分3-CSA表現出3-CSA和分子量為482的未知 化合物的兩個主峰。該實施例包括分子量為482的基本上純化的生物活性化合物的鑒定。
[0030] 應該指出的是，"分離的或純化的"生物活性化合物或其生物活性部分基本上不 含其它多孔材料或其它組分或基本上不含化學前體或其它化學物質。
[0031] 通常，通過一般制備性HPLC的二步法工藝分離峰482,所述二步法工藝用于分離 包含峰482的級分W及從所述級分分離孤立峰482。具有峰482的分離化合物的純度和特 性是通過使用分析性HPLC確認的。為了克服由具有峰482的化合物對流動相抑的敏感性 而造成的洗脫問題，開發(fā)出了一種W分析性HPLC來量化和確認峰482的特性的新型程序。
[0032] 本發(fā)明的分離、純化和鑒定方法通過W下范例性實例進一步說明。應當理解的是 運些實驗性實例，雖然指示了本發(fā)明的優(yōu)選實施例，但是僅通過用于更好說明的方式給出。 本領域中的技術人員可弄清本發(fā)明的基本特征和實施例，因此可提供各種改變來適應各種 用途和條件。
[003引 實例1
[0034] 化合物的制備
[0035] 為了防止注入化合物之前層析柱中阻塞和壓力增大，預處理生物活性化合物W獲 得預先濃縮或者部分純化的提取物，所述提取物不含半纖維素材料和纖維素材料。運可用 下述低嚴苛性條件進行：對提取物實施快速色譜法或類似方法，或替代地對所述提取物進 行乙醇沉淀，然后用高效液相色譜法進行分離。此類方法的一個實例在下文W引用的方式 給出并且不應理解為限制權利要求的范圍。
[0036] 第一途徑設及的主要步驟為：用大約兩種體積的冷乙醇沉淀兩種物質，然后滿流 旋轉混合物并且使所述混合物在冰箱中聚結一小時。W大約2000rpm的轉速離屯、分離所述 聚結混合物大約12分鐘，然后使來自所述物質的上清液蒸發(fā)并且用水進行5倍重溶W供 HPLC分析。將干燥產物溶解在預定量的蒸饋水中W用于HPLC分析。應當指出的是運些步 驟可用在本領域中已知的標準程序的替代步驟來代替，從而實現類似的目的。
[0037] 用于制備所公開的組合物的方法的下一必要步驟設及從部分純化或者預處理的 提取物分離和純化酪類化合物。運可通過基于低嚴苛性條件或參數的常規(guī)高效液相色譜法 0PLC)來進行。此類方法的一個實例在下文W引用的方式給出并且不應理解為限制權利要 求的范圍。
[003引 實例2
[0039] 制備用于分級分離的HPLC
[0040] HPLC用于從0PP分離峰482的化合物。在一個優(yōu)選實施例中，制備粒度為5μm、 優(yōu)選為25cm柱長XlOmm內徑、流速為每分鐘3ml的EconosilC18。優(yōu)選的流動相梯度可 包含兩種溶劑，其中一種溶劑由0. 1%的Ξ氣乙酸（TFA)組成并且另一種溶劑由90/10的乙 臘（ACN)和0. 1 %的TFA組成。在此研究中，注入柱體積為1ml并且在280皿處進行讀數。 表1示出根據本實例的優(yōu)選實施例用于分級分離樣品0PP的HPLC程序。
[0041]
[0043]
[0044]表1
[0045] 在關于分離峰482的另一個優(yōu)選實施例中，制備粒度為5μm、優(yōu)選為25cm柱 長XlOmm內徑、流速為每分鐘3ml的EconosilC18。優(yōu)選的流動相梯度可包含兩種溶 劑，其中一種溶劑由0. 1 %的Ξ氣乙酸燈FA)組成并且另一種溶劑由體積比（volumeper volume,v/v)為90/10的乙臘（ACN)和TFA組成。在此研究中，注入柱體積為3ml并且在 275nm處進行讀數。表2顯示根據本實例的優(yōu)選實施例用于峰482的分離的HPLC程序。
[0046]
[0048]表 2
[0049] 然而應當理解的是可改變柱的選擇和HPLC參數來獲得與所描述的洗脫時間類似 的洗脫時間結果?？蛇m當地收集洗脫級分并且W粉末或者液體形式提供所述洗脫級分W供 進一步分析使用。
[0050]實例 3
[0051] 級分的分離
[0052] 圖2示出0PP乙醇提取物的HPLC色譜圖，其中在預定時間收集流出液。對于級 分21(化21)，在大約40分鐘時收集流出液；對于級分22 (化22)，在大約44分鐘時收集流出 液；對于級分23 (化23)，在大約46分鐘時收集流出液。發(fā)現峰3-CSA包含在級分23中，并 且LC-MS色譜圖顯示峰482稍早于化2