microRNA-548k抑制劑在治療和/或預(yù)防食管鱗狀細(xì)胞癌中的用圖【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及micr〇RNA-548k抑制劑在治療和/或預(yù)防食管鱗狀細(xì)胞癌的
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。另一方面，本發(fā)明涉及microRNA-548k作為分子標(biāo)記物用于診斷食管鱗狀細(xì)胞癌的
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?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌，其是全世界癌癥死亡的第六大原因，參見Kamangar,F.，G.M.Dores,等人（2006)."Patternsofcancerincidence,mortality,andprevalenceacrossfivecontinents:definingprioritiestoreducecancerdisparitiesindifferentgeographicregionsoftheworld.〃JClin0ncol24(14):2137-2150。全球大約70%的食管癌發(fā)生在中國，而在中國90%的食管癌的為食管鱗狀細(xì)胞癌。到目前為止，對食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制了解甚少，因此針對食管鱗狀細(xì)胞癌早期診斷及治療的手段和方法非常有限，食管鱗狀細(xì)胞癌患者的5年生存率只有10%，參見乂11，￥.，乂.￥11，等人（2012).〃他〇3(1加￥3111：￥618118adjuvanttreatment:whichoneisbetterforresectableesophagealsquamouscellcarcinoma?"WorldJSurgOncollO:173;Zhang，S.W.，M.Zhang，etal.(2012)."AnAnalysisofIncidenceandMortalityofEsophagealCancerinChina，2003~2007."China分子靶向治療為近年來研究熱點(diǎn)，并在部分惡性腫瘤治療中取得突破性進(jìn)展。如吉非替尼（Irresa)治療非小細(xì)胞肺癌，尤其女性、不吸煙、腺癌患者預(yù)后更佳；伊馬替尼治療胃腸道間質(zhì)瘤，特別是對于有Kit外顯子11突變者可獲得更好的療效，參見NilssonB，S.K.,KindblomLG,等人（2007)."Adjuvantimatinibtreatmentimprovesrecurrence-freesurvivalinpatientswithhigh-riskgastrointestinalstromaltumours(GIST)·〃BrJCancer96:1656-1658(NilssonB2007);C225聯(lián)合放療治療局部晚期頭頸部癌，較單純放療，生存率提高近I倍，參見BonnerJA,H.P·，GiraltJ,等人（2006)."Radiotherapypluscetuximabforsquamous-cellcarcinomaoftheheadandneck.〃NEnglJMed354:567-578。因此，闡明食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制是人類攻克食管鱗狀細(xì)胞癌的前提。[0003]MicroRNA由18-25個核苷酸組成，系非編碼RNA分子，可以通過和mRNA結(jié)合抑制mRNA功能，調(diào)節(jié)翻譯過程。MicroRNA在腫瘤中的發(fā)生和發(fā)展中均發(fā)揮了重要作用，并且有些MicroRNA還與腫瘤的預(yù)后相關(guān)，如在慢性淋巴瘤，急性髓細(xì)胞樣白血病，非小細(xì)胞肺癌，胰腺癌，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，結(jié)腸癌，小細(xì)胞肺癌中得到證實(shí)：miRNA對預(yù)后影響顯著。[0004]microRNA-548k定位于11號染色體，含有22個核苷酸，其genbank登錄號為：GeneID:100313770,在文獻(xiàn)中未見報(bào)道對其相關(guān)功能的研究。[0005]本發(fā)明人運(yùn)用高通量測序和比較基因組雜交技術(shù)對我國食管鱗狀細(xì)胞癌的基因組進(jìn)行了研究，出人意料的發(fā)現(xiàn)，llql3.3-13.4這個區(qū)域在48.1%的樣本中存在擴(kuò)增，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，此外，在這個區(qū)域中存在micr〇RNA-548k的同步高表達(dá)。隨后我們的功能實(shí)驗(yàn)表明，micr〇RNA-548k在食管鱗狀細(xì)胞瘤細(xì)胞系中普遍存在高表達(dá)，并且microRNA-548k能正性調(diào)節(jié)食管鱗狀細(xì)胞瘤細(xì)胞的惡性表型。因此，microRNA-548k有望可以作為食管鱗狀細(xì)胞癌診斷的分子標(biāo)志物和治療的祀點(diǎn)。【
發(fā)明內(nèi)容】[0006]本發(fā)明提供了microRNA_548k抑制劑用于制備治療和/或預(yù)防食管鱗狀細(xì)胞癌的藥物中的用途。[0007]優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的microRNA-548k抑制劑是核酸抑制劑；進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明的核酸抑制劑是與micr〇RNA-548k序列互補(bǔ)的反義核酸分子。[0008]另一方面，本發(fā)明提供了一種或多種特異地檢測microRNA_548k表達(dá)水平的引物和/或探針在制備用于診斷食管鱗狀細(xì)胞癌患者的試劑中的用途。[0009]更進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明所述引物和/或探針包含與microRNA-548k序列互補(bǔ)的核苷酸序列，或由與micr〇RNA-548k序列互補(bǔ)的核苷酸序列組成。[0010]優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的診斷食管鱗狀細(xì)胞癌患者的用途中其進(jìn)一步包括：[0011]a)提供來自個體的食管鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁組織的樣品；和[0012]b)確定樣品中如microRNA_548k的表達(dá)水平；[0013]c)比較癌組織和癌旁組織的樣品中microRNA-548k的表達(dá)水平。優(yōu)選地，在上述用途中，其中在所述步驟b)中使用選自宏陣列篩選、微陣列篩選、納米陣列篩選、逆轉(zhuǎn)錄PCR、實(shí)時PCR或原位PCR的方法進(jìn)行。[0014]優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明所述的用途，其中所述食管鱗狀細(xì)胞癌指哺乳動物中的食管鱗狀細(xì)胞癌。[0015]進(jìn)一步優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明所述的用途，其中所述哺乳動物是人。[0016]另一方面，本發(fā)明提供了一種治療和/或預(yù)防哺乳動物食管鱗狀細(xì)胞癌的方法，包括向遭受所述癌癥的患者給藥治療有效量的microRNA-548k抑制劑?！靖綀D說明】[0017]圖1表明人食管鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤組織分析的電泳結(jié)果。[0018]圖2表明改變microRNA-548k表達(dá)后對細(xì)胞生長的影響情況。其中，miR-NC指microRNA陰性對照。[0019]圖3A-3F表明改變microRNA-548k表達(dá)后對細(xì)胞克隆形成的影響情況。圖3A和3B表明在KYSE30細(xì)胞系中microRNA-548k表達(dá)的改變對細(xì)胞克隆形成的影響；圖3C和3D表明在KYSE150細(xì)胞系中microRNA-548k表達(dá)的改變對細(xì)胞克隆形成的影響；圖3E和3F表明在KYSE410細(xì)胞系中microRNA-548k表達(dá)的改變對細(xì)胞克隆形成的影響。[0020]圖4A-4I表明改變micr〇RNA-548k表達(dá)后對細(xì)胞遷移及侵襲的影響情況。圖4A-4C表明microRNA-548k表達(dá)的改變對KYSE30細(xì)胞系遷移及侵襲的影響；圖4D-4F表明mi當(dāng)前第1頁1 2