專利名稱：用于抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶的苯并吡啶并環(huán)庚烷化合物的制作方法
背景1995年4月20日公開的國際專利公布號WO 95/10516公開用于抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶的三環(huán)類化合物。
鑒于法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑的現(xiàn)實(shí)意義，對本領(lǐng)域的一個(gè)寶貴貢的貢獻(xiàn)將是用于抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶的一些化合物。本發(fā)明即提供了此種貢獻(xiàn)。
本發(fā)明概述本發(fā)明提供用于抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶(FPT)的化合物。本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物由下式表示
其中a代表N或NO-；Ra、Rb、Rc和Rd相同或不同，且選自H、鹵代、烷基和烷氧基，前提是Ra、Rb、Rc和Rd中至少1個(gè)，但不超過2個(gè)為H；虛線(---)代表任選的雙鍵；R選自H、-S(O)2R1、-S(O)2NR1R2、-C(O)R1和-C(O)NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立選自H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、取代的烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、取代的雜芳基、取代的雜芳烷基、取代的(C3-C7)環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基烷基、取代的雜環(huán)烷基，其中所述取代的基團(tuán)具有一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基烷基、烷氧基、芳烷基、雜芳烷基、-NO2、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、C3-C7環(huán)烷基、芳基、-CN、雜芳基、雜環(huán)烷基、＝O、-OH、氨基、取代的氨基、硝基和鹵代；Re和Rf獨(dú)立選自H、烷基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、取代的烷基、取代的烷氧基烷基、取代的烷氧基烷氧基烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、取代的雜芳基、取代的雜芳烷基、取代的(C3-C7)環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基烷基、取代的雜環(huán)烷基，其中所述取代的基團(tuán)具有一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基烷基、烷氧基、芳烷基、雜芳烷基、-NO2、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、C3-C7環(huán)烷基、芳基、-CN、雜芳基、雜環(huán)烷基、＝O、-OH、氨基、取代的氨基、硝基和鹵代；或Re選自H、烷基和芳基而Rf由-(CH2)n-R15表示，其中n為0-8的整數(shù)而R15選自-C(O)NH2、-SO2NH2、芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基，任選由烷基、烷氧基、芳烷基、雜芳烷基、-NO2、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、C3-C7環(huán)烷基、芳基、-CN、雜環(huán)烷基、＝O、-OH、氨基、取代的氨基、硝基和鹵代所取代，或R15為
，其中B為OH或NH2而A為NH、O、NOH或NOH或NCN，或R15為NR16R17，其中R16為H或烷基和R17為H、烷基、SO2CH3或C(O)NH2，或Re和Rf與它們所連接的氮原子一起形成5或6元雜環(huán)烷基環(huán)，其任選由OH、NH2、NHR16、NHR17、NR16R17或(CH2)nR18R19取代，其中R16和R17如上所定義，R18為H或C1-C6烷基，而R19選自H、C1-C6烷基、取代的烷基、芳烷基、?；?如乙?；?、苯甲?；?、甲酰胺基、烷氧基羰基(如甲氧基羰基)、芳烷氧基羰基(如芐氧基羰基)、衍生自氨基酸(如甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸等)的酰氨基衍生物、imidate(如苯氧基imidate)、氰化物、亞胺酰胺基(imidamido)(如，(C＝NH)NH2、(C＝NSO2NH2)NH2等)、亞磺酰氨基(如，SO2NH2、SO2N(CH3)2)、磺酰基(如，SO2CH3、SO2C6H5、SO2CH2C6H5等)、phosphinate(如，P(＝O)(CH3)2)、雜環(huán)基和亞胺酰胺基(如，(C＝NC6H5)C6H5、(C＝NH)C6H5等)，其中n如上所定義；及Rh為H或＝O；進(jìn)一步的前提是，當(dāng)Rh為H及Rb和Rd均為H時(shí)，則Re為H和Rf為
本發(fā)明的化合物(i)體外可有效地抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶，但不抑制香葉基香葉基蛋白轉(zhuǎn)移酶I；(ii)阻斷為法呢基受體的轉(zhuǎn)化Ras形式誘導(dǎo)的表型的改變，但不阻斷改造為香葉基香葉基受體的轉(zhuǎn)化Ras形式誘導(dǎo)的表型的改變；(iii)阻斷為法呢基受體的Ras的細(xì)胞內(nèi)加工，但不阻斷改造為香葉基香葉基受體的Ras的細(xì)胞內(nèi)加工；及(iv)阻斷由轉(zhuǎn)化Ras誘導(dǎo)的在培養(yǎng)物中的異常細(xì)胞生長。
本發(fā)明的化合物抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶和癌基因蛋白Ras的法呢基化。因此本發(fā)明進(jìn)一步提供通過給予有效量的上述的三環(huán)類化合物抑制哺乳動(dòng)物，尤其是人中的法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶(如ras法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶)的方法。給予患者本發(fā)明的化合物以抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶在下述癌癥的治療中是有用的。
本發(fā)明提供通過給予有效量的本發(fā)明化合物抑制或治療細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)化的細(xì)胞)異常生長的方法。細(xì)胞的異常生長指不依賴于正常調(diào)節(jié)機(jī)制(如接觸抑制的喪失)的細(xì)胞生長。這包括下列的異常生長(1)表達(dá)激活的Ras癌基因的腫瘤細(xì)胞(腫瘤)；(2)其中Ras蛋白因另一種基因的致癌突變而被激活的腫瘤細(xì)胞；及(3)其中出現(xiàn)異常的Ras激活的其它增生性疾病的良性和惡性細(xì)胞。
本發(fā)明也提供通過給予需要此治療的哺乳動(dòng)物(如人)有效量的本文所述的三環(huán)類化合物抑制或治療腫瘤生長的方法。具體地說，本發(fā)明提供通過給予有效量的本文上述的化合物抑制或治療表達(dá)激活的Ras癌基因的腫瘤生長的方法。可以被抑制或治療的腫瘤的實(shí)例包括(但不限于)肺癌(如肺腺癌)、胰癌(如胰腺癌像外分泌性的胰腺癌)、結(jié)腸癌(如結(jié)腸直腸癌像結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤)、骨髓性白血病(如急性骨髓性白血病(AML))、甲狀腺濾泡癌、脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)、膀胱癌、表皮癌、乳腺癌和前列腺癌。
相信本發(fā)明也提供通過給予需要此治療的哺乳動(dòng)物(如人)本文所述的有效量的三環(huán)類化合物抑制或治療良性和惡性增生性疾病的方法，在這些增生性疾病中，Ras蛋白因其它基因的致癌突變而被異常激活，即所述Ras基因本身不被突變所激活為致癌形式。例如，通過本文所述的三環(huán)類化合物可以抑制或治療良性增生性紊亂神經(jīng)纖維瘤病或其中Ras因酪氨酸激酶癌基因(如neu、src、abl、lck和fyn)的突變或過度表達(dá)而被激活的腫瘤。
用于本發(fā)明方法中的三環(huán)類化合物可以抑制或治療細(xì)胞的異常生長。不希望受到理論的束縛，相信這些化合物可以通過阻斷G-蛋白異戊二烯化而抑制G-蛋白(如 ras p21)的功能而起作用，從而使它們用于治療增生性疾病如腫瘤生長和癌癥。不希望受到理論的束縛，相信這些化合物可以抑制ras法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶，從而使它們顯示對ras轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的抗增生活性。
本發(fā)明詳述除非另外指明，用于本文的下列術(shù)語按如下定義
MH+-代表質(zhì)譜中分子的分子離子加氫；Bu-代表丁基；Boc代表叔丁氧基羰基；Et-代表乙基；Me-代表甲基；Ph-代表苯基；苯并三唑-1-基氧基表示
1-甲基-四唑-5-基硫代表示
烷基-(包括烷氧基、烷基氨基和二烷基氨基的烷基部分)-表示含有1-20個(gè)碳原子(優(yōu)選1-6個(gè)碳原子)的直和分支碳鏈；烷氧基烷基表示連接于氧原子上的烷基，它再連接于烷基上；烷氧基烷氧基烷基表示連接于氧原子上的烷基，它再連接于烷基上；再連接于氧原子，再連接于烷基上(如CH2CH2OCH2CH2OCH2CH3)；鏈烷二基-表示具有1-20個(gè)碳原子(優(yōu)選1-6個(gè)碳原子)的二價(jià)直和分支烴鏈，該兩個(gè)可利用的鍵可來自其相同的或不同的碳原子，例如，亞甲基、1，2-亞乙基、亞乙基、-CH2CH2CH2-、-CH2CHCH3、-CHCH2CH3等。
環(huán)烷基-表示3-20個(gè)碳原子(優(yōu)選3-7個(gè)碳原子)的分支或未分支的飽和碳環(huán)；雜環(huán)烷基-表示含有3-15個(gè)碳原子(優(yōu)選4-6個(gè)碳原子)的飽
(TFAA)；1-羥基苯并三唑(HOBT)；間-氯代過苯甲酸(MCPBA)；三乙胺(Et3N)；乙醚(Et2O)；氯代甲酸乙酯(ClCO2Et)；1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)；二異丁基氫化鋁(DIABL)；及4-甲基嗎啉(NMM)。
所述三環(huán)體系中的位置為
對于式1.0中的Ra、Rb、Rc和Rd而言，優(yōu)選的鹵原子選自溴、氯或碘，更優(yōu)選溴和氯。
式1.0化合物包括下式的化合物
式1.0化合物包括下式的化合物
對于本發(fā)明的化合物而言，優(yōu)選Ra、Rb、Rc和Rd選自鹵代，優(yōu)選溴或氯，更優(yōu)選Ra為溴和Rc為氯。優(yōu)選Ra、Rb、Rc和Rd中只有一個(gè)為H。
在式(1.0a)中，優(yōu)選Ra為溴，Rc為氯，及Rb或Rd為鹵代。在式(1.0a)中，更優(yōu)選Ra為溴，Rc為氯，及Rb或Rd為溴。
對于本發(fā)明的化合物而言，優(yōu)選Re或Rf中的一個(gè)為H，而另一個(gè)為-(CH2)n-R15，其中R15選自烷氧基烷基、NHBoc、
對于本發(fā)明的化合物而言，優(yōu)選在三環(huán)體系的5和6位之間(即C5-C6)不存在任選的雙鍵。
對于本發(fā)明的化合物而言，還優(yōu)選環(huán)I上的取代基a表示N。
因此，本發(fā)明的化合物包括下式化合物
下列化合物可以根據(jù)WO96/31478和/或WO95/15016中所述的方法制備，它們均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)
畫入環(huán)體系的線表明已指定的鍵可以連接到任何可取代的環(huán)碳原子上。
本發(fā)明的一些化合物可以以不同的異構(gòu)體形式(如對映體和非對映體)存在。本發(fā)明意欲包括所有此類純形式和混合物的異構(gòu)體，包括外消旋混合物。也包括烯醇形式。
某些三環(huán)化合物應(yīng)具有酸性，例如具有羧基或酚羥基的那些三環(huán)化合物。這些化合物可以形成藥學(xué)上可接受的鹽。此類鹽的實(shí)例可包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋁鹽、金鹽和銀鹽。也考慮了與藥學(xué)上可接受的胺如氨、烷基胺、羥基烷基胺、N-甲基葡糖胺等形成的鹽。
某些堿性的三環(huán)化合物也可形成藥學(xué)上可接受的鹽，如酸加成鹽。例如，吡啶-氮原子可與強(qiáng)酸形成鹽，而具有堿性取代基如氨基的化合物也可與弱酸形成鹽。用于形成鹽的適合酸的例子為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、草酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、琥珀酸、抗壞血酸、馬來酸、甲磺酸和其它本領(lǐng)域熟知的無機(jī)酸和羧酸。常規(guī)的方法為使游離堿的形式與足量的所需酸接觸產(chǎn)生鹽來制備所述鹽。通過用適當(dāng)?shù)南A水溶液，如稀氫氧化鈉、碳酸鉀、氨和碳酸氫鈉水溶液處理所述鹽可以再生所述游離堿形式。這些游離堿形式在某些物理性質(zhì)，如在極性溶劑中的溶解度方面與它們各自的鹽形式有些不同，但對于本發(fā)明的目的而言，所述酸和堿的鹽與它們各自的游離堿形式卻是等同的。
所有這些酸和堿的鹽都在本發(fā)明藥學(xué)上可接受的鹽的范圍內(nèi)，且對本發(fā)明的目的而言，認(rèn)為所有的酸和堿的鹽與相應(yīng)化合物的游離堿形式是等同的。
根據(jù)WO96/30363(1996年10月3日公開)、WO96/31478(1996年10月10日公開)、WO95/10516(1995年4月20日公開)、同時(shí)待審的申請序列號08/410187號(1995年3月24日遞交)、同時(shí)待審的中請序列號08/577951號(1995年12月22日遞交)和同時(shí)待審的申請序列號08/615760號(1996年3月13日遞交)(每一公開的內(nèi)容通過引用結(jié)合于本文中)中所述方法以及根據(jù)以下描述的方法可以制備本發(fā)明化合物。
式1.0a化合物可以如反應(yīng)流程1所示由三環(huán)羥基化合物(2.0)制備。
反應(yīng)流程1
化合物(2.0)(可如WO95/10516(1995年4月20日公開)和U.S.5151423中所述制備)如在此所述用氯化劑，例如亞硫酰氯氯化形成化合物(2.1)。然后使化合物(2.1)與合適的取代的哌嗪反應(yīng)形成化合物(1.0a)。與哌嗪的反應(yīng)可在合適的溶劑，例如DMF或THF中，在堿如三乙胺存在下，于0-80℃溫度下進(jìn)行1-24小時(shí)，然后加入水中，用合適的溶劑，例如乙酸乙酯提取并經(jīng)硅膠層析純化。
或者，化合物(1.0a)一般可如反應(yīng)流程2所示制備。
反應(yīng)流程2
化合物(2.1)與哌嗪-3-甲酸乙酯反應(yīng)以形成化合物(2.1a)。與哌嗪的反應(yīng)在合適的溶劑，例如DMF或THF中，在堿如三乙胺存在下，于0-80℃溫度下進(jìn)行1-24小時(shí)，然后加入水中，用合適的溶劑，例如乙酸乙酯提取并經(jīng)硅膠層析純化。然后，使用二碳酸二叔丁酯，可使化合物(2.1a)與合適的保護(hù)基團(tuán)，例如Boc基團(tuán)反應(yīng)形成化合物(2.1b)。使化合物(2.1b)經(jīng)下文討論的步驟(用NReRf替換OEt)，形成化合物(3.0)。然后，使化合物(3.0)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的去保護(hù)反應(yīng)除去Boc基團(tuán)，由此形成化合物(3.1)。如果需要R不是H，可使化合物(3.1)任選經(jīng)歷反應(yīng)步驟(b)(用R取代哌嗪上的氮)。步驟(a)和(b)可以任何順序進(jìn)行。當(dāng)化合物(2.1a)首先經(jīng)歷反應(yīng)步驟(b)(即形成化合物(3.2))時(shí)，通常不需要使用保護(hù)基團(tuán)。
步驟(a)通過使化合物(2.1b)或化合物(3.2)與氫氧化鋰在水和合適的助溶劑，例如甲醇中反應(yīng)將-C(O)ORt基團(tuán)轉(zhuǎn)化為-C(O)OH來進(jìn)行。然后，在HOBt和N-甲基嗎啉以及偶合劑，例如DEC或DCC存在下，在合適的溶劑，例如DMF中，該羧酸中間體可與合適的NHReRf胺化合物(其中Re和Rf定義如上)在0-80℃的溫度下反應(yīng)1-24小時(shí)，然后加入水中，用合適的溶劑，例如乙酸乙酯提取并經(jīng)硅膠層析純化。
步驟(b)可以下列方式進(jìn)行，這取決于R取代基的情況而定對于式(1.0a)化合物而言(其中R與其所連接的氮原子一起組成酰胺，例如，其中R為-C(O)-烷基)，步驟(b)可通過胺(2.1a或3.1)與式RA-C(O)-OH的羧酸(其中RA-C(O)為R)在偶合劑，例如DEC、CDI或DCC存在下的反應(yīng)而進(jìn)行。該反應(yīng)通常在適合的有機(jī)溶劑，例如DMF、THF或二氯甲烷中，在-10℃-100℃，優(yōu)選在0℃-50℃，且最優(yōu)選在約室溫下進(jìn)行。當(dāng)偶合劑為DCC或DEC時(shí)，該反應(yīng)優(yōu)選在HOBT和N-甲基嗎啉存在下進(jìn)行。
或者，可以使所述胺(2.1a或3.1)與式R-L，其中R定義如上和L為離去基團(tuán)如氯、溴、碘、-O-C(O)-RB其中RB為C1-C6烷基或苯基或式-OSO2-RC的磺酸酯基團(tuán)，其中RC選自C1-C6烷基、苯基、三氟甲基、甲苯基和對-溴代苯基，反應(yīng)形成式(1.0a)化合物。該反應(yīng)在堿(優(yōu)選叔胺堿，例如三乙胺、DMAP、吡啶或Hünigs堿)存在下進(jìn)行。
對于式(1.0a)化合物而言，其中R為-C(O)-CH2-RD，其中RD為下式的哌啶
和RE表示-C(O)NH2(即甲酰胺)，步驟(b)可通過胺(2.1a或3.1)與保護(hù)的哌啶，即C(O)CH2-哌啶-N-Boc，在偶合劑，例如DEC、CDI或DCC存在下的反應(yīng)而進(jìn)行。該反應(yīng)通常在適合的有機(jī)溶劑，例如DMF、THF或二氯甲烷中，在-10℃-100℃，優(yōu)選在0℃-50℃，且最優(yōu)選在約室溫下進(jìn)行。當(dāng)偶合劑為DCC或DEC時(shí)，該反應(yīng)優(yōu)選在HOBT和N-甲基嗎啉存在下進(jìn)行。然后，用適當(dāng)?shù)乃幔缛宜崾股鲜龅腂oc-哌啶化合物去保護(hù)，得到其中氮未取代的哌啶。使上述未取代的哌啶在水中與過量的脲反應(yīng)。該反應(yīng)可用相對于未取代的哌啶原料反應(yīng)物為約4-約10當(dāng)量的脲進(jìn)行。通常，使用約10當(dāng)量的脲。該反應(yīng)進(jìn)行約3-約68小時(shí)。通常，該反應(yīng)可進(jìn)行約60-70小時(shí)。該反應(yīng)通常在反應(yīng)混合物的回流溫度下進(jìn)行。所述溫度范圍可在約98-約100℃。未取代的哌啶原料反應(yīng)物相對于水的量一般可在約0.025g/ml-約0.6g/ml之間變化，且通?？蔀榧s0.1g/ml。
對于制備式(1.0a)化合物而言，其中R為-C(O)-NH-RG，其中RG為烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，步驟(b)可采用本領(lǐng)域已知的方法，通過式(2.1a或3.1)的化合物與式RG-N＝C＝O的異氰酸酯在適合的溶劑，例如DMF、THF或二氯甲烷中的反應(yīng)而進(jìn)行。
或者，可如反應(yīng)流程4所示，使所述胺(2.1a或3.1)與光氣反應(yīng)形成式(5.0)的氯代甲酸酯中間體。所述氯代甲酸酯(5.0)一般不用分離而與式RG-NH2的胺反應(yīng)，其中RG定義如上，形成式(1.0a)化合物，其中R為-C(O)-NH-RG。
反應(yīng)流程4
當(dāng)R為S(O)2R1時(shí)，步驟(b)可通過將化合物(3.1)溶解于適合的溶劑，例如DMF或THF中來進(jìn)行。加入堿如三乙胺，并于0℃至室溫及攪拌下，將通過本領(lǐng)域已知的方法制備的合適的烷基磺酰氯(R1-S(O)2Cl)加入該反應(yīng)混合物中。1-24小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物加入水中并用合適的溶劑，例如乙酸乙酯提取該產(chǎn)物。然后可經(jīng)硅膠柱層析純化粗的反應(yīng)產(chǎn)物。
當(dāng)R為S(O)2NR1R2時(shí)，步驟b可通過將化合物3.1溶解于適合的溶劑，例如DMF或THF中來進(jìn)行。加入堿如三乙胺，并于0℃至室溫及攪拌下，將通過本領(lǐng)域已知的方法制備的合適的烷基氨基磺酰氯(R1R2N-S(O)2Cl)加入該反應(yīng)混合物中。1-24小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物加入水中并用合適的溶劑，例如乙酸乙酯提取該產(chǎn)物。然后可經(jīng)硅膠柱層析純化粗的反應(yīng)產(chǎn)物。
或者，式(1.0a)化合物通?？扇绶磻?yīng)流程5所示制備。
反應(yīng)流程5
使化合物(6.0)與二碳酸二叔丁酯反應(yīng)形成化合物(6.1)。在DEC和HOBt存在下，使化合物(6.1)與NHReRf反應(yīng)形成化合物(6.2)。用TFA處理化合物(6.2)形成化合物(6.3)。使化合物(6.3)與三環(huán)化合物(6.4)反應(yīng)形成化合物(6.5)。使化合物(6.5)經(jīng)歷上面步驟(b)中所述的處理得到化合物(6.6)。
R-對映體形式的式(1.0a)化合物通常可如以下反應(yīng)流程6和7所示制備。
反應(yīng)流程6
在Pd/C催化劑，例如10％Pd/C的存在下，在例如30-100psi(優(yōu)選50psi)壓力下，將化合物(6.7)氫化。所述氫化作用在20℃-30℃溫度下，在乙醇中進(jìn)行。隨后于室溫下，使氫化的產(chǎn)物與氫氧化鉀在水中反應(yīng)得到化合物(6.8)。于室溫下使化合物(6.8)與3當(dāng)量R(-)樟腦磺酸(“CSA”)反應(yīng)并在水中重結(jié)晶數(shù)次得到二樟腦磺酸鹽，化合物(6.9)。于室溫下，使化合物(6.9)與(Boc)2O(二碳酸二叔丁酯)在甲醇/水溶液中反應(yīng)得到化合物(6.10)。于0℃使化合物(6.10)與磺酰氯在DMF中反應(yīng)，隨后于0℃在吡啶中與乙腈反應(yīng)并使之溫?zé)嶂潦覝氐玫交衔?6.11)。于室溫下，使化合物(6.11)與NHReRf在二氯甲烷中反應(yīng)形成化合物(6.12)。使化合物(6.12)與異氰酸酯，R1-N＝C＝O，或者與羧酸，R1CO2H(其中R1與上面式(1.0)定義相同)反應(yīng)得到化合物(6.13)，其中R＝-C(O)NHR1或C(O)R1。與R1-N＝C＝O或R1CO2H的反應(yīng)于室溫下在DMF或二氯甲烷中進(jìn)行。當(dāng)使用R1CO2H時(shí)，該反應(yīng)優(yōu)選在偶合劑，例如DEC存在下進(jìn)行。將化合物(6.11)轉(zhuǎn)化為化合物(6.12)及將化合物(6.12)轉(zhuǎn)化為化合物(6.13)的反應(yīng)可作為一步合成法進(jìn)行。于室溫下，在二氯甲烷中，用TFA使化合物(6.13)去保護(hù)形成化合物(6.14)。于室溫下，使化合物(6.14)與化合物(6.15)在DMF中反應(yīng)形成化合物(6.16)。
反應(yīng)流程7
于室溫下，使根據(jù)如上流程6所示制備的化合物(6.9)與氯代甲酸芐酯(CBZ-Cl)在50％二氧六環(huán)水溶液中反應(yīng)形成芐氧基羰基化合物，隨后使其與(Boc)2O反應(yīng)形成化合物(6.17)。于室溫下，在Pd/C催化劑存在下，在例如30-100psi(優(yōu)選50psi)壓力下，將化合物(6.17)氫化形成化合物(6.18)。于室溫下使化合物(6.18)與化合物(6.19)在DMF中反應(yīng)形成化合物(6.20)。于室溫下，使化合物(6.20)與NHReRf及DEC/HOBt在DMF中反應(yīng)形成化合物(6.21)。于室溫下，用TFA使化合物(6.21)去保護(hù)，然后與異氰酸酯，R1-N＝C＝O，或者與羧酸，R1CO2H(其中R1與上面式(1.0)定義相同)反應(yīng)形成化合物(6.22)，其中R為-C(O)NHR1或-C(O)R1。與R1-N＝C＝O或R1CO2H的反應(yīng)于室溫下在DMF或二氯甲烷中進(jìn)行。當(dāng)使用R1CO2H時(shí)，該反應(yīng)優(yōu)選在偶合劑，例如DEC存在下進(jìn)行。將化合物(6.20)轉(zhuǎn)化為化合物(6.21)及將化合物(6.21)轉(zhuǎn)化為化合物(6.22)的反應(yīng)可作為一步合成法進(jìn)行。
根據(jù)以下反應(yīng)流程可以制備其中R為H的化合物(1.0b)
用氰尿酰氟和吡啶在二氯甲烷中處理化合物(7.0)。隨后在三乙胺存在下，使生成的酰氟與NHReRf在二氯甲烷中反應(yīng)得到化合物(7.1)。使化合物(7.1)與哌啶在氯仿中反應(yīng)得到胺，隨后使該胺與溴代乙酰溴和2，6-二甲基吡啶在二氯甲烷中反應(yīng)形成化合物(7.2)。用三氟乙酸在二氯甲烷中處理化合物(7.2)，接著在DMSO中用二異丙基乙胺處理形成酮基-取代的哌嗪化合物，化合物(7.2a)。使化合物(7.2a)與三環(huán)化合物(7.3)反應(yīng)得到化合物(1.0b)，其中R為H。
根據(jù)以下反應(yīng)流程可以制備其中R不為H的化合物(1.0b)
使化合物(8.0)與R(O)H，例如戊醛在2％乙酸/甲醇中反應(yīng)得到化合物(8.1)。在2，6-二甲基吡啶存在下，使化合物(8.1)與氯代乙酰氯在DMF中反應(yīng)得到化合物(8.2)。在二氯甲烷中，用三氟乙酸處理化合物(8.2)，接著在DMSO中用二異丙基乙胺處理形成酮基-取代的哌嗪化合物，化合物(8.2a)。然后，使化合物(8.2a)與三環(huán)化合物(8.3)反應(yīng)得到化合物(8.4)。
根據(jù)以下流程所示，通過采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，可以由三環(huán)酮制備其中取代基a為NO的式1.0化合物
例如，在適宜的溫度下，在合適的有機(jī)溶劑，例如二氯甲烷(通常為無水的)中，可使酮化合物(9.0)與間-氯代過苯甲酸反應(yīng)，得到NO-取代的化合物(9.1)。通常在加入間-氯代過苯甲酸之前，將酮(9.0)的有機(jī)溶劑溶液冷卻至約0℃。然后，在反應(yīng)期間使該反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝?。通過標(biāo)準(zhǔn)分離方法回收化合物(9.1)。例如，可用合適的堿，如飽和碳酸氫鈉或氫氧化鈉(如1N氫氧化鈉)水溶液洗滌該反應(yīng)混合物，然后經(jīng)無水硫酸鎂干燥。真空濃縮含有產(chǎn)物的溶液。通過標(biāo)準(zhǔn)方法，例如，通過硅膠層析(如快速柱層析)可以純化該產(chǎn)物。通過常規(guī)方法，例如，使化合物(9.1)與硼氫化鈉在甲醇中反應(yīng)可將化合物(9.1)轉(zhuǎn)化為羥基化合物(9.2)。通過常規(guī)方法，例如使化合物(9.2)與亞硫酰氯反應(yīng)，將化合物(9.2)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的氯代化合物(9.3)。然后，使化合物(9.3)與上述的合適取代的哌嗪反應(yīng)得到所需化合物。
本發(fā)明所用的化合物通過下列實(shí)施例示范說明，它們并不構(gòu)成對本公開范圍的限制。
實(shí)施例1根據(jù)下述方法制備下列化合物
化合物A按如下制備將5.25g(52.85mmol) 2-哌嗪羧酸.2HCl溶于160ml的1∶1二氧六環(huán)/水中，用50％氫氧化鈉(水溶液)調(diào)節(jié)pH至11。緩慢加入(分次)7.21g(29.28mmol)BOC-ON在40ml二氧六環(huán)中的溶液中，同時(shí)在加入過程中用50％氫氧化鈉(水溶液)維持pH在11。于室溫下攪拌5小時(shí)，然后冷卻至0℃并用50％氫氧化鈉(水溶液)調(diào)節(jié)至pH/9.5。緩慢加入(分次)7.34g(28.37mmol)FMOC-Cl在40ml二氧六環(huán)中的溶液，在加入過程中用50％氫氧化鈉維持pH9.5。將該混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?0小時(shí)。用Et2O(3×150ml)洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥合并的萃取物并真空濃縮至150ml的體積。冷卻至-20℃過夜，過濾收集生成的固體，用己烷洗滌并真空干燥固體，得到5.4g產(chǎn)物化合物。
制備化合物B。向哌嗪羧酸衍生物(A)(150mg，0.33mmol)和組胺二氫氯化物(73mg，0.39mmol)的二氯甲烷的攪拌溶液中加入DCC(81mg，0.39mmol)和HOBt(53mg，0.39mmol)。將該混合物攪拌過夜。真空除去溶劑，殘留物經(jīng)柱層析純化(用4-7％甲醇的二氯甲烷液)，得到98mg所需產(chǎn)物，收率55％。MSm/z546(MH+)。
步驟1B
制備化合物C。向酰胺(B)(54mg，0.098mmol)的二氯甲烷(2ml)的攪拌溶液中加入三乙胺(14ul，0.098mmol)和p-甲苯磺酰氯(19mg，0.098mmol)。將該反應(yīng)物攪拌過夜。用二氯甲烷(20ml)稀釋該反應(yīng)物并用水(20ml)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空除去溶劑，得到50mg所需產(chǎn)物，收率73％。MSm/z700(MH+)。
步驟1C
制備化合物D。向化合物(C)(50mg，0.072mmol)的THF(2ml)的攪拌溶液中加入哌啶(1ml)。將該反應(yīng)物攪拌2小時(shí)，并真空除去溶劑，殘留物經(jīng)柱層析純化(用5％甲醇的二氯甲烷液)，得到18mg胺，收率53％。MSm/z478(MH+)。將該胺溶于乙醇(2ml)并加入異氰酸環(huán)己酯(54ul，0.37mmol)。將該反應(yīng)物攪拌過夜。真空除去溶劑，殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用4％甲醇的二氯甲烷液)，得到定量的所需產(chǎn)物。MSm/z603(MH+)。
步驟1D
4.制備化合物E。向脲(D)(23mg，0.038mmol)的二氯甲烷(2ml)的攪拌溶液中加入三氟乙酸(0.5ml)。將該混合物攪拌20分鐘，并真空除去溶劑，在高真空管中抽吸該殘留物2小時(shí)并使之溶于乙腈(1ml)中。向該溶液中加入1，2，2，6，6-五甲基哌啶(34ul，0.19mmol)和三環(huán)烷基氯(5)(13mg，0.038mmol)。將該反應(yīng)物攪拌過夜。形成白色沉淀。將該混合物溶于水(10ml)并用二氨甲烷(15ml×2)提取。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空除去溶劑，殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用4％甲醇的二氯甲烷液)，得到15.9mg所需產(chǎn)物，收率52％。MSm/z810(MH+)。
步驟1E
5.制備化合物F。向化合物E(9.5mg，0.012mmol)的甲醇(1ml)的攪拌溶液中加入HOBt(5mg，0.035mmol)。將該反應(yīng)物攪拌過夜。真空除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用5-7％甲醇的二氯甲烷液)，得到4.5mg所需產(chǎn)物，收率58％。MSm/z656(MH+)。
實(shí)施例2
1.制備化合物B。向酸(A)(1.69g，3.97mmol)的二氯甲烷(5ml)的攪拌溶液中加入吡啶(32ul，3.97mmol)和氰尿酰氟(669ul，7.93mmol)。將該反應(yīng)物攪拌過夜并加入水(10ml)。用二氯甲烷(15ml×2)提取該混合物。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空蒸發(fā)溶劑。將得到的酰氟溶于二氯甲烷(5ml)中。向該溶液中加入三乙胺(732ul，5.25mmol)和3-氨基-甲基吡啶(428ul，4.2mmol)。攪拌該混合物3小時(shí)，然后用二氯甲烷(10ml)稀釋。用飽和氯化銨溶液(5ml)洗滌該溶液。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用2％甲醇的二氯甲烷液)，得到1.4g所需產(chǎn)物，收率68％。MSm/z517(MH+)。
2.制備化合物C。向化合物(B)(581mg，1.13mmol)的氯仿(4ml)的攪拌溶液中加入哌啶(2ml)。將該混合物攪拌1小時(shí)并真空除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用5-10％甲醇的二氯甲烷液)，得到320mg胺，收率90％。將該胺(68mg，0.231mmol)溶于二氯甲烷(3ml)。向該溶液中加入2，6-二甲基吡啶(46ul，0.39mmol)和溴代乙酰溴(30ul，0.35mmol)。攪拌該反應(yīng)物15分鐘。用2％氯化銨溶液洗滌該反應(yīng)物。用碳酸氫鈉堿化水相并用二氯甲烷提取。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并蒸發(fā)得到27mg產(chǎn)物，收率28％。MSm/z415(M+)。
3.制備化合物D。向化合物C(27mg，0.066mmol)的二氯甲烷(2ml)的攪拌溶液中加入三氟乙酸(1ml)。將該反應(yīng)物攪拌1小時(shí)并真空除去溶劑，在高真空管中抽吸該殘留物3小時(shí)，然后使之溶于DMSO(1ml)中。向該溶液中加入二異丙基乙胺(69ul，0.39mmol)。將該反應(yīng)物攪拌2小時(shí)，然后加入三環(huán)烷基氯5(27mg，0.079mmol)和二異丙基乙胺(23ul，0.13mmol)。攪拌該混合物過夜。真空除去溶劑。將殘留物溶于乙酸乙酯(10ml)中并用水(5ml)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用1％甲醇的二氯甲烷液)，得到4mg產(chǎn)物，收率13％。MSm/z542(MH+)。
實(shí)施例3采用如同實(shí)施例2的方法，除了使用實(shí)施例2的化合物A的R-異構(gòu)體外，制備下列化合物
實(shí)施例4
1.制備化合物B。向胺(A)(276mg，0.939mmol)的2％乙酸/甲醇(2ml)的攪拌溶液中加入戊醛(110ul，1mmol)和NaBH3CN。將該混合物攪拌過夜。真空除去溶劑并加入15％氫氧化鈉溶液。用二氯甲烷(10ml×2)提取該混合物。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空蒸發(fā)除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用2％甲醇的二氯甲烷液)，得到220mg產(chǎn)物，收率65％。MSm/z365(MH+)。
2.制備化合物C。向胺(B)(10lmg，0.28mmol)的DMF(2ml)的攪拌溶液中加入2，6-二甲基吡啶(43ul，0.37mmol)和氯代乙酰氯(27ul，0.34mmol)。攪拌該反應(yīng)物1小時(shí)并真空除去溶劑。使殘留物溶于二氯甲烷(10ml)中并用0.5N氫氧化鈉溶液洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空除去溶劑，得到116mg產(chǎn)物，收率94％。MSm/z441(MH+)。
3.制備化合物D。向化合物(C)(116mg，0.26mmol)的二氯甲烷(3ml)的攪拌溶液中加入三氟乙酸(1ml)。將該反應(yīng)物攪拌1小時(shí)。真空除去溶劑，在高真空下抽吸該殘留物3小時(shí)，然后使之溶于DMSO(1ml)中。向該溶液中加入二異丙基乙胺(275ul，1.58mmol)。將該反應(yīng)物攪拌2小時(shí)，然后加入三環(huán)烷基氯5(0.131mmol)和1，2，2，6，6-五甲基哌啶(94ul，0.52mmol)。攪拌該混合物過夜。真空除去溶劑。將殘留物溶于乙酸乙酯(10ml)中并用水(5ml)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層并真空除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(用1％甲醇的二氯甲烷液)，得到5.4mg產(chǎn)物，收率6.7％。MSm/z612(MH+)。
實(shí)施例5采用如同實(shí)施例4的方法，除了使用實(shí)施例4的化合物A的R異構(gòu)體外，制備下列化合物
實(shí)施例6方法1. 3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-醇的制備
將3，10-二溴代-8-氯代-5，6-二氫-11H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-酮(2g，5mm)溶于20ml甲醇中。加入硼氫化鈉(0.6g)并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物。1小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物加入20ml1N鹽酸中并攪拌5分鐘。加入30ml1N氫氧化鈉并用二氯甲烷提取該產(chǎn)物3次。經(jīng)硫酸鎂干燥二氯甲烷層，過濾并真空蒸發(fā)至干，得到1.98g標(biāo)題產(chǎn)物。FABMS(M/e+1)＝402方法2. 3，10-二溴代-8，11-二氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶的制備
在干燥氮?dú)庀?，?，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-醇(1g，2.48mm)懸浮于20ml二氯甲烷中。加入亞硫酰氯(1.63g，13.71mm)并攪拌該反應(yīng)混合物2小時(shí)。真空蒸發(fā)該粗反應(yīng)混合物至干，得到1.1g產(chǎn)物，為鹽酸鹽。FABMS(M/e+1)＝420
方法3. 1-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-3-哌嗪甲酸乙酯的制備
在干燥氮?dú)庀拢瑢?，10-二溴代-8，11-二氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶(1.05g，2.48mm)溶于20ml干燥N，N-二甲基甲酰胺中。加入哌嗪-3-甲酸乙酯(1.177g，7.44mm)和二異丙基乙胺(1.28g，9.92mm)并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物18小時(shí)。將反應(yīng)混合物加入100ml鹽水中并用3×150ml二氯甲烷提取。真空除去溶劑得到固體，將其經(jīng)100g快速硅膠層析(用50％乙酸乙酯/己烷)，得到0.895g標(biāo)題化合物。FABMS(M/e+1)＝542方法4. 4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-1-(1-氧代戊基)-2-哌嗪甲酸乙酯的制備
將1-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-3-哌嗪甲酸乙酯(0.46g，0.85mm)溶于10ml干燥N，N-二甲基甲酰胺中。加入戊酸(0.153g，1.5mm)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)(0.288g，1.5mm)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(0.203g，1.5mm)和N-甲基嗎啉(0.5g，5mm)并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物。48小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物加入鹽水中并用3×150ml乙酸乙酯提取。合并乙酸乙酯洗液并真空蒸發(fā)溶劑得到一膠狀物。將該膠狀物經(jīng)75g快速硅膠層析，用25％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑，得到0.45g標(biāo)題產(chǎn)物。FABMS(M/e+1)＝626方法5. 4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-1-(1-氧代戊基)-2-哌嗪羧酸的制備
將4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-1-(1-氧代戊基)-2-哌嗪甲酸乙酯(0.4g，0.64mm)溶于10ml乙醇中。加入5ml1M氫氧化鋰并攪拌該反應(yīng)混合物24小時(shí)。用10％檸檬酸調(diào)節(jié)pH至4.5，用50ml水稀釋并用2×100ml二氯甲烷提取。經(jīng)硫酸鎂干燥二氯甲烷提取物，過濾并蒸發(fā)至干，得到0.385g標(biāo)題產(chǎn)物。FABMS(M/e+1)＝598
方法6. 4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-N-(3-吡啶基甲基)-1-(1-氧代戊基)-2-哌嗪甲酰胺的制備
將4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-1-(1-氧代戊基)-2-哌嗪羧酸(0.353g，0.59mm)溶于干燥N，N-二甲基甲酰胺中。加入3-氨基甲基吡啶(0.127g，1.18mm)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)(0.266g，1.18mm)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(0.16g，1.18mm)和N-甲基嗎啉(0.59g，5.9mm)并于室溫下，在干燥氮?dú)庵袛嚢柙摲磻?yīng)混合物18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物加入鹽水中并用3×159ml乙酸乙酯提取產(chǎn)物。經(jīng)硫酸鎂干燥乙酸乙酯層并真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)物經(jīng)50g硅膠柱層析(用2.5％甲醇-2M氨/二氯甲烷并增加至10％洗脫)，得到0.387g標(biāo)題產(chǎn)物。FABMS(M/e+1)＝691方法7.N，N-二-叔丁氧基羰基-3-羧基哌嗪的制備
將3-羧基哌嗪(10g，49.2mm)溶于200ml50％甲醇/水中并用50％氫氧化鈉將pH調(diào)至9.5。加入二碳酸二叔丁基酯(21g)并用1N氫氧化鈉將pH維持在9.5。通過tlc監(jiān)測該反應(yīng)，如果需要，可以加入更多的二碳酸二叔丁基酯。用濃鹽酸將該反應(yīng)混合物酸化至pH＝7，然后再用檸檬酸調(diào)至pH＝3.8并用二氯甲烷提取，得到15.4g固體產(chǎn)物。
方法8.N，N-二-叔丁氧基羰基-3-[4-吡咯烷酮-氨基丙基(propiony)]-哌嗪的制備
將N，N-二-叔丁氧基羰基-3-羧基哌嗪(2g，6.2mm)溶于20ml N，N-二甲基甲酰胺中。加入4-吡咯烷酮氨基丙烷(12.4ml，12.4mm)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)(2.38g，12.4mm)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(1.68g，12.4mm)和N-甲基嗎啉(6.82ml，62mm)并于室溫下，在干燥氮?dú)庵袛嚢柙摲磻?yīng)混合物18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物加入鹽水中并用3×159ml乙酸乙酯提取產(chǎn)物。經(jīng)硫酸鎂干燥乙酸乙酯層并真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析，用5％甲醇/二氯甲烷作為洗脫劑，得到標(biāo)題產(chǎn)物，于室溫下，用30ml三氟乙酸處理該產(chǎn)物4小時(shí)。蒸發(fā)三氟乙酸得到6g淺棕色油狀物。
方法9. 4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-N-[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]-2-哌嗪甲酰胺的制備
將3-[4-吡咯烷酮-氨基丙基(propiony)]-哌嗪二-三氟乙酸鹽(6.2mm)加入3，10-二溴代-8，11-二氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶(1g，2.48mm)在30mlN，N-二甲基甲酰胺和N-甲基嗎啉(3.47ml)的溶液中并攪拌24小時(shí)。將該反應(yīng)混合物加入100ml鹽水中并用3×150ml二氯甲烷提取。真空除去溶劑得到固體。將其經(jīng)快速硅膠層析(用2.5-7.5％甲醇/二氯甲烷)，得到0.4g標(biāo)題產(chǎn)物。FABMS(M/e+1)＝641方法10. 4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-1-[(2-甲氧基乙氧基)乙?；鵠-N-[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]-2-哌嗪甲酰胺的制備
將4-(3，10-二溴代-8-氯代-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基)-N-[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]-2-哌嗪甲酰胺(0.064g)溶于2mlN，N-二甲基甲酰胺中。加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)(0.038g)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(0.027g)和N-甲基嗎啉(0.11ml)并于室溫下，在干燥氮?dú)庵袛嚢柙摲磻?yīng)混合物18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物加入鹽水中并用乙酸乙酯提取產(chǎn)物。經(jīng)硫酸鎂干燥乙酸乙酯層并真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析，用5％甲醇/二氯甲烷作為洗脫劑，得到0.059g標(biāo)題產(chǎn)物。FABMS(M/e+1)＝713
實(shí)施例7采用基本與實(shí)施例1或6的相同的反應(yīng)程序，和/或以上說明書中所述反應(yīng)流程來制備下列化合物
測定根據(jù)WO 95/10516(1995年4月20日公開)所述的測定方法測定FPTIC50(對法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶的抑制，體外酶測試)和COS細(xì)胞IC50(細(xì)胞-基測試)。根據(jù)WO 95/10516所述的測試方法可以測定GGPTIC50(對香葉基香葉基蛋白轉(zhuǎn)移酶的抑制，體外酶測試)、細(xì)胞墊分析和抗腫瘤活性(體內(nèi)抗腫瘤研究)。WO 95/10516的公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
按照與上述基本相同的方法可以進(jìn)行其它一些測試，但是用另外的指示腫瘤細(xì)胞系代替T24-BAG細(xì)胞。這些測試可以用表達(dá)激活的K-ras基因的DLD-1-BAG人結(jié)腸癌細(xì)胞或表達(dá)激活的K-ras基因的SW620-BAG人結(jié)腸癌細(xì)胞進(jìn)行。用本領(lǐng)域已知的其它腫瘤細(xì)胞系也可以證實(shí)本發(fā)明化合物抑制其它類型癌細(xì)胞的活性。
軟瓊脂測定無貼壁依賴性生長是致瘤細(xì)胞系的特征。將人腫瘤細(xì)胞懸浮于含有0.3％瓊脂糖和指定濃度的法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的生長培養(yǎng)基中。將該溶液涂在用含有相同濃度的法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的0.6％瓊脂糖固化的生長培養(yǎng)基上作為上層。待上層固化后，將培養(yǎng)板于37℃、5％二氧化碳下孵育10-16天使集落突起。孵育后，用MTT(3-[4，5-二甲基-噻唑-2-基]-2，5-二苯基溴化四唑鎓，噻唑基蘭)(1mg/ml的PBS溶液)涂于所述瓊脂上進(jìn)行集落染色。對這些集落進(jìn)行計(jì)數(shù)并計(jì)算IC50。
下表給出結(jié)果(“nM”表示“納摩爾”)。
在由本發(fā)明所述的化合物制備藥用組合物時(shí)，惰性的、藥學(xué)上可接受的載體可以為固體或液體。固體制劑包括粉劑、片劑、分散顆粒劑、膠囊劑、扁囊劑和栓劑。粉劑和片劑可含有約5-約70％的活性組分。適當(dāng)?shù)墓腆w載體是本領(lǐng)域已知的，如碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、蔗糖、乳糖。片劑、粉劑、扁囊劑和膠囊劑為適合口服給藥的固體劑型。
制備栓劑時(shí)，首先將低熔點(diǎn)的蠟如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，攪拌下將活性組分均勻分散其中。然后將融化的均勻混合物傾入方便大小的模中，使其冷卻并因此固化。
液體制劑包括溶液、懸浮液和乳劑。適合胃腸外注射的實(shí)例為水或水-丙二醇溶液。
液體制劑也可以包括供鼻內(nèi)給藥的溶液。
適合吸入的氣霧制劑可包括溶液和粉末形式的固體，它們可以與藥學(xué)上可接受的載體例如惰性壓縮氣體混合。
也包括在臨用前將其轉(zhuǎn)化為供口服或胃腸外給藥的液體制劑的固體形式制劑。此類液體制劑包括溶液、懸浮液和乳劑。
也可以將本發(fā)明的化合物透皮給藥。透皮組合物可以為霜?jiǎng)?、洗劑、氣霧劑和/或乳劑，包括為此目的的本領(lǐng)域常用的基質(zhì)型或儲(chǔ)庫型的透皮貼劑。
優(yōu)選該化合物口服給藥。
優(yōu)選該藥用制劑為單位劑型。為此類劑型時(shí)，該制劑可以分成含有適當(dāng)量(如達(dá)到所需目的的有效量)的活性組分的單位劑量。
制劑的單位劑量中活性化合物的量可以根據(jù)具體的使用情況在約0.1mg-1000mg、更優(yōu)選在約1mg-300mg之間變化或調(diào)整。
根據(jù)病人的需要和待治療疾病的嚴(yán)重程度可以改變使用的實(shí)際劑量。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地決定具體情況下的合適劑量。一般而言，治療以比該化合物的最佳劑量稍低的較低劑量開始。此后，逐漸增加劑量至在特定情況下達(dá)到最佳效果。為方便起見，可以將每日總劑量分開，并根據(jù)需要在全天中分次給藥。
在考慮了各種因素如病人的年齡、身體狀況和身高體重以及治療的癥狀的嚴(yán)重程度后，根據(jù)醫(yī)師的判斷調(diào)整本發(fā)明的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的給藥量和給藥頻率。一般口服給藥的推薦劑量方案為每天10mg-2000mg、優(yōu)選每天10-1000mg，在全天分2-4次給藥以阻斷腫瘤生長。當(dāng)在該劑量范圍內(nèi)給藥時(shí)，所述化合物是無毒性的。
下列為含有本發(fā)明化合物的藥用劑型的實(shí)施例。本發(fā)明的藥用組合物方面的范圍不受所提供的實(shí)施例的限制。
藥物劑型實(shí)施例實(shí)施例A片劑<
<p>制備方法將序號1和2的成分在適合的混合器中混合10-15分鐘。將該混合物與序號3成分一起制粒。如果需要可通過粗篩(如1/4”，0.63cm)磨碎濕顆粒。干燥濕顆粒。如果需要，過篩干燥的顆粒并使其與序號4的成分混合10-15分鐘。加入序號5的成分并混合1-3分鐘。在合適的壓片機(jī)上將該混合物壓片成適當(dāng)?shù)拇笮『椭亓俊?br> 實(shí)施例B膠囊
制備方法將序號1、2和3的成分在適合的混合器中混合10-15分鐘。加入序號4的成分并混合1-3分鐘。在合適的裝膠囊機(jī)上將該混合物填入合適的兩節(jié)-硬明膠膠囊中。
盡管結(jié)合以上提出的具體的實(shí)施方案介紹了本發(fā)明，它的許多另外的改變、修改和變化對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說應(yīng)是顯而易見的。所有這些改變、修改和變化都將認(rèn)為是在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.下式的化合物
或藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑化物，其中a代表N或NO-；Ra、Rb、Rc和Rd相同或不同，且選自H、鹵代、烷基和烷氧基，前提是Ra、Rb、Rc和Rd中至少1個(gè)，但不超過2個(gè)為H；虛線(---)代表任選的雙鍵；R選自H、-S(O)2R1、-S(O)2NR1R2、-C(O)R1和-C(O)NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立選自H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、取代的烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、取代的雜芳基、取代的雜芳烷基、取代的(C3-C7)環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基烷基、取代的雜環(huán)烷基，其中所述取代的基團(tuán)具有一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基烷基、烷氧基、芳烷基、雜芳烷基、-NO2、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、C3-C7環(huán)烷基、芳基、-CN、雜芳基、雜環(huán)烷基、＝O、-OH、氨基、取代的氨基、硝基和鹵代；Re和Rf獨(dú)立選自H、烷基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、取代的烷基、取代的烷氧基烷基、取代的烷氧基烷氧基烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、取代的雜芳基、取代的雜芳烷基、取代的(C3-C7)環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基烷基、取代的雜環(huán)烷基，其中所述取代的基團(tuán)具有一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基烷基、烷氧基、芳烷基、雜芳烷基、-NO2、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、C3-C7環(huán)烷基、芳基、-CN、雜芳基、雜環(huán)烷基、＝O、-OH、氨基、取代的氨基、硝基和鹵代；或Re選自H、烷基和芳基而Rf由-(CH2)n-R15表示，其中n為0-8的整數(shù)而R15選自-C(O)NH2、-SO2NH2、芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基，任選由烷基、烷氧基、芳烷基、雜芳烷基、-NO2、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、C3-C7環(huán)烷基、芳基、-CN、雜環(huán)烷基、＝O、-OH、氨基、取代的氨基、硝基和鹵代取代，或R15為
，其中B為OH或NH2而A為NH、O、NOH或NCN，或R15為NR16R17，其中R16為H或烷基和R17為H、烷基、-SO2CH3或C(O)NH2，或Rc和Rf與它們所連接的氮原子一起形成5或6元雜環(huán)烷基環(huán)，其任選由OH、NH2、NHR16、NHR17、NR16R17或(CH2)nR18R19取代，其中R16和R17如上所定義，R18為H或C1-C6烷基，而R19選自H、C1-C6烷基、取代的烷基、芳烷基、?；?如乙?；⒈郊柞；?、甲酰胺基、烷氧基羰基(如甲氧基碳基)、芳烷氧基羰基(如芐氧基羰基)、衍生自氨基酸(如甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸等)的酰氨基衍生物、imidate (如苯氧基imidate)、氰化物、亞胺酰胺基(imidamido)(如，C(＝NH)NH2、(C＝NSO2NH2)NH2等)、亞磺酰氨基(如，SO2NH2、SO2N(CH3)2)、磺酰基(如，SO2CH3、SO2C6H5、SO2CH2C6H5等)、phosphinate(如，P(＝O)(CH3)2)、雜環(huán)基和亞胺酰胺基(如，(C＝NC6H5)C6H5、(C＝NH)C6H5等)，其中n如上所定義；及Rh為H或＝O；進(jìn)一步的前提是，當(dāng)Rh為H及Rb和Rd均為H時(shí)，則Re為H和Rf為
2.權(quán)利要求1的化合物，其中Rc為H和Rf為-(CH2)nR15，而R15選自
3.權(quán)利要求1的化合物，其中a為N和Rh為H。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中Ra、Rc和Rd為鹵代，及Rb為H。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中Ra和Rd為溴及Rc為氯。
6.權(quán)利要求2的化合物，R選自H、-C(O)(CH2)3CH3、-S(O)2CH3、-C(O)-CH2-O-(CH2)2-O-CH3、-C(O)-CH2-OCH3、-C(O)NH(CH2)3CH3、
7.權(quán)利要求1的化合物，其中Rh為O＝。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中Rb和Rd為H，而Ra和Rc為鹵代。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中Ra為溴及Rc為氯。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中Re為H和Rf為-(CH2)n-R15。
11.權(quán)利要求10的化合物，其中Rf為
12.抑制細(xì)胞異常生長的方法，它包括給予有效量的權(quán)利要求1的化合物。
13.抑制細(xì)胞異常生長的方法，它包括給予有效量的權(quán)利要求6的化合物。
14.抑制細(xì)胞異常生長的方法，它包括給予有效量的權(quán)利要求7的化合物。
15.抑制細(xì)胞異常生長的方法，它包括給予有效量的權(quán)利要求11的化合物。
16.權(quán)利要求12的方法，其中所抑制的細(xì)胞為表達(dá)被激活的ras致癌基因的腫瘤細(xì)胞。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所抑制的細(xì)胞為胰腫瘤細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、骨髓性白血病腫瘤細(xì)胞、甲狀腺濾泡腫瘤細(xì)胞、脊髓發(fā)育不良腫瘤細(xì)胞、表皮癌腫瘤細(xì)胞、膀胱癌腫瘤細(xì)胞或結(jié)腸腫瘤細(xì)胞。
18.選自下列的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物
全文摘要
本發(fā)明公開新的式(1.0)化合物。也公開了抑制法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶功能,因而抑制細(xì)胞異常生長的方法。該方法包括給予生物系統(tǒng)式(1.0)化合物。具體地說,該方法抑制哺乳動(dòng)物,例如人的細(xì)胞異常生長。
文檔編號A61P35/00GK1266433SQ98808124
公開日2000年9月13日 申請日期1998年6月15日 優(yōu)先權(quán)日1997年6月17日
發(fā)明者A·B·科珀, R·J·多爾, V·M·吉里杰瓦拉貝漢, A·干古利, J·C·里德, J·J·巴德溫, 黃嘉瑜 申請人:先靈公司