專利名稱：一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可減少在手術(shù)和內(nèi)科治療中的大量出血，并能夠加速內(nèi)科治療和手術(shù)痊愈速度的蛋白質(zhì)粒子，尤指一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。
眾所周知，人體血液充足是健康之本，許多手術(shù)及內(nèi)科治療、例如癌癥手術(shù)，均會引起失血。然而輸血又是一個很復(fù)雜的過程，可能會引起艾滋病和引入肝炎病毒；另外，尤其對于血小板缺乏的病人，失血過多則更是危險甚大。因而，在臨床上急需一種對凝血有幫助的物質(zhì)來解決上述這些問題。
由于此類物質(zhì)其功效如同血小板，可減少開刀和手術(shù)病人及血小板缺乏的病人的失血量，因而在將其注射入人體后，對其性質(zhì)要一定的要求。其一人體微血管的直徑為7微米，那么此類物質(zhì)微粒直徑必須小于7微米；其二此物質(zhì)微粒本身不應(yīng)在血流中凝聚，但能在傷口處凝聚，此物質(zhì)微粒不會引起血細胞在血管中凝聚，但會參與或促進血細胞在傷口處凝聚。
此類物質(zhì)微粒有助于血液凝聚，那么這些微粒必須具有能夠允許它們參與血液凝固的表面分子，例如纖維蛋白原。
現(xiàn)在技術(shù)中，如K.J.Widder等人在《藥理及化學(xué)治療法的發(fā)展》，Vol.16，213-271中的“抗癌試劑生物物理示蹤中的磁活性微球體及其他載體”一文所涉及的，用蛋白質(zhì)水溶液和油通過加熱或聚合得到的乳化液合成蛋白質(zhì)微球體。然而由于蛋白質(zhì)在此過程中極易變質(zhì)而使此微粒其半衰期很短。因而在實際治療中需要其能夠在血管中保存至少一天以上不會變質(zhì)的粒子。
Oppenhein等人在美國專利US4,107,288，“注射組合物中有效的極微粒子及其生產(chǎn)方法”中提出另一種方法，其中通過使用一種相反的增溶劑來調(diào)節(jié)去溶劑試劑的濃度而使蛋白質(zhì)溶液達到一個去溶劑極限。這種方法存在的問題是在反應(yīng)開始時條件極不穩(wěn)定，在反應(yīng)過程中間伴隨著導(dǎo)致球體生成的大量的聚合，并伴隨超過血凝程度的聚合現(xiàn)象出現(xiàn)。血凝球體直徑大于7微米，超過了血管直徑，這就會造成血管阻塞并引起危險。因而在實際治療中需要其不會凝聚且其直徑比7微米小得多的微粒。
本發(fā)明的目的在于提供一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子及其生產(chǎn)方法和用途，此粒子在懸浮液中不凝聚，其直徑比1微米小，在其表面連有纖維蛋白原時可起到良好的凝血效果。
本發(fā)明的此種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子是由人體白蛋白經(jīng)以下方式制成1、首先制造蛋白質(zhì)粒子懸浮液，其中a、在滲透壓適當?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；b、向a中所述的蛋白質(zhì)溶液中加入表面活性劑；c、向b中所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中加入交聯(lián)劑；d、向c中所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液。
即刻，出現(xiàn)一混濁的蛋白質(zhì)球體懸浮液，此懸浮液適于靜脈注射并且不會阻塞血管。
本發(fā)明中，所述的蛋白質(zhì)溶液是人體白蛋白溶液。
本發(fā)明中，所述的表面活性劑是洗滌劑。
本發(fā)明中，所述的表面活性劑可以選自四癸基硫酸鈉(Sodiumtetradecylsulfate)、Tween-80 TritonX-151中的一種本發(fā)明中，所述的交聯(lián)劑分子是包括戊二醛(glutaraldahyde)的共價小分子。
本發(fā)明中，所述緩沖溶液PH值范圍為4-8。
本發(fā)明中，所述的滲透壓范圍為14-680mOsm。
2、對上述的人體白蛋白的球體懸浮液再處理成粉末，包括進行稀釋、過濾、滲析、再過濾、離心分離、電泳分離和色譜柱分離，再通過真空冷凍干燥及冷凍后的粉末重構(gòu)化。其中在此過程中需加入緩沖液或改變緩沖液及加入防腐劑等生物相溶體，這些試劑的種類和用量是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
這樣，就制成本發(fā)明的適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。
本發(fā)明的蛋白質(zhì)粒子其用途在于如果在人體白蛋白球體懸浮液混濁出現(xiàn)后，將表面蛋白質(zhì)加到懸浮液中的球體中，這樣，球體上末反應(yīng)的交聯(lián)部分將通過共價健將表面蛋白原連到人體白蛋白球體表面上；其中，本發(fā)明中的表面蛋白可以是纖維蛋白原。那么此蛋白質(zhì)粒子懸浮液組合物適合于靜脈注射，這種組合物其微粒直徑小于7微米，且此微粒本身在血管中不凝聚，但能在傷口處凝聚，此微粒不會引起血細胞在血管中凝聚，但會參與或促進血細胞在傷口處凝聚。
下面通過實施例對本發(fā)明進一步說明，盡管以下實施例是使用人體白蛋白，但是人體其它蛋白質(zhì)、如免疫蛋白、肌紅蛋白、膠原和明膠同樣也可使用并能夠形成球體。
實施例1沒有纖維蛋白原形成微粒的方法將人體白蛋白粉末放入0.9％的氯化鈉溶液中，并加入濃度在0.05mg/ml-15mg/ml的表面活性劑，如四癸基硫酸鈉、tween-80或TritonX-151，形成濃度在5-20％。(重量體積比)的蛋白質(zhì)溶液。然后向含有不同濃度的表面活性劑的含2ml上述蛋白質(zhì)溶液的系列試管中加入2ml以氯化鈉溶液稀釋過的，其濃度范圍為0.01-3.0％的戊二醛。10分鐘以后，再加入10ml的乙醇(用水稀釋到80％(體積比))，這時溶液立刻出現(xiàn)混濁。再過10分鐘，以5倍體積的氯化鈉溶液稀釋來觀察此懸浮液是否澄清，結(jié)果為否定的。此后以1000倍的的顯微鏡觀察此懸浮液，發(fā)現(xiàn)此懸浮液中粒子的直徑小于1微米。
同時也發(fā)現(xiàn)，用濃度為1-2.5mg/ml的TritonX-151和濃度為100-200mg/ml的白蛋白制面的合劑效果最好。另外也發(fā)現(xiàn)用濃度為1--12mg/ml的四癸基硫酸鈉制成的合劑其微粒直徑的變異系數(shù)最小。
權(quán)利要求
1.一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子，其中此粒子是按以下方式制備的a、在滲透壓適當?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；b、向a中所述的蛋白質(zhì)溶液中，加入表面活性劑；c、向b中所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中，加入交聯(lián)劑；d、向c中所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液。
2.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的蛋白質(zhì)溶液是人體白蛋白溶液。
3.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的表面活性劑是洗滌劑。
4.按照權(quán)利要求3所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的表面活性劑是選自四癸基硫酸鈉、Triton X-151或Tween 80的中的一種。
5.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的交聯(lián)劑分子是包括戊二醛的共價小分子。
6.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的緩沖溶液范圍為PH＝4～8。
7.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的滲透范圍為14-680mOsm。
8.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的醇溶液為乙醇溶液。
9.按照權(quán)利求1-8中任意一項所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，其制備過程還包括將此蛋白質(zhì)粒子懸浮液制成粉末。
10.按照權(quán)利要求9所述的蛋白質(zhì)粒子的生產(chǎn)方法，其中該方法包括以下步驟及分離、干燥、重構(gòu)過程。a、在滲透壓適當?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；b、向a中所述的蛋白質(zhì)溶液中，加入表面活性劑；c、向b中所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中，加入交聯(lián)劑；d、向c中所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液的懸浮液。
11.按照權(quán)利要求9所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，該粒子可用于靜脈注射。
全文摘要
本發(fā)明涉及可減少在手術(shù)和內(nèi)科治療中的大量出血，并能夠加速內(nèi)科治療和手術(shù)痊愈速度的蛋白質(zhì)粒子，尤指一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。本發(fā)明的此種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子是由人體白蛋白經(jīng)以下方式制成首先制造蛋白質(zhì)粒子懸浮液，其中在滲透壓適當?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；向所述的蛋白質(zhì)溶液中加入表面活性劑；然后再向所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中加入交聯(lián)劑；最后再向所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液，就制成了本發(fā)明的適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。
文檔編號A61P7/08GK1150047SQ9511794
公開日1997年5月21日 申請日期1995年11月6日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月6日
發(fā)明者徐家祥 申請人:徐家祥