本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及土木香內(nèi)酯在制備防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

引起肝臟損傷的因素有多種，如：病毒、藥物、化學(xué)毒物及代謝紊亂等，臨床發(fā)病率逐年增加。早期多表現(xiàn)為轉(zhuǎn)氨酶增高，之后隨病情發(fā)展，肝臟損傷進(jìn)一步加重，最終可出現(xiàn)凝血機(jī)制障礙、黃疸、肝性腦病和腹水等癥狀。目前認(rèn)為機(jī)體免疫應(yīng)答和氧化應(yīng)激反應(yīng)是發(fā)病的重要原因，但我們對(duì)于肝臟損傷的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，目前尚無有效的治療措施。由于我國(guó)的肝病患者眾多，因此如何有效的防治肝臟損傷已成為一個(gè)重要課題。

土木香內(nèi)酯（alantolactone）是提取于土木香根莖的活性物質(zhì)，其分子式為c15h20o2，分子量為232.32，結(jié)構(gòu)如式i所示：

式i

研究證明，土木香內(nèi)酯具有抗炎、抗真菌、驅(qū)蟲及抗腫瘤等作用。體外實(shí)驗(yàn)表明，土木香內(nèi)酯能夠促進(jìn)小鼠肝癌細(xì)胞株hepa1c1c7抗氧化酶如血紅素單加氧酶-1，谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶，γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶的表達(dá)。土木香內(nèi)酯還能夠抑制巨噬細(xì)胞raw264.7產(chǎn)生誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（inos），一氧化氮（no），環(huán)氧合酶-2（cox-2），從而發(fā)揮抗炎效果。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，土木香內(nèi)酯能緩解東莨菪堿引起的小鼠認(rèn)知障礙。但目前尚無研究土木香內(nèi)酯與肝臟損傷的關(guān)系，本發(fā)明由此而來。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的旨在提供一種土木香內(nèi)酯的新的藥物用途，特別是治療痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes，p.acnes)/lps引起的小鼠肝臟損傷及d-氨基半乳糖胺（d-galn）引起的小鼠肝臟損傷的藥物用途，為防治肝臟損傷提供了一種新途徑。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種防治肝臟損傷的藥物制劑，由土木香內(nèi)酯和藥學(xué)上可接受的輔料組成。

優(yōu)選的，所述土木香內(nèi)酯的重量百分比為40~90%。

進(jìn)一步的，將所述土木香內(nèi)酯直接或間接加入制備不同劑型時(shí)所需的藥學(xué)上可接受的各種常用輔料，如輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、增溶劑和其它常用的添加劑等。

進(jìn)一步的，本發(fā)明所述藥物制劑為片劑或者膠囊劑的一種。

進(jìn)一步的，本發(fā)明所述藥物制劑為控釋或者緩釋制劑的一種。

進(jìn)一步的，本發(fā)明所述藥物制劑為適用于胃腸道的藥物制劑。

進(jìn)一步的，將含有土木香內(nèi)酯的提取物制備防治肝臟損傷藥物。

有益效果：在p.acnes/lps引起的小鼠肝臟損傷中，低劑量土木香內(nèi)酯即可有效緩解炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和肉芽腫形成，高劑量組效果更加明顯。血清檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alt）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（ast）結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和對(duì)照組相比，p.acnes/lps組小鼠alt和ast水平明顯提高（p＜0.01）；和p.acnes/lps組相比，土木香內(nèi)酯有效降低了血清alt和ast水平（p＜0.01）。實(shí)時(shí)定量pcr結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，p.acnes/lps組小鼠肝臟組織inos表達(dá)明顯增高，土木香內(nèi)酯有效降低了肝臟inos表達(dá)（p＜0.01）。

在d-galn誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷中，和對(duì)照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)紊亂，可見細(xì)胞氣球樣變及壞死。和d-galn組相比，土木香內(nèi)酯有效降低了肝臟組織損傷，肝臟組織完整，肝細(xì)胞變性和壞死明顯好轉(zhuǎn)，其中高劑量土木香內(nèi)酯組未見明顯肝細(xì)胞變性和壞死。血清檢測(cè)alt和ast結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和對(duì)照組相比，d-galn組小鼠alt和ast水平明顯提高（p＜0.01）。和d-galn組相比，土木香內(nèi)酯有效降低了血清alt和ast水平（p＜0.01）。實(shí)時(shí)定量pcr結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織inos表達(dá)明顯增高，土木香內(nèi)酯有效降低了肝臟inos表達(dá)（p＜0.01）。

通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，土木香內(nèi)酯對(duì)p.acnes/lps和d-galn誘導(dǎo)的肝臟急性損傷有一定的防治作用，可使肝臟組織損傷減輕，有效降低血清alt和ast水平，可作為肝臟損傷藥物干預(yù)的一種新手段。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中的方案，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：本發(fā)明分別通過應(yīng)用p.acnes/lps誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷模型和d-galn誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷模型，觀察土木香內(nèi)酯對(duì)肝臟損傷的治療作用，分析了血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的水平，并評(píng)估了inos的表達(dá)變化，從而闡明了土木香內(nèi)酯干預(yù)肝臟損傷的作用機(jī)制—即土木香內(nèi)酯通過抑制肝臟inos的表達(dá)來緩解肝臟損傷。

附圖說明

圖1p.acnes/lps誘導(dǎo)的小鼠模型實(shí)驗(yàn)中各組小鼠肝臟組織進(jìn)行he染色分析，a為對(duì)照組，b為p.acnes/lps組，c為土木香內(nèi)酯低劑量組，d為土木香內(nèi)酯高劑量組。

圖2p.acnes/lps誘導(dǎo)的小鼠模型實(shí)驗(yàn)中各組小鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（a）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（b）檢測(cè)值。**p＜0.01和對(duì)照組相比，^##p＜0.01和p.acnes/lps組相比。

圖3p.acnes/lps誘導(dǎo)的小鼠模型實(shí)驗(yàn)中各組小鼠肝臟組織inos基因表達(dá)分析。**p＜0.01和對(duì)照組相比，^##p＜0.01和p.acnes/lps組相比。

圖4d-galn誘導(dǎo)的小鼠模型實(shí)驗(yàn)中各組小鼠肝臟組織進(jìn)行he染色分析，a為對(duì)照組，b為d-galn組，c為土木香內(nèi)酯低劑量組，d為土木香內(nèi)酯高劑量組。

圖5d-galn誘導(dǎo)的小鼠模型實(shí)驗(yàn)中各組小鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（a）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（b）檢測(cè)值。**p＜0.01和對(duì)照組相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01和d-galn組相比。

圖6d-galn誘導(dǎo)的小鼠模型實(shí)驗(yàn)中各組小鼠肝臟組織inos基因表達(dá)分析。**p＜0.01和對(duì)照組相比，^##p＜0.01和d-galn組相比。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明公開了一種土木香內(nèi)酯在制備防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參考本文內(nèi)容實(shí)現(xiàn)其應(yīng)用，特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。本發(fā)明的方法和應(yīng)用已經(jīng)通過較佳的實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

本發(fā)明提供的一種土木香內(nèi)酯在制備防治肝臟損傷藥物中的應(yīng)用中所用到的試劑及原料均可由市場(chǎng)購(gòu)得。

為了使本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：

實(shí)驗(yàn)例1：土木香內(nèi)酯對(duì)p.acnes/lps誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷的防護(hù)作用

雄性c57bl/6小鼠（18-20g）分4組：

（1）對(duì)照組：5只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續(xù)9天，其中第3天小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl，第9天小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl。

（2）p.acnes/lps組：9只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續(xù)9天，其中第3天小鼠尾靜脈注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾靜脈注射lps1μg/100μl。

（3）土木香內(nèi)酯低劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內(nèi)酯（0.15ml，0.75mg/kg），連續(xù)9天。其中，第3天小鼠尾靜脈注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾靜脈注射lps1μg/100μl。

（4）土木香內(nèi)酯高劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內(nèi)酯（0.15ml，1.5mg/kg），連續(xù)9天。其中第3天小鼠尾靜脈注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾靜脈注射lps1μg/100μl。

lps注射2小時(shí)后處死小鼠，采集血清檢測(cè)ast和alt活力。取肝臟標(biāo)本，一部分固定后石蠟包埋進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)，一部分進(jìn)行實(shí)時(shí)定量pcr檢測(cè)，測(cè)定inos的表達(dá)水平。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

（1）從圖1中的he染色圖得知，光鏡下，與對(duì)照組小鼠肝臟結(jié)構(gòu)相比，p.acnes/lps組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及肉芽組織形成。土木香內(nèi)酯治療組僅可見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞排列整齊。

（2）ast及alt活力

從圖2中得知，和對(duì)照組小鼠相比，p.acnes/lps組小鼠血清ast及alt表達(dá)明顯升高，土木香內(nèi)酯治療組明顯降低了血清ast及alt表達(dá)水平，土木香內(nèi)酯能有效抑制p.acnes/lps引起的小鼠肝臟損傷及ast及alt活力。

（3）inos表達(dá)

從圖3得知，和對(duì)照組小鼠相比，p.acnes/lps組小鼠肝臟inos表達(dá)明顯升高，土木香內(nèi)酯治療組明顯降低了inos表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)例2：土木香內(nèi)酯對(duì)d-galn誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的防護(hù)作用

雄性c57bl/6小鼠（18-20g）分4組：

（1）對(duì)照組：5只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續(xù)7天，第7天腹腔額外注射生理鹽水0.15ml。

（2）d-galn組：9只，小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.15ml，連續(xù)7天，第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

（3）土木香內(nèi)酯低劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內(nèi)酯（0.15ml，0.75mg/kg），連續(xù)7天。第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

（4）土木香內(nèi)酯高劑量組：9只，小鼠每天腹腔注射土木香內(nèi)酯（0.15ml，1.5mg/kg），連續(xù)7天。第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

d-galn注射16小時(shí)后處死小鼠，采集血清檢測(cè)ast和alt活力，取肝臟標(biāo)本，一部分固定后石蠟包埋進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)，一部分進(jìn)行實(shí)時(shí)定量pcr檢測(cè)，測(cè)定inos的表達(dá)水平。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

（1）從圖4得知，和對(duì)照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)紊亂，可見細(xì)胞氣球樣變及壞死。和d-galn組相比，土木香內(nèi)酯有效降低了肝臟組織損傷，肝臟組織完整，肝細(xì)胞變性和壞死明顯好轉(zhuǎn)，其中高劑量土木香內(nèi)酯組未見明顯肝細(xì)胞變性和壞死。

（2）ast及alt活力

從圖5得知，和對(duì)照組小鼠相比，d-galn組小鼠血清ast及alt表達(dá)明顯升高，土木香內(nèi)酯治療組明顯降低了血清ast及alt表達(dá)。

（3）inos表達(dá)

從圖6得知，和對(duì)照組相比，d-galn組小鼠肝臟組織inos表達(dá)明顯增高，土木香內(nèi)酯有效降低了肝臟inos表達(dá)（p＜0.01）。

結(jié)論:土木香內(nèi)酯能有效抑制p.acnes/lps和d-galn引起的小鼠肝臟損傷，可以用來制備抗肝臟損傷藥物。