本發(fā)明涉及柔性脂質體領域，特別涉及一種歐前胡素柔性脂質體；本發(fā)明還涉及上述脂質體的制備方法以及該脂質體的應用。
背景技術：
：柔性脂質體是由普通脂質體經處方改進而來,即在脂質體的磷脂成分中不加或者少加膽固醇,同時加入了表面活性劑如膽酸鈉、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(吐溫)等作為膜軟化劑,使脂質體的類脂膜具有高度的變形能力,通過皮膚層內外滲透壓差的驅動，柔性脂質體能高效穿透比其自身小數倍的角質細胞間的孔道，再經過多次變形，到達皮膚深處后其組成不變。柔性脂質體從皮膚表層開始滲透逐漸到達真皮，隨后是更深的組織，當周邊地區(qū)飽和后，再經由淋巴系統進入血液。柔性脂質體能夠顯著增加藥物的經皮滲透，增強藥物的作用療效，降低刺激和減少不良反應，提高生物利用度，因此柔性脂質體越來越廣泛地成為各種大分子，脂溶性藥物及水溶性藥物的載體。常用的具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用的傘形科植物如白芷、前胡、羌活等均含有香豆素類(TCP)物質，如歐前胡素(Imperatorin)、異歐前胡素(Isoimperatorin)、羌活醇(Notopterol)、補骨脂素(Psoralen)等，其中的歐前胡素是主要的藥理效應成分之一。據研究表明，歐前胡素的主要藥理作用有：(1)抗炎作用：通過體內外試驗研究對卵白蛋白誘導變應性鼻炎小鼠模型的作用發(fā)現，歐前胡素能調節(jié)caspase-1的活性從而產生抗炎作用；選用角叉菜膠致大鼠急性胸膜炎模型進行抗炎實驗，發(fā)現歐前胡素能抑制花生四烯酸代謝產物的產生、抑制促炎細胞因子釋放，從而減少小鼠炎性滲出液的體積，降低白細胞計數，降低滲出液中PEG2、IL-1β、TNF-α含量，降低肺組織中MDA的含量；(2)鎮(zhèn)痛作用：對小鼠采用熱板法、醋酸扭體法等研究白芷中歐前胡素主要線型呋喃香豆素的成分的鎮(zhèn)痛活性，發(fā)現歐前胡素能顯著減少醋酸所致的小鼠的扭體次數，還能明顯延遲小鼠扭體的出現；而且歐前胡素具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，能明顯抑制熱板法所致的小鼠疼痛，在具有鎮(zhèn)痛活性的成分中歐前胡素的鎮(zhèn)痛作用最強；(3)抗菌、抗病毒作用：對大腸桿菌、弗氏痢疾桿菌、變形桿菌、傷寒桿菌具有不同程度的抑制作用，對革蘭陽性菌和革蘭陰性菌均有較強的抑制活性(最小抑菌濃度32～128m/ml)，還能夠抑制水泡性口腔炎病毒假型或糖蛋白gpl60包膜的人類免疫缺陷病毒I型(HIV-1)對T細胞和Hela細胞的感染；(4)解痙作用：通過家兔離體回腸法觀察歐前胡素的解痙活性，發(fā)現歐前胡素能明顯緩解BaCl2所致兔腸平滑肌痙攣，歐前胡素能緩解不同物質導致的平滑肌強直性收縮及痙攣，解痙作用與罌粟堿的作用相當，毒性較低使用安全；(5)其它作用：具有舒張血管活性的作用，歐前胡素通過作用于NO通路，能抑制血管壁增厚，并具有抑制心肌肥大、肥厚的作用，從而對高血壓、動脈粥樣硬化和肥厚型心肌病等有治療作用。因此，歐前胡素可以開發(fā)成為一種抗炎鎮(zhèn)痛的新產品。歐前胡素難溶于水，皮膚滲透性差，不易透過皮膚產生吸收，制備成傳統脂質體其透皮效率低，傾向于停留在皮膚角質層表層，無法到達到皮膚深處，因而制備成柔性脂質體有利于提高經皮滲透吸收。目前國內外在歐前胡素脂質體劑型研究暫時處于空白，將其制備成柔性脂質體的方法具有極大的潛在價值。技術實現要素：本發(fā)明要解決的技術問題是針對現有技術的上述不足，提供一種包封率高，粒徑小，體外累計滲透量高，穩(wěn)定性好的歐前胡素柔性脂質體。本發(fā)明要解決的另一個技術問題是提供一種上述脂質體的制備方法，以保證脂質體的分布均勻性。本發(fā)明還提供一種上述脂質體在制備皮膚外用抗炎鎮(zhèn)痛藥品中的應用。為解決上述技術問題，本發(fā)明的前一技術方案是這樣的：一種歐前胡素柔性脂質體，所述的柔性脂質體包括以下組分：歐前胡素、大豆卵磷脂、膽固醇、吐溫80及泊洛沙姆P188。需要說明的是，歐前胡素與大豆卵磷脂、膽固醇的質量比例為1:25:1.5～1:35:1.5。需要說明的是，大豆卵磷脂與吐溫80、泊洛沙姆P188質量比例為5.6:0.5:1.8～5.6:3:1.9。需要說明的是，所述的脂質體粒徑為100～300nm。本發(fā)明的后一技術方案這這樣的：一種歐前胡素柔性脂質體的制備方法，包括以下步驟：步驟1：按比例稱取歐前胡素、大豆卵磷脂、膽固醇，加入吐溫80乙醇溶液加熱振蕩至溶解；步驟2：在水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，除去有機溶劑，形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠及泊洛沙姆P188水溶液，旋轉水化至洗脫，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲即分散完畢，放置冰箱4℃保存。需要說明的是，步驟1所述的吐溫80乙醇溶液的濃度為5～20mg/ml。需要說明的是，步驟2所述的水浴溫度為40～60℃。需要說明的是，步驟3所述的旋轉水化時間為0.5～2h。需要說明的是，步驟4所述的探頭超聲時間為10～20min。本發(fā)明還公開了上述的歐前胡素柔性脂質體在制備皮膚外用抗炎鎮(zhèn)痛藥品中的應用。本發(fā)明與傳統方法相比，具有以下優(yōu)勢：1、本發(fā)明所制備的歐前胡素柔性脂質體把歐前胡素包裹在雙磷脂層中，保證了包裹的活性成分具有良好的穩(wěn)定性，同時修飾了脂質體磷脂層的流動性，具備柔性性質，產生彈性和形變更好地滲透入皮膚深層，極大增加透皮吸收效果，使用泊洛沙姆P188作為水化溶液可使脂質體表面穩(wěn)定，使得脂質體間相互排斥避免絮集，增加了穩(wěn)定性，提高歐前胡素的經皮滲透吸收，延長藥物的皮膚滲透作用時間，提高在皮膚內的滯留時間，生物利用度得到有效增長；2、本發(fā)明所制備的歐前胡素柔性脂質體的包封率達60～80％，粒徑范圍處于50～200nm中，表面電位為-(30～50)mv，體外累積滲透量達40～60％，穩(wěn)定性好；3、本發(fā)明所述的制備方法簡單方便，易于工業(yè)化，同時反應條件溫和，整個工藝過程機械化程度高，使產品質量和工藝具由良好的重現性和穩(wěn)定性。附圖說明圖1為實施例4所制得的歐前胡素柔性脂質體的粒徑分布圖；圖2為實施例4所制得的歐前胡素柔性脂質體的Zeta電位圖；圖3為實施例1-4所制得的歐前胡素脂質體與飽和溶液的經皮滲透吸收曲線圖。具體實施方式下面結合具體實施方式，對本發(fā)明的權利要求做進一步的詳細說明，但不構成對本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權利要求范圍內所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明的權利要求保護范圍內。實施例1：步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入無水乙醇20ml在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠及30ml去離子水，旋轉30min將薄膜從瓶壁水化至從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實施例所得的歐前胡素普通脂質體粒徑大小為(118.20±3.00)nm，Zeta電位大小為(-40.87±1.14)mv，透析袋方法測得包封率為(70.70±0.28)％，呈現白色混懸液，靜置底部有絮狀物，搖動可變均勻乳白色。實施例2:步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液16ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠及1％泊洛沙姆P188溶液30ml，旋轉30min將薄膜從瓶壁水化至從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4:在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實施例所得的歐前胡素柔性脂質體粒徑大小為(116.47±2.39)nm，Zeta電位大小為(-42.87±1.22)mv，透析袋方法測得包封率為(71.26±2.00)％，呈現白色混懸液，搖動可變均勻乳白色。實施例3：步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液16ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入1％十二烷基硫酸鈉溶液30ml，繼續(xù)旋轉水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實施例所得的歐前胡素陰離子柔性脂質體粒徑大小為(77.47±0.80)nm，Zeta電位大小為(-63.99±1.45)mv，透析袋方法測得包封率為(69.60±1.05)％，呈現澄清透明溶液液，靜置無變化。實施例4：步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液16ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入1％十六烷基三甲基溴化銨溶液30ml，繼續(xù)旋轉水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。如圖1所示，所得的歐前胡素柔性陽離子脂質體粒徑大小為(102.40±1.15)nm，如圖2所示，Zeta電位大小為(62.68±1.68)mv。透析袋方法測得包封率為(75.22±0.89)％，呈現澄清透明溶液液，靜置無變化。實施例5步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂750mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液13.2ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.6％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實施例所得的歐前胡素柔性脂質體粒徑大小為(124.26±0.83)nm，Zeta電位大小為(-41.34±1.62)mv，透析袋方法測得包封率為(42.51±1.56)％，呈現澄清透明溶液，靜置過夜后出現混懸狀態(tài)，搖晃可澄清。實施例6步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂1050mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液18.5ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.8％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實施例所得的歐前胡素柔性脂質體粒徑大小為(148.71±1.42)nm，Zeta電位大小為(-43.73±1.12)mv，透析袋方法測得包封率為(67.34±2.01)％，呈現澄清透明溶液液，靜置無變化。實施例7步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液8ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.8％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實施例所得的歐前胡素柔性脂質體粒徑大小為(137.71±0.83)nm，Zeta電位大小為(-36.81±0.73)mv，透析袋方法測得包封率為(63.81±1.21)％，呈現澄清透明溶液液，靜置無變化。實施例8步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液24ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.8％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實施例所得的歐前胡素柔性脂質體粒徑大小為(104.28±1.42)nm，Zeta電位大小為(-45.62±0.33)mv，透析袋方法測得包封率為(68.32±0.62)％，呈現澄清透明溶液液，靜置無變化。實施例9：對脂質體穩(wěn)定性進行測定：取實施例2所制得的歐前胡素柔性脂質體于冰箱4℃條件下保存，分別于0天、15天及30天測定其包封率，粒徑、Zeta電位,并觀察外觀，以確定其穩(wěn)定性，其結果如表1所示：表1歐前胡素柔性脂質體穩(wěn)定性結果從表1可以看出，歐前胡素柔性脂質體在4℃條件下穩(wěn)定性良好，0天、15天及30天各項結果沒有顯著性差異(p>0.05)，可預測歐前胡素柔性脂質體的穩(wěn)定性良好。實施例10對柔性脂質體的體外透皮吸收性能進行測試：取健康體重合格的SD大鼠，頸椎脫臼處死，用8％的硫化鈉溶液把腹部皮膚進行脫毛處理，然后將腹部皮膚剝離，剔除該皮膚皮下脂肪組織及筋膜，用生理鹽水沖洗干凈保存使用；使用改良的Franz擴散池進行透皮吸收實驗，將皮膚夾于雙室擴散池中間，角質層面向供給池，真皮層面面向接收池；供給池分別注入1ml的歐前胡素飽和水溶液、歐前胡素普通脂質體、歐前胡素柔性脂質體、歐前胡素陰離子柔性脂質體及歐前胡素陽離子柔性脂質體，接收池分別注入3％吐溫水溶液17ml，在0.5、1、2、4、6、8、12、24h時間取2ml接受液并補充相應的釋放介質，采用HPLC方法測定歐前胡素含量，計算累計透皮滲透量，每個樣品平行實驗三次取SD值。圖3為實施例1-4所制得的歐前胡素脂質體與飽和溶液的經皮滲透吸收曲線圖，可以看出所有脂質體均有很好的透皮滲透能力，歐前胡素普通脂質體、歐前胡素柔性脂質體、歐前胡素陰離子柔性脂質體及歐前胡素陽離子柔性脂質體的透皮累積滲透量分別是飽和水溶液的18.07倍、21.88倍、17.40倍、14.66倍。表2為實施例1-實施例4所制得的不同歐前胡素樣品在大鼠鼠皮的累積滲透量，可以看出柔性脂質體透皮滲透量最高，原因為柔性脂質體增強了脂質體對皮膚表層的滲透性，脂質體本身柔性特質的發(fā)揮，使得脂質體的透皮能力大大增強，將載入藥物帶入皮膚深層次結構層，比普通脂質體效果更好，相比陰離子柔性脂質體和陽離子柔性脂質體，可以看出脂質體表面帶高濃度離子對透皮滲透有阻礙作用，透皮效果甚至低于普通脂質體，沒有得到有效的提高，綜合對比發(fā)現，表明帶柔性脂質體具有相當良好的皮膚透過性能，有利于活性成分的作用的充分發(fā)揮。表2不同歐前胡素樣品在大鼠鼠皮的累積滲透量樣品24h平均累積滲透量(％)SD飽和水溶液2.530.08普通脂質體(實施例1)45.722.21柔性脂質體(實施例2)55.382.57陰離子柔性脂質體(實施例3)44.031.25陽離子柔性脂質體(實施例4)37.091.52以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。當前第1頁1 2 3