一種利用新型表面活性劑制備的原花青素柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種天然抗氧化劑原花青素柔性納米脂質(zhì)體及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 原花青素是由（+)_兒茶素、（-)-兒茶素及（-)-表兒茶素沒食子酸酯通過C4-C8 鍵或(;-(:6鍵連接而成的不同聚合度的多酚物質(zhì)，廣泛存在于葡萄籽、銀杏、柏樹和松樹皮 等植物中。原花青素（OPC)具有強(qiáng)抗氧化作用，人體吸收度高，可以清除體內(nèi)的自由基和活 性氧，預(yù)防由于人體血液中低密度脂蛋白（LDL)的氧化為主要原因而引起的動(dòng)脈硬化。另 外還具有一些令人注目的生理功效，如降壓效應(yīng)與對(duì)心肌的保護(hù)作用、抗輻射作用、抗微生 物、促進(jìn)細(xì)胞增殖活性、抗突變和抗癌等。
[0003] 柔性納米脂質(zhì)體又名傳遞體、變形脂質(zhì)體，是通過自身膜的高度變形性，以滲透壓 差為驅(qū)動(dòng)力，能高效地穿透比它本身小數(shù)倍孔道的類脂聚集體。其主要成分為磷脂和表面 活性劑（如膽酸鈉、去氧膽酸鈉等）。粒徑多為數(shù)十至數(shù)百納米，外觀為膠體溶液。具有高 效滲透性、高度柔韌性和親水性。它與普通脂質(zhì)體最大的區(qū)別就是加入了表面活性劑，使其 具有高度變形性。該類脂質(zhì)體受角質(zhì)層水合所產(chǎn)生的滲透壓的影響能發(fā)生變形并被"擠入" 角質(zhì)層，因而顯著增加藥物的經(jīng)皮滲透更多的藥物保留在皮膚中，減少藥物進(jìn)入血循環(huán)，在 表皮和真皮內(nèi)形成藥物貯庫(kù)，形成一個(gè)緩釋模型，使藥物持久地對(duì)病變局部起治療作用。同 時(shí)柔性納米脂質(zhì)體能改變?cè)退幬锏睦砘再|(zhì)，增強(qiáng)藥物的藥理作用及療效，減少胃腸道 刺激性，降低藥物不良反應(yīng)，提高生物利用度。因此柔性納米脂質(zhì)體越來越多地用作各種大 分子、水溶性藥物或脂溶性藥物的載體。
[0004] 原花青素水溶性較好，但是穩(wěn)定性較差，且天然原花青素分子量較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜， 不利于人體組織吸收。因此，限制了原花青素在各個(gè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。已有研宄制備了原 花青素柔性納米脂質(zhì)體，但是其忽略了不同的表面活性劑對(duì)柔性納米脂質(zhì)體制備的影響， 其制備的柔性納米脂質(zhì)體包封率低，粒徑大，體外緩釋作用差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是探索一種新型表面活性劑以制備包封率高、粒徑小、體外緩釋作 用好、穩(wěn)定性好、透皮吸收效果好的原花青素柔性納米脂質(zhì)體。
[0006]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007]本發(fā)明的原花青素柔性納米脂質(zhì)體包括原花青素、磷脂、膽固醇、表面活性劑，其 中，所述的表面活性劑為Tween80、Span20或去氧膽酸鈉。
[0008] 磷脂、膽固醇、表面活性劑的質(zhì)量比為8:1:1-8:2 :2;優(yōu)選8:1.4:1.4-8:2:2。 [0009]磷脂、原花青素的質(zhì)量比為8 :0. 5- 8 :1 ;優(yōu)選8 :0. 7- 8 :1。
[0010] 所述磷脂優(yōu)選大豆卵磷脂。
[0011] 本發(fā)明的原花青素柔性納米脂質(zhì)體通過如下方法制備：
[0012] 按比例稱取磷脂、膽固醇和表面活性劑，加入氯仿、甲醇或者無水乙醇氯仿混合 液，使磷脂的濃度達(dá)到質(zhì)量體積比1-2%;振蕩充分混合后，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，40- 50°C恒 溫水浴中，減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑使類脂溶液形成一層均勻薄膜；向薄膜中加入一定量含 原花青素的〇. 9%氯化鈉水溶液，其中，原花青素濃度為l-2mg/mL，輕搖，將脂膜洗脫并旋 轉(zhuǎn)水合l-2h，得到原花青素脂質(zhì)體混懸液；再將混懸液置于冰水中探頭超聲一段時(shí)間5- 20min，每5s間歇一次，優(yōu)選10 - 15min，超聲功率50W，即得；于冰箱4°C避光保存。對(duì)原花 青素柔性納米脂質(zhì)體進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括包封率、粒徑、體外緩釋作用、穩(wěn)定性及透皮滲透量。
[0013] 試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0014] 1、制備的原花青素柔性納米脂質(zhì)體把原花青素包裹在脂質(zhì)體內(nèi)水相中，降低了其 對(duì)外界環(huán)境的敏感度，增強(qiáng)其穩(wěn)定性。
[0015] 2、制備的原花青素柔性納米脂質(zhì)體包封率高、粒徑小、體外緩釋作用好、穩(wěn)定性 高、透皮吸收好。
[0016] 3、工藝簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化。
[0017] 4、反應(yīng)條件溫和，安全環(huán)保。
【附圖說明】
[0018] 圖1為實(shí)施例5條件下原花青素柔性納米脂質(zhì)體、原花青素普通脂質(zhì)體和原花青 素溶液的體外釋藥圖。
[0019] 圖2為實(shí)施例5條件下原花青素柔性納米脂質(zhì)體、原花青素普通脂質(zhì)體和原花青 素溶液在不同溫度下的保留率圖
[0020] a為原花青素柔性納米脂質(zhì)體、原花青素普通脂質(zhì)體和原花青素溶液在4°C下 的保留率圖；b為原花青素柔性納米脂質(zhì)體、原花青素普通脂質(zhì)體和原花青素溶液在室溫 (25°C)下的保留率圖；c為原花青素柔性納米脂質(zhì)體、原花青素普通脂質(zhì)體和原花青素溶 液在室外溫度（30°C)的保留率圖。
[0021] 圖3為實(shí)施例5條件下原花青素柔性納米脂質(zhì)體、原花青素普通脂質(zhì)體和原花青 素溶液的皮膚滲透量圖。 具體實(shí)施方案：
[0022] 本發(fā)明可以按照下列實(shí)施例進(jìn)行具體說明其制備過程和效果。
[0023] 實(shí)施例1:
[0024] 1、分別稱取300mg大豆卵磷脂、37. 5mg膽固醇和37. 5mgTween80,加入15mL無水 乙醇氯仿混合液（I:2);
[0025] 2、振蕩充分混合后，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，40- 50°C恒溫水浴中，減壓蒸發(fā)除去有機(jī) 溶劑使類脂溶液形成一層均勻薄膜；
[0026] 3、稱取37. 5mg原花青素并溶解于37. 5mL含0. 9 %氯化鈉的水溶液中，將原花青素 溶液加入薄膜中，輕搖，將脂膜洗脫并旋轉(zhuǎn)水合lh，得到原花青素脂質(zhì)體混懸液；
[0027] 4、再將混懸液置于冰水中探頭超聲IOmin即得，超聲5s，間歇5s，超聲功率50W; 于冰箱4°C避光保存；
[0028] 5、同法制備原花青素溶液和不含Tween80的普通脂質(zhì)體；
[0029] 6、所得的原花青素柔性納米脂質(zhì)體包封率為78. 9%，粒徑為139. 4nm;原花青素 普通脂質(zhì)體包封率為61. 1 %，粒徑為279. 4nm。
[0030] 實(shí)施例2 :
[0031] 1、分別稱取300mg大豆卵磷脂、52. 5mg膽固醇和52. 5mgSpan20,加入15mL無水 乙醇氯仿混合液（I:2);
[0032] 2、振蕩充分混合后，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，40- 50°C恒溫水浴中，減壓蒸發(fā)除去有機(jī) 溶劑使類脂溶液形成一層均勻薄膜；
[0033] 3、稱取26. 25mg原花青素并溶解于26. 25mL含0. 9 %氯化鈉的水溶液中，將原花青 素溶液加入薄膜中，輕搖，將脂膜洗脫并旋轉(zhuǎn)水合lh，得到原花青素脂質(zhì)體混懸液；
[0034] 4、再將混懸液置于冰水中探頭超聲20min即得，超聲3s，間歇3s，超聲功率30W; 于冰箱4°C避光保存；
[0035] 5、同法制備原花青素溶液和不含Span20的普通脂質(zhì)體；
[0036] 6、所得的原花青素柔性納米脂質(zhì)包封率為67. 2%，粒徑為238. 4nm原花青素普通 脂質(zhì)體包封率為60. 2%，粒徑為218. 6nm。
[0037] 實(shí)施例3 :
[0038] 1、分別稱取300mg大豆卵磷脂、37. 5mg膽固醇和37. 5mgTween80,加入15mL無水 乙醇氯仿混合液（I:2);
[0039] 2、振蕩充分混合后，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，40- 50°C恒溫水浴中，減壓蒸發(fā)除去有機(jī) 溶劑使類脂溶液形成一層均勻薄膜；
[0040] 3、稱取18. 75mg原花青素并溶解于18. 75mL含0. 9 %氯化鈉的水溶液中，將原花青 素溶液加入薄膜中，輕搖，將脂膜洗脫并旋轉(zhuǎn)水合lh，得到原花青素脂質(zhì)體混懸液；
[0041] 4、再將混懸液置于冰水中探頭超聲5min即得，超聲7s，間歇7s，超聲功率70W;于 冰箱4 °C避光保存；
[0042] 5、同法制備原花青素溶液和不含Tween80的普通脂質(zhì)體；
[0043]6、所得的原花青素柔性納米脂