專利名稱：降低彎曲菌屬感染的疫苗和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
用于產(chǎn)生對(duì)抗多種制劑的黏膜免疫的安全和成本有效的疫苗的庫(kù)是很有限的。引起世界范圍的人胃腸道疾病的主要細(xì)菌是彎曲菌屬(Campylobacter)。對(duì)于可預(yù)知的將來，細(xì)菌性胃腸炎持續(xù)構(gòu)成美國(guó)和國(guó)外一般公眾的重要威脅。發(fā)生空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)感染比更加眾所周知的來自沙門氏菌屬(Salmonella)物種或大腸桿菌(Escherichia coli)0157 :H7的感染更頻繁。全國(guó)范圍的彎曲菌屬胃腸炎疾病的實(shí)際負(fù)擔(dān)是每年500-850例感染/100，000人。
背景技術(shù)：
彎曲菌屬不僅僅是細(xì)菌性胃腸炎的主要原因，空腸彎曲菌(C. jejuni)還與神經(jīng)病理性疾病格林-巴利綜合征(GBS)相關(guān)。該威脅生命的疾病可能是對(duì)導(dǎo)致對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的自體免疫反應(yīng)的特定空腸彎曲菌株上的神經(jīng)節(jié)苷脂樣結(jié)構(gòu)的免疫反應(yīng)。盡管GBS是最主要的慢性后遺癥，彎曲菌屬感染還與反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎相關(guān)，其可進(jìn)展為萊特爾綜合征。使用基于滅活的全細(xì)胞或蛋白的疫苗對(duì)彎曲菌屬的接種具有有限的成功。另外，存在關(guān)于來自滅活的全細(xì)胞接種的發(fā)生格林-巴利綜合征或其它后遺癥的關(guān)注。成功的疫苗將需要是成本有效的、安全的、口服有效的，并且在很短的時(shí)間內(nèi)能大量生產(chǎn)的。目前沒有這樣的疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
此處提供了用于增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬感染抗性增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬的免疫反應(yīng)的載體和方法。在一方面中，提供了包含第一多核苷酸序列的載體，多核苷酸序列編碼與載體非固有相關(guān)的抗原多肽?？乖嚯目梢允荢EQ ID NO: 7 (C j aD; C j 0113; GVSI TVEGNCDEffGTDEYNQA),SEQ ID NO: 8 (c jaA; c j0982; KDIVLDAEIGGVAKGKDGKEK)或 SEQ ID NO: 9 (ACE 393;cj0420;KVALGVAVPKDSNITSVEDLKDKTLLLNKGTTADA)，或其片段。載體還可以包括與該載體非固有相關(guān)的免疫刺激多肽。疫苗載體能夠從被接種受試者激發(fā)免疫反應(yīng)，其包括對(duì)彎曲菌屬的IgA抗體反應(yīng)。該反應(yīng)對(duì)彎曲菌屬的攻擊可以是保護(hù)性的。在另一方面中，提供了包含第一多核苷酸序列和第二多核苷酸序列的載體，所述第一多核苷酸序列編碼與載體非固有相關(guān)的抗原多肽，所述第二多核苷酸序列編碼免疫刺激多肽?？乖嚯目梢允?SEQ ID NO: I (cjaD)、SEQ ID NO:2 (cjaA)或 SEQ ID NO:3(ACE393)的片段。疫苗載體能夠從被接種受試者激發(fā)免疫反應(yīng)，其包括對(duì)彎曲菌屬的IgA抗體反應(yīng)。該反應(yīng)對(duì)彎曲菌屬的攻擊可以是保護(hù)性的。在另一個(gè)方面中，公開了在藥學(xué)上可接受的載體中含有此處提供的載體的藥物組合物。在另一方面中，此處提供了增強(qiáng)受試者中針對(duì)彎曲菌屬的免疫反應(yīng)的方法。該方法包括向受試者施用有效量的此處提供的載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，增強(qiáng)的免疫反應(yīng)包括IgA抗體反應(yīng),該反應(yīng)可以是保護(hù)性的。
在進(jìn)一步的另一方面中，此處提供了增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬感染抗性的方法。該方法包括向受試者施用有效量的此處公開的載體，從而使受試者可抵抗隨后暴露于彎曲菌屬的感染。在一個(gè)實(shí)施方案中，增強(qiáng)的免疫反應(yīng)包括IgA抗體反應(yīng)，且該反應(yīng)可以是保護(hù)性的。


圖I是表示定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的圖，其表明如通過傳統(tǒng)培養(yǎng)確定的X軸上的可培養(yǎng)的空腸彎曲菌的數(shù)目和菌落形成單位(CFU)的確定。在定量PCR中，熒光與閾值交匯(cross)處的循環(huán)數(shù),在Y軸上表示。圖2是顯示用空腸彎曲菌(5xl07cfu/ml)攻擊后11天，用鹽水、或表達(dá)彎曲菌屬肽cj0420 (SEQ ID N0:9)、cj0113 (SEQ ID N0:7)或 cj0982 (SEQ ID N0:8) (108cfu/雞)的沙門氏菌屬載體接種的雞中cfu/g回腸內(nèi)容物的對(duì)數(shù)的圖。在用傳統(tǒng)方法從回腸黏膜內(nèi)層提取的總DNA上進(jìn)行定量PCR。結(jié)果表示為平均值+/-SEM (n=10)。具有不同小寫字母的組差異顯著(p〈0. 05)。圖3是顯示用空腸彎曲菌(lxl07cfu/ml)攻擊后11天，用鹽水、沒有抗原多肽插入的沙門氏菌屬載體、或有cj0113插入(SEQ ID NO: 7) (IO8Cfu/雞)的沙門氏菌屬載體接種的雞中cfu/g回腸內(nèi)容物的對(duì)數(shù)的圖。在用傳統(tǒng)方法從回腸黏膜表層提取的總DNA上進(jìn)行定量PCR。結(jié)果表示為平均值+/-SEM (n=10)，*表示顯著差異(p〈0. 05)。圖4是表示在施用指定的載體(IO8Cfu/雞)后21天和32天，由ELISA測(cè)量的抗彎曲菌屬IgG (S/P比)的相對(duì)水平的圖。具有不同小寫字母的組差異顯著(P〈0. 05)。圖5是表示在用指定的載體(IO8Cfu/雞)接種后32天，在回腸黏膜中的抗彎曲菌屬slgA (S/P比)的相對(duì)水平的圖。具有不同小寫字母的組差異顯著(P〈0. 05)。圖6是表示在用鹽水、沒有插入的沙門氏菌屬載體、或有抗原多肽、cj0113 (SEQID NO:7) (IO8Cfu/雞)的載體接種后21和31天血清IgG水平(S/P比)，和接種后32天在回腸黏膜中slgA水平(S/P比)的圖。*表示與對(duì)照相比差異顯著(P〈0. 05)。圖7是表示以IO8Cfu/雞通過口腔灌胃接種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)骨架株(BSBB)或cj0113 (SEQ ID NO: 7)枯草芽孢桿菌載體候選疫苗后10天，空腸彎曲菌特異的血清IgG抗體水平的圖。數(shù)據(jù)表示為平均值土SEM，*表示與兩對(duì)照相比，有顯著差異(Ρ〈0· 05)。
圖8是表示以IO8Cfu/雞通過口腔灌胃接種枯草芽孢桿菌骨架株(BSBB)或CjOl 13(SEQ ID NO: 7)枯草芽孢桿菌載體候選疫苗后10天，空腸彎曲菌特異的分泌IgA抗體水平的圖。在回腸區(qū)域收集黏膜。數(shù)據(jù)表示為平均值土SEM，*表示與兩對(duì)照相比，有顯著差異(Ρ〈0· 05)。圖9是表示如通過定量PCR計(jì)算的每克回腸內(nèi)容物的空腸彎曲菌的CFU的Iogltl的圖。以IxlO8Cfu/雞的空腸彎曲菌攻擊用枯草芽孢桿菌骨架株(BSBB)或表達(dá)CjOl 13的枯草芽孢桿菌載體(SEQ ID NO: 7)接種鳥，然后10天后通過PCR計(jì)算。在通過傳統(tǒng)方法從回腸黏膜內(nèi)層提取的總DNA上進(jìn)行qPCR。結(jié)果表示為平均log1(lcfu/g回腸內(nèi)容物土SEM(n=10), *表示與對(duì)照相比差異顯著(P〈0. 05)。
圖10是表示如通過定量PCR計(jì)算的每克火雞回腸內(nèi)容物的空腸彎曲菌的IogltlCFU的圖。以IxlO8Cfu/雞的C. coli攻擊用骨架株或cj0113 (SEQ IDNO:7)沙門氏菌屬載體疫苗接種火雞，然后12天后通過PCR計(jì)算。在通過傳統(tǒng)方法從回腸黏膜內(nèi)層提取的總DNA上進(jìn)行qPCR。結(jié)果表示為平均IogltlCfu/克回腸內(nèi)容物土SEM (n=10), *表示與對(duì)照相比差異顯著(P〈0. 05)。
具體實(shí)施例方式激發(fā)對(duì)彎曲菌屬多種血清型的黏膜的、體液的和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的疫苗載體為限制彎曲菌屬胃腸炎提供了有前景的方法。通過插入編碼非固有線性表位(抗原多肽)的多核苷酸序列，本項(xiàng)目利用一種新方法開發(fā)疫苗?？乖嚯目梢栽谝呙巛d體中與免疫刺激多肽，如⑶154 (⑶40L)或HMGBl (高遷移率族蛋白I)組合使用。適當(dāng)?shù)匚窗l(fā)現(xiàn)抗原多肽和免疫刺激多肽是與載體固有相關(guān)的多肽。表位或抗原多肽和免疫刺激多肽可以在重組載體表面上表達(dá)。載體可以是細(xì)菌、病毒或甚至是脂質(zhì)體載體。在施用之前，載體可以是活的、活的且減毒的或滅活的。如在實(shí)施例中所顯示的，實(shí)質(zhì)上的初步數(shù)據(jù)表明表達(dá)外源表位的沙門氏菌屬或芽孢桿菌屬(Bacillus)構(gòu)建體能夠快速在體內(nèi)誘導(dǎo)高滴度的表位特異的抗體。而且，表面⑶154或HMGBl的共表達(dá)有效地增強(qiáng)了對(duì)外源表位的抗體反應(yīng)。重組DNA技術(shù)使得能夠相對(duì)簡(jiǎn)單的操作許多細(xì)菌和病毒物種。一些細(xì)菌和病毒是溫和的或非致病的，但其能夠產(chǎn)生強(qiáng)的免疫反應(yīng)。這些細(xì)菌和病毒成為用于激發(fā)對(duì)異源的、非固有的或外源的抗原的免疫反應(yīng)的有吸引力的疫苗載體。細(xì)菌或病毒載體可以模仿自然感染，并產(chǎn)生強(qiáng)的持久的免疫。疫苗載體通常相對(duì)便宜地生產(chǎn)和施用。另外，這種載體通常攜帶一種以上抗原，并可以提供對(duì)多種傳染性劑的保護(hù)。編碼來自任何數(shù)目的病原性生物體的多肽抗原的多核苷酸可以被插入至疫苗載體，并表達(dá)產(chǎn)生抗原多肽?？乖嚯氖悄軌虮猾@得性(adaptive)免疫系統(tǒng)特異識(shí)別的多肽。抗原多肽包括免疫原性的任何多肽?？乖嚯陌ǖ幌抻诓≡w相關(guān)的、變應(yīng)原相關(guān)的、腫瘤相關(guān)的或疾病相關(guān)的抗原。病原體包括病毒、寄生蟲、真菌和細(xì)菌病原體以及蛋白質(zhì)病原體，例如朊病毒?？乖嚯目梢允侨L(zhǎng)蛋白質(zhì)或其部分。已經(jīng)非常明確許多蛋白質(zhì)的免疫系統(tǒng)識(shí)別是基于相對(duì)少的氨基酸數(shù)目，通常稱為表位。表位可以僅為8-10個(gè)氨基酸。因而，此處描述的抗原多肽可以是全長(zhǎng)蛋白質(zhì)、8個(gè)氨基酸長(zhǎng)的表位、或這兩種極端間的任何部分。事實(shí)上，抗原多肽可以包括來自單一病原體或蛋白質(zhì)的一個(gè)以上的表位。適當(dāng)?shù)?，抗原多肽是與載體非固有相關(guān)的多肽。非固有相關(guān)包括也可以固有地存在于載體中的抗原多肽，但其作為表位被重組地表達(dá)，作為融合蛋白質(zhì)與不同的多肽組合表達(dá)，從而與固有地表達(dá)的多肽相比，允許免疫反應(yīng)的差異展示和差異增強(qiáng)。相同表位的多個(gè)拷貝或來自不同蛋白質(zhì)的多個(gè)表位可以包含于疫苗載體中?？梢韵氲絹碜韵嗤虿煌≡w或疾病的幾個(gè)表位或抗原組合在單一疫苗載體中施用，以產(chǎn)生對(duì)多個(gè)抗原的增強(qiáng)的免疫反應(yīng)。重組疫苗載體可以編碼來自多種病原性微生物、病毒或腫瘤相關(guān)抗原的抗原。施用能夠表達(dá)多種抗原的疫苗載體具有同時(shí)誘導(dǎo)對(duì)兩種或多種疾病的免疫的優(yōu)點(diǎn)。多核苷酸可以被插入疫苗載體的染色體或在質(zhì)?；蚱渌馊旧wDNA上編碼。編碼表位的多核苷酸可以被獨(dú)立地表達(dá)(即，在載體中被可操縱地連接至功能的啟動(dòng)子)或可以被插入在載體中表達(dá)的疫苗載體多核苷酸中(即，固有的多核苷酸或非固有的多核苷酸)。適當(dāng)?shù)兀呙巛d體多核苷酸編碼在疫苗載體的表面上表達(dá)的多肽，如跨膜蛋白質(zhì)。編碼抗原多肽的多核苷酸可以在框架中被插入到疫苗載體多核苷酸序列，以允許抗原多肽表達(dá)在載體表面上。例如，編碼抗原多肽的多核苷酸可以在框架中被插入到細(xì)菌多核苷酸中編碼跨膜蛋白質(zhì)的外環(huán)區(qū)的區(qū)域中，從而載體多核苷酸序列保留在框架中。參見下面的實(shí) 施例，其中抗原多肽被插入到腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritidis)載體的IamB基因的外環(huán)?？商娲兀幋a抗原多肽的多核苷酸可以被插入分泌的多肽中。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解編碼抗原多肽的多核苷酸能夠被插入到多種疫苗載體多核苷酸，以提供抗原多肽的表達(dá)和向用疫苗載體治療的受試者免疫細(xì)胞的遞呈。在實(shí)施例中，幾個(gè)彎曲菌屬多核苷酸被插入到腸炎沙門氏菌IamB編碼序列中。得到的重組細(xì)菌在細(xì)菌表面表達(dá)插入的抗原多肽。多核苷酸可以被插入枯草芽孢桿菌的CotB中，從而重組細(xì)菌在孢子或sip中表達(dá)插入的抗原多肽用于營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌中的表面表達(dá)。載體可包括編碼全長(zhǎng)彎曲菌屬蛋白質(zhì)(包括cjaD (SEQ ID NO: I), cjaA (SEQIDN0:2)和ACE393 (SEQ ID NO:3)或這些蛋白質(zhì)的抗原多肽的多核苷酸。在實(shí)施例中，源自全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的抗原多肽如下使用SEQ ID NO:7 (一種稱為cj0113的cjaD多肽)；SEQ IDNO:8 (—種稱為 cj0982 的 cjaA 多肽)和 SEQ ID NO:9 (—種稱為 cj0420 的 ACE 393 多肽)。用于實(shí)施例的多核苷酸分別提供為SEQ IDNO: 4-6。用于實(shí)施例中的多核苷酸具有由絲氨酸接頭(linker)分離，并連接至⑶154氨基酸140-149的SEQ ID NO 7-9的抗原多肽(在抗原多肽和免疫刺激多肽之前、后和之間的三個(gè)氨基酸)。適當(dāng)?shù)兀迦氲揭呙巛d體的抗原多肽的部分是免疫原性或抗原性的。免疫原性片段是能夠激發(fā)細(xì)胞或體液免疫反應(yīng)的肽或多肽。適當(dāng)?shù)?，抗原多肽可以是全長(zhǎng)蛋白質(zhì)、或適當(dāng)?shù)?，可以是全長(zhǎng)序列的20個(gè)或更多個(gè)氨基酸、15個(gè)或更多個(gè)氨基酸、10個(gè)或更多個(gè)氨基酸、8個(gè)或更多個(gè)氨基酸。適當(dāng)?shù)?，?duì)目標(biāo)病原體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)是保護(hù)性的免疫反應(yīng)。保護(hù)性的免疫反應(yīng)是這樣的反應(yīng)，其能夠阻止或降低隨后的目標(biāo)病原體(即彎曲菌屬)感染引起的發(fā)病率或死亡率。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解任何這些多核苷酸序列可以與任何其它抗原多肽(包括來自其它異源病原體或生物體)的多肽組合使用，也可以與編碼免疫刺激多肽的多核苷酸聯(lián)合使用，例如，如國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US07/078785和PCT/US2011/022062中描述的CD154或HMGBl多肽，這些申請(qǐng)的全文在此引入作為參考。也可以將編碼對(duì)受試者蛋白質(zhì)是同源的且能夠刺激免疫系統(tǒng)對(duì)外源表位反應(yīng)的免疫刺激多肽的多核苷酸插入載體。如下面詳述，載體可以包括CD154多肽，該多肽能夠在受試者中結(jié)合CD40，并刺激受試者對(duì)載體及其相關(guān)的外源抗原多肽反應(yīng)。另外，載體可以包括HMGBl多肽或其功能片段。關(guān)于抗原多肽如上所述，編碼這些多肽的多核苷酸可以被插入到載體的染色體或保留在染色體外。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解這些多核苷酸能夠被插入到多種載體多核苷酸中用于在載體不同部分中表達(dá)或用于多肽的分泌。編碼能夠增強(qiáng)對(duì)非固有抗原多肽的免疫反應(yīng)的免疫刺激多肽的多核苷酸也可以編碼抗原多肽。編碼免疫刺激多肽的多核苷酸可以被連接至編碼抗原多肽的多核苷酸，從而在疫苗載體中免疫刺激多肽和外源抗原多肽呈現(xiàn)在同一多核苷酸上。例如，抗原多肽和免疫刺激多肽可以是融合蛋白質(zhì)的部分。在實(shí)施例中，編碼能夠結(jié)合CD40的CD154多肽的多核苷酸也編碼來自彎曲菌屬cjaD、cjaA或ACE 393的抗原多肽。參見所附序列表中潛在多肽序列的一些實(shí)例SEQ ID NO: 10-12，和編碼抗原多肽、免疫刺激多肽和宿主多肽間任選的絲氨酸接頭的多核苷酸序列SEQ ID N0:4-6?！ぴ趯?shí)施例中，編碼彎曲菌屬抗原多肽的多核苷酸和編碼免疫刺激多肽的多核苷酸均被插入跨膜IamB基因的外環(huán)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解也可以使用編碼其它跨膜蛋白質(zhì)的載體多核苷酸。另外，抗原多核苷酸可以是染色體外的或由載體分泌的。在實(shí)施例中，編碼彎曲菌屬cj0113抗原(SEQ ID NO:7)和免疫刺激肽HMGBl (SEQ ID N0:20)的多核苷酸從芽孢桿菌屬(Bacillus)載體攜帶的質(zhì)粒表達(dá)，且在細(xì)胞表面表達(dá)。適當(dāng)?shù)?，?54多肽長(zhǎng)度少于50個(gè)氨基酸、更適當(dāng)?shù)?，少?0個(gè)、少于30個(gè)或少于20個(gè)氨基酸長(zhǎng)。多肽長(zhǎng)度可以在10至15個(gè)氨基酸之間、10至20個(gè)氨基酸之間或10至25個(gè)氨基酸之間。⑶154序列和⑶40結(jié)合區(qū)在多個(gè)物種間不是高度保守的。雞和人的⑶154序列分別提供在SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14中。已經(jīng)確認(rèn)了許多物種(包括人、雞、鴨、小鼠和牛)的⑶154的⑶40結(jié)合區(qū)，其分別表示于 SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18 和 SEQ ID NO: 19 中。盡管在物種間CD40結(jié)合區(qū)的序列中存在變異，已經(jīng)報(bào)道了 CD154與CD40的交叉結(jié)合。例如，人CD154多肽能夠增強(qiáng)雞中的免疫反應(yīng)。因此，可以使用物種特異的CD154多肽或異源CD 154多肽實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。HMGBl (高遷移率族蛋白I)蛋白質(zhì)首先被鑒別為對(duì)DNA結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性重要的DNA結(jié)合蛋白質(zhì)。其為廣泛表達(dá)的核蛋白，無(wú)序列特異性地與DNA結(jié)合。該蛋白高度保守并發(fā)現(xiàn)于植物至哺乳動(dòng)物中。斑馬魚、雞和人HMGBl氨基酸序列分別提供于SEQ ID NO: 28,SEQID N0:20和SEQ ID N0:27中。遍及哺乳動(dòng)物的該序列高度保守，具有98%的氨基酸同一性，且氨基酸變化是保守的。因此，來自一個(gè)物種的HMGBl蛋白可能功能性地取代來自另一物種的HMGBl蛋白。全長(zhǎng)的HMGBl蛋白或其部分可用作此處描述的疫苗載體中的HMGBl多肽。HMGBl具有兩個(gè)DNA結(jié)合區(qū)，稱為如SEQ ID NO: 21和22所示的A盒和如SEQID NO: 23和 24 所不的 B 盒。參見 Andersson 和 Tracey, Annu. Rev. Tmmunol. 2011, 29:139-162,其全文并入此處作為參考。HMGBl是炎癥的調(diào)節(jié)子，并作為核損傷(如來自壞死細(xì)胞的)的信號(hào)。HMGBl還可能在需要蛋白乙?；⒖绾说囊莆缓头置诘倪^程中，由單核/巨噬細(xì)胞系的細(xì)胞活性分泌。通過經(jīng)由晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)和經(jīng)由Toll樣受體家族(TLR)成員(特別是TLR4)的信號(hào)傳導(dǎo)，細(xì)胞外HMGBl作為強(qiáng)效的炎癥調(diào)節(jié)子發(fā)揮作用。已經(jīng)鑒別了 RAGE結(jié)合活性，其需要SEQ ID NO:25的多肽。TLR4結(jié)合需要SEQ ID NO:20的106位的半胱氨酸，其被發(fā)現(xiàn)在HMGBl的B盒區(qū)域。HMGBl的炎癥活性不需要全長(zhǎng)蛋白，已經(jīng)鑒定了功能性片段。已表明B盒足以介導(dǎo)HMGBl的促炎癥作用，因而，在本發(fā)明的上下文中SEQ ID NO: 23和24是HMGBl多肽或其功能片段。另外，RAGE結(jié)合位點(diǎn)和促炎癥細(xì)胞因子活性分別被繪圖于在SEQ ID N0:25和SEQID N0:26。因此，在本發(fā)明的上下文中這些多肽是HMGBl多肽的功能片段。使用如國(guó)際申請(qǐng)NO.W002092004中的那些方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠鑒定能夠刺激促炎癥細(xì)胞因子活性的HMGBl多肽及其片段，該國(guó)際申請(qǐng)全文并如此處作為參考。適當(dāng)?shù)?，HMGBl多肽在SEQ ID NO: 20(SEQ ID NO: 25或其同源物)的氨基酸150-183包括RAGE結(jié)合結(jié)構(gòu)域，在SEQ ID NO:20 (SEQ ID NO:26或其同源物)的氨基酸89-109之間包括促炎癥細(xì)胞因子活性結(jié)構(gòu)域。特別地，HMGBl多肽及其功能片段或同源物包括與SEQ ID NO:20-28 的HMGBl多肽至少99%同一性、至少98%同一性、至少95%同一性、至少90%同一性、至少85%同一性、或至少80%同一性的多肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解HMGBl多肽可被用于增強(qiáng)對(duì)存在于載體中的一種以上的抗原多肽的免疫反應(yīng)。來自HMGBl的多肽至少部分通過激活樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，從而刺激產(chǎn)生IL-l、IL-6、IFN-Y和TNF-α，來刺激免疫反應(yīng)。適當(dāng)?shù)兀琀MGBl可以在載體表面表達(dá)。至少部分抗原多肽和至少部分HMGBl多肽或其它免疫刺激多肽可出現(xiàn)在疫苗載體的表面。出現(xiàn)在疫苗載體的表面包括這樣的多肽，其包含于跨膜蛋白中、與跨膜蛋白、膜脂質(zhì)或膜瞄定的碳水化合物相互作用、共價(jià)地或化學(xué)地交聯(lián)。通過具有含有由連接至N端、C端或跨膜蛋白中的任何部位的肽鍵的多肽的氨基酸(即，在跨膜蛋白的兩個(gè)氨基酸之間插入或代替跨膜蛋白的一個(gè)或多個(gè)氨基酸(即，缺失-插入))，多肽可包含于跨膜蛋白質(zhì)中。適當(dāng)?shù)?，多肽可以被插入到跨膜蛋白的外環(huán)。適當(dāng)?shù)目缒さ鞍资莄otB和IamB,但本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解許多合適的跨膜蛋白是可用的。作為替代，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的方法，多肽可共價(jià)地或化學(xué)地連接至膜中的蛋白、脂質(zhì)或碳水化合物，或衣殼(如果使用病毒載體的話)。例如，二硫鍵或生物素-抗生物素蛋白交聯(lián)可被用來將抗原和HMGBl多肽呈現(xiàn)在疫苗載體的表面。適當(dāng)?shù)?，抗原多肽和HMGBl多肽是融合蛋白的部分。兩種多肽可以通過肽鍵直接連接，或被接頭或其中插入的第三蛋白區(qū)段所分開。在實(shí)施例中，一些載體具有編碼在同一多核苷酸(IamB)上的彎曲菌屬抗原多肽(cj0113、cj0420和cj0982)和免疫刺激多肽(CD154氨基酸140-149或HMGBl或其功能片段)，從而其序列彼此在框架內(nèi)，并與其所插入的沙門氏菌屬多核苷酸在框架內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，接頭可以被加到編碼抗原多肽和免疫刺激多肽的多核苷酸序列之間，從而在表達(dá)的多肽中幾個(gè)氨基酸分開兩個(gè)多肽。接頭可以是編碼單個(gè)氨基酸的3個(gè)核苷酸，或者可以更長(zhǎng)，如編碼10個(gè)的30個(gè)核苷酸，或編碼更多氨基酸。在實(shí)施例中，使用9個(gè)核苷酸的接頭，其編碼3個(gè)絲氨酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到可以使用許多其它類型的接頭。另外，多核苷酸可以在一個(gè)拷貝或多個(gè)拷貝中存在。例如，可以在跨膜蛋白的相同外環(huán)中發(fā)現(xiàn)抗原多肽的三個(gè)拷貝和免疫刺激多肽的三個(gè)拷貝，或者其可以表達(dá)在幾個(gè)不同的載體蛋白中。在可替換的實(shí)施方案中，免疫刺激多肽和抗原多肽可由不同的多核苷酸編碼。用于方法中的潛在疫苗載體包括但不限于芽孢桿菌屬、沙門氏菌屬(腸炎沙門氏菌)、志賀氏菌屬(Shigella)、埃希氏菌屬(E. coli)、耶爾森菌屬(Yersinia)、博德特菌屬(Bordetella)、乳球菌屬(Lactococcus)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、弧菌屬(Vibrio)(霍亂弧菌(Vibrio cholerae))、李斯特氏菌屬(Listeria)、腺病毒、痘病毒、皰疫病毒、甲病毒和腺相關(guān)病毒。適當(dāng)?shù)?，疫苗載體是GRAS生物體。疫苗載體可以是失活的或滅活的，從而其不能復(fù)制。失活或滅活細(xì)菌或病毒疫苗載體的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括但不限于例如，福爾馬林失活、基于抗生素的失活、熱處理或乙醇處理的方法。在一些實(shí)施方案中，疫苗載體可以是基于脂質(zhì)體的載體。本發(fā)明提供了包含載體和藥學(xué)上可接受的載體(carrier)的組合物。藥學(xué)上可接受的載體是任何適合于體內(nèi)施用的載體。藥學(xué)上可接受的載體可以包括水、緩沖溶液、葡萄糖溶液或細(xì)菌培養(yǎng)液。組合物的額外成分可適當(dāng)?shù)匕ㄙx形劑，例如穩(wěn)定劑、防腐劑、稀釋劑、乳化劑和潤(rùn)滑劑。藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的例子包括例如碳水化合物(如山梨·醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖)的穩(wěn)定劑、例如白蛋白或酪蛋白的蛋白質(zhì)、例如牛血清或脫脂乳的含蛋白制劑、和緩沖液(如，磷酸鹽緩沖液)。特別地，當(dāng)向組合物添加這樣的穩(wěn)定劑時(shí)，組合物適合于冷凍干燥或噴霧干燥。還提供了通過施用此處所述的載體增強(qiáng)受試者中對(duì)彎曲菌屬的免疫反應(yīng)的方法。該載體可以包括能夠刺激對(duì)上述載體和抗原多肽免疫反應(yīng)的HMGBl多肽或CD154多肽。以增強(qiáng)受試者對(duì)非固有抗原多肽的免疫反應(yīng)的有效量向受試者施用載體。適當(dāng)?shù)?，增?qiáng)了對(duì)彎曲菌屬攻擊的免疫反應(yīng)。增強(qiáng)免疫反應(yīng)包括但不局限于增強(qiáng)抗體反應(yīng)。與對(duì)照相比，載體施用后適當(dāng)?shù)卦鰪?qiáng)了 IgA反應(yīng)，更適當(dāng)?shù)卦鰪?qiáng)了分泌的IgA反應(yīng)。對(duì)照可以是載體施用前的同一受試者、僅施用載體的可比較的受試者、或施用表達(dá)不相關(guān)的或非彎曲菌屬抗原多肽的載體的可比較的受試者?？贵w反應(yīng)，適當(dāng)?shù)豂gA反應(yīng)，與對(duì)照受試者的反應(yīng)比較，可被增加2倍、3倍、4倍、5倍或更多。增強(qiáng)的免疫反應(yīng)也可以導(dǎo)致在施用此處所述的載體后彎曲菌屬生長(zhǎng)或復(fù)制、在受試者中形成克隆的能力降低?？赏ㄟ^用彎曲菌屬感染攻擊施用載體的受試者，并與對(duì)照受試者相比，監(jiān)測(cè)細(xì)菌形成克隆和復(fù)制(即，感染受試者)的能力來測(cè)試所述降低。彎曲菌屬在受試者中的生長(zhǎng)可降低llog、21ogs、31ogs、41ogs、51ogs或甚至更多。彎曲菌屬在施用載體的受試者中的生長(zhǎng)可以在檢測(cè)限以下。另外，公開了增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬感染抗性的方法。簡(jiǎn)言之，該方法包括以激發(fā)免疫反應(yīng)的有效量向受試者施用上述包含彎曲菌屬抗原多肽的載體。增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬感染的抗性包括但不限于降低彎曲菌屬感染的發(fā)病率(incidence)、限制彎曲菌屬感染從一個(gè)宿主向其它宿主的傳播、降低彎曲菌屬在受試者中的復(fù)制、在同一宿主的侵入或傳播、降低彎曲菌屬感染相關(guān)的發(fā)病率、以及降低彎曲菌屬感染的持續(xù)時(shí)間。載體的施用可以防止受試者感染上彎曲菌屬或防止出現(xiàn)任何疾病的外在體征，例如胃腸炎或GBS。增強(qiáng)的彎曲菌屬抗性還可以包括增加的抗體產(chǎn)生、適當(dāng)?shù)豂gA的產(chǎn)生?？贵w反應(yīng)，適當(dāng)?shù)?，IgA的反應(yīng)，與對(duì)照受試者的反應(yīng)相比，可以增加2倍、3倍、4倍、5倍或更多。增強(qiáng)的免疫反應(yīng)也可以導(dǎo)致在施用此處所述載體后彎曲菌屬在受試者中的生長(zhǎng)、復(fù)制和形成克隆能力降低。可通過用彎曲菌屬感染攻擊施用載體的受試者，與對(duì)照受試者相比并監(jiān)測(cè)細(xì)菌形成克隆和復(fù)制(即，感染)受試者的能力來測(cè)試這種降低。彎曲菌屬在受試者中的生長(zhǎng)可降低llog、21ogs、31ogs、41ogs、51ogs或更多。彎曲菌屬在施用載體的受試者中的生長(zhǎng)可以在檢測(cè)限以下。
用于此處描述的所有方法的抗原多肽可以來自上述的cjaD、cjaA或ACE 393。載體中抗原多肽的插入可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種方法完成，包括但不限于國(guó)際專利公開NO.W02008/036675中描述的無(wú)痕定點(diǎn)突變系統(tǒng)，其全文并入此處作為參考。載體可以是工程化的細(xì)菌，來表達(dá)聯(lián)合上述能夠增強(qiáng)免疫反應(yīng)的多核苷酸的彎曲菌屬抗原多肽。特別地，⑶154或HMGBl的多肽可以被載體表達(dá)以增強(qiáng)受試者對(duì)抗原多肽的免疫反應(yīng)。用于這些方法中的載體在施用或用于該方法前，可以是減毒的或滅活的。有用的施用劑量根據(jù)受試者的年齡、體重和物種、施用的模式和途徑、以及免疫反應(yīng)所尋求抵抗的病原體類型而不同。組合物可以以有效引發(fā)免疫反應(yīng)的任何載體劑量施用。對(duì)于細(xì)菌載體，可以考慮劑量范圍IO3至101°個(gè)細(xì)菌、IO4至IO9個(gè)細(xì)菌、或IO5至IO7個(gè)細(xì)菌是適當(dāng)?shù)?。組合物可以僅施用一次，或可以施用兩次或多次，以增加免疫反應(yīng)。例如，可以間隔一周、兩周或三或更多周施用兩次或更多次組合物。在施用之前，適當(dāng)?shù)丶?xì)菌載體是活的，但在一些實(shí)施方案中，在施用之前細(xì)菌載體可以是滅活的。在一些實(shí)施方案中，細(xì)菌載體能夠在受試者中復(fù)制，而在另一些實(shí)施方案中，細(xì)菌載體可以是減毒的和/或可以在受試者中不能復(fù)制。對(duì)于動(dòng)物或人的施用，組合物可以通過各種手段施用，包括但不局限于鼻內(nèi)、黏膜的、由噴霧、皮內(nèi)的、胃腸外的、皮下的、口服的，由氣霧的或肌肉方式施用。另外，滴眼施用或添加至飲用水或食物中也是附加地適當(dāng)施用手段。對(duì)于雞，組合物可以卵內(nèi)施用。關(guān)于方法，受試者包括但不局限于脊椎動(dòng)物，適當(dāng)?shù)夭溉閯?dòng)物、適當(dāng)?shù)厝?、或鳥，適當(dāng)?shù)厍?，例如雞或火雞。也可以使用感染的其它動(dòng)物模型。增強(qiáng)免疫反應(yīng)包括但不局限于，誘導(dǎo)由受試者免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的治療或預(yù)防效果。例如，如果防止了受試者隨后的彎曲菌屬的感染，則增強(qiáng)了免疫反應(yīng)。特別地，增強(qiáng)免疫反應(yīng)可以包括增強(qiáng)的抗體產(chǎn)生，例如圖4-8所證明的、增強(qiáng)的抗體重鏈的種類轉(zhuǎn)換、抗原遞呈細(xì)胞的成熟、輔助T細(xì)胞的刺激、溶細(xì)胞性T細(xì)胞的刺激或T和B記憶細(xì)胞的誘導(dǎo)。在實(shí)施例中，在載體施用后可見分泌的IgA量的增加，其與保護(hù)免于隨后的彎曲菌屬感染相關(guān)?？梢韵氲絹碜韵嗤虿煌≡w的幾個(gè)表位或抗原可以在一個(gè)載體中組合施用，以產(chǎn)生對(duì)多個(gè)抗原及其相關(guān)病原體的增強(qiáng)的免疫反應(yīng)。重組疫苗載體可以編碼來自多種病原微生物、病毒的抗原或腫瘤相關(guān)抗原的抗原。能夠表達(dá)多種抗原的疫苗載體的施用具有同時(shí)誘導(dǎo)對(duì)兩種或多種疾病的免疫的優(yōu)點(diǎn)。使用本領(lǐng)域公知的方法，編碼抗原的異源多核苷酸可以在任何非必要的位點(diǎn)被插入疫苗載體基因組，或可替換地，可以被攜帶在質(zhì)粒上。用于多核苷酸插入的一個(gè)適當(dāng)?shù)奈稽c(diǎn)在跨膜蛋白的外部中，或偶聯(lián)至靶向用于分泌途徑的異源多核苷酸的序列。用于多核苷酸插入的適當(dāng)?shù)目缒さ鞍椎囊粋€(gè)例子是沙門氏菌屬的IamB基因。異源多核苷酸包括但不局限于編碼選自不是疫苗載體的病原微生物或病毒的抗原的多核苷酸，即編碼非固有多肽的非固有多核苷酸。
以下的實(shí)施例僅僅是示例性的，并不限制本發(fā)明或所附權(quán)利要求的范圍。此處引用的所有參考并入此處用作參考。實(shí)施例沙門氏菌屬候選疫苗株的減毒如前所述，通過在腸炎沙門氏菌基因組aroA和/或htrA基因中導(dǎo)入確定的、不可逆的缺失突變，使腸炎沙門氏菌噬菌體型13A (S. enteritidis)減毒(可在ATCC保藏號(hào)PTA-787UPTA-7872和PTA-7873獲得)。簡(jiǎn)言之，用卡那霉素抗性(KmK)基因序列取代腸炎沙門氏菌細(xì)菌基因組中的目標(biāo)基因序列。使用3S-PCR，并將3S-PCR產(chǎn)物電穿孔進(jìn)入含有PKD46質(zhì)粒的電效能(electrocompetent)沙門氏菌屬細(xì)胞進(jìn)行該步驟。將得到的細(xì)胞混合物鋪板于補(bǔ)充有Km的LB瓊脂板上，來選擇含有KmK基因的陽(yáng)性克隆。通過使KmK基因兩側(cè)帶有目標(biāo)基因同源的序列，將10^基因插入含有目標(biāo)基因(aroA或htrA)的基因組區(qū)。一旦得到KmK突變體，使用PCR和DNA測(cè)序確認(rèn)缺失突變。在表位插入開始前，除去所有的KiZ基因。·候選重組疫苗的構(gòu)建選擇三種可能的候選抗原多肽0mpl8/cjaD(cj0113)、cjaA (cj0982)和 ACE393(cj0420)。選擇的多肽如下cj0113(GVSITVEGNCDEWGTDEYNQAWMTTSYAPTS ；SEQ ID NO: 10)、cj0982c (KDIVLDAEIGGVAKGKDGKEKWMTTSYAPTS ；SEQ ID NO: 11)和 cj0420 (KVALGVAVPKDSNITSVEDLKDKTLLLNKGTTADAWMTTSYAPTS ；SEQ ID NO: 12)，所有的插入另外地含有 CD154 氨基酸140-149的序列。使用Cox 等人(Cox 等人,Scarless and site-directed mutagenesis inSalmonellaenteritidis chromosome. BMC Biotechnol 2007; 7:59)的方法構(gòu)建含有穩(wěn)定整合 cj0113-CD154 (cj0113)、cj0420-CD154 (cj0420)或 cj0982c_CD154 (cj0982)拷貝的重組腸炎沙門氏菌株。簡(jiǎn)言之，通過設(shè)計(jì)具有I-SceI酶切位點(diǎn)與KmK基因(兩側(cè)的每側(cè)具有大約200-300個(gè)堿基對(duì)的DNA，該DNA與環(huán)9的上游和下游區(qū)同源)的PCR產(chǎn)物，將I-SceI酶切位點(diǎn)連同KmK基因引入IamB基因的環(huán)9。使用的引物在下面的表I中表示。將PCR產(chǎn)物電穿孔至含有PKD46質(zhì)粒的電效能減弱的沙門氏菌屬細(xì)胞中，將得到的細(xì)胞混合物鋪板于補(bǔ)充有Km的LB瓊脂板上，選擇含有KiZ基因的陽(yáng)性克隆。在環(huán)9中制造Sce-1/Km突變后，用密碼子優(yōu)化的外源表位DNA序列取代該區(qū)域(Burns DM, Beacham IR. Rare codons inE. coli and S. typhimurium signal sequences. FEBS Lett 1985; 189 (2) : 318-24)。該第二次3S-PCR反應(yīng)產(chǎn)生了兩側(cè)具有環(huán)9上游和下游區(qū)域的外源表位插入，將得到的PCR產(chǎn)物電穿孔至含有上述Sce-1/Km突變的電效能SE13A中。還將質(zhì)粒pBC-1-SceI與插入一起電穿孔至細(xì)胞，因?yàn)橘|(zhì)粒產(chǎn)生I-SceI酶，其識(shí)別并切斷序列，在LamB基因的環(huán)9區(qū)域的I-SceI酶切位點(diǎn)產(chǎn)生一個(gè)缺口，在該缺口處外源表位序列插入SE13A基因組。質(zhì)粒還攜帶一個(gè)氯霉素(Cm)抗性基因(CmK)作為將取代KmK基因的插入，突變必須具有新的選擇標(biāo)記以對(duì)先前的I-Scel/Km突變反向選擇。在電穿孔后，將細(xì)胞鋪板于含有25 μ g/mL Cm的LB瓊脂板，以選擇陽(yáng)性突變體。表I:PCR 引物
權(quán)利要求
1.一種包含編碼 SEQ ID NO:7 (cjaD ;cj0113)、SEQ ID NO:8 (cjaA ;cj0982)或 SEQID NO:9 (ACE 393 ;cj0420)的抗原多肽或其片段的第一多核苷酸序列的載體，所述第一多核苷酸序列與該載體非固有相關(guān)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的載體，其進(jìn)一步包括編碼與該載體非固有相關(guān)的免疫刺激多肽的第二多核苷酸序列。
3.一種包含第一多核苷酸序列和第二多核苷酸序列的載體，所述第一多核苷酸序列編碼與該載體非固有相關(guān)的抗原多肽，所述第二多核苷酸序列編碼免疫刺激多肽，其中抗原多肽是 SEQ ID N0:1 (cjaD ;cj0113)、SEQ ID NO:2 (cjaAcj0982)或 SEQ ID N0:3 (ACE393 ；cj0420)的片段。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的載體，其中所述載體是細(xì)菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的載體，其中所述的細(xì)菌是選自沙門氏菌屬、埃希氏菌屬、芽孢 桿菌屬或乳桿菌屬的屬。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的載體,其中所述第一多核苷酸序列和第二多核苷酸序列被整合至細(xì)菌的基因組。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)所述的載體，其中所述載體包括一個(gè)以上的第一多核苷酸序列的拷貝、一個(gè)以上第二多核苷酸序列的拷貝或一個(gè)以上第一和第二多核苷酸序列的拷貝。
8.根據(jù)權(quán)利要求2-7任一項(xiàng)所述的載體，其中所述第一多核苷酸序列在框架中被連接至第二多核苷酸序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求2-8任一項(xiàng)所述的載體，其中所述抗原多肽和免疫刺激多肽在載體表面表達(dá)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的載體，其中所述第一多核苷酸序列和第二多核苷酸序列被插入在編碼跨膜蛋白外部部分的第三多核苷酸序列中。
11.根據(jù)權(quán)利要求2-10任一項(xiàng)所述的載體，其中所述免疫刺激多肽是CD154多肽或HMGBl多肽。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的載體，其中所述CD154多肽能夠結(jié)合CD40，CD154多肽具有少于50個(gè)的氨基酸，且含有SEQ ID NO 13的氨基酸140-149或其同源物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的載體，其中所述⑶154多肽含有選自SEQID NO :15-19的多肽。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的載體，其中所述HMGBl多肽包含選自SEQIDNO :20-28的至少一個(gè)或SEQ ID NO 20-28的至少一個(gè)的片段的多肽。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的載體,其中所述第一多核苷酸序列是SEQIDNO 7或其片段。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)所述的載體，其中所述第一多核苷酸序列是SEQIDNO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID N0:8 的片段、SEQ ID NO:9 的片段，或其組合。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16任一項(xiàng)所述的載體，其中向受試者施用載體能夠激發(fā)抗體反應(yīng)。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的載體，其中所述抗體反應(yīng)是IgA反應(yīng)。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-18任一項(xiàng)所述的載體，其中所述載體能夠保護(hù)接種的受試者免受隨后的彎曲菌屬的感染。
20.一種藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的載體和藥學(xué)上可接受的載體。
21.一種增強(qiáng)受試者中免疫反應(yīng)的方法，其包括以增強(qiáng)受試者免疫反應(yīng)的有效量向受試者施用權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的載體。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述免疫反應(yīng)包括增強(qiáng)的抗體反應(yīng)。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述可溶IgA抗體反應(yīng)被增強(qiáng)。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中相對(duì)于施用對(duì)照載體的受試者的IgA反應(yīng)，載體施用后的IgA反應(yīng)增加了至少3倍。
25.根據(jù)權(quán)利要求21-23任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括用彎曲菌屬攻擊受試者，其中與施用對(duì)照載體的受試者相比，攻擊后，在施用載體的受試者中，彎曲菌屬在受試者中的生長(zhǎng)降低了 21ogs。
26.一種增強(qiáng)受試者中對(duì)彎曲菌屬感染的抗性的方法，其包括在隨后的暴露于彎曲菌屬后，以增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬感染的抗性的有效量向受試者施用權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的載體。
27.根據(jù)權(quán)利要求21-26任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體是減毒的。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中在施用前滅活載體。
29.根據(jù)權(quán)利要求26-28任一項(xiàng)所述的方法，其中通過增加的抗體產(chǎn)生增強(qiáng)抗性。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中增加的抗體反應(yīng)包括增加的IgA反應(yīng)。
31.根據(jù)權(quán)利要求26-30任一項(xiàng)所述的方法，其中增加的抗性的特征在于隨后的用彎曲菌屬的感染導(dǎo)致了與對(duì)照相比降低的彎曲菌屬生長(zhǎng)。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中與對(duì)照載體施用后的彎曲菌屬生長(zhǎng)相比，彎曲菌屬的生長(zhǎng)降低至少21ogs。
全文摘要
此處提供了用于增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬感染抗性或用于增強(qiáng)對(duì)彎曲菌屬免疫反應(yīng)的疫苗載體和方法。疫苗載體包括編碼選自SEQ ID NO:7-9的抗原多肽或其片段的第一多核苷酸。載體還可以包括免疫刺激多肽。該方法包括向受試者施用疫苗載體。
文檔編號(hào)A61K39/02GK102971008SQ201180028098
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月9日
發(fā)明者B·哈吉斯, N·R·帕佛德, Y·M·權(quán), S·萊頓 申請(qǐng)人:阿肯色大學(xué)評(píng)議會(huì)