專利名稱：核酸復(fù)合物的制作方法
核酸復(fù)合物本發(fā)明涉及核酸序列的復(fù)合物。具體地，本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)錄因子誘餌的復(fù)合物、其向細(xì)菌的遞送和其制劑。細(xì)菌生長(zhǎng)和毒性的控制形成了日益增加的問題，尤其是在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用中，并可成為公共健康的重大挑戰(zhàn)。用于抵抗病原性細(xì)菌的抗生素是本領(lǐng)域熟知的。然而，此類抗生素的廣泛使用已導(dǎo)致對(duì)至少一種、以及在一些情形下多種抗生素具有抗性的細(xì)菌(所謂的多藥抗性菌株)的出現(xiàn)。已發(fā)現(xiàn)的傳統(tǒng)抗生素和開發(fā)中的抗生素?cái)?shù)量的下降加劇了這一形勢(shì)。事實(shí)上，抗生素抗性是抗細(xì)菌研究的重大挑戰(zhàn)，并危及市售抗生素以及那些仍處于開發(fā)中的抗生素的效力。因此，存在對(duì)可用于阻礙細(xì)菌傳播和感染的新的抗細(xì)菌劑的需要?；贒NA的治療具有克服現(xiàn)有抗細(xì)菌治療的限制的潛能，因?yàn)樗鼈兛梢员辉O(shè)計(jì)為通過以下方式治療潛在的任何病原體阻止編碼抗生素抗性機(jī)制的基因的表達(dá)，或通過改變關(guān)鍵或適應(yīng)性基因或操縱子的表達(dá)抑制生長(zhǎng)，或類似地阻止毒性或致病性的發(fā)作。另外， 細(xì)菌不可能發(fā)展出針對(duì)這些劑的抗性，因?yàn)檫@將需要影響轉(zhuǎn)錄因子和其關(guān)聯(lián)結(jié)合位點(diǎn)二者的同時(shí)突變。這對(duì)于控制多個(gè)關(guān)鍵基因的劑尤其如此。可選地，可通過突變使得基因組成型表達(dá)而使基因逃避轉(zhuǎn)錄因子誘餌介導(dǎo)的控制。然而，在轉(zhuǎn)錄因子誘餌同時(shí)作用于許多基因的情形下，將需要這些基因中的許多基因獲得突變以使它們轉(zhuǎn)換為組成型表達(dá)，這是被視為不可能的事件。轉(zhuǎn)錄因子誘餌(TFD)是一種此類基于DNA的治療劑。誘餌寡核苷酸被設(shè)計(jì)為模擬轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)并阻止后者與它們的關(guān)聯(lián)基因組靶標(biāo)結(jié)合，從而改變基因表達(dá)(Mann和 Dzau(2000) J. Clin.TFD具有超過其他基于DNA的治療劑的顯著優(yōu)點(diǎn)。其作用機(jī)制是簡(jiǎn)單且可預(yù)測(cè)的-它們通過掩蔽轉(zhuǎn)錄因子來控制基因表達(dá)，通過使細(xì)胞充滿足量拷貝的特異結(jié)合序列而阻止后者與啟動(dòng)子結(jié)合(因此，術(shù)語”誘餌”)。這與其中由于mRNA的復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)而難以限定靶標(biāo)的反義策略相反。與反義方法相比，TFD具有作用迅速、阻止基因表達(dá)的另外的優(yōu)點(diǎn)，而反義方法涉及表達(dá)的結(jié)果。因此，TFD在極低的濃度下有效，因?yàn)閱我?TFD-轉(zhuǎn)錄因子相互作用可阻斷單一基因的轉(zhuǎn)錄，而單一基因可以產(chǎn)生成千上萬拷貝的mRNA，而mRNA構(gòu)成反義方法的靶標(biāo)。其他基于DNA的治療劑包括含有用于基因治療的質(zhì)粒、用于反義和反基因應(yīng)用的寡核苷酸(Crooke ST. (1998) Antisense Nucleic Acid Drug Dev.旦115-122)、核酶、DNA 酶、適體和小干擾 RNA(siRNA) (Stull R. A.等(1995)Pharm Res. 12 :465-483 ；PatilS. D.和 Burgess D. J. (2003) AAPS Newsmagazine豆27)。盡管大多數(shù)基于 DNA 的藥物處于臨床前開發(fā)或臨床試驗(yàn)的早期階段，但是近年來已出現(xiàn)了這一類化合物以產(chǎn)生針對(duì)包括以下的廣泛范圍的疾病的藥物治療的極有希望的候選物癌癥、AIDS、神經(jīng)疾患諸如帕金森病和阿爾茨海默病以及心血管疾患。然而，包括TFD在內(nèi)的基于DNA的治療劑的遞送仍是重大的挑戰(zhàn)。當(dāng)遞送大的親水性治療劑諸如蛋白質(zhì)或核酸時(shí)，細(xì)胞膜是遇到的主要障礙之一。解決此問題的大多數(shù)努力集中于遞送至真核細(xì)胞，以開發(fā)用于人類癌癥等的有效治療。在真核細(xì)胞中，不同的細(xì)胞區(qū)室(包括核)受到生物膜的保護(hù)，生物膜隔離不同的細(xì)胞區(qū)室并阻止溶質(zhì)從細(xì)胞和細(xì)胞器的流入和流出。盡管這些屏障對(duì)于細(xì)胞的維持是必要的，但是當(dāng)試圖向細(xì)胞或細(xì)胞內(nèi)的特定細(xì)胞器遞送治療劑時(shí)，這些屏障是實(shí)質(zhì)的問題。由于細(xì)胞膜的疏水性內(nèi)部產(chǎn)生的大的自由能障礙，大多數(shù)陽離子在沒有特異性載體系統(tǒng)下不能通過細(xì)胞膜。為了被細(xì)胞選擇性積累和保留，陽離子化合物需要足夠的親脂性和其正電荷的離域以降低當(dāng)從水環(huán)境移至疏水環(huán)境時(shí)的自由能變化。這允許該化合物被動(dòng)穿過質(zhì)膜和線粒體膜并響應(yīng)于膜電位而積累。蛋白質(zhì)進(jìn)入真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)主要通過內(nèi)吞介導(dǎo)。這是高度組織化的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，其中大的極性分子通過被吞食到細(xì)胞膜內(nèi)而被吸附。吞噬作用和胞飲作用是非受體介導(dǎo)的形式的內(nèi)吞，而受體介導(dǎo)的內(nèi)吞是更加特異的主動(dòng)事件，其中細(xì)胞質(zhì)膜向內(nèi)折疊以形成有被小窩。在這種情形下，蛋白質(zhì)或其他觸發(fā)顆粒受困于細(xì)胞質(zhì)膜中的受體/配體或受困于與細(xì)胞表面的非特異性相互作用，例如由于電荷相互作用。僅到那時(shí)顆粒才被吞食。這些向內(nèi)出芽的小泡出芽形成細(xì)胞質(zhì)小泡。
已開發(fā)了多種技術(shù)來體內(nèi)和體外將生物活性分子易位跨過這些屏障。電穿孔和顯微注射對(duì)于體內(nèi)使用是苛刻且不實(shí)際的，因?yàn)檫@些方法在可以將物質(zhì)引入細(xì)胞之前必須破壞細(xì)胞膜，并且因此它們限于有限量的細(xì)胞。雖然使用內(nèi)吞途徑是有吸引力的，但是一個(gè)重要的缺點(diǎn)是確保在溶酶體活性發(fā)生之前的內(nèi)體逃脫。脂質(zhì)體包囊和受體介導(dǎo)的內(nèi)吞也受到其缺乏靶向和低遞送效率的限制。迄今進(jìn)行的大多數(shù)探索工作集中于向真核細(xì)胞遞送SiRNA分子。通常采用的方法是與共價(jià)連接的靶向肽形成脂質(zhì)體或復(fù)合物，靶向肽指導(dǎo)治療劑到達(dá)細(xì)胞內(nèi)的合適靶標(biāo)。當(dāng)選擇用于此類遞送機(jī)制的脂質(zhì)組分時(shí)有許多考慮因素。脂質(zhì)樣組分通常是陽離子并具有三種功能I.壓縮核酸以使遞送更易實(shí)現(xiàn)；2.保護(hù)核酸不被核酸酶降解或不被質(zhì)膜蛋白等非特異性吸附，和3.遮蔽磷酸主鏈的負(fù)電荷。第三點(diǎn)可通過使用具有減少的電荷或沒有電荷的合成主鏈來克服。另外，脂質(zhì)體或復(fù)合物需要某些理想的物理性質(zhì)I.良好的穩(wěn)定性，不論是在鹽溶液或生物液中。這可用測(cè)量顆粒之間的吸引或排斥的ξ-電位來定量；2.窄的大小分布,對(duì)于細(xì)菌理想地在介于50和IOOnm之間；3.較低的毒性，盡管大多數(shù)轉(zhuǎn)染劑(脂質(zhì)、親脂性陽離子)顯示中等水平的毒性；4.能夠?qū)嶋H生產(chǎn)，考慮諸如貨物成本的問題。通常已知用于真核遞送的肽透化膜，經(jīng)由靶細(xì)胞上的特異性受體穿透細(xì)胞，或簡(jiǎn)單地是陽離子(如聚精氨酸)。使用具有細(xì)胞穿透性質(zhì)的肽具有幾種優(yōu)點(diǎn)，這主要是由于可以對(duì)肽序列進(jìn)行各種修飾。這允許工程化定位不同細(xì)胞亞域和/或能夠轉(zhuǎn)運(yùn)不同類型的貨物的載體。一類膜易位劑是細(xì)胞穿透肽(CPP)。除了是體外進(jìn)入不同細(xì)胞器的溫和且有效的工具之外，CPP已用于幾種劑的體內(nèi)細(xì)胞遞送，具有有希望的結(jié)果。CPP通常由少于30個(gè)氨基酸組成，具有凈正電荷，且能夠易位穿過質(zhì)膜和以看似能量依賴的方式轉(zhuǎn)運(yùn)幾種貨物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)和核。易位經(jīng)由不受各種內(nèi)吞抑制劑或低溫影響的目前未知的機(jī)制發(fā)生(Langel,ti，編(2002)Cell-Penetrating Peptides, Processesand Applications, CRC Press)。術(shù)語CPP包括合成的細(xì)胞穿透肽、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和膜易位序列，其全部具有易位穿過細(xì)胞膜和進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的能力。具有實(shí)現(xiàn)遞送至尤其是細(xì)菌的潛能的其他類別的肽是具有抗細(xì)菌性質(zhì)的那些肽。這些肽包括抗微生物肽(AMP)、細(xì)胞穿透肽(CPP)、非核糖體合成的那些肽和糖肽。所有這些類型的肽在本文被稱為抗細(xì)菌蛋白(ABP)。
AMP可來源于細(xì)菌來源，此時(shí)它們被稱為細(xì)菌素，或來自高等真核來源，包括人、兩棲類、昆蟲等。特別感興趣的AMP是能夠增加生物膜的穿透性或者具有易位穿過膜以到達(dá)其細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)的能力的那些。AMP基于結(jié)構(gòu)相似性一般分為五個(gè)不互相排斥的亞組(Brogden,2005 Nat. Rev. Microbiol. 3 :238-250)I.陰離子肽是通常與鋅復(fù)合的小肽，并針對(duì)革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細(xì)菌具有活性；2.通常長(zhǎng)度少于40個(gè)氨基酸、缺乏半胱氨酸并以兩個(gè)α -螺旋區(qū)之間的中央鉸鏈區(qū)為特征的線性陽離子α -螺旋肽(諸如buforin)；3.富集特定氨基酸的陽離子肽，諸如富含脯氨酸和富含精氨酸的蜜蜂抗菌肽(apidaecin)；4.由于在半胱氨酸基團(tuán)之間形成二硫鍵而形成β -折疊的陰離子和陽離子肽；5.為較大蛋白質(zhì)的片段的陰離子和陽離子肽。AMP實(shí)現(xiàn)微生物殺傷的機(jī)制是不同的，并且不局限于某些亞組。絕大多數(shù)通過在細(xì)菌的膜上形成孔、導(dǎo)致細(xì)胞被透化來殺傷細(xì)菌。認(rèn)為存在三種截然不同的透化機(jī)制，其可以是肽的特定性質(zhì)或是所用的肽的濃度的作用I.形成環(huán)形孔,例如,爪蟾抗菌肽(magainin)、蜂毒肽；2.毪狀物形成(Carpet formation),例如，dermaseptin S、殺菌肽或蜂毒肽；3.桶板形成(Barrel stave formation),例如，丙甲菌素。已描述了幾種其中最終靶標(biāo)不是膜而是細(xì)胞內(nèi)性質(zhì)的AMP，使得AMP必須易位穿過膜。此易位能力是特別值得關(guān)注的，因?yàn)檫@些肽、或基于其建模的合成肽可用于遞送可選的貨物諸如治療劑。因此這些AMP可根據(jù)其胞內(nèi)殺傷模式來分類I.結(jié)合核酸,例如，buforin、buforin II和類似物以及速普肽(tachyplesin)；2.胞內(nèi)內(nèi)容物的絮凝，例如，陰離子肽；3.隔膜形成,例如，小菌素(microcin) 25 ;4.細(xì)胞壁合成,例如，mersacidin ;5.抑制核酸合成,例如，pleurocidin和娃皮抗菌肽(dermaseptin)；6.抑制蛋白質(zhì)合成,例如，pleurocidin和娃皮抗菌肽；7.抑制酶活性，例如，蜜蜂抗菌肽。非核糖體合成的肽可以是結(jié)構(gòu)上多樣的。它們經(jīng)常是環(huán)化的或分支的，含有非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸或已被修飾以產(chǎn)生羥基丙氨酸或羥基絲氨酸的氨基酸，并可進(jìn)行羥基化、齒化或糖基化(Walsh等(2004) Science303 :1805-1810)。這些肽的絕大多數(shù)通過透化細(xì)菌的膜來抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。向細(xì)菌遞送肽和核酸的挑戰(zhàn)與對(duì)真核細(xì)胞遇到的那些相似，但是細(xì)胞組分是不同的。具體地，細(xì)菌不具有內(nèi)吞機(jī)制來幫助將治療劑移到細(xì)胞內(nèi)。然而，一個(gè)明顯的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)菌不具有核區(qū)室，所以將治療劑遞送到細(xì)胞質(zhì)足以使其接近細(xì)菌基因組。因此，需要開發(fā)真核遞送系統(tǒng)的替代系統(tǒng)。這包括發(fā)現(xiàn)通過透化膜進(jìn)入細(xì)胞的途徑。在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下，向細(xì)胞遞送DNA (轉(zhuǎn)染)通過用陰離子緩沖液、最常見的是含有鈣離子的緩沖液處理細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)，陰離子緩沖液通過干擾電荷分布破壞細(xì)胞膜?？蛇x地，使用電穿孔，其中在具有低電導(dǎo)的緩沖液中制備細(xì)胞，并使用高電壓來在一些盡管并不是全部細(xì)胞的細(xì)菌膜上產(chǎn)生瞬時(shí)的孔，導(dǎo)致少量細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。顯然在動(dòng)物模型或臨床環(huán)境下使用任一種方法向細(xì)菌遞送DNA治療劑都是不切實(shí)際的。體內(nèi)轉(zhuǎn)染可通過將治療劑綴合到已知破壞膜并導(dǎo)致通過隨后的孔或擠壓進(jìn)入的合成的陽離子肽或ABP實(shí)現(xiàn)。另外，一些ABP易位通過膜的能力是開發(fā)可信賴的遞送策略的
另一替代方案。 從使用遞送肽的真核模型出發(fā)，細(xì)菌遞送肽的理想特征包括I.細(xì)菌特異性/偏好性，優(yōu)化用于原核生物而不是真核生物；2.誘發(fā)抗性的低可能性。例如，改變其外膜電荷密度的MRSA可抵抗陽離子肽；3.廣譜活性，迄今為止用作至細(xì)菌的通用遞送系統(tǒng)；和4.低或無宿主毒性。相似地，使用脂質(zhì)樣轉(zhuǎn)運(yùn)分子需要針對(duì)細(xì)菌膜的特定結(jié)構(gòu)量身定制。例如，革蘭氏陰性細(xì)菌具有外膜和內(nèi)膜，在將治療劑遞送至細(xì)菌內(nèi)之前需要克服這兩種膜。在這一背景下，本發(fā)明提供了核酸序列諸如TFD的制劑和其向細(xì)菌的遞送的解決方案。具體地，本發(fā)明在于一種抗細(xì)菌復(fù)合物，該抗細(xì)菌復(fù)合物包含核酸序列和一種或多種遞送部分。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)自身具有一些抗細(xì)菌活性的遞送部分是理想的。具體地，一種或多種遞送部分當(dāng)與核酸序列組合時(shí)應(yīng)顯示協(xié)同的抗細(xì)菌作用。換言之，遞送部分和核酸序列的組合當(dāng)與核酸序列或遞送部分單獨(dú)的作用相比時(shí)應(yīng)顯示增強(qiáng)的抗細(xì)菌作用。遞送部分可選自季胺化合物和雙氨基烷烴類和其不飽和衍生物，其中如本文所用的術(shù)語”氨基烷烴類”指形成雜環(huán)的一部分的氨基基團(tuán)(優(yōu)選地三價(jià)氨基基團(tuán))。此類化合物的示例是式(I)的化合物
權(quán)利要求
1.一種抗細(xì)菌復(fù)合物，包含核酸序列和至少一種遞送部分，其中所述遞送部分選自季胺化合物；雙氨基烷烴類和其不飽和衍生物，其中所述氨基烷烴的氨基組分是形成雜環(huán)的一部分的氨基基團(tuán)；和抗細(xì)菌肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗細(xì)菌復(fù)合物，其中所述遞送部分選自喹啉或吖啶的四價(jià)衍生物和抗細(xì)菌肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合物，其中所述遞送部分是雙喹啉鎗。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合物，其中所述遞送部分是地喹胺或其類似物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合物，其中所述地喹胺類似物的烷基鏈具有8至14個(gè)甲基基團(tuán)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的復(fù)合物，其中所述烷基鏈具有10或12個(gè)甲基基團(tuán)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的復(fù)合物，其中所述季胺化合物是10，10’_(癸烷-1，10- 二基)雙(9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶)二氯化物。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的復(fù)合物，其中所述季胺化合物是10，10’-(十二烷-1，12-二基)雙(9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶)二氯化物。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的復(fù)合物，其中所述季胺化合物和雙氨基烷烴類和其不飽和衍生物選自式⑴的化合物
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的復(fù)合物，其中所述式(I)的化合物由式(II)表示
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的復(fù)合物，其中R3是Q1且η在所有情形下是0，且其中式(II)的化合物由式(III)表示
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的復(fù)合物，其中所述式(I)的化合物由式(IV)表示
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的復(fù)合物，其中所述式(IV)的化合物由式(V)表示
14.根據(jù)權(quán)利要求I至13中的任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽是天然存在的肽。
15.根據(jù)權(quán)利要求I至13中的任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽是天然存在的肽的肽模擬物或合成變體。
16.根據(jù)權(quán)利要求I至15中的任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽透化細(xì)菌細(xì)胞膜。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽選自包括以下的組防御素、魚類抗菌肽、爪蟾抗菌肽、蛙皮抗菌肽、蜜蜂抗菌肽、天蠶抗菌肽、小菌素和片球菌素。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽選自包括以下的組短桿菌肽和多粘菌素。
19.根據(jù)權(quán)利要求I至15中的任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽具有細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的復(fù)合物，其中所述復(fù)合物還包含連接子。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的復(fù)合物，其中所述連接子是羧基基團(tuán)-至-伯胺交聯(lián)劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求21或權(quán)利要求22所述的復(fù)合物，其中所述連接子是EDC。
23.根據(jù)權(quán)利要求19至22中的任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽選自包括以下的組抗生素、糖肽抗生素、陽離子多肽諸如聚賴氨酸和聚精氨酸。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的復(fù)合物，其中所述抗細(xì)菌肽是Buforin或其衍生物。
25.根據(jù)權(quán)利要求I至24中的任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其中所述核酸序列包含轉(zhuǎn)錄因子的天然細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的序列。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的復(fù)合物，其中所述天然細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)包含細(xì)菌Sig結(jié)合位點(diǎn)的序列。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的復(fù)合物，其中所述核酸序列具有SEQID NO :9、10、30和31、39、40或41所列的序列。
28.根據(jù)權(quán)利要求25所述的復(fù)合物，其中所述天然細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)包含細(xì)菌Fur結(jié)合位點(diǎn)的序列。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的復(fù)合物，其中所述核酸序列具有SEQID ΝΟ:11、12或13所列的序列。
30.一種抗細(xì)菌復(fù)合物，包含 a)包含轉(zhuǎn)錄因子的天然細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的序列的核酸序列，b)10，10’-(十二烷-1，12-二基)雙(9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶)二氯化物；和任選地 c)抗細(xì)菌肽。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的復(fù)合物，其中所述核酸序列具有SEQID N0:30和31所列的序列。
32.根據(jù)權(quán)利要求I至31中任一項(xiàng)所述的復(fù)合物用于治療細(xì)菌感染的用途。
33.一種藥物組合物或藥物，包含根據(jù)權(quán)利要求I至32中的任一項(xiàng)所述的復(fù)合物和生理上可接受的載體或賦形劑。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的藥物組合物或藥物，用于治療細(xì)菌感染。
全文摘要
本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)錄因子誘餌的復(fù)合物、其向細(xì)菌的遞送和其制劑。具體地，本發(fā)明在于一種抗細(xì)菌復(fù)合物，該抗細(xì)菌復(fù)合物包含核酸序列和選自以下的一種或多種遞送部分季胺化合物；雙氨基烷烴類和其不飽和衍生物，其中所述氨基烷烴的氨基組分是形成雜環(huán)的一部分的氨基基團(tuán)；和抗細(xì)菌肽。
文檔編號(hào)A61K38/10GK102791295SQ201180009006
公開日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2011年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月12日
發(fā)明者M.麥克阿瑟 申請(qǐng)人:普羅卡塔生物系統(tǒng)有限公司