專利名稱：一種慢性全身性猴帕金森病模型及其藥物篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種慢性全身性猴帕金森病模型及其藥物篩選方法。
背景技術(shù)：
帕金森病(Parkinson’ s disease,PD)的實驗動物模型已有多種，包括小鼠、大鼠的外科損傷或6-羥多巴立體定向注射毀損的模型等。最有價值的模型動物應(yīng)是和人類神經(jīng)系統(tǒng)尤其是中腦基底節(jié)區(qū)有著相似結(jié)構(gòu)、功能和復(fù)雜程度的物種。靈長類PD動物模型能夠反映PD癥狀的基本特征，是目前最接近人類PD的動物模型，為PD的基礎(chǔ)研究提供了良好的基礎(chǔ)和平臺。人類帕金森病是發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的慢性神經(jīng)變性疾病。往往由一側(cè)肢體發(fā)病，逐漸發(fā)展到對側(cè)肢體，癥狀逐漸加重。當(dāng)前采用頸內(nèi)動脈注射MPTP建立的恒河猴帕金森病模型，由于實驗猴帕金森病樣癥狀出現(xiàn)迅速且局限于一側(cè)，與人類帕金森病的自然進(jìn)程不相符合。因此，建立一種緩慢起病，并出現(xiàn)全身帕金森病樣癥狀的靈長類帕金森病動物模型具有重要價值。目前，有學(xué)者提出采用MPTP注射建立慢性全身性帕金森病模型的方法。但是，這些方法具有建模成本高，建模方法較復(fù)雜的缺點。Russ等連續(xù)四天使用總量為2. 5mg/kg 的MPTP注射建立了慢性帕金森病模型，模型猴在開始注射后13天開始出現(xiàn)帕金森病樣癥狀，在注射結(jié)束后5天，癥狀消失[1]。Albanese等發(fā)現(xiàn)，使用慢性MPTP注射導(dǎo)致紋狀體多巴胺水平降低50%后停止用藥，8個月后，模型猴多巴胺代謝水平恢復(fù)至建模前的正常水平[幻。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種慢性全身性猴帕金森病模型的制備方法。本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了一種治療慢性全身性帕金森病藥物篩選方法。本發(fā)明提供了一種慢性全身性猴帕金森病模型的制備方法，是將劑量為0. 2mg/kg 的MPTP施用于猴，自首次施用日起，每間隔2天施用相同劑量MPTP，連續(xù)施用7次；其后改為每隔3天施用1次，連續(xù)施用7次。其中，所述的MPTP施用方法是靜脈注射。本發(fā)明還提供了該方法制備的動物模型在篩選治療慢性全身性帕金森病的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種篩選治療慢性全身性帕金森病的藥物的方法，它包括如下步驟a、將劑量為0. 2mg/kg的MPTP施用于獼猴，自首次施用日起，每間隔2天為施用相同劑量MPTP，連續(xù)施用7次；其后改為每隔3天施用1次，連續(xù)施用7次，建立慢性全身性猴帕金森病模型；b、將候選藥物、治療慢性全身性帕金森病的經(jīng)典藥物分別施用于動物模型；
C、與治療慢性全身性帕金森病的經(jīng)典藥物比較，觀察候選藥物對慢性全身性帕金森病的癥狀的影響情況，評價潛在治療慢性全身性帕金森病的藥物。其中所述的慢性全身性帕金森病的癥狀包括基本的運動技能狀況、精細(xì)運動、震顫、動作徐緩程序、木僵、運動、姿勢、吃驚反應(yīng)、運動減弱、平衡等。其中，所述的MPTP施用方法是靜脈注射。本發(fā)明建模方法具有如下優(yōu)點1、建模操作簡單，容易實施；2、注射藥物次數(shù)少， 建模成本低；3、模型維持時間長，模型癥狀典型；4、模型癥狀嚴(yán)重程度適中，飼養(yǎng)容易。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明的上述基本技術(shù)思想前提下，還可以作出其它多種形式的修改、替換和變更。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1 :M9在注射MPTP 7次后出現(xiàn)木僵，面具臉圖2 :M12在注射MPTP 7次后出現(xiàn)面具臉，運動減少圖3 實驗猴對刺激反應(yīng)減弱，運動遲緩，但軀體姿勢受影響較小圖4:注射MPTP后3個月(B)，雙側(cè)腦糖代謝較建模前㈧顯著降低圖5 右側(cè)丘腦HE X 400圖6 左側(cè)丘腦HE X 400圖7 實驗猴腦左右側(cè)紋狀體TH染色THX 100圖8 實驗猴腦左右側(cè)紋狀體TH染色TH X 400圖9 實驗猴腦左右側(cè)紋狀體D2受體染色D2 X 100圖10 實驗猴腦左右側(cè)紋狀體&受體染色& X 400
具體實施例方式實施例1本發(fā)明動物模型的制備一、材料和方法1.實驗動物入選參照實驗猴納入標(biāo)準(zhǔn)(見后述)，由四川平安實驗動物繁育中心購入4只健康成年獼猴。年齡5-6歲，體重4. 8-6. 3Kg,雄性2只，雌性2只，分別以M9，MlO，Ml 1，M12代表。 經(jīng)檢驗、檢疫合格后，置于國家(成都)中藥安全性評估中心(GLP)大動物飼養(yǎng)中心飼養(yǎng)。實驗猴納入標(biāo)準(zhǔn)①、年齡4-7歲；②、有血液常規(guī)、生化和傳染病等檢測報告，且檢查結(jié)果正常，無傳染??；③、既往未接受其他實驗研究；④、體重4_7Kg;⑤、軀干、肢體及頭面部活動自如；⑥、對外界環(huán)境及刺激反應(yīng)正常。
表1 各實驗猴基本資料
權(quán)利要求
1.一種慢性全身性猴帕金森病模型的制備方法，其特征在于將劑量為0. 2mg/kg的 MPTP施用于猴，自首次施用日起，每間隔2天施用相同劑量MPTP，連續(xù)施用7次；其后改為每隔3天施用1次，連續(xù)施用7次。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的慢性全身性猴帕金森病模型的制備方法，其特征在于所述的MPTP施用方法是靜脈注射。
3.權(quán)利要求1或2所述的方法制備的動物模型在篩選治療慢性全身性帕金森病的藥物中的用途。
4.一種篩選治療慢性全身性帕金森病的藥物的方法，它包括如下步驟a、將劑量為0.2mg/kg的MPTP施用于獼猴，自首次施用日起，每間隔2天為施用相同劑量MPTP，連續(xù)施用7次；其后改為每隔3天施用1次，連續(xù)施用7次，建立慢性全身性猴帕金森病模型；b、將候選藥物、治療慢性全身性帕金森病的經(jīng)典藥物分別施用于動物模型；c、與治療慢性全身性帕金森病的經(jīng)典藥物比較，觀察候選藥物對慢性全身性帕金森病的癥狀的影響情況，評價潛在治療慢性全身性帕金森病的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的篩選藥物的方法，其特征在于所述的MPTP施用方法是靜脈注射。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種慢性全身性猴帕金森病模型的制備方法，將劑量為0.2mg/kg的MPTP施用于猴，自首次施用日起，每間隔2天施用相同劑量MPTP，連續(xù)施用7次；其后改為每隔3天施用1次，連續(xù)注射7次。本發(fā)明還提供了一種篩選治療慢性全身性帕金森病的藥物的方法。本發(fā)明建模方法具有如下優(yōu)點1、建模操作簡單，容易實施；2、注射藥物次數(shù)少，建模成本低；3、模型維持時間長，模型癥狀典型；4、模型癥狀嚴(yán)重程度適中，飼養(yǎng)容易。
文檔編號A61P25/16GK102526047SQ201010608850
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月28日
發(fā)明者劉文科, 李宏霞, 李鵬, 王偉, 王莉 申請人:四川大學(xué)華西醫(yī)院, 國家成都中藥安全性評價中心, 成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司