專利名稱：：一種含有活性劑分子的抗體結(jié)合的合成囊泡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明大體涉及一種靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)(PNS)的細(xì)胞的合成囊泡，尤其是一種抗體結(jié)合的合成囊泡，用于輸送包含在囊泡中的分子至表達(dá)抗體的受體靶標(biāo)的細(xì)胞。
背景技術(shù)：
：每年大約270,000人經(jīng)受中度至重度創(chuàng)傷性腦損傷(traumaticbraininjury,TBI)。TBI是“由外部物理力量導(dǎo)致的對(duì)腦的后天性損傷...導(dǎo)致?lián)p害一個(gè)或更多方面，如認(rèn)知；語(yǔ)言；記憶；注意力；推理；抽象思維；判斷；解決問(wèn)題；感覺(jué)、知覺(jué)和運(yùn)動(dòng)能力；社會(huì)心理行為；生理功能；信息處理；及說(shuō)話能力”。TBI可以產(chǎn)生于許多損傷類型，示例性地包括交通意外、暴力行為、運(yùn)動(dòng)損傷、生理異常、或者疾??；酒精與超過(guò)一半的物理性損傷發(fā)生有關(guān)。TBI是工業(yè)化國(guó)家中45歲以下的人死亡和殘疾的首要原因(McAllister，1992)。在美國(guó)每年估計(jì)發(fā)生的150萬(wàn)例頭部創(chuàng)傷(headtraumas)中，50萬(wàn)可能需要住院，80，000導(dǎo)致某種慢性殘疾(Langloisetal，2006)。疾病控制中心(TheCenterforDiseaseControl，⑶C)估計(jì)目前至少有530萬(wàn)美國(guó)人，或約2%人口，由于TBI在每日生活活動(dòng)方面需要長(zhǎng)期協(xié)助(Langloisetal，2006)。此外，每年用于TBI的總健康費(fèi)用達(dá)到大約350億美元(Maxetal，1991)。盡管這種損傷形式流行和嚴(yán)重，但是仍然沒(méi)有研發(fā)出有效的治療。TBI與許多長(zhǎng)期疾病例如阿爾茨海默氏和帕金森氏癥(Alzheimer‘sandParkinson'sdisease)).1];(dementiapuglistica)、禾口損貞后^liiit匿^不:所有來(lái)自TBI的損害都發(fā)生在傷害的瞬間，而是通過(guò)繼發(fā)損害發(fā)生。繼發(fā)性腦損害可能是，例如，新陳代謝過(guò)程比如最初傷害后腦部缺氧的結(jié)果。繼發(fā)性腦損害的主要原因之一是整個(gè)大腦的谷氨酸(glutamate)水平的提高。谷氨酸結(jié)合至可以在腦細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的谷氨酸受體，允許鈣進(jìn)入胞內(nèi)液，細(xì)胞質(zhì)。當(dāng)過(guò)多的鈣進(jìn)入腦細(xì)胞，導(dǎo)致最終殺死細(xì)胞的許多事件。這些事件包括活性氧數(shù)目增加、線粒體功能障礙、蛋白酶和磷脂酶(phospholipidase)過(guò)度激活、和鈣誘導(dǎo)的鈣釋放。所有這些事件都導(dǎo)致細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡(程序性細(xì)胞死亡的兩種形式)(WangandYuen(1994).TrendsPharmacol.Sci.15，412-419)。類似的CNS和PNS細(xì)胞紊亂、受傷或死亡也可能發(fā)生在其它人類疾病例如中風(fēng)、蛛網(wǎng)膜下腔出血、癲癇、痙攣、神經(jīng)性疼痛、頭痛、帕金森氏癥、阿爾茨海默氏癥、亨廷頓癥(Huntingtondisease)、多發(fā)性硬化癥中。有一些藥物可以防止或減輕繼發(fā)損害事件的發(fā)生。這樣一種藥物族包括蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的一個(gè)問(wèn)題是，即使它們已知是保護(hù)細(xì)胞的，由于生理不穩(wěn)定，它們具有差的藥代動(dòng)力學(xué)(pharmacokinetics)和動(dòng)力學(xué)(dynamics)。此外，如果身體經(jīng)受過(guò)量的這些藥物，病人處于許多不期望的副作用的風(fēng)險(xiǎn)中。最后，難以同時(shí)施用多種藥物。通過(guò)解釋物理或化學(xué)應(yīng)力后響應(yīng)腦細(xì)胞的生化反應(yīng)的啟動(dòng)子或抑制信號(hào)，可以闡明一系列預(yù)期有效的化合物的一個(gè)或更多個(gè)的效力。通過(guò)例子的方式，鈣激活細(xì)胞質(zhì)蛋白酶鈣蛋白酶已知在壞死前細(xì)胞損傷中激活，而半胱天冬蛋白酶已知在凋亡前細(xì)胞損傷中激活，并涉及降解腦細(xì)胞的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)蛋白，導(dǎo)致組織自身消化作為T(mén)BI級(jí)聯(lián)的部分。這些問(wèn)題有可能通過(guò)使用靶向的和/或保護(hù)的輸送而解決。例如，癌癥研究者一直試圖開(kāi)發(fā)用于化療的可以專門(mén)針對(duì)細(xì)胞類型或細(xì)胞表型的可靶向的分子，以便它們有區(qū)別地殺死癌細(xì)胞，因?yàn)檫@會(huì)增加癌癥治療的效果，同時(shí)降低不利事件或其它副作用的風(fēng)險(xiǎn)。然而，TBI具有以前的研究沒(méi)有正確解決的特殊問(wèn)題。例如，輸送系統(tǒng)要求能夠識(shí)別生理正常的或已經(jīng)經(jīng)受最初損傷或繼發(fā)損傷傳遞物的神經(jīng)組織。此外，輸送系統(tǒng)需要能夠定位靶向神經(jīng)組織，同時(shí)區(qū)分開(kāi)其它組織類型，能夠容易地施用給需要的病人。最后，神經(jīng)介質(zhì)是獨(dú)一無(wú)二的，給予相對(duì)于其它組織可認(rèn)識(shí)到的考驗(yàn)。因此，對(duì)用于輸送貨物分子至對(duì)象中CNS和PNS細(xì)胞的具有細(xì)胞特異性和具有在輸送中保護(hù)貨物分子的組合物和方法存在需要。
發(fā)明內(nèi)容提供了一種用于輸送至少一活性劑貨物分子進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞的方法，其中貨物分子置于合成囊泡例如脂質(zhì)體中，生物素化蛋白例如抗體結(jié)合至合成囊泡以形成蛋白結(jié)合的合成囊泡，其中蛋白識(shí)別表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞的表面上的受體，將蛋白結(jié)合的合成囊泡接觸細(xì)胞直到貨物分子輸送進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)。許多貨物分子通過(guò)發(fā)明的包括鈣蛋白酶抑制劑和半胱天冬蛋白酶抑制劑的合成囊泡進(jìn)行輸送。蛋白示例性地靶向用于配體如谷氨酸(glutamate)、甘氨酸(glycine)、多巴胺(dopamine)、尼古丁(nicotine)、毒蕈堿(muscarine)、乙酰膽堿(acetylcholine)、或羥色胺(serotonin)等等的細(xì)胞受體。在發(fā)明的方法中，在所述合成囊泡結(jié)合生物素化蛋白之前，貨物分子可選地裝入所述合成囊泡中。同時(shí)，合成囊泡可選地用置于中間的親和素或鏈霉親和素結(jié)合生物素化蛋白?？衫斫饨佑|神經(jīng)細(xì)胞是在體外(invitro)、間接體內(nèi)(exvivo)、或在體內(nèi)(invivo)，細(xì)胞可選地是在對(duì)象的中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周邊神經(jīng)系統(tǒng)中。還提供一種組合物，其可選地是具有容積和外表面的合成囊泡，在合成囊泡的容積內(nèi)具有貨物分子，生物素化抗體結(jié)合至合成囊泡的外表面，其中抗體識(shí)別表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞的表面上的受體。抗體優(yōu)選地定向到用于配體如谷氨酸、甘氨酸、多巴胺、尼古丁、毒蕈堿、乙酰膽堿、或羥色胺等等的細(xì)胞受體。優(yōu)選地，配體是谷氨酸。優(yōu)選地，貨物分子是鈣蛋白酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑、或它們的組合。發(fā)明的組合物優(yōu)選地是脂質(zhì)體，聚己酸內(nèi)酯(polycaprolactone，PCL)，或聚乳酸-羥基乙酸共聚物(polydactic-co-glycolicacid)，PLGA)。另外，合成囊泡優(yōu)選地用置于中間的親和素或鏈霉親和素結(jié)合至抗體。優(yōu)選地，合成囊泡是生物素化的。還提供了一種治療CNS細(xì)胞的疾病、傷害或健康狀況的方法，其中發(fā)明的組合物施用至對(duì)象。優(yōu)選地，健康狀況是創(chuàng)傷性腦損傷。貨物分子優(yōu)選地是凋亡抑制劑例如鈣蛋白酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑、或它們的組合。輸送發(fā)明的組合物優(yōu)選地輸送凋亡抑5制劑至受到創(chuàng)傷的CNS細(xì)胞。還提供了一種用于生產(chǎn)發(fā)明的組合物的方法，包括形成合成囊泡，將生物素化磷脂酰乙醇胺專門(mén)整合進(jìn)所述外表面中。優(yōu)選地，在形成合成囊泡時(shí)存在貨物分子。同時(shí)，優(yōu)選地，在抗體結(jié)合合成囊泡之前，親和素或鏈霉親和素結(jié)合至抗體。圖1是說(shuō)明發(fā)明的方法的示意圖。圖2是說(shuō)明抗體識(shí)別表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞上的受體的Western雜交。圖3是說(shuō)明抗體結(jié)合至細(xì)胞表面的顯微照片。圖4是說(shuō)明鏈霉親和素偶聯(lián)至封裝貨物分子的脂質(zhì)體的顯微照片。圖5A-C是說(shuō)明免疫脂質(zhì)體結(jié)合至神經(jīng)細(xì)胞表面并內(nèi)化的顯微照片。圖6是說(shuō)明在激發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞中SBDP形成抑制的凝膠電泳。圖7A-B是分別說(shuō)明激發(fā)的和施用發(fā)明的脂質(zhì)體的細(xì)胞中完整的αII-血影蛋白的量的條形圖和凝膠電泳。圖8Α-Β是說(shuō)明免疫脂質(zhì)體在神經(jīng)細(xì)胞中結(jié)合和攝入的顯微照片。和圖9是說(shuō)明通過(guò)施用免疫脂質(zhì)體至激發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞后神經(jīng)細(xì)胞死亡減少的條形圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明在通過(guò)使用抗體將囊泡靶向細(xì)胞從而輸送合成囊泡的內(nèi)部貨物至細(xì)胞中具有用途。囊泡貨物使用例如有助于細(xì)胞成像的染料，而治療物貨物對(duì)具有負(fù)面健康狀況或紊亂的細(xì)胞提供了靶向輸送和治療。隨著囊泡被細(xì)胞內(nèi)化，囊泡貨物將執(zhí)行特定功能如保護(hù)細(xì)胞免于程序性細(xì)胞死亡(抑制劑)或其它損傷病變(DNA，siRNA，治療物)或促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和更換(干細(xì)胞或促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng)和/或分化的藥物)。術(shù)語(yǔ)“抗體”指免疫球蛋白，其特異性結(jié)合并因此定義為與表達(dá)在細(xì)胞表面上的物體的特定空間和極性結(jié)構(gòu)構(gòu)成互補(bǔ)，具體包括作為用于抗體的靶向物體的細(xì)胞表面受體?？贵w可以是單克隆的或多克隆的，并且可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的技術(shù)進(jìn)行制備，如免疫宿主和收集血清(多克隆的)，或通過(guò)制備連續(xù)雜交細(xì)胞系并收集分泌的蛋白(單克隆的)，或通過(guò)克隆和表達(dá)至少編碼用于對(duì)于特異性結(jié)合天然抗體所需的氨基酸序列的核苷酸序列或其誘變突變體。也可以使用完整的抗體，其片段(例如，F(xiàn)ab或的F(ab')2))，或其基因工程變體(如sFv)。這些抗體可以是包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD和其任何亞型的任何免疫球蛋白類?？蛇x地標(biāo)記抗體、生物素，親和素、鏈霉親和素、脂質(zhì)、貨物分子、或其它有用于作為本發(fā)明的組分的分子。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道在這里可操作的許多標(biāo)記。標(biāo)記和標(biāo)記試劑盒是可選地從hvitrogenCorp，Carlshd，CA市售可得的。標(biāo)記示例性地包括熒光標(biāo)記、生物素、過(guò)氧化物酶、放射性核苷酸(radionucleotides)、膠體金，磁性粒子、酶、或其它本領(lǐng)域已知的標(biāo)記。術(shù)語(yǔ)“合成囊泡”指形成的具有從50到5000納米直徑的能夠在其中攜帶貨物分子的中空結(jié)構(gòu)。在這里可操作的合成囊泡示例性地包括脂質(zhì)體和由聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)構(gòu)成的結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)體是由脂雙層膜構(gòu)成的含有封裝的水性容積的完全封閉的結(jié)構(gòu)?？蛇x地，單層和膠束(micelle)也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，合成囊泡是雙層脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可以包含由水相分隔的許多同心脂雙層(多層囊泡(multilamellarvesicles)或MLVs)，或可以由單個(gè)雙層膜構(gòu)成(單層囊泡)。在本發(fā)明中使用的脂質(zhì)體可以具有多種組合物和內(nèi)容物，并可以是多層、單層或其它類型脂質(zhì)體的形式，或更普遍地，含脂顆粒，現(xiàn)在已知的或以后開(kāi)發(fā)的。例如，含脂顆?？梢允橇趔w脂質(zhì)體(steroidalliposomes)的形式，美國(guó)專利US599691，含α-維生素E的脂質(zhì)體，美國(guó)專利US786740，穩(wěn)定多層脂質(zhì)體(stableplurilamellarliposomes,SPLVs)，美國(guó)專禾IjUS4522803,單相囊泡(monophasicvesicles,MPVs)，美國(guó)專利US4588578，或脂質(zhì)基質(zhì)載體(lipidmatrixcarriers，LMC)，美國(guó)專利US4610868，其相關(guān)部分在這里通過(guò)參考納入?？梢栽诒景l(fā)明中使用的脂質(zhì)體的類別中，優(yōu)選地，是一種脂質(zhì)體亞類，特征是具有溶質(zhì)分布大致等于在其中制備的溶質(zhì)分布環(huán)境。這個(gè)亞類可以被定義為穩(wěn)定多層囊泡(SPLV)、單相囊泡(MPVs)、冷凍和解凍的多層囊泡(thawedmultilamellarvesicles,FATMLVs),如在〃SoluteDistributionsandTrappingEfficienciesObservedinFreeze-ThawedMultilamellarVesicles"Mayeretal.BiochimicaetBiophysicaActa817:1983-196(1985)中所描述的。相信SPLV型脂質(zhì)體的特別的穩(wěn)定性產(chǎn)生于伴隨溶質(zhì)平衡的低能量狀態(tài)?？商鎿Q地，用于生產(chǎn)大單層脂質(zhì)體(largeunilamellarliposomes，LUVs)所使用的技術(shù)，如反相蒸發(fā)，輸注程序和清潔劑稀釋，可以用于生產(chǎn)脂質(zhì)體。對(duì)于用于生產(chǎn)脂質(zhì)體的這些技術(shù)禾口其它方法可以在文章Liposomes,MarcJ.Ostro,ed.，MarcelDekker,Inc.，NewYork,1983,Chapter1中找到，其有關(guān)部分在這里通過(guò)參考納入。在一優(yōu)選的具體實(shí)施例中，脂質(zhì)體是一種非對(duì)稱的雙層。示例性地，脂質(zhì)體雙層形成產(chǎn)生對(duì)稱的雙層之后，組分如生物素化PE隨后加到外膜層形成非對(duì)稱的雙層表面。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是使用常規(guī)技術(shù)優(yōu)化貨物分子裝入囊泡的內(nèi)部容積中并同時(shí)減小囊泡聚集效應(yīng)可以形成預(yù)制和可選地預(yù)裝的對(duì)稱囊泡。合成囊泡可選地由生物素-磷脂整合進(jìn)脂質(zhì)體的表面，生物素-多酸整合進(jìn)PLGA囊泡的表面或生物素-多酸整合進(jìn)PCL囊泡的表面構(gòu)成。囊泡可選地用多種磷脂部分生產(chǎn)，示例性地包括卵磷脂(phosphatidylcholine)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine)、磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine)，PEG化磷月旨(PEGylatedphospholipids)、鞘磷脂(sphingomyelin)、它們的修飾物、和本領(lǐng)域已知的磷酸化或非磷酸化的其它脂質(zhì)。磷脂示例性地來(lái)自多種來(lái)源，示例性地包括大豆、雞蛋、或其它來(lái)源。合成囊泡可選地通過(guò)在脂層中具有一個(gè)或更多的固醇(sterol)而形成。優(yōu)選地，固醇是膽固醇，但其它固醇如麥角固醇(ergosterol)、羊毛甾醇(lanosterol，)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、豆留醇(stigmasterol)等等。進(jìn)一步可理解固醇的修飾物是同樣可操作的。合成囊泡可選地是固體脂質(zhì)納米顆粒(solidlipidnanoparticles，SLN)或納米結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)載體(nanostructuredlipidcarriers，NLC)，它們是兩種主要類型的脂質(zhì)納米顆粒。制備了生物素化抗體或抗體免疫原性片段，其識(shí)別抗原至細(xì)胞表達(dá)蛋白例如谷氨酸受體、促代謝型谷氨酸受體(metabotropicglutamaterec印tors，mGluR)、和識(shí)別配體示例性地包括谷氨酸、甘氨酸、多巴胺、尼古丁、毒蕈堿、乙酰膽堿和羥色胺的受體。優(yōu)選地，受體在神經(jīng)元細(xì)胞例如神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞示例性地包括星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)。然后抗體通過(guò)引入鏈霉親和素或親和素去同時(shí)結(jié)合生物素化抗體和生物素化合成囊泡從而偶聯(lián)至合成囊泡。在一優(yōu)選的具體實(shí)施例中，在結(jié)合抗體或其它蛋白之前，合成囊泡已經(jīng)預(yù)裝了用于細(xì)胞輸送的一種或更多種類型的貨物分子?？商鎿Q地，合成囊泡可選地用響應(yīng)濃度梯度形成跨層的跨膜電位這種方式制備。該濃度梯度可以通過(guò)鈉/鉀位(sodium/potassiumpotential)或pH值形成。在內(nèi)部與外部的電位差異是一種驅(qū)動(dòng)可電離的貨物分子裝載合成囊泡的可能的機(jī)制?？衫斫馊缓箜憫?yīng)跨膜電位發(fā)生預(yù)制的合成囊泡的延遲裝載。因此，在一個(gè)或更多個(gè)保護(hù)糖如以脫水狀態(tài)儲(chǔ)存的雙糖海藻糖和蔗糖的存在下，這些合成囊泡可以脫水，由于具有離子梯度和相關(guān)的積累離子型貨物分子的能力，隨后復(fù)水?！懊庖吆铣赡遗荨?，其中免疫脂質(zhì)體是一個(gè)亞類，示例性地通過(guò)下述步驟制備(i)允許脂質(zhì)體封裝貨物分子如熒光染料(Hoechst-33258，葡聚糖_熒光素(Dectran-Fluorescein)和葡聚糖-羅丹明綠(Dextran-RhodamineGreen))；(ii)通過(guò)使用整合進(jìn)脂質(zhì)體表面的生物素化磷脂將脂質(zhì)體結(jié)合至鏈霉親和素；然后(iii)將該結(jié)構(gòu)連接，至少，每個(gè)合成囊泡一個(gè)生物素化抗體?？衫斫?，優(yōu)選地，在將生物素-鏈霉親和素結(jié)合抗體接觸生物素化合成囊泡之前，鏈霉親和素連接或結(jié)合至生物素化蛋白或抗體?？贵w優(yōu)選地對(duì)兩個(gè)神經(jīng)元特異性受體(谷氨酸受體亞型N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸受體-l(N-methyl-D-AsparateReceptor-l,NMDA-Rl)或甘氨酸受體)之一是特異性的，將它們結(jié)合至在步驟(ii)整合的鏈霉親和素。然后該免疫脂質(zhì)體制劑與培養(yǎng)的大鼠大腦皮層或小腦顆粒神經(jīng)元或分化的神經(jīng)PC-12細(xì)胞一起孵育，在那里將檢測(cè)免疫脂質(zhì)體通過(guò)結(jié)合至脂質(zhì)體的抗體結(jié)合神經(jīng)細(xì)胞表面的受體和可選地輸送貨物分子至靶向細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)空間或細(xì)胞質(zhì)的能力。整個(gè)脂質(zhì)體可以可選地內(nèi)化，以便封裝的熒光染料或其它貨物分子在神經(jīng)元內(nèi)釋放。幾種不同類型的發(fā)明的脂質(zhì)體可選地用抗體類型、脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)組分(脂質(zhì))和封裝的分子(貨物分子)的變體進(jìn)行生產(chǎn)。優(yōu)選地，使用了兩種類型的抗體，NMDA受體抗體和甘氨酸受體抗體。兩種受體都可以在神經(jīng)細(xì)胞如CGN或人或動(dòng)物體內(nèi)神經(jīng)元表面發(fā)現(xiàn)。脂質(zhì)體可選地在貨物分子存在或不存在下形成。熒光染料的類型示例性地包括Hoechst-33258，葡聚糖-羅丹明綠和葡聚糖-FITC。示例性使空脂質(zhì)體攝取染料Hoechst-33258和葡聚糖-羅丹明綠，自制脂質(zhì)體在染料葡聚糖-FITC存在下封裝染料葡聚糖-FITC(見(jiàn)表1)。表1制備的封裝染料的脂質(zhì)體類型權(quán)利要求1.一種用于輸送活性劑分子貨物進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞的方法，其特征在于，包括將至少一活性劑貨物分子置于合成囊泡中；將生物素化蛋白結(jié)合至所述合成囊泡以形成蛋白結(jié)合的合成囊泡，所述蛋白識(shí)別表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞的表面的受體；和將所述細(xì)胞接觸所述蛋白結(jié)合的合成囊泡直到所述至少一活性劑貨物分子輸送進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述蛋白是抗體。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述至少一活性劑貨物分子是鈣蛋白酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑、或它們的組合。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述合成囊泡是脂質(zhì)體。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述受體是用于選自包括谷氨酸、甘氨酸、多巴胺、尼古丁、毒蕈堿、乙酰膽堿或羥色胺的組合的配體的細(xì)胞受體。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中在所述合成囊泡結(jié)合生物素化蛋白之前，所述至少一活性劑貨物分子裝入所述合成囊泡中。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述合成囊泡通過(guò)置于中間的親和素或鏈霉親和素結(jié)合至所述生物素化蛋白。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述神經(jīng)細(xì)胞是體外的或間接體內(nèi)的。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述神經(jīng)細(xì)胞是體內(nèi)的。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述神經(jīng)細(xì)胞是在對(duì)象的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述神經(jīng)細(xì)胞是在對(duì)象的周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中。12.—種組合物，其特征在于，包括具有容積和外表面的合成囊泡；在所述合成囊泡的容積內(nèi)的至少一活性劑貨物分子；結(jié)合至所述合成囊泡的外表面的生物素化抗體，所述抗體識(shí)別表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞的表面的受體。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其特征在于，其中所述受體是用于選自包括谷氨酸、甘氨酸、多巴胺、尼古丁、毒蕈堿、乙酰膽堿或羥色胺的組合的配體的細(xì)胞受體。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其特征在于，其中所述配體是谷氨酸。15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其特征在于，其中所述合成囊泡是脂質(zhì)體，聚乳酸-羥基乙酸共聚物或聚己酸內(nèi)酯。16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其特征在于，還包括位于所述生物素化抗體和所述合成囊泡之間的親和素或鏈霉親和素。17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其特征在于，其中所述合成囊泡是生物素化的。18.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其特征在于，其中所述至少一活性劑貨物分子是鈣蛋白酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑、或它們的組合。19.一種治療CNS細(xì)胞的疾病、傷害或健康狀況的方法，其特征在于，包括將根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物輸送至對(duì)象。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，其中所述健康狀況是創(chuàng)傷性腦損傷。21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，其中所述至少一活性劑貨物分子是凋亡或脹亡抑制劑。22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述凋亡或脹亡抑制劑選自鈣蛋白酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑、或它們的組合的組合。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述處理是輸送所述凋亡或脹亡抑制劑至經(jīng)受創(chuàng)傷的CNS細(xì)胞。24.一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物的方法，其特征在于，包括形成合成囊泡；和將生物素化磷脂酰乙醇胺專門(mén)整合進(jìn)所述外表面中。25.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其特征在于，在形成合成囊泡時(shí)所述至少一活性劑貨物分子存在。26.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其特征在于，在所述抗體結(jié)合至所述合成囊泡之前，親和素或鏈霉親和素結(jié)合至所述抗體。27.一種劑型，其特征在于，包括根據(jù)權(quán)利要求12-18任一所述的組合物作為活性成分，與一個(gè)或更多個(gè)可接受的載體、賦形劑或媒介物連接。28.根據(jù)權(quán)利要求12-18任一所述的組合物在制備用于細(xì)胞間輸送活性劑貨物分子至神經(jīng)細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。29.—種商業(yè)包裝，其特征在于，包括權(quán)利要求12所述的組合物作為活性成分，及用于其輸送活性劑貨物分子至神經(jīng)細(xì)胞的使用說(shuō)明書(shū)。30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，基本上如在任何實(shí)例中在這里所描述的。全文摘要本發(fā)明提供了一種用于輸送至少一活性劑貨物分子進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞的方法，其中貨物分子置于合成囊泡例如脂質(zhì)體中；生物素化蛋白例如抗體結(jié)合至所述合成囊泡以形成蛋白結(jié)合的合成囊泡，其中所述蛋白識(shí)別表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞的表面的受體；和將所述蛋白結(jié)合的合成囊泡接觸所述細(xì)胞直到所述貨物分子輸送進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞。各種貨物分子通過(guò)發(fā)明的合成囊泡進(jìn)行輸送，包括鈣蛋白酶抑制劑和半胱天冬蛋白酶抑制劑。蛋白示例性地靶向用于配體例如谷氨酸、甘氨酸、多巴胺、尼古丁、毒蕈堿、乙酰膽堿或羥色胺等等的細(xì)胞受體。文檔編號(hào)A61P25/28GK102065894SQ200980122491公開(kāi)日2011年5月18日申請(qǐng)日期2009年4月17日優(yōu)先權(quán)日2008年4月17日發(fā)明者喬納森·王,凱文·卡王·王,斯蒂芬·弗蘭克·拉爾內(nèi)爾,賈里德·V·古德曼申請(qǐng)人:班揚(yáng)生物標(biāo)記公司