專利名稱：高血壓小鼠模型的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種高血壓小鼠模型的制備方法。具體涉及一種通過寒冷刺激制備用于高血 壓發(fā)病機制及治療方法研究的動物模型的方法。
背景技術：
妊娠高血壓是妊娠期特有的一種疾病，主要表現(xiàn)為妊娠20周后出現(xiàn)高血壓、水腫、蛋白 尿。嚴重者有頭痛、頭昏、眼花等自覺癥狀，甚至出現(xiàn)抽搐及昏迷。 一般在妊娠結(jié)束后血壓 恢復正常。在我國的發(fā)病率為5~8%，是臨床上導致孕、產(chǎn)婦死亡的三大病因之一，也是胎兒 宮內(nèi)發(fā)育遲緩、導致嬰幼兒死亡的原因之一。妊娠高血壓征的病理學基礎至今不明，在過去 的50多年中，妊娠高血壓征的發(fā)生率和治療都沒有根本性的改變，在嚴重的情形下，唯一有 效的手段是提前終止妊娠。
建立合適的動物模型模仿人類妊娠高血壓征，有助于人們了解妊娠高血壓征的病理發(fā)生 和發(fā)展進程，幫助理解與妊娠高血壓征有關的病因?qū)W因素，建立臨床上的診斷指標，對篩選 治療藥物具有重大意義，還有助于詳細研究妊娠高血壓征對子代發(fā)育的影響，為提前介入治 療提供實驗依據(jù)。
人們己經(jīng)根據(jù)不同目的和手段制備成功多種高血壓動物模型。如腎性高血壓模型、神經(jīng) 型高血壓模型、腎外包扎型高血壓模型、腎上腺燙傷型高血壓模型、詞喂致高血壓、藥物誘 導致高血壓、環(huán)境誘導致高血壓等。在探討人類高血壓發(fā)病機理，設計和開發(fā)抗高血壓藥物， 大鼠高血壓模型都起了非常重要的作用。
由于妊娠高血壓征的最主要特點是高血壓，妊娠高血壓征建模的首要目的是使動物產(chǎn)生 高血壓。目前建模方法大致可以分為以下幾種手術形成，藥物誘導，遺傳改造，環(huán)境誘導。 手術形成的高血壓模型一般選用狗、兔、大鼠，成功率較高，但進行手術較為繁瑣，需要施 術者有一定技術，獲得的動物數(shù)量有限。藥物誘導形成的高血壓模型使用較多的藥物有脫氧 皮質(zhì)酮醋酸鹽、左旋硝基精氨酸甲酯、胰島素、阿霉素、鏈脲霉素等，在研究妊娠高血壓征 的發(fā)病機理和妊娠高血壓征對胎兒發(fā)育的影響方面都取得了一些成果，但是藥物也可能對妊 娠產(chǎn)生不利影響。通過遺傳改造制備的轉(zhuǎn)基因或基因突變高血壓模型，由于其導致高血壓的 基因的遺傳性，實際上不適用于研究自然妊娠高血壓征的病理和妊娠高血壓征對胎兒發(fā)育的 影響。
應該指出，上面提到的每一個妊娠高血壓征模型都是以研究高血壓為主要特征，還不能 完全模擬人類妊娠高血壓征的各個方面。因為還不明了妊娠高血壓征的病因?qū)W原理，使用不 同的研究模型，每一種模型都通過不同的機理誘導出相同的結(jié)果，這是非常有利的。
因而，目前迫切需要建立一種穩(wěn)定、便捷、成本合理的妊娠高血壓小鼠模型，以便順利 開展疾病發(fā)病機制及治療方法的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足,提供一種高血壓小鼠模型的制備方法。
本發(fā)明的技術方案如下
一種高血壓小鼠模型的制備方法，其特征在于將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模 型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模型組小鼠，放于2 6'C的環(huán)境中進行寒冷刺 激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為2~6小時，結(jié)束后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對 照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激 后的第16 20天測定小鼠血壓，收縮壓超過UO毫米汞柱即為高血壓小鼠模型制備成功。將所述的模型組小鼠放于2'C的環(huán)境中進行寒冷刺激。 將所述的模型組小鼠放于4'C的環(huán)境中進行寒冷刺激。 將所述的模型組小鼠放于6'C的環(huán)境中進行寒冷刺激。 所述每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為2小時。 所述每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為4小時。 所述每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為6小時。 上述高血壓小鼠模型的制備方法，具體步驟如下
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為四組，即正常對照組、冷激2小時組、冷激4小時 組、冷激6小時組。平時四組小鼠都置于25'C環(huán)境中正常飼養(yǎng)，每天分別對各組小鼠進行如
下處理
(1) 正常對照組將小鼠置于25'C環(huán)境中正常飼養(yǎng)。
(2) 冷激2小時組每天上午8 : 00 10 : 00，將小鼠置于2-6'C的寒冷環(huán)境進行剌激， 寒冷刺激結(jié)束后立即送回動物飼養(yǎng)室，反復刺激16~20天。
(3) 冷激4小時組每天上午8 : 00 12 : 00，將小鼠置于2-6'C的寒冷環(huán)境進行刺激， 寒冷刺激結(jié)束后立即送回動物伺養(yǎng)室，反復刺激16 20天。
(4) 冷激6小時組每天上午8 : 00 14 : 00，將小鼠置于2 6。C的寒冷環(huán)境進行刺激， 寒冷刺激結(jié)束后立即送回動物飼養(yǎng)室，反復剌激16-20天。
(5) 刺激結(jié)束，分別對每一組小鼠稱量體重，麻醉，測量血壓。 本發(fā)明方法的特點為采用
本發(fā)明制備的高血壓小鼠模型的評價方法包括小鼠一般情況的觀察、血壓的檢測等，所 有評價方法均為常規(guī)方法。評價結(jié)果表明，模型組的血壓明顯高于對照組。
本發(fā)明復制的高血壓小鼠模型穩(wěn)定性好、與臨床病理相似度高、制備速度快等優(yōu)點，適 合于妊娠高血壓發(fā)病機制及治療方法的研究。
具體實施例方式
實施例一
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus)，中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g,購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2'C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BSi24S，精確度0.0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于2i:的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為2小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷剌激后的第16天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。
實施例二
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus)，中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2'C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BS124S，精確度0.0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于4'C的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為2小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物詞養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷 刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第18天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。
實施例三
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus)，中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2. C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BS124S，精確度0.0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于6'C的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為2小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷 刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第20天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱即為高血壓小鼠模型制備成功。
實施例四
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus)，中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2'C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BS124S，精確度0. 0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于2'C的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為4小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷 刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第18天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。
實施例五
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus),中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2'C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BS124S，精確度0.0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于4'C的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為4小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷 剌激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第18天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。實施例六
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus)，中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2'C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BS124S，精確度0. 0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于6'C的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為4小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷 刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第14天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。
實施例七
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus),中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2'C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BS124S，精確度0. 0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于2'C的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為6小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷 剌激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第18天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。
實施例八1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus)，中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買詞養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2'C的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g)，電子天平(BS124S，精確度0.0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于4"C的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為6小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物詞養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷 刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第18天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。
實施例九
1. 實驗動物
小鼠(MusMusculus)，中國昆明種(KUNMING, C-l)。由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心 提供。體重26-28g，購買飼養(yǎng)一周，待其適應新環(huán)境后用于實驗，自由取食和飲水。
2. 實驗器材
2X:的冷藏室，PcLab生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，水銀檢壓計，壓力換能器。解剖刀， 解剖剪，解剖盤，止血鉗，動物固定板，棉線，固定釘，玻璃分針，動脈夾，2ml注射器， 離心機。扭力天平(TN型，精確度0.01g),電子天平(BS124S，精確度0.0001g)。
3. 藥品、試劑
3.8%檸檬酸三鈉溶液，20%脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9%生理鹽水。
4. 實驗步驟
將正常成年鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模 型組小鼠，放于6t的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為6小時，結(jié)束 后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物詞養(yǎng)室中詞養(yǎng)，不進行寒冷 刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第14天測定小鼠血壓，收縮壓超過110毫米汞柱 即為高血壓小鼠模型制備成功。
權利要求
1. 一種高血壓小鼠模型的制備方法，其特征在于將正常成年小鼠按完全隨機的方法分為模型組和對照組，每天從常溫動物飼養(yǎng)室中取出模型組小鼠，放于2～6℃的環(huán)境中進行寒冷刺激，每天進行寒冷刺激的持續(xù)時間為2～6小時，結(jié)束后立即將小鼠送回常溫動物飼養(yǎng)室；對照組小鼠一直在常溫動物飼養(yǎng)室中飼養(yǎng)，不進行寒冷刺激；開始對模型組小鼠進行寒冷刺激后的第16～20天測定小鼠血壓，評價模型制備效果。
2. —種如權利要求l所述的高血壓小鼠模型的制備方法，其特征在于將所述的模型組 小鼠放于4。C的環(huán)境中進行寒冷刺激。
3. —種如權利要求1或2所述的高血壓小鼠模型的制備方法，其特征在于所述每天進 行寒冷刺激的持續(xù)時間為2小時。
4. 一種如權利要求1或2所述的高血壓小鼠模型的制備方法，其特征在于所述每天進 行寒冷刺激的持續(xù)時間為4小時。
5. —種如權利要求1或2所述的高血壓小鼠模型的制備方法，其特征在于所述每天進 行寒冷刺激的持續(xù)時間為6小時。
全文摘要
妊娠高血壓是妊娠期特有的一種疾病，建立合適的動物模型模仿人類妊娠高血壓征，有助于人們了解妊娠高血壓征的病理發(fā)生和發(fā)展進程，幫助理解與妊娠高血壓征有關的病因?qū)W因素，建立臨床上的診斷指標，對篩選治療藥物具有重大意義，還有助于詳細研究妊娠高血壓征對子代發(fā)育的影響，為提前介入治療提供實驗依據(jù)。本發(fā)明提供一種通過寒冷刺激制備用于高血壓發(fā)病機制及治療方法研究的動物模型的方法，用于建立一種穩(wěn)定、便捷、成本合理的妊娠高血壓小鼠模型，以便順利開展疾病發(fā)病機制及治療方法的研究。
文檔編號A61B19/00GK101444439SQ20081023869
公開日2009年6月3日 申請日期2008年12月22日 優(yōu)先權日2008年12月22日
發(fā)明者劉文娜, 寧 張, 潘正軍, 王振平, 陳忠科, 魏金環(huán) 申請人:山東大學