專利名稱：油菜蜂花粉有效部位群的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從油菜(Brassica campestris L)蜂花粉(Pollen of BrassinCampestris L)制備油菜花粉有效部位群的方法，油菜花粉有效部位群可作為制備抗前列腺增生、前列腺炎及由前列腺增生、前列腺炎引起的尿頻、尿急、尿痛、尿后滴瀝、尿潴留、尿道流白、性功能障礙等相關(guān)癥狀藥物的主要原料。
背景技術(shù)：
前列腺是男性的附屬性腺，其分泌的前列腺液是精液的重要組成部分。它形似粟子，位于膀胱下方，尿道恰好從其中間穿過(guò)。而前列腺增生是一種慢性的男性老年人特有的最常見(jiàn)的病患。由于人到中年以后，前列腺內(nèi)的結(jié)締組織開(kāi)始增生，嚴(yán)重時(shí)腺體體積可比正常腺體大出10-15倍，肥大的前列腺刺激壓迫引起尿頻尿急，滴瀝不爽，排尿困難及癥狀，久而久之還會(huì)造成許多嚴(yán)重的并發(fā)癥，如尿道感染，膀胱結(jié)石，腎功能損害等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，年逾50的男性有一半以上存在不同程度的前列腺增生，而且發(fā)病率隨年齡增大而增高，尤以更年期后的男性發(fā)病率高達(dá)75％，對(duì)老年人的身體健康和生活質(zhì)量影響很大。前列腺增生除晚期重癥病人需要手術(shù)外，藥物治療仍是最基本且不失有效的治療措施。
目前，治療前列腺增生的藥物按作用機(jī)制不同可分為α-受體阻滯劑、5α-還原酶抑制劑、植物類制劑及其它。前兩種可松弛平滑肌，解除尿路梗阻的被動(dòng)因素，還緩解癥狀，起到治標(biāo)的作用，但不能逆轉(zhuǎn)前列腺增生，并不能治本。而植物類制劑可抑制前列腺細(xì)胞生長(zhǎng)，使增大的前列腺回縮，消除尿道梗阻的機(jī)械因素，堪稱治本。國(guó)內(nèi)外的實(shí)踐證明，蜂花粉及其制劑對(duì)前列腺增生有良好的療效，是前列腺增生的克星。
油菜是十字花科蕓苔屬植物，以菜籽榨油為種植目的一年生或越年生草本植物，油菜蜂花粉是其另一主要的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)物。油菜蜂花粉的成分復(fù)雜，除作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑外，還具抑制前列腺增生、調(diào)節(jié)免疫、改善糖代謝等藥理活性。藥理實(shí)驗(yàn)表明油菜蜂花粉能顯著縮小老齡犬增大體積和高度增生的前列腺體，并能改善前列腺增生患者的癥狀，縮小前列腺體積，減少剩余尿，明顯減輕排尿困難。用天然油菜蜂花粉為原料直接制備而成的“前列康”制劑，是目前臨床治療前列腺增生療效明顯的藥物之一。
國(guó)外現(xiàn)有瑞典生產(chǎn)的抗前列腺增生花粉制劑是由梯牧草26％、玉米26％、黑麥19％、榛26％、水楊6％、白楊6％、法蘭西菊6％和松5％共8種植物花粉混合提取、制劑而成的，價(jià)格昂貴。
由于目前國(guó)內(nèi)的花粉制劑直接以油菜花粉為原料生產(chǎn)而成，因此其服用劑量大，并且不易保存。
國(guó)內(nèi)有人提出以花粉(未明確花粉的來(lái)源植物)提取物為藥物制劑原料，制備抗前列腺增生藥物，但如不確定花粉來(lái)源植物，則不能保證藥品有效、安全、穩(wěn)定的三個(gè)基本要求。例如中國(guó)專利CN 1391911A記載了以高效花粉為原料，用丙酮冷浸提取得到抗前列腺增生的花粉提取物的方法，這種方法存在下列缺點(diǎn)(1)首先制劑原料所用的花粉未明確植物來(lái)源，難以建立符合做為藥品基本要求。(2)由于丙酮易揮發(fā)，回收率極低，大規(guī)模生產(chǎn)如以丙酮作為提取溶媒，生產(chǎn)成本高。(3)由于用丙酮提取，未經(jīng)過(guò)分離純化即將提取物作為藥物制劑來(lái)源，這樣提取物中非有效成分未能去除，有效成分在提取物中的含量低，會(huì)加大服用量，給患者帶來(lái)不便。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)以油菜蜂花粉為原料，將油菜蜂花粉粉碎或破壁，用80％以上的乙醇或丙酮、氯仿、甲醇、石油醚浸泡提取，提取液濃縮即得脂溶性提取物；溶劑浸泡提取后的油菜花粉揮去溶劑后，加純化水浸泡提取，提取液濃縮即得水溶性提取物。將脂溶性提取物用40-60％的乙醇溶解，用石油醚或乙酸乙酯、氯仿萃取3-5次，石油醚或乙酸乙酯、氯仿萃取物濃縮、干燥即得脂溶性有效部位。將水溶性提取物與90％以上的乙醇體積比4∶1～2∶1醇沉，過(guò)濾，濾液濃縮后與90％以上的乙醇體積比1∶2～1∶3醇沉，濾液回收后再與90％以上乙醇體積比為1∶3～1∶8醇沉，抽濾，濾液減壓回收，干燥即得水溶性有效部位。上述醇沉工序醇沉溫度0-5℃為宜，醇沉?xí)r間以12-48小時(shí)為宜，將脂溶性有效部位與水溶性有效部位按實(shí)際生藥提取量合并混勻，即為花粉有效部位群。該花粉有效部位群制備的制劑，可為軟膠囊劑、膠囊劑、口服液。
本發(fā)明以油菜蜂花粉為原料，油菜(Brassica campestris L)是以菜籽榨油為目的一年生成越年生草本植物，在世界范圍內(nèi)廣泛種植，我國(guó)是油菜種植大國(guó)，種植面積、年產(chǎn)量及消費(fèi)量均居世界第一，以油菜花科作為原料，資源豐富易得，年產(chǎn)量700萬(wàn)噸以上。本發(fā)明以乙醇等有機(jī)溶劑為提取溶媒，污染小，成本低，操作方便。提取物經(jīng)有機(jī)溶劑萃取分離，通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)模型篩選，去除花粉中無(wú)活性的成分，保留了具抗前列腺增生、前列腺炎的活性成分，對(duì)有效部位進(jìn)行質(zhì)量控制。本發(fā)明在以乙醇提取其脂溶性部分后，再以純化水為溶媒提取其水溶性部分，這樣將花粉中的有效成分完全提取出來(lái)，增強(qiáng)療效，因此本發(fā)明具有極強(qiáng)的實(shí)用性。本發(fā)明的有益效果還在于(1)對(duì)臨床上有確切療效的油菜花粉制劑進(jìn)行深度開(kāi)發(fā)，明確以油菜蜂花粉為原藥材，控制藥材質(zhì)量。(2)以油菜蜂花粉為原料，制備抗前列腺增生、前列腺炎及前列腺增生、前列腺炎引起的尿頻、尿急、尿痛、尿后滴瀝、尿潴留、尿道流白等癥狀藥物，控制了質(zhì)量，增強(qiáng)了療效，提高了安全性。(3)增強(qiáng)了與進(jìn)口藥的競(jìng)爭(zhēng)力。(4)有利于藥品運(yùn)輸、貯存與患者的服用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1經(jīng)特征顯色反應(yīng)及薄層層析檢查，本發(fā)明油菜蜂花粉脂溶性活性部位含大量甾醇類物質(zhì)，植物脂肪酸、少量糖、氨基酸，水溶性活性部位含糖、黃酮、氨基酸類物質(zhì)，用高效液相色譜法測(cè)定本發(fā)明中抗前列腺增生藥中脂溶性活性成分甾醇類物質(zhì)的含量?jī)x器Waters高效液相儀色譜柱C18柱4.6mm×250mm流動(dòng)相乙腈-水 (97∶3)檢測(cè)波長(zhǎng)210nm流速1ml/min結(jié)果測(cè)得甾醇類的含量為15％-35％。
用氨基酸分析儀測(cè)定本發(fā)明油菜蜂花粉有效部位中氨基酸含量檢測(cè)波長(zhǎng)540nm，470nm，條件交換樹(shù)脂，日制2169(酸性陽(yáng)離子)，緩沖液，pH3.3，pH4.2，pH5.20。顯色劑茚三酮。
結(jié)果氨基酸的含量為2.0-20％。
用紫外分光光度計(jì)按苯酚-硫酸法測(cè)定本發(fā)明有效部位中糖含量測(cè)波長(zhǎng)487nm，測(cè)得糖類含量10-30％。
實(shí)施例2 本發(fā)明油菜花粉有效部位藥理學(xué)試驗(yàn)1.脂溶性有效部位500克和水溶性有效部位510克(按生藥提取量)混合，取SD種大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，腹腔注射0.3％的戊巴比妥鈉0.1ml/kg麻醉，開(kāi)腹，摘除雙側(cè)睪丸，隨機(jī)留取10只大鼠僅開(kāi)腹不摘除睪丸作為假手術(shù)組。手術(shù)后一周，將去勢(shì)動(dòng)物隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、試驗(yàn)藥，每組10只。除假手術(shù)組外，其它3組大鼠均皮下注射丙酸睪酮注射液，2.0mg/kg，每天一次，連續(xù)注射30天。注射造模藥物的同時(shí)按下表中劑量分別灌胃給藥30天，模型對(duì)照組灌胃蒸餾水。
表1 對(duì)前列腺重量的影響(n＝10，X±SD)
注組間T檢驗(yàn)與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01表2對(duì)前列腺體積的影響(n＝10，X±SD)
注組間T檢驗(yàn)與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01表3 對(duì)前列腺增生程度的影響(n＝10)
注秩和檢驗(yàn)與模型組比較，*P＜0.05分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)“-”前列腺正?！?”前列腺輕度腫脹、增生、無(wú)明顯炎癥。
“++”前列腺增生，肥大，有輕度炎癥。
“+++”前列腺增生程度較重、肥大，并有間質(zhì)浸潤(rùn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本法制備的花粉提取物對(duì)大鼠的前列腺增生有抑制作用，從前列腺組織病變來(lái)觀察，給藥組與模型組相比，也有很大程度的減輕。
2.有效部位排尿作用試驗(yàn)有效部位2.5mg/ml濃度時(shí)有效部位對(duì)家兔尿道平滑肌舒張作用與大鼠膀胱收縮作用分別達(dá)到54.7±8.7％和51.4±22.1％。
實(shí)施例3取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用95％乙醇浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取2-4次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，得脂溶性有效部位114g。
乙醇浸提后之花粉揮去乙醇，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液濃縮至干，得水溶性有效部位133g。
把114克脂溶性有效部位和133克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例4取油菜花粉1500g，破壁粉碎，用無(wú)水乙醇浸泡提取6次，每次24小時(shí)，加乙醇量每次為4500g，合并提取液，提取液使?jié)饪s至稠約500ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇1000ml，混勻后加石油醚萃取五次，每次2000ml，合并萃取液，濃縮至干，得脂溶性有效部位168g。
乙醇浸提取后的花粉揮去乙醇。加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量每次為4500ml，提取液過(guò)濾濃縮至1300ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加無(wú)水乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1300ml，加無(wú)水乙醇5200ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液濃縮至干，得水溶性有效部位180.7g。
把168克脂溶性有效部位和180.7克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例5取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用95％乙醇浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，得脂溶性有效部位124g。
乙醇浸提后之花粉揮去乙醇，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位127g。
把124克脂溶性有效部位和127克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例6取油菜花粉1500g，破壁粉碎，用無(wú)水乙醇浸泡提取6次，每次24小時(shí)，加乙醇量每次為4500g，合并提取液，提取液使?jié)饪s至稠，約500ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇1000ml，混勻后加氯仿萃取四次，每次2000ml，合并萃取液，回收至干，得脂溶性有效部位154g。
乙醇浸提取后的花粉揮去乙醇。加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量每次為4500ml，提取液過(guò)濾濃縮至1300ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加無(wú)水乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1300ml，加無(wú)水乙醇5200ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位172g。
把154克脂溶性有效部位和172克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例7
取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用95％乙醇浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加乙酸乙酯萃取三次，每次3000ml，合并，萃取液回收至干，得脂溶性有效部位132g。
乙醇浸提后之花粉揮去乙醇，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位130g。
把132克脂溶性有效部位和130克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例8取油菜花粉1500g，破壁粉碎，用無(wú)水乙醇浸泡提取6次，每次24小時(shí)，加乙醇量每次為4500g，合并提取液，提取液使?jié)饪s至稠，約500ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇1000ml，混勻后加乙酸乙酯萃取五次，每次2500ml，合并萃取液，回收至干，得脂溶性有效部位152g。
乙醇浸提取后的花粉揮去乙醇。加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量每次為4500ml，提取液過(guò)濾濃縮至1300ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加無(wú)水乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1300ml，加無(wú)水乙醇5200ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位181g。
把152克脂溶性有效部位和181克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例9取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用丙酮浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加丙酮量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，得脂溶性有效部位127g。
丙酮浸提后之花粉揮去丙酮，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位125g。
把127克脂溶性有效部位和125克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例10取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用丙酮浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加丙酮量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，得脂溶性有效部位134g。
丙酮浸提后之花粉揮去丙酮，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位135g。
把134克脂溶性有效部位和135克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例11取油菜花粉1500g，破壁粉碎，用丙酮浸泡提取6次，每次24小時(shí)，加丙酮量每次為4500g，合并提取液，提取液使?jié)饪s至稠，約500ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇1000ml，混勻后加乙酸乙酯萃取四次，每次2000ml，合并萃取液，回收至干，得脂溶性有效部位142g。
丙酮浸提取后的花粉揮去丙酮。加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量每次為4500ml，提取液過(guò)濾濃縮至1300ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加無(wú)水乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1300ml，加無(wú)水乙醇5200ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位161g。
把142克脂溶性有效部位和161克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例12取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用甲醇浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取五次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，得脂溶性有效部位135g。
甲醇浸提后之花粉揮去甲醇，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位123g。
把135克脂溶性有效部位和123克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例13取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用甲醇浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，得脂溶性有效部位128g。
甲醇浸提后之花粉揮去甲醇，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位126g。
把128克脂溶性有效部位和126克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例14取油菜花粉1500g，破壁粉碎，用甲醇浸泡提取6次，每次24小時(shí)，加甲醇量每次為4500g，合并提取液，提取液使?jié)饪s至稠，約500ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇1000ml，混勻后加乙酸乙酯萃取四次，每次2000ml，合并萃取液，回收至干，得脂溶性有效部位156g。
甲醇浸提取后的花粉揮去甲醇。加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量每次為4500ml，提取液過(guò)濾濃縮至1300ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加無(wú)水乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1300ml，加無(wú)水乙醇5200ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位154g。
把156克脂溶性有效部位和154克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例15取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用石油醚浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加石油醚量為每次3000ml，合并提取液，回收至干，得脂溶性有效部位136g。
石油醚浸提后之花粉揮去石油醚，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位135g。
把136克脂溶性有效部位和135克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例16取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用95％乙醇浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，加1∶1的硅藻土混勻干燥后，加石油醚提取四次，每次1500ml，合并，回收至干，得脂溶性有效部位124g。
乙醇浸提后之花粉揮去乙醇，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位130g。
把124克脂溶性有效部位和130克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例17取油菜花粉1500g，破壁粉碎，用無(wú)水乙醇浸泡提取6次，每次24小時(shí)，加乙醇量每次為4500g，合并提取液，提取液使?jié)饪s至稠，約500ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇1000ml，混勻后加1∶1的硅藻土，混勻干燥后加石油醚提取三次，每次3000ml，合并，回收至干，得脂溶性有效部位163g。
乙醇浸提取后的花粉揮去乙醇。加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量每次為4500ml，提取液過(guò)濾濃縮至1300ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加無(wú)水乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1300ml，加無(wú)水乙醇5200ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位169g。
把163克脂溶性有效部位和169克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
實(shí)施例18取油菜花粉1000g，干燥，機(jī)械粉碎，用甲醇浸泡提取五次。每次24小時(shí)，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至稠約300ml，得到脂溶性提取物，在脂溶性提取物中加50-60％乙醇600ml，混勻后加1∶1的硅藻土，混勻干燥后加石油醚提取五次，每次2500ml，合并，提取液回收至干，得脂溶性有效部位133g。
甲醇浸提后之花粉揮去甲醇，加純化水浸泡提取四次，每次8小時(shí)，加純化水的量為每次3000ml，提取液過(guò)濾后濃縮至900ml，得到水溶性提取物，在水溶性提取物中加95％乙醇450ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇2000ml醇沉過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至1000ml，加95％乙醇4000ml醇沉，放置過(guò)夜，過(guò)濾、濾液回收至干，得水溶性有效部位138g。
把133克脂溶性有效部位和138克水溶性有效部位混合均勻，即得油菜蜂花粉治療前列腺疾病的有效部位群。
權(quán)利要求
1.油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，是以油菜蜂花粉為原料，用有機(jī)溶劑提取，其特征是油菜蜂花粉先行干燥和粉碎處理后，再用有機(jī)溶劑浸泡，提取，再按以下步驟進(jìn)行(1)提取液濃縮即得脂溶性提取物，將脂溶性提取物用40-60％的乙醇溶解，石油醚萃取，萃取物濃縮、干燥即得脂溶性有效部位；(2)將溶劑浸泡提取后的油菜蜂花粉揮去溶劑后，加純化水浸泡提取，提取液濃縮即得水溶性提取物，將水溶性提取物與90％以上的乙醇混勻進(jìn)行醇沉，過(guò)濾，濾液減壓回收，干燥即得水溶性有效部位；(3)將脂溶性有效部位與水溶性有效部位按花粉實(shí)際生藥提取量合并混勻，即為油菜蜂花粉有效部位群。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是步驟①中脂溶性提取物進(jìn)行3-5次乙醇溶解及石油醚或乙酸乙酯、氯仿萃取。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是步驟②中醇沉工序按以下步驟進(jìn)行①水溶性提取物與90％以上的乙醇按體積比4∶1～2∶1進(jìn)行一次醇沉，過(guò)濾，②濾液濃縮后與90％以上的乙醇按體積比1∶2～1∶3進(jìn)行二次醇沉，過(guò)濾，③濾液濃縮后再與90％以上乙醇按體積比1∶3～1∶8進(jìn)行三次醇沉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和3所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是所述醇沉?xí)r間為12-48小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和3所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是所述醇沉工序中醇沉溫度為0-5℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是所述的脂溶性有效部位在油菜蜂花粉中的含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％-35％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1和6所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是脂溶性有效部位主要含植物甾醇類、植物脂肪酸、氨基酸等物質(zhì)，其中甾醇類物質(zhì)和脂肪酸類物質(zhì)在脂溶性有效部位含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)20-80％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是所述的水溶性有效部位在油菜蜂花粉中的含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5-45％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1和8所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是所述的水溶性有效部位含氨基酸、黃酮、糖類等物質(zhì)，其中氨基酸含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)2-20％，糖類含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10-50％，黃酮含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5-30％。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是脂溶性有效部位在油菜蜂花粉生藥中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)得率為5-19％。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是水溶性有效部位在油菜蜂花粉生藥中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)得率為8-22％。
12.根據(jù)權(quán)利要1-11任一所述的油菜蜂花粉有效部位群的提取方法，其特征是有效部位群制備的治療抗前列腺增生、前列腺炎的制劑為軟膠囊、膠囊、口服液。
全文摘要
本發(fā)明提供油菜蜂花粉有效部位群的提取方法以油菜蜂花粉為原料，將油菜蜂花粉粉碎或破壁，用乙醇或丙酮等浸泡提取，提取液濃縮；溶劑浸泡提取后的油菜花粉揮去溶劑后，加水浸泡提取，提取液濃縮。將脂溶性提取物用乙醇溶解后萃取，萃取物濃縮、干燥即得脂溶性有效部位。將水溶性提取物醇沉，過(guò)濾，濾液減壓回收，干燥即得水溶性有效部位；將脂溶性有效部位與水溶性有效部位按實(shí)際生藥提取量合并混勻，即為花粉有效部位群。該花粉有效部位群制備的制劑，可為軟膠囊劑、膠囊劑、口服液。本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，是對(duì)油菜花粉制劑進(jìn)行深度開(kāi)發(fā)，通過(guò)對(duì)藥材質(zhì)量控制，增強(qiáng)了制劑療效，提高用藥安全性，有利于藥品運(yùn)輸、貯存與患者的服用。
文檔編號(hào)A61P13/08GK1650971SQ20041008443
公開(kāi)日2005年8月10日 申請(qǐng)日期2004年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月19日
發(fā)明者張馮敏, 阮碧芳, 吳健, 邱紅英, 姚建標(biāo) 申請(qǐng)人:浙江康恩貝制藥股份有限公司, 浙江康恩貝藥品研究開(kāi)發(fā)有限公司