一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，是提取茶蜂花粉中具有抗氧化能力的成分。本發(fā)明提供對茶蜂花粉進行機械破壁，然后通過不同的有機溶劑的分步提取等多步提取達到不同化合物分離的目的，再用乙酸乙酯萃取，對萃取物進行濃縮干燥，去除茶蜂花粉中富含的脂肪、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，最終獲得高濃度的活性成分。本發(fā)明方法獲得的物質(zhì)具有較強的抗氧化能力。為茶蜂花粉的藥用價值的開發(fā)提供了新手段。
【專利說明】一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬天然產(chǎn)物的開發(fā)提取領(lǐng)域，涉及一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，通過多步提取而獲得高濃度的活性成分。
【背景技術(shù)】
[0002]蜂花粉是主要的蜂產(chǎn)品之一，是蜜蜂從被子植物雄性花藥和裸子植物小孢子葉上的小孢子囊采集的花粉粒，經(jīng)過蜜蜂加工而成的花粉團狀物。作為一種自然資源，蜂花粉中不僅含有非常豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、微量元素、維生素，還含有對生物體生理功能具有特殊功效的核酸、黃酮類、激素等生物活性物質(zhì)，被譽為“全能營養(yǎng)庫”、“完全營養(yǎng)品”。
[0003]茶樹{Camellia sinensis)是我國重要的經(jīng)濟作物之一,在全國都有大面積的種植。因此，茶蜂花粉也是我國主要的蜂花粉之一。茶葉中富含茶多酚、兒茶素和咖啡堿等生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒和抗氧化等功效。但是，同樣來源于茶樹的茶蜂花粉卻鮮有生物學(xué)活性的報道。究其原因主要是茶蜂花粉中富含蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等物質(zhì)，而這些物質(zhì)在抗氧化等方面的作用甚微，起主要作用的往往是黃酮和酚酸類物質(zhì)。傳統(tǒng)的蜂花粉活性成分提取都是采用單步醇法提取，其在獲得黃酮酚酸類物質(zhì)的同時也提取了脂肪、醇溶性蛋白等物質(zhì)，造成活性成分 濃度過低無法發(fā)揮應(yīng)有的生物學(xué)活性。如何獲得高濃度的黃酮酚酸類物質(zhì)，是困擾蜂花粉生物學(xué)活性深入開發(fā)的重要原因之一。
[0004]研究一種合理的提取方法，可以去除蜂花粉中對抗氧化效果不強的成分，提高目標(biāo)成分的濃度，從而為蜂花粉的生物學(xué)活性開發(fā)奠定基礎(chǔ)，對提高蜂產(chǎn)品的附加值，促進蜂產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，是提取茶蜂花粉中具有抗氧化能力的成分，通過多步提取，去除茶蜂花粉中富含的脂肪、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，獲得高濃度的目標(biāo)成分并具有較強的抗氧化能力，為茶蜂花粉的藥用價值的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
[0006]本發(fā)明方法通過以下步驟實現(xiàn):
(O新鮮茶蜂花粉經(jīng)冷凍干燥后，經(jīng)粉碎機進行機械破壁處理；
(2)去除脂類成分處理:加入固液比(W:V)1:2~1:15之間的正己烷，超聲波輔助提取40-80分鐘，分離提取液體，將殘渣再加入正己烷同法提取與分離1-3次，合并提取液，回收殘渣；
(3)用30%~80%的乙醇按固液比(W:V)1:1?: 10之間提取殘渣，加入超聲波輔助提取40-80分鐘，離心分離取上清液，將殘渣再加入上述乙醇溶液同法提取與分離1-3次，合并提取液并過濾。
[0007](4)減壓濃縮、沉淀:將提取物濃縮至1/5~2/3，再過濾回收濾液。
[0008](5)再用(V:V) 1:4的乙酸乙酯提取水溶液，收集乙酸乙酯層，烘干獲得目標(biāo)物(茶蜂花粉抗氧化活性成分)。[0009]優(yōu)選的在步驟(2)中，加入固液比(W:V) 1:4的正己烷，超聲輔助提取50分鐘，分離提取液，將殘渣再加入正己烷提取與分離I次，合并提取液，回收殘渣；
優(yōu)選的在步驟(3)中，用50%乙醇按固液比(W:V) 1:8對殘渣進行提取，超聲輔助提取50分鐘，5000 Xg/分鐘，離心10分鐘，收集上清液，同樣方法在提取一次，合并提取液并過濾；
優(yōu)選的在步驟(4)中，水浴溫度控制在低于55°C，選用50°C，將提取物濃縮至原體積1/2后，過濾，取濾液；
優(yōu)選的在步驟(5)中，選用體積比為1:1的乙酸乙酯提取水溶液，充分振蕩后，靜止2小時，回收乙酸乙酯層，同法再重復(fù)一次，合并乙酸乙酯層，50°C烘干，得到目標(biāo)物(茶蜂花粉抗氧化活性成分);
本發(fā)明所述的一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法在茶蜂花粉中提取抗氧化活性成分中的應(yīng)用。將步驟(5)中獲得的目的物，通過以蘆丁為對照比色法測定總黃酮，其含量達到132.85 ±14.77 μ g/mg，通過以綠原酸為對照比色法測定總酚酸，其含量達到了255.23±21.43 μ g/mg。通過ABTS法測定自由基清除率，發(fā)現(xiàn)其IC5tl值為53.93 μ g/ml ；而通過甲醇提取獲得的提取物的IC5tl值為700.21 μ g/ml。本發(fā)明方法的提取物其抗氧化能力是甲醇提取法提取物的12.98倍。
[0010]本發(fā)明通過多次提取去除了花粉中廣泛存在的色素、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和糖類等抗氧化能力較弱的物質(zhì)，通過有機溶劑與目標(biāo)提取物的理化特性有針對性的提取酚酸和黃酮類物質(zhì)，從而獲得較高濃度的該類物質(zhì)，為進一步蜂花粉的相關(guān)生物學(xué)活性研究及開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1是實施例1中提取物ABTS自由基清除力與甲醇法提取物結(jié)果。
[0012]圖2是實施例2中提取物ABTS自由基清除力與甲醇法提取物結(jié)果。
[0013]圖3是實施例3中提取物ABTS自由基清除力與甲醇法提取物結(jié)果。
【具體實施方式】
[0014]為了本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明所提供的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例作進一步的說明。
[0015]實施例1 本發(fā)明對于茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，包括如下步驟:
(O新鮮茶蜂花粉經(jīng)冷凍干燥后，經(jīng)粉碎機進行機械破壁處理；
(2)去除脂類成分處理:加入固液比(W:V)1:4的正己烷，超聲波輔助提取50分鐘，分離提取液體，將殘渣再加入正己烷同法提取與分離I次，合并提取液，回收殘渣；
(3) 用50%的乙醇按固液比(W:V) 1:8之間提取殘渣，加入超聲波輔助提取50分鐘，5000 Xg/分鐘，離心10分鐘，收集上清液，同樣方法在提取一次，合并提取液并過濾；
(4)減壓濃縮、沉淀:將提取物在50°C水浴，真空濃縮至原體積的1/2，再過濾回收濾
液；
(5)再將濾液用體積比(V:V)1:1的乙酸乙酯提取可溶物，充分振蕩后，靜止2小時，回收乙酸乙酯層，同法再重復(fù)一次，合并乙酸乙酯層，50°C烘干，得到目標(biāo)物。[0016]通過以蘆丁為對照比色法測定總黃酮，其含量達到132.85±14.77 yg/mg，通過以綠原酸為對照比色法測定總酚酸，其含量達到了 255.23±21.43 μ g/mg。通過ABTS法測定自由基清除率，發(fā)現(xiàn)其IC5tl值為53.93 yg/ml ;而通過甲醇提取獲得的提取物的IC5tl值為700.21 μ g/ml。本發(fā)明方法的提取物其抗氧化能力是甲醇提取法提取物的12.98倍。結(jié)果參見附圖1。
[0017]實施例2本發(fā)明對于茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，包括如下步驟:
(O新鮮茶蜂花粉經(jīng)冷凍干燥后，經(jīng)粉碎機進行機械破壁處理；
(2)去除脂類成分處理:加入固液比(W:V)1:2的正己烷，超聲波輔助提取30分鐘，分離提取液體，將殘渣再加入正己烷同法提取與分離2次，合并提取液，回收殘渣；
(3)用30%的乙醇按固液比(W:V)1:4之間提取殘渣，加入超聲波輔助提取40分鐘，5000 Xg/分鐘，離心10分鐘,收集上清液,合并提取液并過濾；
(4)減壓濃縮、沉淀:將提取物在50°C水浴，真空濃縮至原體積的2/3左右，再過濾回收濾液；
(5)再將濾液用體積比(V:V)1:2的乙酸乙酯提取可溶物，充分振蕩后，靜止2小時，回收乙酸乙酯層，同法再重復(fù)一次，合并乙酸乙酯層，50°C烘干，得到目標(biāo)物。
[0018]通過以蘆丁為對照比色法測定總黃酮，其含量達到112.74±8.62 μ g/mg，通過以綠原酸為對照比色法測定總酚酸，其含量達到了 208.73±9.53 μ g/mg。通過ABTS法測定自由基清除率，發(fā)現(xiàn)其IC5tl值為94.38 μ g/ml ;而通過甲醇提取獲得的提取物的IC5tl值為700.21 μ g/ml。本發(fā)明方法的提取物其抗氧化能力是甲醇提取法提取物的7.42倍。結(jié)果參見圖2。
[0019]實施例3
為了本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明所提供的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例進行闡述。
[0020]本發(fā)明對于茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，包括如下步驟:
(O新鮮茶蜂花粉經(jīng)冷凍干燥后，經(jīng)粉碎機進行機械破壁處理；
(2)去除脂類成分處理:加入固液比(W:V)1:15的正己烷，超聲波輔助提取80分鐘，分離提取液體，將殘渣再加入正己烷同法提取與分離3次，合并提取液，回收殘渣；
(3)用80%的乙醇按固液比(W:V)1:10之間提取殘渣，加入超聲波輔助提取80分鐘，5000 Xg/分鐘，離心10分鐘，收集上清液，同樣方法在提取3次，合并提取液并過濾；
(4)減壓濃縮、沉淀:將提取物在50°C水浴，真空濃縮至原體積的1/5，再過濾回收濾
液；
(5)再將濾液用體積比(V:V)1:4的乙酸乙酯提取可溶物，充分振蕩后，靜止2小時，回收乙酸乙酯層，同法再重復(fù)一次，合并乙酸乙酯層，50°C烘干，得到目標(biāo)物。
[0021]通過以蘆丁為對照比色法測定總黃酮，其含量達到114.85±11.21 yg/mg，通過以綠原酸為對照比色法測定總酚酸，其含量達到了 229.62±17.34 μ g/mg。通過ABTS法測定自由基清除率，發(fā)現(xiàn)其IC5tl值為73.94 μ g/ml ;而通過甲醇提取獲得的提取物的IC5tl值為700.21 μ g/ml。本發(fā)明方法的提取物其抗氧化能力是甲醇提取法提取物的9.47倍。結(jié)果參見圖3。
[0022]對所公開的實施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會被限制于本文所示的這些實施例， 而不是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn): (1)新鮮茶蜂花粉經(jīng)冷凍干燥后，經(jīng)粉碎機進行機械破壁處理； (2)去除脂類成分處理:加入固液比1:2~1:15的正己烷，超聲波輔助提取40-80分鐘，分離提取液體，將殘渣再加入正己烷同法提取與分離1-3次，合并提取液，回收殘渣； (3)用30%~80%的乙醇按固液比1:4~1:10提取殘渣，加入超聲波輔助提取40-80分鐘，離心分離取上清液，將殘渣再加入上述乙醇溶液同法提取與分離1-3次，合并提取液并過濾； (4)減壓濃縮、沉淀:將提取物濃縮至1/5~2/3，再過濾回收濾液； (5)再用體積比1:廣1:4的乙酸乙酯提取水溶液，收集乙酸乙酯層，烘干獲得目標(biāo)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，其特征在于，步驟(2)改為，加入固液比1:4的正己烷，超聲輔助提取50分鐘，分離提取液，將殘渣再加入正己烷提取與分離I次，合并提取液，回收殘渣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，其特征在于，步驟(3)改為，用50%乙醇按固液比1:8對殘渣進行提取，超聲輔助提取50分鐘，5000Xg/分鐘，離心10分鐘，收集上清液，同樣方法再提取一次,合并提取液并過濾。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，其特征在于，步驟(4)改為，水浴溫度控制在50°C，將提取物濃縮至原體積1/2后，再過濾回收濾液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法，其特征在于，步驟(5)為，選用體積比為1:1.的乙酸乙酯提取水溶液，充分振蕩后，靜止2小時，回收乙酸乙酯層，同法再重復(fù)一次，合并乙酸乙酯層，50°C烘干，得到茶蜂花粉抗氧化活性成分。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶蜂花粉抗氧化活性成分的提取方法在茶蜂花粉中提取抗氧化活性成分中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P39/06GK103463134SQ201310406113
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】胡福良, 平舜, 張源彬 申請人:浙江大學(xué), 寧波源彬蜂業(yè)發(fā)展有限公司