專利名稱：一種治療急性腦出血的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療急性腦出血的藥物，具體涉及一種以中草藥為原料制備的中成藥，本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法。
西醫(yī)對本病的治療目前仍以控制血壓、脫水、降顱壓，止血劑應(yīng)用等對癥治療為主，對部分出血量大的病人或具有腦干壓迫，腦疝，腦積水跡象者還需及時手術(shù)清除血腫。中醫(yī)對腦出血急性期雖有安宮牛黃丸，至寶丹，蘇合香丸，參附湯等治療方法，但臨床用藥極不方便。近年來，有學(xué)者將原來用于冠心病和缺血性中風(fēng)的復(fù)方丹參注射液用于急性腦出血的治療，在促進(jìn)患者意識恢復(fù)、血腫吸收和降低死亡率方面明顯優(yōu)于單用西藥治療組，說明活血化瘀法對急性腦出血具有確切的治療作用。此外，在安宮牛黃丸基礎(chǔ)上研制而成的清開靈注射液和醒腦靜注射液，均采用了靜脈給藥方法。由于使用方便，適應(yīng)了臨床急救的需要，所以在臨床上得到了廣泛應(yīng)用。但由于這些藥物都僅僅針對腦出血復(fù)雜病機(jī)的某一環(huán)節(jié)進(jìn)行治療，故臨床效果并不能盡如人意，所以臨床迫切需要一種針對急性腦出血復(fù)雜病機(jī)，療效確切，方便安全，質(zhì)量穩(wěn)定的急救用藥。
本發(fā)明的另一目的在于提供該藥物的制備方法。
本發(fā)明提供的一種治療急性腦出血的藥物，是由下述重量配比的原料制成的藥劑大黃80～120 蒲黃130～180梔子135～180 冰片0.8～1.5。
上述用于治療急性腦出血的藥物，可以制成藥劑學(xué)上所說的多種劑型，如注射液、膠囊、片劑或散劑。
將上述重量配比的原料制成本發(fā)明藥物的方法，包括以下步驟(1)大黃粉碎成粗粒，加5～12倍量70～80％乙醇，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.12，攪拌加入4％明膠溶液至無沉淀產(chǎn)生，再加乙醇使含醇量達(dá)75～85％，冷藏24～72小時，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35，真空干燥，得大黃干燥提取物；(2)蒲黃、梔子壓碎后，加6～10倍量80～90％乙醇回流提取2～4次，每次1～3小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10～1.12，冷藏24～72小時，濾過，濾液用等量乙酸乙酯萃取4～8次，減壓回收乙酸乙酯至稠膏狀，真空干燥，得蒲梔干燥提取物；(3)取上述兩干燥提取物，加注射用水溶解，加活性炭，充分?jǐn)嚢?，加熱煮沸，放冷，濾過；(4)冰片與泊洛沙姆研勻，攪拌加入上述濾液中使溶解，加入氯化鈉，調(diào)pH值至7.0～8.0，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水，再調(diào)pH值至7.0～8.0，然后用微孔濾膜濾過，濾液灌裝于處理好的輸液瓶中，熱壓滅菌，制得注射液。
本發(fā)明組方合理，嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)，方中大黃，苦、寒，歸脾、胃、大腸、肝、心經(jīng)。功能清熱瀉火，不僅寒能清熱，而且能瀉下泄熱，對腑氣不通，大便秘結(jié)，高熱不退，甚則神昏譫語者起到釜低抽薪之功。邪熱得祛，血熱得涼，則血熱妄行之出血可止。同時，大黃具有較好的活血祛瘀作用，在清熱止血之同時，使腦竅之瘀血得散，故有止血而不留瘀的優(yōu)點，用為君藥。蒲黃，甘、平，歸心、肝、心包經(jīng)。生用既可行血祛瘀，又能收斂止血，與大黃一樣具有止血而不留瘀的特點，適用于各種出血證。梔子苦、寒，主歸心、肝、肺、胃，三焦經(jīng)，可清心瀉火除煩，又能清熱利濕，其性寒涼，入血分，能清熱涼血止血，故可用治血熱迫血妄行之證，與蒲黃合用共助君藥大黃以加強(qiáng)清熱，涼血，止血之功，共為臣藥。冰片，辛、苦，微寒，歸心、脾、肺經(jīng)。功似麝香而性涼，具開竅醒神之功，可治療身熱神昏等癥，助臣藥梔子以加強(qiáng)醒神開竅之功，用為佐藥。諸藥合用，共奏清熱化瘀，醒腦開竅之功，使邪熱得清，瘀血得祛，出血得止，腦竅得開，故中風(fēng)神昏之證可愈。
臨床試驗結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對急性腦出血具有良好的治療作用，能明顯改善腦出血所致的偏癱體征，縮小腦內(nèi)血腫面積，減輕腦水腫和神經(jīng)細(xì)胞的繼發(fā)性損害；減少死亡率，提高存活質(zhì)量，改善神經(jīng)功能缺損，明顯減少腦組織的含水量，提高腦內(nèi)超氧化物歧化酶的活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生，并有利尿作用；有效縮短血液的凝血時間和出血的止血時間；對神經(jīng)元細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，量效關(guān)系明顯。
下面結(jié)合實施例及主要藥效學(xué)試驗對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
受試藥物 本發(fā)明注射液，58.1％生藥/100ml/瓶。
劑量設(shè)定本發(fā)明注射液成人臨床擬用法用量靜脈滴注，100ml/次，1次/日。若以每日注射ml，成人以70kg計算，則依“實驗動物與人體表面積比等效量換算比率”可算出各動物的等效劑量。
小鼠的等效量為7.553(58.1×0.026×50)g/kg，實驗用量的小劑量、中劑量、大劑量分別設(shè)定為3.7765g/kg、7.553g/kg、15.106g/kg。
大鼠的等效量為5.229(58.1×0.018×5)g/kg，實驗用量的小劑量、中劑量、大劑量分別設(shè)定為2.6145g/kg、5.229g/kg、10.458g/kg。
兔的等效量為2.771(58.1×0.07÷1.5)g/kg，實驗用量的小劑量、中劑量、大劑量分別設(shè)定為1.355g/kg、2.711g/kg、5.422g/kg。
給藥途徑包括iv與ip，與擬推薦的臨床用藥途徑一致。
試驗對照 空白對照組，給等體積的生理鹽水。
數(shù)據(jù)處理所有實驗數(shù)據(jù)以x±s表示。計量數(shù)據(jù)由SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析及組間檢驗。
實驗動物清潔級ICR小鼠，體重18-20g，雌雄各半，動物證編號SCXK11-00-0008，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供；日本大耳白兔，體重2.0-2.5kg，雌雄不限，動物許可證編號京動許字第004號，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院中國獸藥監(jiān)查所實驗動物中心提供；SPF級Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重250-300g，雄性，動物許可證編號SCXK11-00-0008，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供。
飼養(yǎng)條件動物進(jìn)入清潔級動物實驗室后，大鼠每籠放養(yǎng)5只，飼養(yǎng)3天后使用；小鼠每籠10只，飼養(yǎng)3天后使用；兔每籠1只，由專人飼養(yǎng)管理。動物室光照充足，通風(fēng)和空調(diào)設(shè)備良好，室溫控制在23-25℃，相對濕度為50-70％。實驗室按常規(guī)定期消毒。
陽性對照藥尼莫地平注射液(ND)。選藥依據(jù)，此藥系腦出血急性期臨床常用藥。規(guī)格100mg/50ml，批號0009039，山東新華制藥股份有公司生產(chǎn)。用法與用量，靜脈注射或滴注，2mg/次，大鼠按臨床用量換算為30μg/kg。
材料與方法一、試劑超氧化物歧化酶(SOD)、脂質(zhì)過氧化(LPO)試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。
二、實驗方法及使用儀器1、家兔急性腦出血模型的建立實驗動物均在術(shù)前1天耳靜脈采血1ml，4℃存放，造模家兔在2％利多卡因局麻下于手術(shù)當(dāng)日稱取150mg自體血凝塊裝入20號穿刺針內(nèi)，仿照Levine’s方法，行右側(cè)腦內(nèi)血塊埋藏術(shù)。手術(shù)部分為冠狀縫前0.1cm，矢狀逢右側(cè)旁開0.6cm，深1.4cm。
2、實驗分組60只家兔隨機(jī)分為六組(1)假手術(shù)對照組10只，不造模。
(2)模型組10只，造模7日。
(3)陽性藥尼莫地平注射液(ND)組，造模7日。
(4)本發(fā)明注射液大劑量組10只，造模7日。
(5)本發(fā)明注射液中劑量組10只，造模7日。
(6)本發(fā)明注射液小劑量組10只，造模7日。
手術(shù)后立即開始給藥，陽性藥ND 15ug/kg，iv；本發(fā)明注射液三組按相應(yīng)劑量給予不同濃度的藥液，iv；正常組及模型組則按相應(yīng)容量的生理鹽水，iv。連續(xù)給藥六天。如不能正常進(jìn)食，則每日灌一次濃奶粉20毫升。
3、標(biāo)本處理所有家兔均于照模后7日殺檢，迅速取腦。造模各組兔腦沿縱裂均勻切為左右兩半球，再經(jīng)血腫正中冠狀切開，分為左右前后4個部分，假手術(shù)組家兔腦也切成相應(yīng)4部分，作組織檢查，與含水量及SOD、LOP含量測定。
三、觀察指標(biāo)及檢測指標(biāo)1、動物一般情況、體重、及死亡數(shù)2、動物神經(jīng)功能缺損分級變化動物神經(jīng)功能缺損分級方案參照Bederson及愛丁堡與斯堪的那維亞研究組方案修訂0級正常I級一側(cè)肢體輕度無力，略有跛行，可以直線行或有偏行(行進(jìn)打偏半徑超過1米)；II級一側(cè)肢體明顯無力，頭部輕度向另側(cè)歪斜，跛行，不能向正前方直行，偏行半徑在0.5-0.75米左右。
III級一側(cè)偏癱，站立比較困難，不能行走，但可以臥位，有顯著的歪頭、口角歪斜；IV組一側(cè)偏癱，不能正臥，呈側(cè)臥甚至仰臥，歪頭及身體扭曲明顯；或不能自主進(jìn)食；神智迷朦，或抽搐頻繁(10分鐘內(nèi)2次以上)；V級昏迷或死亡。
3、腦指數(shù)與腦組織含水量測定腦組織含水量測定按Gotoh等方法。
腦組織含水量＝(腦濕重-腦干重)/腦濕重×100％腦指數(shù)＝腦濕重/體重×100％稱量采用電子天平(TA-1003，上海天平儀器廠)。腦組織經(jīng)DF205型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京西城醫(yī)用設(shè)備二廠)60℃7天烘至恒重(連續(xù)稱重3次無變化)，然后稱取腦干重。
4、超氧化歧化酶、過氧化脂質(zhì)水平的測定超氧化歧化酶SOD采用放射免疫法測定；過氧化脂質(zhì)LPO以TBA法(測MDA含量)測定，722光柵分光光度計測定。
實驗結(jié)果1、動物一般情況及死亡數(shù)家兔于造模術(shù)后均有不同程度的精神萎靡，左側(cè)肢體肌張力增高，肌力減弱，以前肢為顯著；蹦跳反射差，跛行，并向右側(cè)(腱側(cè))偏轉(zhuǎn)；模型組家兔飲食及劑量組家兔大便比較通暢，排便量基本同正常組，小便色澤較清。
表1 本發(fā)明注射液對家兔急性腦出血后死亡數(shù)影響(x±s)死亡數(shù)組別 死亡率3日 7日假手術(shù)組(n＝10)0 0 0模型組(n＝14) 3 1 28.57尼莫地平組(n＝10) 0 0 0小劑量組(n＝13)2 0 15.38本發(fā)明中劑量組(n＝10)0 0 0大劑量組(n＝10)0 0 02、神經(jīng)功能缺損分級變化造模后第1天，模型組及治療組家兔神經(jīng)功能缺損分級相似(組間比較p＞0.05)，與正常組比較均有極顯著的差異(P＜0.01)。第6天觀察，模型組家兔的神經(jīng)功能缺損分組與第1天的分級差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，提示模型組的自然改善程度不顯著；陽性組及本發(fā)明注射液第6天家兔神經(jīng)功能缺損分級均有改善，但陽性組與正常組之間尚有差異(P＜0.05)，本發(fā)明注射液治療組與第1天自身比較，均有顯著性差異(p＜0.01)，與正常組比較無顯著性差異(p＞0.05)，尢以本發(fā)明注射液大、中劑量治療組明顯，說明本發(fā)明注射液對家兔神經(jīng)功能缺損分級的改善程度較大。
表3 本發(fā)明注射液對家兔神經(jīng)功能缺損分析的影響神經(jīng)功能缺損分級組別時間0IIIIIIIVV正常對照組 實驗1日 000 0 0 0實驗6日 000 0 0 0模型組 實驗1日 033 2 2 0實驗6日 024 2 2 0尼莫地平組 實驗1日 034 2 1 0實驗6日 044 2 0 0小劑量組實驗1日 035 1 1 0實驗6日 044 1 1 0本發(fā)明 中劑量組實驗1日 035 1 1 0實驗6日 043 2 1 0大劑量組實驗1日 053 1 1 0實驗6日 062 2 0 03、指數(shù)與腦組織含水量的變化造模后第7天，模型組腦指數(shù)與右腦組織含水量均顯著高于正常對照組，左腦含水量接近正常，提示模型組造模側(cè)腦水腫仍明顯。尼莫地平組及本發(fā)明注射液治療組腦指數(shù)仍高，但低于模型組，較模型組均顯著降低。尼莫地平組及本發(fā)明注射液大、中劑量治療組右腦組織含水量均較模型組顯著降低。提示陽性與本發(fā)明注射液均有減輕腦水腫的作用(見表4)。
表4 本發(fā)明注射液對急性腦出血家兔腦指數(shù)與腦組織含水量的影響(x±s，n＝10)腦含水量(％)組別 腦指數(shù)左腦 右腦對照組0.273±0.020*77.17±0.73 77.27±0.90**模型組0.386±0.038 78.02±1.04 79.30±1.06尼莫地平組0.305±0.044*77.46±0.79 77.07±0.94**小劑量組0.333±0.048*77.54±0.92 78.68±0.84本發(fā)明 中劑量組0.301±0.043*77.40±0.61 78.02±1.00**大劑量組0.293±0.047*77.45±1.21 77.62±1.15**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01.4、腦組織病理學(xué)檢查肉眼觀察發(fā)現(xiàn)，模型組腦內(nèi)血腫明顯，而各組治療腦內(nèi)血腫縮小。
光學(xué)顯微鏡下觀察(見附圖
)模型對照組血腫明顯，可見陳舊性的血凝塊，血腫中有少量膠質(zhì)細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤；血腫周圍腦組織水腫，組織疏松本發(fā)明注射液小劑量組血腫部分被吸收，血腫縮小，血腫部分有較多的膠質(zhì)細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤，并取代血腫。本發(fā)明注射液中劑量組血腫大部分被吸收，血腫明顯縮小，可見小的瘢痕；腦組織水腫明顯減輕。本發(fā)明注射液大劑量組和尼莫地平組病變類似，血腫大部分被吸收，有早期的膠質(zhì)細(xì)胞瘢痕形成。5、組織超氧化物岐化酶、過氧化脂質(zhì)水平的變化造模后7天觀察，模型組家兔腦組織LPO含量均較正常組顯著增高，SOD含量顯著降低。陽性藥組及本發(fā)明注射液大、中劑量組與模型組比較，LPO含量均降低；陽性藥組及本發(fā)明注射液組SOD含量均增高。提示本發(fā)明注射液能升高組織SOD含量，降低LPO水平，從而減輕腦組織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。見表5。
表5 本發(fā)明注射液對急性腦出血家兔腦組織中SOD、LPO含量的影響(x±s)組別 LPO(nmol/100mg.Pro)SOD(U/mg.Pro)對照組354.67±106.59 17.36±3.50*模型組378.86±205.80 13.12±4.45尼莫地平組316.81±94.4920.61±2.83**小劑量組360.06±189.36 19.39±4.71**本發(fā)明中劑量組153.09±48.39**20.31±3.65**大劑量組181.77±44.39**24.19±6.65**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.0權(quán)利要求
1.一種治療急性腦出血的藥物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的藥劑大黃80～120 蒲黃130～180梔子135～180 冰片0.8～1.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療急性腦出血的藥物，其特征在于所述的藥劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療急性腦出血的藥物，其特征在于所述的藥劑是注射液。
4.權(quán)利要求3所述的治療急性腦出血的藥物的制備方法，包括以下步驟(1)大黃粉碎成粗粒，加5～12倍量70～80％乙醇，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.12，攪拌加入4％明膠溶液至無沉淀產(chǎn)生，再加乙醇使含醇量達(dá)75～85％，冷藏24～72小時，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35，真空干燥，得大黃干燥提取物；(2)蒲黃、梔子壓碎后，加6～10倍量80～90％乙醇回流提取2～4次，每次1～3小時，合并醇提液，減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10～1.12，冷藏24～72小時，濾過，濾液用等量乙酸乙酯萃取4～8次，減壓回收乙酸乙酯至稠膏狀，真空干燥，得蒲梔干燥提取物；(3)取上述兩干燥提取物，加注射用水溶解，加活性炭，充分?jǐn)嚢瑁訜嶂蠓?，放冷，濾過；(4)冰片與泊洛沙姆研勻，攪拌加入上述濾液中使溶解，加入氯化鈉，調(diào)pH值至7.0～8.0，濾過，濾液補(bǔ)加注射用水，再調(diào)pH值至7.0～8.0，然后用微孔濾膜濾過，濾液灌裝于處理好的輸液瓶中，熱壓滅菌，制得注射液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療急性腦出血的藥物，它以大黃、蒲黃、梔子和冰片為原料，根據(jù)每味中藥的不同特性，經(jīng)過提取制成注射液。本發(fā)明藥物對急性腦出血具有良好的治療作用，能明顯改善腦出血所致的偏癱體征，縮小腦內(nèi)血腫面積，減輕腦水腫和神經(jīng)細(xì)胞的繼發(fā)性損害；減少死亡率，提高存活質(zhì)量，改善神經(jīng)功能缺損，明顯減少腦組織的含水量，提高腦內(nèi)超氧化物歧化酶的活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生，并有利尿作用；有效縮短血液的凝血時間和出血的止血時間；對神經(jīng)元細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，量效關(guān)系明顯。
文檔編號A61P9/00GK1424080SQ0214969
公開日2003年6月18日 申請日期2002年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月20日
發(fā)明者張晴龍 申請人:張晴龍