(5β,7α,9β,10α)-7,14-二羥基-16-烯-3,15-二酮在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域及醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及（5 β，7 α，9 β，10 α ) -7, 14-二羥 基-16-烯-3, 15-二酮在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] (5β，7α，9β，10α)-7, 14-二羥基-16-烯-3, 15-二酮（在本申請中簡稱為 ΤΤ28)是冬凌草中的重要活性成分。冬凌草又名冰凌草為藥用植物，為唇形科香菜屬碎米 椏變種，多年生草本植物，陽性耐陰植物，略喜陰，抗寒性強；一般高30~130厘米，葉對生， 葉片皺縮，呈帶棱的卵圓形。8~10月開花，9~11月結(jié)果。因冬季植株葉片凝結(jié)成薄入 蟬翼的冰芯片而得名。具有清熱解毒，消炎止痛，活血功效。藥用成分為揮發(fā)油和二萜類、 冬凌草甲素、乙素、丙素、丁素、戊素、辛素以及ct 一香樹脂醇。中藥用以治療感冒、頭痛、炎 癥。（5 β，7 α，9 β，10 α )-7, 14-二羥基-16-烯-3, 15-二酮是冬凌草中的活性物質(zhì)，其基 本信息如下：
[0003] 【英文名】（5beta，7alpha，9beta，IOalpha) _7, 14-dihydroxykaur-16-ene-3, 15_d ione
[0004] 【分子式】C20H2804
[0005] 【分子量】332. 43
[0006] 【CAS 號】79498-31-0
[0007] 【檢測方式】高效液相色譜法HPLC彡98%
[0008]【性狀】本品為白色結(jié)晶
[0009]【作用與用途】本品用于含量測定。
[0010]【提取來源】本品為唇形科植物冬凌草Rabdosiarubescens (Hamst.) C. Y. WuetHsuan，的全草。
[0011]【藥理性質(zhì)】密度：1.22g/cm3。熔點：513.4°C易甲醇，乙醇。
[0012] TT28是取自傳統(tǒng)重要材料的天然產(chǎn)物，生物利用度高、性質(zhì)穩(wěn)定，具有臨床使用 價值。隨著人們對此類化合物的化學(xué)和生物學(xué)研究的深入，其分子作用機制將逐步明確， 這將進一步推動此類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系研究，并有助于提高此類化合物 的藥用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的目的是提供（5 β，7 α，9 β，10 α ) -7, 14-二羥基-16-烯-3, 15-二酮（在 本申請中簡稱為ΤΤ28)的新的藥物用途。
[0014] 本發(fā)明所述的ΤΤ28,結(jié)構(gòu)式如下：
[0015]
[0016] 本發(fā)明的TT28購自上海遠幕生物科技有限公司。
[0017] 本發(fā)明提供了 TT28在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述的腫瘤可以是肝癌、肺腺 癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、宮頸癌或者血癌。
[0018] 相應(yīng)的抗腫瘤藥物可以是針劑或者片劑。
[0019] 本發(fā)明提供了一種抑制體外腫瘤細胞增殖的方法，將TT28加入腫瘤細胞的培養(yǎng) 液中。所述的腫瘤細胞可以是肝癌細胞、血癌細胞、宮頸癌細胞、乳腺癌細胞或者胰腺癌細 胞。本發(fā)明的一個實施例中采用的肝癌細胞是SK-HEPl、Focus和QGY。
[0020] CCK-8測試結(jié)果顯示，TT28能夠明顯抑制細胞增殖，甚至導(dǎo)致腫瘤細胞死亡。細胞 周期結(jié)果顯示，TT28能夠促進細胞凋亡。
[0021] 一般而言，加入 TT28 的終濃度為（λ 1-50 μ M。例如，(λ 1-5 μ Μ，(λ 1-10 μ M， 0· 1-12 μ Μ,0· 1-20 μ Μ,0· 1-30 μ Μ,0· 1-50 μ Μ,0· 1-2 μ Μ,5-10 μ Μ,2-50 μ Μ,0· 5-50 μ Μ， 0· 5-5 μ Μ,0· 5-10 μ Μ,1-12 μ Μ,1-20 μ Μ,0· 5-50 μ Μ,15-50 μ Μ,0· 5-10 μ Μ,0·5-12 μ Μ， 0· 5-20 μ Μ，0· 5-30 μ Μ，15-60 μ Μ，等等。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤藥物，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是ΤΤ28。所述的 腫瘤可以是肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、宮頸癌或者血癌。
[0023] 本發(fā)明的小分子化合物可以采用各種常規(guī)的制備方法制備。例如，采用人工化學(xué) 合成的方法。
[0024] 利用本發(fā)明小分子化合物，通過各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與ΤΤ28發(fā)生相互作 用的物質(zhì)，如受體、抑制劑或拮抗劑等。
[0025] 本發(fā)明及其抑制劑、拮抗劑等，在治療上進行施用（給藥）時，可提供不同的效果。 通常，可將這些物質(zhì)配制于無毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通 常約為5-8,較佳地pH約為6-8, pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變 化。配制好的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進行給藥，其中包括（但并不限于）：肌內(nèi)、腹 膜內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。
[0026] 以本發(fā)明的TT28為例，可以將其與合適的藥學(xué)上可接受的載體聯(lián)用。這類藥物組 合物含有治療有效量的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括（但并不限 于）：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā) 明的TT28可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過 常規(guī)方法進行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規(guī)方法進行制備。藥物 組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量， 例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的TT28還可與其他治 療劑一起使用。
[0027] 當(dāng)本發(fā)明的TT28被用作藥物時，可將治療有效劑量的TT28施用于哺乳動物，其中 該治療有效劑量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約8毫克/千 克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約1毫克/千克體重。當(dāng)然，具體劑量還 應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
[0028] 本發(fā)明提供了 TT28在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。TT28是天然產(chǎn)物，能夠明顯抑制 腫瘤細胞的增殖。本發(fā)明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者其輔助成分進行開發(fā)， 抑瘤效果明顯，綠色環(huán)保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑和手段。
【具體實施方式】
[0029] 實驗方法：
[0030] 1.細胞復(fù)蘇
[0031] 1)從液氮罐中取出凍存管，直接投入37°C溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
[0032] 2)從37°C水浴中取出凍存管，用吸管吸出細胞懸液，注入離心管并加入10倍以上 培養(yǎng)液，混合后低速離心，棄上清，再重復(fù)用培養(yǎng)液洗一次。
[0033] 3)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，接種培養(yǎng)瓶，放在37°C培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng) 液，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)至一定濃度時進行傳代。PANC-I細胞培養(yǎng)在含10% Gibico胎牛血清 的DMEM高糖培養(yǎng)基中，SK-HEPl和QGY細胞培養(yǎng)在含10 %胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)基中含l〇〇U/ml青霉素和100μ g/ml鏈霉素。
[0034] 2.細胞傳代培養(yǎng)
[0035] 每天觀察細胞生長的情況，當(dāng)細胞在培養(yǎng)瓶中長至約90 %匯合時傳代，約每隔 2-4天傳代一次。一瓶傳代成三瓶，或一個25cm2傳代于一個75cm2的培養(yǎng)瓶中。方法：
[0036] 1)用IX磷酸緩沖液洗滌細胞一次。
[0037] 2)加入2_3ml胰酶消化液消化，置于37°C培養(yǎng)箱中數(shù)分鐘。用手拍打細胞培養(yǎng)瓶， 使細胞分離。
[0038] 3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合適培養(yǎng)基終止胰酶消化。將細胞分裝于 新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
[0039] 3.細胞凍存
[0040] 1)取