一種卷煙煙氣中角鯊烯的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及卷煙煙氣中成分的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種卷煙煙氣中角 鯊烯的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 角鯊烯最初是從鯊魚(yú)的肝油中發(fā)現(xiàn)的，1914年被命名為Squalene，其化學(xué)名稱(chēng)為 2,6，10，15，19,23-六甲基一2,6，10，14，18,22-二十四碳六烯，屬開(kāi)鏈三萜類(lèi)化合物。
[0003] 角鯊烯具有提高人體內(nèi)超氧化物歧化酶(S0D)活性、增強(qiáng)機(jī)體抗氧化性和免疫能 力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，是一種無(wú)毒性的具有防病治病作 用的生物活性物質(zhì)。最近研究發(fā)現(xiàn)角鯊烯對(duì)人體還具有解毒作用，可移除組織中的脂溶性 毒素。已有研究表明：在煙絲中添加一定量的角鯊烯，可降低煙氣中幾種有害物質(zhì)和自由基 含量，表明角鯊烯具有獨(dú)特降害作用，目前開(kāi)發(fā)利用角鯊烯已成為科技界和煙草業(yè)研究的 熱點(diǎn)。
[0004] 2014年4月，國(guó)家煙草專(zhuān)賣(mài)局下發(fā)關(guān)于加快卷煙降焦減害技術(shù)成果推廣應(yīng)用的通 知（國(guó)煙辦綜[2014]218號(hào)），提出要加大卷煙減害技術(shù)重大專(zhuān)項(xiàng)研究成果的應(yīng)用推廣力度， 要采取針對(duì)性技術(shù)措施加快卷煙降焦減害步伐。為了配合國(guó)家局加快卷煙降焦減害步伐的 重大決策，本申請(qǐng)人在完成中國(guó)煙草總公司2013年度科技面上項(xiàng)目《廣西主流煙氣天然抗 氧化劑角鯊烯的生態(tài)累積與減害研究》（中煙辦[2013] 149號(hào))研究基礎(chǔ)上，迫切需要建立一 種可行的適于標(biāo)準(zhǔn)的主流煙氣角鯊烯含量的檢測(cè)方法。
[0005] 但是，目前國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有可參考的煙氣中尤其是主流煙氣中角鯊烯定性和定量的 檢測(cè)方法，因此，在煙草行業(yè)建立烤煙中角鯊烯定性和定量的檢測(cè)方法具有前瞻性，也是十 分必要的。而在煙氣中角鯊烯的檢測(cè)中，良好的樣品前處理方法對(duì)獲得準(zhǔn)確科學(xué)的檢測(cè)結(jié) 果起到關(guān)鍵性作用。在確定的檢測(cè)條件下，采用不同提取劑提取樣品中角鯊烯，其提取效 率、提取操作用時(shí)等因素都是必須考慮的重要因素，各個(gè)因素之間又是相互影響的關(guān)系，目 前未見(jiàn)基于高效液相色譜法檢測(cè)煙葉中角鯊烯的樣品前處理研究報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是填補(bǔ)現(xiàn)有煙氣中角鯊烯的檢測(cè)技術(shù)不足，提供一種基 于高效液相色譜法檢測(cè)卷煙煙氣中角鯊烯的方法。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
[0008] 提供一種卷煙煙氣中角鯊烯的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0009] 以甲醇和乙腈為流動(dòng)相，采用填有粒徑5μπι的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)，精確 吸取1〇此待測(cè)樣品液注入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于210nm波長(zhǎng) 處檢測(cè)角鯊烯的吸收值，采用外標(biāo)法，根據(jù)吸收峰面積計(jì)算其含量。
[0010] 所述高效液相色譜法檢測(cè)主流煙氣中所含角鯊烯的方法包括以下步驟：
[0011] S1.樣品經(jīng)前處理得到樣品液；
[0012] S2.配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
[0013] S3.檢測(cè):取樣品液注入高效液相色譜儀檢測(cè)；
[0014] S4.采用外標(biāo)法，根據(jù)吸收峰面積計(jì)算角鯊烯含量。
[0015] 所述檢測(cè)的檢測(cè)條件為：
[0016] (1)高效液相色譜儀HPLC(AgilentllOO)配紫外檢測(cè)器；
[0017] (2)色譜柱:C18 柱，5ym，4.6X250mm;
[0018] ⑶柱溫：2(TC;
[0019] ⑷流動(dòng)相類(lèi)型：甲醇：乙腈(V:V = 70:30);
[0020] (5)流動(dòng)相流速:0.8mL/min;
[0021] (6)檢測(cè)波長(zhǎng)為：210nm;
[0022] (7)進(jìn)樣量：10yL;
[0023] 步驟S2所述配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法是準(zhǔn)確稱(chēng)取0. lg角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品，精確至O.OOOlg， 用乙腈(色譜純)溶解后定容至100mL配制成1000mg/L的角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分振蕩搖勻。所 配標(biāo)準(zhǔn)溶液置于4°C保存，待用。
[0024] 步驟S2所述角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立的方法是:采用系列稀釋法，分別配制成濃度 為0.002，0.01，0.05，0.2，0.5mg/mL的角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)溶液于高效液相色譜進(jìn)樣檢測(cè)；以進(jìn)樣濃 度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，求出角鯊烯濃度與相應(yīng)峰面積的線(xiàn)性回歸方 程。
[0025]其中，步驟S1包括以下步驟：
[0026] S11.收集煙氣固粒相物并提取:抽吸卷煙，采用濾片收集煙氣固粒相物；
[0027] S12.提取:將收集了煙氣固粒相物劍橋?yàn)V片放入錐形瓶中，加入提取劑，常溫下振 蕩提取，得提取液；
[0028] S13.凈化:取步驟S12所得提取液，經(jīng)過(guò)再處理后得到的溶液再經(jīng)過(guò)柱，丙酮洗脫， 收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用色譜乙腈定容，過(guò)〇. 22μπι濾膜即得待測(cè)樣品液；
[0029] 其中，步驟S12所述提取劑為丙酮或氯仿；
[0030] 步驟S13所述再處理指的是將步驟S12所得提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用正己烷溶解， 再用正己烷洗滌；
[0031] 步驟S13所述過(guò)柱是采用Ν-丙基乙二胺固相固相萃取柱。
[0032] 優(yōu)選地，步驟S11所述抽吸卷煙是按照GB/T 16450標(biāo)準(zhǔn)操作。步驟S11所述濾片為 Φ 92mm的劍橋?yàn)V片。
[0033]優(yōu)選地，步驟S12所述振蕩提取是用搖床以130轉(zhuǎn)/min振蕩20min。
[0034]優(yōu)選地，步驟S13所述洗滌的次數(shù)為3次。
[0035]優(yōu)選地，步驟S13所述N-丙基乙二胺固相固相萃取柱的裝柱方法為稱(chēng)取0.3gN_丙 基乙二胺固相吸附劑裝柱，其上方加l.〇g無(wú)水硫酸鈉。
[0036]本發(fā)明適用于卷煙主流煙氣中角鯊烯的檢測(cè)。
[0037]本發(fā)明具有以下有益效果：
[0038]本發(fā)明提供了一種高效液相色譜法檢測(cè)卷煙煙氣中角鯊烯的檢測(cè)方法，采用丙酮 或氯仿作為提取溶劑，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干后用正己烷溶解和洗滌，保障了較高的提取 效率，再經(jīng)硅膠吸附劑科學(xué)凈化，很好地去除雜質(zhì)。本發(fā)明建立了一種高效液相色譜法檢測(cè) 卷煙煙氣中角鯊烯的檢測(cè)方法，科學(xué)的前處理方法保障了較高的提取效率，再經(jīng)硅膠吸附 劑科學(xué)凈化，很好地去除雜質(zhì)，獲得的樣品液在本發(fā)明整體優(yōu)化的檢測(cè)條件下，角鯊烯色譜 峰分離較好，具有準(zhǔn)確、快速、高靈敏、重現(xiàn)性好、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，不僅符合定性要求，而且 符合定量要求。
【附圖說(shuō)明】
[0039] 圖1角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。
[0040] 圖2角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（lmg/L角鯊烯標(biāo)樣，峰面積= 41.9)。
[0041] 圖3角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（5mg/L角鯊烯標(biāo)樣，峰面積= 213.3)。
[0042] 圖4丙酮提取液未添加角鯊烯空白樣品色譜圖。
[0043]圖5.丙酮提取液添加40mg/kg(換算為煙絲含量)角鯊烯樣品色譜圖。
[0044] 圖6氯仿提取液未添加角鯊烯空白樣品色譜圖。
[0045] 圖7氯仿提取液添加40mg/kg(換算為煙絲含量)角鯊烯樣品色譜圖。
[0046]圖8未經(jīng)凈化處理效果色譜圖（空白對(duì)照）。
[0047]圖9未經(jīng)凈化處理效果色譜圖（添加40mg/kg角鯊烯樣品）。
[0048] 圖10經(jīng)PSA柱凈化后樣品的色譜圖（空白對(duì)照）。
[0049] 圖11經(jīng)PSA柱凈化后樣品的色譜圖（添加40mg/kg角鯊烯樣品）。
[0050] 圖12丙酮提取液直接過(guò)柱處理后色譜圖。
[0051]圖13丙酮提取液再經(jīng)正己烷溶解后過(guò)柱處理后色譜圖。
[0052]圖14 C8柱檢測(cè)樣品的色譜圖（流動(dòng)相甲醇：乙腈，5mg/kg角鯊烯標(biāo)樣）。
[0053]圖15 C8柱檢測(cè)樣品的色譜圖（流動(dòng)相甲醇：乙腈，空白對(duì)照）。
[0054]圖16 C8柱檢測(cè)樣品的色譜圖（流動(dòng)相甲醇：乙腈，添加40mg/kg角鯊烯的樣品）。 [0055]圖17 C8柱檢測(cè)樣品的色譜圖（流動(dòng)相乙腈:水，5mg/kg角鯊烯標(biāo)樣）。
[0056]圖18 C8柱檢測(cè)樣品的色譜圖（流動(dòng)相乙腈:水，空白對(duì)照）。
[0057]圖19 C8柱檢測(cè)樣品的色譜圖（