一種檢測麥冬中黃酮含量的高效液相色譜方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測麥冬中黃酮含量的高效液相色譜方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥材成分復(fù)雜，功效眾多，其質(zhì)量評價正向快速、高效、樣品前處理簡單、高重復(fù) 性、低成本、容易操作的方向發(fā)展。HPLC同時測定多種成分的檢測方法已成為當(dāng)前分析研究 中藥材、中成藥質(zhì)量的最有效方法之一。特別是對于一些多基源、多產(chǎn)地品種，多種成分評 價更能真實的反應(yīng)不同來源藥材質(zhì)量的差異性，為臨床用藥提供更為可靠的參考依據(jù)。
[0003] 麥冬，來源于百合科沿階草屬植物Ophiopogon japonicus (L. f) Ker-Gawl.的干燥 塊根，是常用中藥材之一，主要用于治療肺燥干咳，陰虛癆嗽，喉痹咽痛，津傷口渴，內(nèi)熱消 渴等疾病，已收錄在《中國藥典2010年版》一部中，其產(chǎn)地主要分布在四川、浙江、湖北、山 東、安徽等。
[0004] 麥冬的有效成分中，包括甲基麥冬黃燒酮A、甲基麥冬黃燒酮B、6_醛基異麥冬黃 烷酮A、麥冬甲基黃烷酮A、甲基麥冬二氫高異黃酮B等多種黃酮成分。為了有效的監(jiān)控麥 冬藥材的產(chǎn)品質(zhì)量，需要對麥冬中的多種黃酮成分一一進(jìn)行含量測定。
[0005] 中國專利CN 102445502 A、CN 102759582 A測定了甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬 黃烷酮B、6-醛基異麥冬黃烷酮A這3種黃酮成分的含量，其高效液相色譜檢測方法需要采 用特定的梯度洗脫條件，才能實現(xiàn)較好的檢測效果，存在操作復(fù)雜、出峰時間長等缺陷。
[0006] 為了解決現(xiàn)有檢測方法中存在的問題，同時為了更有效的監(jiān)控麥冬藥材的產(chǎn)品質(zhì) 量，我們尋求建立一種檢測麥冬藥材的新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測麥冬中黃酮含量的高效液相色譜方法。
[0008] 本發(fā)明提供的一種檢測麥冬中黃酮含量的高效液相色譜方法，包括以下步驟：
[0009] a、取麥冬黃酮的對照品，制備對照品溶液，用高效液相色譜方法進(jìn)行檢測，得到標(biāo) 準(zhǔn)曲線；
[0010] b、取待檢的麥冬樣品，制備供試品溶液，用高效液相色譜方法進(jìn)行檢測；
[0011] c、計算麥冬樣品中的黃酮含量；
[0012] 步驟a和b所用高效液相色譜方法的色譜條件為：C18色譜柱；流動相為乙腈-水 溶液，乙腈與水的體積比為35 :65~65 :35。
[0013] 進(jìn)一步的，步驟a中，麥冬黃酮的對照品選自甲基麥冬高黃酮A、麥冬甲基黃烷酮 A、甲基麥冬二氫高異黃酮B中的任意一種或兩種以上。
[0014] 進(jìn)一步的，步驟a中，制備對照品溶液的溶劑為甲醇。
[0015] 進(jìn)一步的，步驟a中，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線是對照品色譜峰的峰面積與對照品濃度之間 的線性關(guān)系方程。
[0016] 進(jìn)一步的，步驟b中，制備供試品溶液的方法為：取麥冬粉末，過篩，加入甲醇A，靜 置12h~48h后，超聲提取30min~90min，過濾，濾渣加入甲醇B，超聲提取15min~60min， 過濾，合并濾液，過〇. 45 μ m濾膜，所得濾液即為供試品溶液；
[0017] 麥冬粉末與甲醇A的重量體積比為1 :6~I. 5 :100g/ml ;麥冬粉末與甲醇B的重 量體積比為1 :4~I. 5 :60g/ml。
[0018] 進(jìn)一步的，所述的色譜條件中，C18色譜柱為Comatex C18柱或Kromasil 100-5C18柱；長度為250mm，內(nèi)徑為4. 6mm，填充劑粒徑為3. 5 μπι。
[0019] 進(jìn)一步的，所述的色譜條件中，乙腈與水的體積比為58 :42。
[0020] 進(jìn)一步的，所述的色譜條件中，體積流量為0. 8mL/min~1. 5mL/min ;優(yōu)選的，體積 流量為 I. 0mL/min〇
[0021] 進(jìn)一步的，所述的色譜條件中，檢測波長為200nm~400nm ;優(yōu)選的，檢測波長為 ~2%nm。
[0022] 進(jìn)一步的，所述的色譜條件中，柱溫為25°C~35°C ;進(jìn)樣量為IOyL~30yL。
[0023] 本發(fā)明高效液相色譜方法，采用等度洗脫，便于操作，檢測方法簡單，且具有良好 的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性，加樣回收率高，檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，為麥冬藥材的 質(zhì)量評價提供了一種行之有效的檢測方法，非常有利于麥冬藥材的質(zhì)量評價和質(zhì)量控制標(biāo) 準(zhǔn)建立。
[0024] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0025] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明對混合對照品和供試品溶液的高效液相色譜檢測結(jié)果：混合對照品 (a)和供試品溶液（b)的HPLC色譜圖：1是指甲基麥冬高黃酮A的色譜峰；2是指麥冬甲基 黃烷酮A的色譜峰；3是指甲基麥冬二氫高異黃酮B的色譜峰。
【具體實施方式】
[0027] 本發(fā)明【具體實施方式】中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過購買市售產(chǎn)品獲得。
[0028] Agilentl200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司，包括二元栗，自動進(jìn)樣器，DAD檢 測器），BP121S十萬分之一電子天平（德國賽多利斯公司），KQ-500DB數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司），Milli-Q Advantage AlO超純水儀（法國默克密理博）。
[0029] 乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純；甲基麥冬高黃酮A(批號： MUST-14080709)和麥冬甲基黃烷酮A(批號：MUST-14052901)對照品由成都曼思特生物科 技有限公司提供，甲基麥冬二氫高異黃酮B(批號：140525)對照品由四川維克奇生物科技 有限公司提供，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均多98% ;檢測樣品為2015年4月在三臺地區(qū)收集麥冬藥材，共 10個批次，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)李敏教授鑒定為Ophiopogon japonicus(L. f) Ker-Gawl.的 干燥塊根。
[0030] 實施例1、本發(fā)明高效液相色譜方法檢測麥冬樣品中黃酮含量
[0031] I、溶液制備
[0032] 1. 1制備混合對照品溶液
[0033] 精密稱定甲基麥冬高黃酮A、麥冬甲基黃烷酮A和甲基麥冬二氫高異黃酮B 3 種對照品9. 98、10. 02、9. 86mg，加甲醇超聲溶解并定容至25mL，制成濃度分別為0. 3992、 0. 4008、0. 3955mg/mL的對照品供試溶液。
[0034] 1. 2制備供試品溶液
[0035] 取待檢的麥冬粉末（過4號篩）3.0g，精密稱定，加甲醇50mL，靜置24h，超聲提取 45min，過濾，濾渣加甲醇30mL，超聲提取30min，過濾，合并濾液，回收溶劑至1~2ml，轉(zhuǎn)入 5ml容量瓶中，洗滌3~4次，洗滌液一并轉(zhuǎn)入容量瓶中，定容至刻度，0. 45 μ m濾膜濾過，得 濾液即為供試品溶液。
[0036] 2、色譜條件
[0037] 色譜柱為 Comatex C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);流動相為乙腈：水（58:42)，體 積流量1.0 mL/min ;柱溫30°C，檢測波長296nm，進(jìn)樣量20 μ L。
[0038] 采用上述色譜條件的高效液相色譜方法分別檢測對照品溶液、供試品溶液；按外 標(biāo)法以峰面積計算得到麥冬中甲基麥冬高黃酮Α、麥冬甲基黃烷酮Α、甲基麥冬二氫高異黃 酮B的含量。
[0039] 混合對照品和供試品溶液的高效液相色譜檢測結(jié)果，如圖1所示。
[0040] 結(jié)果表明，本發(fā)明方法可以使得麥冬中甲基麥冬高黃酮Α、麥冬甲基黃烷酮Α、甲 基麥冬二氫高異黃酮B等組分的色譜峰之間完全分離開，從而實現(xiàn)對麥冬藥材的定性和定 量檢測。
[0041] 實施例2、本發(fā)明高效液相色譜方法檢測麥冬樣品中黃酮含量
[0042] 色譜條件為：色譜柱為Comatex C18柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);流動相為乙腈：水 (35:65)，體積流量I. 2mL/min ;柱溫35°C，檢測波長278nm，進(jìn)樣量15 μ L。
[0043] 其他條件參考實施例1。
[0044] 實施例3、本發(fā)明高效液相色譜方法檢測麥冬樣品中黃酮含量
[0045] 色譜條件為：色譜柱為Kromasil 100-5C18柱（4. 6_X 250