用于檢測(cè)埃里希體屬抗體的肽、裝置和方法
【專利說明】用于檢測(cè)埃里希體屬抗體的肽、裝置和方法
[0001] 本申請(qǐng)是2010年11月19日提交的題為"用于檢測(cè)埃里希體屬抗體的肽、裝置和 方法"的中國(guó)專利申請(qǐng)201080061669. 1的分案申請(qǐng)。
[0002] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0003] 本申請(qǐng)要求2009年11月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/263, 329號(hào)的權(quán)益，該 臨時(shí)申請(qǐng)以引用的方式整體并入本文。
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[0006] 發(fā)明背景
[0007] 埃里希體屬（Ehrlichia)細(xì)菌是感染哺乳動(dòng)物宿主中循環(huán)淋巴細(xì)胞的專性細(xì)胞 內(nèi)病原體。犬埃里希體（Ehrlichiacanis)和恰菲埃里希體（Ehrlichiachaffeensis)是 分別感染犬和人并且引發(fā)犬單核細(xì)胞埃里希體?。–ME)和人單核細(xì)胞埃里希體病（HME)的 相同亞屬組的成員。犬疾病的特征在于發(fā)熱、淋巴結(jié)病、體重減輕和全血細(xì)胞減少癥。在人 中，疾病的特征在于發(fā)熱、頭痛、肌痛和白細(xì)胞減少。早期檢測(cè)和治療對(duì)于治療犬和人埃里 希體病是非常重要的。
[0008] 間接免疫熒光測(cè)定法（IFA)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA)通常用于這類疾病的 診斷。這類測(cè)定法測(cè)量或以其它方式檢測(cè)來自受試者的血液、血漿或血清的抗-埃里希體 屬抗體對(duì)感染的細(xì)胞、細(xì)胞裂解物或部分純化的全埃里希體屬蛋白的結(jié)合。然而，目前已知 的用于檢測(cè)抗-埃里希體屬抗體或其片段的測(cè)定法因與這類測(cè)試中使用的埃里希體屬抗 原的不純性質(zhì)直接相關(guān)的敏感性和特異性問題而在效用上受到嚴(yán)重限制。即，目前已知的 測(cè)定法使用許多全埃里希體屬抗原或非物種特異性抗原的混合物。
[0009] 因此，本領(lǐng)域中仍然需要用于檢測(cè)埃里希體屬抗原和進(jìn)行單核細(xì)胞埃里希體病血 清學(xué)診斷的其它測(cè)定法。
[0010] 發(fā)明概述
[0011] 本發(fā)明部分基于這樣的發(fā)現(xiàn)：埃里希體屬外膜蛋白l(OMP-l)蛋白質(zhì)的片段的某 些序列變體可對(duì)針對(duì)多種埃里希體屬物種的抗體反應(yīng)提供穩(wěn)健的檢測(cè)。因此，本發(fā)明提供 了用于檢測(cè)結(jié)合埃里希體屬抗原的抗體和診斷單核細(xì)胞埃里希體病的組合物、裝置、方法 和試劑盒。
[0012] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了能夠結(jié)合識(shí)別埃里希體屬抗原的抗體的肽。在某些實(shí) 施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDNO: 1的序列XfX^XfXfXfXfXfXfT-Xia-Xn-Xu-X^-G -L-K-Q-X18-ff-X20-G-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-X4〇( SEQIDNO: 1)，其中Xi- &和X27 -X4。的每一個(gè)為任意氨基酸，X7為選自N和Q的氨基酸， Xs為選自T和P的氨基酸，Xi。為選自T和V的氨基酸，Xn為選自G和A的氨基酸，X12為選 自L和V的氨基酸，X13為選自Y和F的氨基酸，X18為選自D和N的氨基酸，X2。為選自D和 N的氨基酸，X22為選自S和V的氨基酸，X23為選自A、S和T的氨基酸，X24為選自A和I的 氨基酸，x25為選自S、T和P的氨基酸，以及X26為選自S、N和K的氨基酸。
[0013] 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDNO: 1的序列，其中&為〇,并 且X25為選自T和P的氨基酸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDNO: 1的序 列，其中X7SN并且X25SS。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDN0:1的序 列，其中Xi為選自S和K的氨基酸，X2為選自A、V和R氨基酸，X3為選自K和D的氨 基酸，乂4為E，X5為選自E、D和N的氨基酸，X6為選自K和Q的氨基酸。在某些實(shí)施方 案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDN0:1的序列，其中，XiSS，X2為選自A和V的氨基酸， &為1(，X々E，X5為選自E和D的氨基酸，并且X#K。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明 的肽包含SEQIDN0:1的序列，其中有序列K-R-D-E-N-Q(SEQIDN0:2)。在 某些實(shí)施方案中，X27-X4。具有選自Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQIDNO: 3)、 M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQIDN0:4)、S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQID N0:5)和Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQIDN0:6)的序列。
[0014] 在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDN0:59的序列F-S-A-K-X5-X6-X7-A-E -t-x11-x12-t-f-g-x16-x17-x18-x19-x20-d-g-a-x24-x25-x26-x27-n-x29-v-x31-n-x33-f-t-i-s-n(s EQID勵(lì):59)，其中1為選自￡和0的氨基酸46為選自￡和0的氨基酸47為任意氨基酸， Xn為選自K和R的氨基酸，X12為任意氨基酸，X16為選自L和I的氨基酸，X17為任意氨基 酸，X1S為選自R和K的氨基酸，X19為選自Q和N的氨基酸，X2。為選自Y和T的氨基酸，X24 為任意氨基酸，X25為選自I和L的氨基酸，X26為任意氨基酸，X27為選自D和E的氨基酸， X29為選自E和Q的氨基酸，X31為選自E和Q的氨基酸，以及X33為選自K和R的氨基酸。
[0015] 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDN0:59的序列，其中X5SE，Xf^E， 父16為L(zhǎng)、X18為K、X2。為Y、X25為I、X29為Q、X31為Q，以及X33為K。在其它實(shí)施方案中，本發(fā) 明的肽包含或由SEQIDN0:59的序列組成，其中X7SK，X12為選自K和R的氨基酸，乂17為 選自E和D的氨基酸，X24為選自K和Q的氨基酸，以及X26為選自E和T的氨基酸。
[0016] 在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDN0:92的序列G-X2-F-S-A-K-X7-Xs-K _X10_A_D_T_R_X15_T_F_G_L_X20_K_Q_T_D_G_A_X27_I_X29_E_N_X32_V_X34_N_X36_F_T_I_S_N(SEQ IDN0:92)，其中X2為選自D和N的氨基酸，X7為選自E和Q的氨基酸，Xs為選自E和Q的 氨基酸，&。為任意氨基酸，X15為任意氨基酸，X2。為任意氨基酸，X27為任意氨基酸，X29為任 意氨基酸，X32為選自E和Q的氨基酸，X34為選自E和Q的氨基酸，以及X36為選自K和R的 氨基酸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含SEQIDN0:92的序列或由其組成，其中&為 N、父7為E、X8為E、X32為Q、X34為Q，以及X36為K。
[0017] 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含3￡〇10從)：1、3￡〇10勵(lì):59或3￡〇10勵(lì) :92 的序列并且還包括額外的N-末端肽序列。額外的N-末端肽序列可包含1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10或更多個(gè)氨基酸并且可以是天然或非天然序列。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含 由3￡〇10勵(lì) ：1、3￡〇10勵(lì):59或3￡〇10勵(lì):92定義的序列并且還包含額外的（：-末端肽 序列。額外的C-末端肽序列可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)氨基酸并且可以是天 然或非天然序列。在某些實(shí)施方案中，非天然序列包含非-0MP-1埃里希體屬抗原（例如， 埃里希體屬P38、p43、pl20、pl40、pl53、pl56、p200、gpl9、gp36、gp47、gp200 或HGE-3)。
[0018] 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽包含至少25、30、35、40、45、50或更多個(gè)氨基酸。 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽是分離的（例如，合成和/或純化的）肽。在某些實(shí)施方案 中，本發(fā)明的肽被綴合至配體。例如，在某些實(shí)施方案中，肽被生物素化。在其它實(shí)施方案 中，肽被綴合至鏈霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白。在其它實(shí)施方案 中，肽被綴合至載體蛋白（例如，血清白蛋白或免疫球蛋白Fc結(jié)構(gòu)域）。在其它實(shí)施方案 中，肽被綴合至樹狀聚合物和/或?yàn)槎嗫乖捏w系（MAPS)的部分。
[0019] 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽被連接至或固定在固體支持物上。在某些實(shí)施方 案中，固體支持物為珠粒（例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等）、側(cè)流免疫測(cè)定裝置中的流 的流動(dòng)通道（flowpath)(例如，多孔膜）、分析轉(zhuǎn)頭中的流動(dòng)通道或管或孔（例如，在適用 于ELISA測(cè)定的板中）。
[0020] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含兩種或更多種本發(fā)明的肽的組合物。例如，在某 些實(shí)施方案中，組合物包含2、3、4或更多種不同的本發(fā)明的肽的混合物，其中每一種肽包 含SEQIDN0:1的序列。在某些實(shí)施方案中，組合物包含2、3、4或更多種不同的本發(fā)明的 肽的混合物，其中每一種肽包含SEQIDN0:59的序列。在其它實(shí)施方案中，組合物包括2、 3、4或更多種不同的本發(fā)明的肽的混合物，其中每一種肽包含SEQIDN0:92的序列。
[0021] 在某些實(shí)施方案中，肽被綴合至配體。例如，在某些實(shí)施方案中，肽被生物素化。在 其它實(shí)施方案中，肽被綴合至鏈霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白。在其 它實(shí)施方案中，肽被綴合至載體蛋白（例如，血清白蛋白或免疫球蛋白Fc結(jié)構(gòu)域）。在其它 實(shí)施方案中，肽被綴合至樹狀聚合物和/或?yàn)槎嗫乖捏w系（MAPS)的部分。
[0022] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含編碼本發(fā)明的肽的序列的核酸。此外，本發(fā)明提 供了包含這類核酸的載體以及包含此類載體的宿主細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，載體為穿梭 載體。在其它實(shí)施方案中，載體為表達(dá)載體（例如，細(xì)菌或真核表達(dá)載體）。在某些實(shí)施方 案中，宿主細(xì)胞為細(xì)菌細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞。
[0023] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了裝置。在某些實(shí)施方案中，裝置對(duì)于進(jìn)行免疫測(cè)定是 有用的。例如，在某些實(shí)施方案中，裝置為側(cè)流免疫測(cè)定裝置。在其它實(shí)施方案中，裝置為 分析轉(zhuǎn)頭。在其它實(shí)施方案中，裝置為管或孔（例如在適用于ELISA測(cè)定的板中）。在其它 實(shí)施方案中，裝置為電化學(xué)、光學(xué)或光電傳感器。
[0024] 在某些實(shí)施方案中，所述裝置包括本發(fā)明的肽。在其它實(shí)施方案中，所述裝置包括 不同的本發(fā)明的肽的混合物。例如，在某些實(shí)施方案中，所述裝置包括2、3、4或更多種不 同的本發(fā)明的肽。在某些實(shí)施方案中，肽或混合物中的每一種肽包括SEQIDNO: 1、SEQID N0:59或SEQIDN0:92的序列。在某些實(shí)施方案中，肽被連接至或固定在裝置上。
[0025] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了檢測(cè)樣品中針對(duì)埃里希體屬抗原的表位的抗體。在 某些實(shí)施方案中，所述方法包括將樣品與本發(fā)明的肽接觸，并檢測(cè)包含所述肽的抗體-肽 復(fù)合物的形成，其中所述復(fù)合物的形成表明所述樣品中存在針對(duì)埃里希體屬抗原的表位的 抗體。在某些實(shí)施方案中，埃里希體屬抗原來自感染性埃里希體屬物種例如犬埃里希體和 恰菲埃里希體。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括將樣品與2、3、4或更多種不同的本發(fā)明 的肽的混合物接觸。
[0026] 在某些實(shí)施方案中，肽或混合物中的每一種肽為分離的（例如，合成和/或純化 的）肽。在某些實(shí)施方案中，肽或肽的混合物被連接至或固定在固體支持物上。在某些實(shí) 施方案中，固體支持物為珠粒（例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等）、側(cè)流免疫測(cè)定裝置中 的流動(dòng)通道（例如，多孔膜）、分析轉(zhuǎn)頭中的流動(dòng)通道或管或孔（例如，在適用于ELISA測(cè)定 的板中）。在某些實(shí)施方案中，固體支持物包括金屬、玻璃、基于纖維素的材料（例如，硝酸 纖維素）或聚合物（例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、尼龍、聚砜等）。在某些實(shí)施方 案中，肽或不同肽的混合物被連接至樹狀聚合物和/或摻入MAPS體系。
[0027] 在某些實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟包括進(jìn)行ELISA測(cè)定。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟 包括進(jìn)行側(cè)流免疫測(cè)定法（側(cè)流免疫測(cè)定）。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟包括進(jìn)行凝集測(cè) 定。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟包括在在分析轉(zhuǎn)頭中離心樣品。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè) 步驟包括用電化學(xué)傳感器、光學(xué)傳感器或光電傳感器分析樣品。
[0028] 在某些實(shí)施方案中，樣品是體液例如血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿、粘液或唾液。 在其它實(shí)施方案中，樣品是組織（例如，組織勻漿物）或細(xì)胞裂解物。在某些實(shí)施方案中， 樣品來自野生動(dòng)物（例如，鹿或嚙齒類動(dòng)物例如小鼠、金花鼠、松鼠等）。在其它實(shí)施方案 中，樣品來自實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物（例如，樣品來自實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物（例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴、靈長(zhǎng) 類動(dòng)物等）。在其它實(shí)施方案中，樣品來自馴養(yǎng)動(dòng)物或野化家畜（例如，狗、貓、馬）。在其 它實(shí)施方案中，樣品來自人。
[0029] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了診斷受試者的單核細(xì)胞埃里希體病的方法。在某些 實(shí)施方案中，所述方法包括將來自受試者的樣品與本發(fā)明的肽接觸，和檢測(cè)包含所述肽的 抗體-肽復(fù)合物的形成，其中所述復(fù)合物的形成表明受試者患有單核細(xì)胞埃里希體病。在 某些實(shí)施方案中，所述方法包括將樣品與本發(fā)明的2、3、4或更多種不同肽的復(fù)合物接觸。
[0030] 在某些實(shí)施方案中，肽或混合物中的每一種肽是分離的（例如，合成和/或純化 的）肽。在某些實(shí)施方案中，肽或不同肽的混合物被連接至或固定在固體支持物上。在某 些實(shí)施方案中，固體支持物是珠粒（例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等）、側(cè)流免疫測(cè)定裝 置中的流動(dòng)通道（例如，多孔膜）、分析轉(zhuǎn)頭中的流動(dòng)通道或管或孔（例如，在適用于ELISA 測(cè)定的板中）。在某些實(shí)施方案中，固體支持物包括金屬、玻璃、基于纖維素的材料（例如， 硝酸纖維素）或聚合物（例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、尼龍、聚砜等）。在某些實(shí) 施方案中，肽或不同肽的混合物被連接至樹狀聚合物和/或摻入MAPS體系。
[0031] 在某些實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟包括進(jìn)行ELISA測(cè)定。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟 包括進(jìn)行側(cè)流免疫測(cè)定。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟包括進(jìn)行凝集測(cè)定。在其它實(shí)施方 案中，檢測(cè)步驟包括在分析轉(zhuǎn)頭中離心樣品。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè)步驟包括用電化學(xué)傳 感器、光學(xué)傳感器或光電傳感器分析樣品。
[0032] 在某些實(shí)施方案中，樣品為體液例如血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿或唾液。在其 它實(shí)施方案中，樣品為組織（例如，組織勻漿物）或細(xì)胞裂解物。在某些實(shí)施方案中，受試 者為野生動(dòng)物（例如，鹿或嚙齒類動(dòng)物，例如小鼠、金花鼠、松鼠等）。在其它實(shí)施方案中，受 試者為實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物（例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴、靈長(zhǎng)類動(dòng)物等）。在其它實(shí)施方案中，受 試者為馴養(yǎng)動(dòng)物或野化家畜（例如，狗、貓、馬）。在其它實(shí)施方案中，受試者為人。
[0033] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了試劑盒。在某些實(shí)施方案中，試劑盒包括本發(fā)明的 肽。在某些實(shí)施方案中，試劑盒包括2、3、4或更多種不同的本發(fā)明的肽。所述肽可包含SEQ IDN0:1、SEQIDN0:59或SEQIDN0:92的序列。在某些實(shí)施方案中，所述肽被連接至或固 定在固體支持物上。例如，在某些實(shí)施方案中，固體支持物是珠粒（例如，膠粒、納米顆粒、 膠乳珠粒等）、側(cè)流免疫測(cè)定裝置中的流動(dòng)通道、分析轉(zhuǎn)頭中的流動(dòng)通道或管或孔（例如， 在板中）。在某些實(shí)施方案中，肽被連接至樹狀聚合物和/或摻入MAPS體系。
[0034] 在某些實(shí)施方案中，試劑盒還包括珠粒群或板（例如，適用于ELISA測(cè)定的板）。 在其它實(shí)施方案中，試劑盒還包括裝置，例如側(cè)流免疫測(cè)定裝置、分析轉(zhuǎn)頭、電化學(xué)傳感器、 光學(xué)傳感器或光電傳感器。在某些實(shí)施方案中，珠粒、板或裝置群用于進(jìn)行免疫測(cè)定。例 如，在某些實(shí)施方案中，珠粒群、板或裝置用于檢測(cè)包含來自樣品的抗體和本發(fā)明的肽的抗 體-肽復(fù)合物的形成。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽或不同肽的混合物被連接至或固定 在珠粒、板或裝置上。
[0035] 在某些實(shí)施方案中，試劑盒進(jìn)一步包括說明書。例如，在某些實(shí)施方案中，試劑盒 包括指示如何使用本發(fā)明的肽檢測(cè)針對(duì)埃里希體屬抗原的抗體或用于診斷單核細(xì)胞埃里 希體病的說明書。在某些實(shí)施方案中，試劑盒包括指示如何使用珠粒群、板或裝置（例如， 包括本發(fā)明的肽或不同肽的混合物）檢測(cè)針對(duì)埃里希體屬抗原的抗體或診斷單核細(xì)胞埃 里希體病。
[0036] 通過下面的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它方面和實(shí)施方案將變得明顯。
[0037] 附圖簡(jiǎn)述
[0038] 圖1是可用于檢測(cè)針對(duì)埃里希體屬抗原的抗體的間接夾心測(cè)定法的示圖。在此實(shí) 施方案中、抗-人IgG/IgM或抗-狗IgG/IgM抗體被固定至測(cè)試位點(diǎn)上的適當(dāng)基底（例如， 硝酸纖維素膜）。測(cè)試樣品中的抗體被固定的抗體結(jié)合。隨后針對(duì)適當(dāng)?shù)陌＠锵ｓw屬抗原 的測(cè)試樣品抗體將結(jié)合本發(fā)明的肽。當(dāng)本發(fā)明的肽被綴合至生物素時(shí)，可使用膠體金-標(biāo) 記鏈霉抗生物素蛋白來檢測(cè)肽在測(cè)試位點(diǎn)上的存在。可以理解，可逆向操作間接夾心測(cè) 定-即可將本發(fā)明的肽固定至基底以捕獲測(cè)試樣品中的抗-埃里希體屬抗體，然后可將綴 合至標(biāo)記物（例如膠體金）的抗-人IgG/IgM或抗-狗IgG/IgM抗體用于檢測(cè)與測(cè)試位點(diǎn) 上固定的肽結(jié)合的抗體的存在。
[0039] 圖2為基于圖1的間接夾心測(cè)定法的側(cè)流免疫測(cè)定裝置的示圖。在側(cè)流免疫測(cè)定 裝置的此實(shí)施方案中，將樣品施加于加樣墊上，隨后流經(jīng)綴合墊至測(cè)試膜。當(dāng)樣品通過綴合 墊時(shí)，肽-生物素-鏈霉抗生物素-金復(fù)合物溶解，隨后形成本發(fā)明的肽與適當(dāng)?shù)目?埃里 希體屬抗原抗體之間的復(fù)合物。測(cè)試位點(diǎn)包含樣品的適當(dāng)抗-IgG或抗-IgM抗體，所述抗 體結(jié)合樣品中的所有抗體。例如蛋白L可用于替代抗-IgG或抗-IgM抗體。如果樣品中充 足的抗體已結(jié)合至本發(fā)明的肽，則陽(yáng)性信號(hào)將出現(xiàn)在測(cè)試位點(diǎn)上。在側(cè)流免疫測(cè)定裝置的 另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽被固定在測(cè)試位點(diǎn)（T)上并且綴合至可檢測(cè)標(biāo)記物（例如 膠體金顆粒）的樣品的適當(dāng)?shù)目?IgG或抗-IgM抗體（例如抗-人或抗-犬）存在于綴合 墊中。通過綴合墊的樣品溶解標(biāo)記抗體和存在于測(cè)試樣品中的任何抗-埃里希體屬抗原抗 體，并且這類抗體復(fù)合物被測(cè)試位點(diǎn)上的本發(fā)明的固定的埃里希體屬肽捕獲，從而產(chǎn)生陽(yáng) 性信號(hào)。在任一實(shí)施方案中，所述裝置還可包括在其上固定識(shí)別綴合墊中的標(biāo)記肽或標(biāo)記 抗體的結(jié)合伴侶的對(duì)照位點(diǎn)（C)。
[0040] 圖3為可用于檢測(cè)針對(duì)埃里希體屬抗原的抗體的雙抗原夾心測(cè)定法的示圖。在此 實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽被固定至測(cè)試位點(diǎn)上的適當(dāng)基底（例如，硝酸纖維素膜、ELISA板 的孔）。測(cè)試樣品中的抗體被本發(fā)明的固定的肽結(jié)合。針對(duì)適當(dāng)埃里希體屬抗原的測(cè)試樣 品抗體隨后將結(jié)合被綴合至檢測(cè)分子（例如，膠體金、辣根過氧化物酶（HRP)、堿性磷酸酶 (ALP))的本發(fā)明的第二組肽，所述檢測(cè)分子檢測(cè)與固定在測(cè)試位點(diǎn)上的第一組肽結(jié)合的抗 體的存在。
[0041] 發(fā)明詳述
[0042] 如本文中使用的，下列術(shù)語(yǔ)可具有下列含義：
[0043] 如本文中所用，術(shù)語(yǔ)"抗原"是指能夠被抗體識(shí)別的分子。抗原可以是例如肽或其 修飾形式?？乖砂ㄒ粋€(gè)或多個(gè)表位。
[0044] 如本文中所用，術(shù)語(yǔ)"表位"是被抗體特異性識(shí)別的抗原部分。表位例如可包肽 (例如，本發(fā)明的肽）的一部分含或由其組成。表位可以是線性表位、順序表位或構(gòu)象表位。
[0045] 術(shù)語(yǔ)"0MP-1蛋白"是指埃里希體屬的外膜蛋白1旁系同源物，包括但不限于犬埃 里希體（E.canis)P_30、犬埃里希體P30-1、恰菲埃里希體（E.chaffeensis)P28、恰菲埃里 希體0MP-1C、恰菲埃里希體0MP-1D、恰菲埃里希體0MP-1E和恰菲埃里希體0MP-1F。
[0046] 術(shù)語(yǔ)"核酸"、"寡核苷酸"和"多核苷酸"在本文中可互換使用并且包括DNA、RNA、 cDNA，無論是單鏈還是雙鏈的，以及其化學(xué)修飾形式。
[0047] 本文中使用的單字母氨基酸縮寫在本領(lǐng)域中具有其標(biāo)準(zhǔn)含義，并且本文中描述的 所有肽序列根據(jù)本發(fā)明以N末端為左和以C末端為右來進(jìn)行書寫。
[0048] 其它術(shù)語(yǔ)將在后面的詳細(xì)說明中按需要進(jìn)行定義。
[0049] 組合物和裝詈
[0050] 本發(fā)明部分地基于這樣的發(fā)現(xiàn)：埃里希體屬0MP-1蛋白的片段的某些序列變體為 針對(duì)多種埃里希體屬的物種的抗體反應(yīng)提