一種Au對(duì)巰基苯硫醇Au復(fù)合拉曼探針及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針的制備方法；屬于生物納米領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥已經(jīng)成為二^^一世紀(jì)威脅人類健康的重大疾病之一。因此，癌癥標(biāo)志物含量的準(zhǔn)確檢測(cè)成為亟待解決的問題。將金納米粒子應(yīng)用于拉曼檢測(cè)中可以放大拉曼信號(hào)，實(shí)現(xiàn)癌癥標(biāo)志物的靈敏檢測(cè)。但是，直接在納米金表面修飾拉曼分子，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的離心、洗滌等操作中，拉曼分子容易損失或變性，使得檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度受到影響。因此，解決現(xiàn)有的納米金修飾拉曼分子存在的缺陷，是其能進(jìn)一步發(fā)展的關(guān)鍵技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對(duì)現(xiàn)有的納米金表面修飾拉曼分子存在的缺陷，本發(fā)明的目的是在于提供一種信號(hào)強(qiáng)、易于修飾生物分子，且穩(wěn)定性好的AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針。
[0004]本發(fā)明的另一個(gè)目的是在于提供一種通過簡(jiǎn)單操作、在溫和條件下制備所述AuO對(duì)巰基苯硫醇?Au復(fù)合拉曼探針的方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明提供了一種AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針，該Au@對(duì)巰基苯硫醇Mu復(fù)合拉曼探針由內(nèi)部核納米金顆粒、拉曼分子夾層和外部金殼層構(gòu)成。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案首次將對(duì)巰基苯硫醇拉曼分子設(shè)置為納米金的內(nèi)部夾層，構(gòu)建出AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu的夾心結(jié)構(gòu)，通過外部包覆的金殼層，使對(duì)巰基苯硫醇物化性質(zhì)穩(wěn)定，耐環(huán)境影響能力強(qiáng)，且保持了拉曼分子信號(hào)強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)金殼表面易于修飾生物分子。本發(fā)明的技術(shù)方案有效解決了現(xiàn)有的納米金修飾拉曼分子在檢測(cè)過程中容易損失或變性，導(dǎo)致檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度降低的缺陷。
[0007]優(yōu)選的方案中核納米金顆粒平均粒徑為42?48nm。
[0008]優(yōu)選的方案中拉曼分子夾層厚度為2?4nm。
[0009]優(yōu)選的方案中金殼層厚度為3?8nm。優(yōu)選適當(dāng)厚度的金殼更有利于保護(hù)拉曼分子的穩(wěn)定性，同時(shí)不影響信號(hào)強(qiáng)度。
[0010]優(yōu)選的方案中拉曼分子為對(duì)巰基苯硫醇。
[0011]本發(fā)明還提供了一種制備所述AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針的方法，該方法是將氯金酸溶液加入到檸檬酸鈉溶液中反應(yīng)得到含核納米金顆粒的溶液，在含核納米金顆粒的溶液中加入對(duì)巰基苯硫醇反應(yīng)，得到Au@對(duì)巰基苯硫醇；所得Au@對(duì)巰基苯硫醇通過分散在檸檬酸鈉溶液中后，再加入氯金酸反應(yīng)，即得AuO對(duì)巰基苯硫醇@Αιι復(fù)合拉曼探針。
[0012]本發(fā)明的制備AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針的方法還包括以下優(yōu)選方案:
[0013]優(yōu)選的方案中將氯金酸溶液逐步添加到過量的檸檬酸鈉溶液中，維持溫度在82?93°C條件下反應(yīng)，得到含核納米金顆粒的溶液。
[0014]較優(yōu)選的方案中含核納米金顆粒的溶液通過如下方法制備得到:將氯金酸溶液加入到沸騰的檸檬酸鈉溶液中，在回流條件下反應(yīng)30?40min后，降溫至82?93°C，再添加部分氯金酸溶液，繼續(xù)反應(yīng)25?35min，再添加部分氯金酸溶液，進(jìn)一步反應(yīng)25?35min后，冷卻至室溫；在冷卻的溶液中補(bǔ)加檸檬酸鈉溶液和水，升溫至82?93°C時(shí)，添加部分氯金酸溶液，反應(yīng)25?35min，再添加部分氯金酸溶液，繼續(xù)反應(yīng)25?35min，冷卻至室溫，即得。
[0015]優(yōu)選的方案中在含核納米金顆粒的溶液中加入過量的對(duì)巰基苯硫醇，在攪拌條件下，反應(yīng)3?5h，離心分離，洗滌固體產(chǎn)物，除去過量的對(duì)巰基苯硫醇，得到AuO對(duì)巰基苯硫醇。
[0016]優(yōu)選的方案中將AuO對(duì)巰基苯硫醇分散在Na3C6H5O7溶液中后，加熱至82?93°C，加入氯金酸溶液攪拌反應(yīng)，得到Au@對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針。
[0017]優(yōu)選的方案包括以下步驟:
[0018]步驟一:制備含核納米金顆粒的溶液
[0019]將0.8?1.2mL濃度為22?28mM的氯金酸溶液加入到140?160mL濃度為2.0?2.4mM的檸檬酸鈉溶液中，在回流條件下攪拌反應(yīng)至顏色穩(wěn)定后，繼續(xù)攪拌反應(yīng)25?35min，降溫至82?93°C，再添加0.8?1.2mL濃度為22?28mM的氯金酸溶液，繼續(xù)攪拌反應(yīng)25?35min，再添加0.8?1.2mL濃度為22?28mM的氯金酸溶液，進(jìn)一步攪拌反應(yīng)25?35min后，攪拌冷卻至室溫；取50?60mL冷卻的溶液，補(bǔ)加1.5?2.5mL濃度為55?65mM的檸檬酸鈉溶液和50?60mL水，升溫至82?93°C時(shí)，添加0.8?1.2mL濃度為22?28mM氯金酸溶液，攪拌反應(yīng)25?35min，再添加0.8?1.2mL濃度為22?28mM氯金酸溶液，攪拌反應(yīng)25?35min，攪拌冷卻至室溫，即得含核納米金顆粒的溶液；
[0020]步驟—■:制備Au?對(duì)疏基苯硫醇
[0021]在8?12mL的步驟一得到的含核納米金顆粒的溶液中加入0.8?1.2mL濃度為0.8 X 10_4?1.2 X 10 _4M的對(duì)巰基苯硫醇溶液，在攪拌條件下反應(yīng)3?5h，離心分離，洗滌固體產(chǎn)物，除去過量的對(duì)巰基苯硫醇，得到AuO對(duì)巰基苯硫醇；
[0022]步驟三:制備AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針
[0023]將步驟二所得AuO對(duì)巰基苯硫醇用濃度為1.8?2.4mM的檸檬酸鈉溶液稀釋至8?12mL，取5.0?6.0mL稀釋液，進(jìn)一步用0.15?0.25mL濃度為55?65mM的檸檬酸鈉溶液和5.0?6.0mL水稀釋后，加熱至82?93°C，加入80?120 μ L濃度為20?30mM的氯金酸溶液反應(yīng)，反應(yīng)25?35min后，冷卻至室溫，即得Au@對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針。
[0024]在本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，通過調(diào)節(jié)氯金酸溶液和檸檬酸鈉溶液的濃度、反應(yīng)溫度以及反應(yīng)循環(huán)次數(shù)等條件可以很好地控制核納米金粒子的形貌和大小以及金殼層的厚度。通過加入過量的拉曼分子可以使拉曼分子更好地包覆核納米金，很好地改善AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針信號(hào)強(qiáng)度。
[0025]相對(duì)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的技術(shù)方案帶來的有益技術(shù)效果:
[0026]I)本發(fā)明的Au@對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針通過制備均勾的外層金殼，可以很好地與生物分子(如:癌癥標(biāo)志物)連接；
[0027]2)本發(fā)明的Au@對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針內(nèi)部的核納米粒子為拉曼分子提供粗糙表面，便于放大拉曼信號(hào)；
[0028]3)本發(fā)明的AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針，具有夾心結(jié)構(gòu)，拉曼分子在金殼的保護(hù)下，性質(zhì)穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，耐環(huán)境影響能力強(qiáng)，有效解決了現(xiàn)有的納米金修飾拉曼分子在檢測(cè)過程中容易損失或變性，導(dǎo)致檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度降低的缺陷。
【附圖說明】
[0029]【圖1】為Au?對(duì)疏基苯硫醇OAu復(fù)合拉曼探針的制備過程不意圖；
[0030]【圖2】為核納米金粒子的透射電子顯微鏡圖；
[0031]【圖3】為AuO對(duì)巰基苯硫醇@Αιι復(fù)合拉曼探針的透射電子顯微鏡圖；
[0032]【圖4】為AuNPs, Aui對(duì)巰基苯硫醇、AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu的粒徑圖；
[0033]【圖5】為AuO對(duì)巰基苯硫醇、AuO對(duì)巰基苯硫醇OAu的拉曼圖。
[0034]【圖6】為復(fù)合拉曼探針用于人血清及不同濃度free-PSAantigen檢測(cè)的拉曼圖。
【具體實(shí)施方式】
[0035]以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本
【發(fā)明內(nèi)容】
，而不是對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍的限制。
[0036]實(shí)施例1
[0037]核納米金粒子的制備。
[0038]步驟如下:在250mL的三口燒瓶中加入150mL 2.2mM Na3C6H5O7,在攪拌(1500r.mirT1)、冷凝回流的作用下加熱至沸，加入ImL 25mM HAuCl4,