本發(fā)明屬于內源性物質檢測，具體涉及一種基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法。

背景技術：

1、短鏈脂肪酸是指碳鏈中碳原子數目小于6個的有機脂肪酸，主要包含八種，分別是乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸、己酸和異己酸。在生理狀態(tài)下，短鏈脂肪酸能提供腸上皮細胞能量供其代謝，并在腸粘膜細胞增殖、分化及維持結腸完整性和粘膜免疫應答過程中發(fā)揮重要作用。

2、臨床研究表明，短鏈脂肪酸具有調節(jié)腸道菌群平衡、改善腸道功能，以及抗腫瘤、抗炎和調控基因表達的作用。腸道中不同種屬類型的細菌產生的短鏈脂肪酸的種類和數量各不相同，主要檢測生物樣品(主要是血液、尿液、糞便、腸道內容物、細胞培養(yǎng)液)中的短鏈脂肪酸的含量，可以反應腸道中腸道菌群的變化，可輔助臨床疾病的診斷、治療。因此，建立經濟、快速、簡便的短鏈脂肪酸的定量和定性檢測方法、提高檢測方法的靈敏度與擴大檢測方法的樣品應用范圍極具意義。

技術實現思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，以解決上述背景技術中提出的建立經濟、快速、簡便的短鏈脂肪酸的定量和定性檢測方法、提高檢測方法的靈敏度與擴大檢測方法的樣品應用范圍的問題。

2、為實現上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：一種基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，包括如下步驟：

3、步驟1、食糜或糞便樣品前處理：將事先采好的結腸、盲腸食糜或糞便樣品解凍，攪拌混勻，均勻稱取適量樣品于離心管，加入1.5ml(v0)超純水，渦旋混勻并靜置30分鐘，靜置后10000xg離心15分鐘，取1ml(v1)上清加入0.2ml(v2)25％(w/v)偏磷酸溶液、23.3ul(v3)210mmol/l巴豆酸溶液，混勻后4℃放置孵育30分鐘，之后8000xg高心分鐘，離心后取0.3ml(v4)上清加入0.9ml(v5)色譜甲醇，渦旋混勻，8000xg離心5分鐘，取上清用0.22μm針式過濾器過濾至1.5mlep管中，上機檢測。

4、步驟2、氣相色譜測定：取步驟1所得樣本進行gc-ms檢測：色譜條件：進樣口溫度220℃，進樣量1μl，分流比50：1；載氣為高純n2，柱流量1ml/min；fid檢測器溫度250℃，燃氣高純h2流量40ml/min，助燃氣零級空氣流量400ml/min，尾吹氣高純n2流量35ml/min，色譜柱hp-ffap，柱溫箱程序升溫：起始溫度100℃，以20℃/min的速度升溫至190℃，保持0.5分鐘，運行時間5分鐘。

5、步驟3、結果與分析：對步驟2所得的數據進行方法學驗證，進行線性、檢測限、重現性和加標回收率測定，并對結果進行分析。

6、在進一步的實施例中，色譜條件：進樣口溫度220℃，進樣量1μl，分流比50：1；載氣為高純n2，柱流量1ml/min；fid檢測器溫度250℃，燃氣高純h2流量40ml/min，助燃氣零級空氣流量400ml/min，尾吹氣高純n2流量35ml/min，色譜柱hp-ffap，柱溫箱程序升溫：起始溫度100℃，以20℃/min的速度升溫至190℃，保持0.5分鐘，運行時間5分鐘。

7、在進一步的實施例中，樣品加入離心管，再加入超純水，隨后渦旋混勻并靜置，此過程需要在冰上進行。

8、在進一步的實施例中，樣品解凍過程不能加熱，解凍時樣品管應密封。

9、本發(fā)明的技術效果和優(yōu)點：

10、該基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，在人體內，特別是腸道中的一些厭氧微生物能將膳食纖維或其他碳水化合物發(fā)酵成短鏈脂肪酸，其中包括戊酸，戊酸和其他短鏈脂肪酸如乙酸、丙酸和丁酸一起，對宿主健康有多方面的影響，細菌代謝產生的戊酸在生物體內主要發(fā)揮著維持腸道穩(wěn)態(tài)、影響免疫功能和可能間接關聯到心臟健康的多種作用，通過設備對動物腸道食糜或糞便中的戊酸進行快速檢測，能夠反映腸道微生物的代謝能力以及益生菌的水平，實現腸道微生物這一復雜生態(tài)系統功能的精確評估，檢測更加靈敏，該基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，可以整體診斷體內厭氧菌的變化，對營養(yǎng)、微生物和環(huán)境的研究有重要意義。

技術特征：

1.一種基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，包括，其特征在于：包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的一種基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，其特征在于：色譜條件：進樣口溫度220℃，進樣量1μl，分流比50：1；載氣為高純n2，柱流量1ml/min；fid檢測器溫度250℃，燃氣高純h2流量40ml/min，助燃氣零級空氣流量400ml/min，尾吹氣高純n2流量35ml/min，色譜柱hp-ffap，柱溫箱程序升溫：起始溫度100℃，以20℃/min的速度升溫至190℃，保持0.5分鐘，運行時間5分鐘。

3.根據權利要求1所述的一種基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，其特征在于：樣品加入離心管，再加入超純水，隨后渦旋混勻并靜置，此過程需要在冰上進行。

4.根據權利要求1所述的一種基于gc-ms檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，其特征在于：樣品解凍過程不能加熱，解凍時樣品管應密封。

技術總結
本發(fā)明公開了一種基于GC?MS檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，屬于內源性物質檢測技術領域，包括以下步驟：食糜或糞便樣品前處理：將事先采好的結腸、盲腸食糜或糞便樣品解凍，攪拌混勻，均勻稱取適量樣品于離心管，加入適量超純水，渦旋混勻并靜置一定時間，靜置后離心一定時間，再加入檢測溶液，混勻后孵育一定時間再進行離心，離心加入一定量的色譜甲醇，渦旋混勻在離心一定時間，過濾一定的溶液至EP管中；氣相色譜測定；結果與分析。該基于GC?MS檢測動物腸道食糜或糞便中戊酸的方法，可以整體診斷體內厭氧菌的變化，對營養(yǎng)、微生物和環(huán)境的研究有重要意義。

技術研發(fā)人員：張建營,倪來學,王偉,姚現琦,劉云國,王宗繼,張遠菊
受保護的技術使用者：臨沂大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/21