專利名稱：一種從果實表皮中提取花色素苷的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物有效成分提取領域，涉及ー種從果實表皮中提取花色素苷的方法。
背景技術：
果皮的色澤是果實外觀品質的核心指標，也是影響其商品價值的重要因素。研究表明，果實色澤主要由葉綠素、類胡蘿卜素和酚類色素的含量及其比例決定。果實著色，是由于果實細胞中葉綠素降解，同時形成和顯現(xiàn)類胡蘿卜素或合成 花色素苷的結果。花色素苷是紅色、紫紅色果皮色澤的主要組成成分，易溶于水、甲醇、こ醇等強極性溶劑，在酸性條件下能保持原有色澤，PH由低到高時，花色素苷溶液呈現(xiàn)由紅色到無色直至藍色的變化，并且高溫、強光條件下，花色素苷易降解。因此，組織中花色素苷多在避光、低溫下提取，采用酸化水溶液或酸化有機溶液提取。在低溫條件下，酸性水溶液溶解花色素苷能力較低，果實中色素提取效果較差，隨著溫度提高，其提取效率升高，但是花色素苷在低溫條件，穩(wěn)定性較好，隨著溫度上升，花色素苷穩(wěn)定性下降，降解速度加快，研究表明，花色素苷在100°C下，2h即完全降解，而在5°C下，花色素苷的半衰期為79d。因此，采用酸化水溶液水浴提取花色素苷時，存在ー對無法協(xié)調的矛盾，任何條件下都會是提取的花色素苷含量不符合果實中的真實值，從而無法精確測量。采用酸化有機溶液提取時，其提取效率較高，但需要長時間的浸堤，長時間處于靜置狀態(tài)，原料沉淀板結，不利于提取液完全溶解原料中色素，并且需要多次的重復，合并提取液，這就會使得最后定容時體積較大，而果實中花色素苷含量本來就較少，最后提取液體積大使得花色素苷濃度變低，儀器(如高效液相色譜)在測定其含量時，有最低檢出限，濃度過低會使得無法測定其含量。因此，采用酸化有機溶液多次浸提材料中花色素苷時，合并提取液定容后需要通過旋轉蒸發(fā)儀濃縮，而旋轉蒸發(fā)過程中加熱會加快花色素苷降解，并且濃縮后花色素苷粘附在旋轉蒸發(fā)瓶上，少量水無法徹底洗脫，使得實驗誤差増大。因此，由于目前花色素苷提取方法存在不足之處，迫切需要ー種新的提取方法，以滿足對果實中花色素苷含量和成分研究的要求。針對上訴方法，本發(fā)明利用超聲波助溶作用，低損耗、高效率的提取了梨果實中花色素苷，并且該方法操作簡便，耗時較少。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術的上述缺陷，提供ー種從果實表皮中提取花色素苷的方法。本發(fā)明的目的可通過如下技術方案實現(xiàn)ー種從果實表皮中提取花色素苷的方法，包括如下步驟I)取果實表皮，液氮研磨至粉末狀，每克鮮果實表皮加入3 6mL 1%鹽酸甲醇(V/V)，勻漿得勻漿液；
2)將勻衆(zhòng)液于O 4°C,避光，浸提4 5h ;3)將浸提液放入超聲儀器中超聲處理；4)超聲波處理后，浸提液在4°C下12000g離心18 25min，取上清液即得花色素苷。所述的果實表皮為紅皮梨、蘋果、葡萄、桃、李、櫻桃的果實表皮；優(yōu)選紅皮梨果實表皮。所述的果實表皮厚度為O. 8 I. 2cm。
配制所述的I %鹽酸甲醇時加入的鹽酸濃度為36 37%，所述的超聲條件為所述的超聲條件為O 4°C下，超聲功率為100W，超聲頻率40KHZ，超聲 O. 5 I. 5h。步驟4)所述的上清液經定容、過濾后用于花色素苷成分或含量檢測。有益效果I、花色素苷是紅色、紫紅色果面色澤的主要組成成分，對果實中花色素苷組分及其含量的測定是對其果皮著色開展深入研究的基礎，而最高效的提取方法是精確測定果實中花色素苷含量的前提條件。本方法綜合考慮了果皮中花色素苷的分布特點及性質，在傳統(tǒng)浸提的基礎上加入超聲處理，選擇特定范圍的浸提溫度、浸提時間、超聲條件，以解決花色素苷傳統(tǒng)提取方法中損耗高，耗時長等問題；在提取過程中一直處于低溫條件，并且步驟簡單，耗時短，提取效率高，有效降低了花色素苷的降解和損耗，為精確測定果實花色素苷含量及組分奠定了基礎。2、本發(fā)明縮短了花色素苷提取時間，提高了提取效率，并且一次性提取果實中花色素苷，其提取濃度較高，無需后續(xù)操作，因而降低了花色素苷損耗。3、本發(fā)明的使用方法簡單，便捷，快速。提取時只需要研缽，塑料薄膜盒，超聲儀器，離心機，離心管，容量瓶，其均為常規(guī)儀器，并且操作簡單，個人即可完成所有實驗內容。4、本發(fā)明的推廣性和應用性很強，可以用于提取梨、蘋果、葡萄、桃、李、櫻桃多種果樹的花色素苷，因此，該方法具有非常廣闊的應用前景。
具體實施例方式實施例II.花色素苷提取I)將采集的梨果實清洗、擦干，取2g梨果實表皮，厚度在O. Icm左右，放入研缽中加液氮研磨至粉末狀，加8mL 1%鹽酸甲醇(V/V)勻漿得勻漿液；所述的1%鹽酸甲醇配制方法為取lmL36%鹽酸加超純水定容到100mL。2)將勻漿液從研缽中轉入IOmL離心管，放入裝有生物冰袋冰盒中避光，O 4°C下浸提4h;3)將離心管放入超聲儀器中超聲lh，超聲功率為100W，超聲頻率40KHZ，在超聲波儀器中放入生物冰袋，使溫度保持在O 4°C下，防止在超聲過程中溫度升高，使得花色素苷降解；4)超聲波處理后，4°C下12000g離心20min，取上清液定容至IOmL得花色素苷提取液，用于花色素苷含量測定；
2.花色素苷含量測定I)取ImL花色素苷提取液，分別用O. 4mol ·じ1KQ-HCl緩沖液(pH I. O)和O.4mol ·じ1檸檬酸/磷酸氫ニ鈉緩沖液(pH 5. 0)，稀釋至5mL，混勻后用蒸餾水作對照，在510nm下測定光密度值(D)。2)每克鮮果皮花色素苷含量(mg· g-1)= Λ DX5X 10X445. 2/29600X2，其中AD=D 510 (pH I. 0)_D510(pH 5. O) ;5為稀釋倍數(shù)；10為浸提體積；445. 2為矢車菊半乳糖苷相對分子量；29600為矢車菊半乳糖苷摩爾吸光系數(shù)(πιοΓ1 · cm—1) ；2為果皮質量(g)。3.試驗結果超聲波處理輔助提取花色素苷及O 4°C浸提4h不進行超聲處理和O 4°C浸提24h不進行超聲處理(CK)的吸光度值及花色素苷含量對比如表I所示表I不同提取方法的花色素苷含量測定比較
權利要求
1.ー種從果實表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于包括如下步驟 1)取果實表皮，液氮研磨至粉末狀，每克鮮果實表皮加入3 6mL1%鹽酸甲醇(V/V)，勻漿得勻漿液； 2)將勻衆(zhòng)液于O 4°C,避光,浸提4 5h; 3)將浸提液放入超聲儀器中超聲處理； 4)超聲波處理后，浸提液在4°C下12000g離心18 25min，取上清液即得花色素苷。
2.根據(jù)權利要求I所述的從果實表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于所述的果實表皮為紅皮梨、蘋果、葡萄、桃、李、櫻桃的果實表皮；優(yōu)選紅皮梨果實表皮。
3.根據(jù)權利要求2所述的從果實表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于所述的果實表皮厚度為O. 8 I. 2cm。
4.根據(jù)權利要求I所述的從果實表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于配制所述的I %鹽酸甲醇時加入的鹽酸濃度為36 37%。
5.根據(jù)權利要求I所述的從果實表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于所述的超聲條件為所述的超聲條件為O 4°C下，超聲功率為100W，超聲頻率40KHZ，超聲O. 5 I.5h。
6.根據(jù)權利要求I所述的從果實表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于步驟4)所述的上清液經定容、過濾后用于花色素苷成分或含量檢測。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物有效成分提取領域，公開了一種從果實表皮中提取花色素苷的方法。本發(fā)明利用超聲波具有助溶的作用，取果實表皮，液氮研磨至粉末，加入1%鹽酸甲醇提取液勻漿，低溫避光浸提，再放入超聲儀器中超聲輔助提取。本發(fā)明簡單、方便、快速，能夠有效提取果實中花色素苷，并且該過程一直在低溫下進行，有利于保持花色素苷的穩(wěn)定性。因此，利用超聲波助溶，可以快速、高效提取果實中花色素苷。
文檔編號G01N1/34GK102660141SQ201210161699
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月22日 優(yōu)先權日2012年5月22日
發(fā)明者吳俊 , 吳巨友, 張紹鈴, 肖長城, 陶書田, 齊開杰 申請人:南京農業(yè)大學