專利名稱：：用于與代謝綜合征、心血管疾病和/或胰島素抗性相關(guān)的病癥的診斷、預(yù)后、監(jiān)測(cè)和治療追...的制作方法用于與代謝綜合征、心血管疾病和/或胰島素抗性相關(guān)的病癥的診斷、預(yù)后、監(jiān)測(cè)和治療追蹤的體外方法本發(fā)明的主題是用于與代謝綜合征、心血管疾病和/或胰島素抗性相關(guān)的病癥的診斷、預(yù)后、監(jiān)測(cè)和治療追蹤的體外方法，所述方法包含測(cè)定一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平及其應(yīng)用。高血壓經(jīng)常伴有肥胖癥、胰島素分泌過多癥和胰島素抗性。這種類型的高血壓的特征為鈉潴留、血管內(nèi)容積增加以及心搏量和輸出量增加(MesserliHl等，1981“肥胖癥和原發(fā)高血壓血液動(dòng)力學(xué)、血管內(nèi)體積、鈉排泄和血漿腎素活性”(Obesityandessentialhypertension.Hemodynamics,intravascularvolume,sodiumexcretion,andplasmareninactivity),ArchInternMed141:81-5；StelfoxHT等，2006“肥胖患者中的血液動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)體重指數(shù)對(duì)心輸出量和心搏量的影響”(Hemodynamicmonitoringinobesepatients:theimpactofbodymassindexoncardiacoutputandstrokevolume),CritCareMed34:1243-6)。作為對(duì)與心力衰竭或急性心肌缺血相關(guān)的血管壁應(yīng)力增加的響應(yīng)，心房利尿鈉肽(ANP)和腦型利尿鈉肽(BNP)在心肌細(xì)胞中作為激素原合成，它們分別被切割成ANP和BNP以及N-端proANP(NT-proANP)和N-端proBNP(NT-proBNP)(RuskoahoH,2003“在心力衰竭中作為診斷工具的心臟激素”(Cardiachormonesasdiagnostictoolsinheartfailure),EndocrRev24:341-56；PotterLR等，2006“利尿鈉肽、它們的受體以及環(huán)鳥苷單磷酸依賴性的信號(hào)傳導(dǎo)功能”(Natriureticpeptides,theirreceptors,andcyclicguanosinemonophosphate-dependentsignalingfunctions),EndocrRev27:47-72)。高利尿鈉肽水平是新的有希望的心血管(CV)風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物，并已經(jīng)與高血液(BP)、左心室肥大和蛋白尿癥相關(guān)聯(lián)(OlsenMH等，2005“N-端腦利尿鈉肽原與代謝型心血管風(fēng)險(xiǎn)因子和代謝綜合征反相關(guān)”(N-terminalprobrainnatriureticpeptideisinverselyrelatedtometaboliccardiovascularriskfactorsandthemetabolicsyndrome),Hypertension46:660-6)。幾項(xiàng)大型研究事實(shí)上觀察到了死亡率與利尿鈉肽水平的獨(dú)立關(guān)聯(lián)性(WangTJ等，2004“血漿利尿鈉肽水平與心血管事件和死亡的風(fēng)險(xiǎn)，，(Plasmanatriureticpeptidelevelsandtheriskofcardiovasculareventsanddeath),NEnglJMed350:655-63；Bibbins-DomingoK等，2007“在患有穩(wěn)定性冠心病的患者中腦型利尿鈉肽激素原的N-端片段(NT-proBNP)、心血管事件和死亡率”(N-terminalfragmentoftheprohormonebrain-typenatriureticpeptide(NT-proBNP),cardiovascularevents,andmortalityinpatientswithstablecoronaryheartdisease),Jama297:169-76；KistorpC等，2005“N-端腦利尿鈉肽原、C-反應(yīng)蛋白和尿液白蛋白水平在老年人中作為死亡和心血管事件的預(yù)測(cè)因子”(N-terminalpro-brainnatriureticpeptide,C-reactiveprotein,andurinaryalbuminlevelsaspredictorsofmortalityandcardiovasculareventsinolderadults),Jama293:1609-16；vonHaehling等，2007“中段心房利尿鈉肽原與N-端B型利尿鈉肽原在患有慢性心力衰立曷的患#中予頁舌的比罾，，(Comparisonofmidregionalpro-atrialnatriureticpeptidewithN-terminalpro-B-typenatriureticpeptideinpredictingsurvivalinpatientswithchronicheartfailure),JAmCollCardiol50:1973—80)。最近的研究描述了在肥胖癥中利尿鈉肽水平被抑制(WangTJ等，2004“肥胖SSMH禾U胃內(nèi)月τΚ5F白勺；Ii口向，，(Impactofobesityonplasmanatriureticpeptidelevels),Circulation109:594-600；DasSR等，2005“體重和身體組成對(duì)利尿鈉肽循環(huán)水平的影響來自達(dá)拉斯心臟研究的結(jié)果“(Impactofbodymassandbodycompositiononcirculatinglevelsofnatriureticpeptides:resultsfromtheDallasHeartStudy),Circulation112:2163-8)。因?yàn)榉逝职Y與鹽潴留和心輸出量增加相關(guān)，因此預(yù)計(jì)它將產(chǎn)生高利尿鈉肽水平。肥胖癥似乎具有相反效應(yīng)這一現(xiàn)象顯得違反直覺，并被歸因于非血液動(dòng)力學(xué)的因素。因此，Wang和同事假定這種反比關(guān)系可能是由于脂肪組織增加了利尿鈉肽清除受體(NPR-C)的表達(dá)，導(dǎo)致在肥胖對(duì)象中利尿鈉肽的清除率增加(WangTJ等，2004“肥胖癥對(duì)血漿利尿鈉肽水平的影響”(Impactofobesityonplasmanatriureticpeptidelevels)，Circulation109:594-600)。然而，Das和同事通過DEXA在達(dá)拉斯心臟研究(Dallasheartstudy)中測(cè)定了瘦肉和脂肪質(zhì)量，并發(fā)現(xiàn)了較低的BNP水平與瘦肉而不是脂肪質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性(DasSR等，2005“體重和身體組成對(duì)利尿鈉肽循環(huán)水平的影響來自達(dá)拉斯心臟研究的結(jié)果”(Impactofbodymassandbodycompositiononcirculatinglevelsofnatriureticpeptides:resultsfromtheDallasHeartStudy)，Circulation112:2163-8)。幾項(xiàng)研究觀察到了利尿鈉肽與代謝綜合征的其他要素的關(guān)聯(lián)性(OlsenMH等，2008“通過N-端腦利尿鈉肽原和高靈敏度的C-反應(yīng)蛋白預(yù)測(cè)心血管風(fēng)險(xiǎn)受到年齡和性別的影響"(CardiovascularriskpredictionbyN-terminalprobrainnatriureticpeptideandhighsensitivityC-reactiveproteinisaffectedbyageandsex),JHypertens26:26-34；WangTJ等，2007“在能走動(dòng)個(gè)體中血漿利尿鈉肽水平與代謝風(fēng)險(xiǎn)因子的關(guān)聯(lián)性”(Associationofplasmanatriureticpeptidelevelswithmetabolicriskfactorsinambulatoryindividuals)，Circulation115:1345-53)。在Framingham心臟研究中，大腰圍、高甘油三酯、低HD和高禁食葡萄糖(WangTJ等，2007“在能走動(dòng)個(gè)體中血漿利尿鈉肽水平與代謝風(fēng)險(xiǎn)因子的關(guān)聯(lián)性”(Associationofplasmanatriureticpeptidelevelswithmetabolicriskfactorsinambulatoryindividuals)，Circulation115:1345-53)與較低的血漿ANP水平相關(guān)，并在略低程度上與較低BNP水平相關(guān)。在丹麥研究中，觀察到了BNP與BMI、胰島素、葡萄糖、甘油三酯和高血壓的關(guān)聯(lián)性(OlsenMH等，2005“N-端腦利尿鈉肽原與代謝型心血管風(fēng)險(xiǎn)因子和代謝綜合征反相關(guān)，，(N-terminalprobrainnatriureticpeptideisinverselyrelatedtometaboliccardiovascularriskfactorsandthemetabolicsyndrome),Hypertension46:660-6)。盡管這些研究證實(shí)了利尿鈉肽與代謝綜合征的幾種特性的緊密關(guān)聯(lián)，但這些關(guān)聯(lián)性背后的機(jī)制仍難以捉摸。降低餐后胰島素水平的營養(yǎng)方法對(duì)于降低血壓非常有效(AppelLJ等，2005“蛋白質(zhì)、單不飽和脂肪和糖類攝取對(duì)血壓和血清脂類的影響=OmniHeart隨機(jī)試驗(yàn)的結(jié)果”(Effectsofprotein,monounsaturatedfat,andcarbohydrateintakeonbloodpressureandserumlipids:resultsoftheOmniHeartrandomizedtrial),Jama2942455-64)，并且據(jù)信餐后狀態(tài)在代謝綜合征的早期階段以及特別是動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展中發(fā)揮重要作用(HanefeldM等，1999“在非糖尿病人個(gè)體中餐后血漿葡萄糖是頸動(dòng)脈內(nèi)-中膜厚度增力口的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子，，(Postprandialplasmaglucoseisanindependentriskfactorforincreasedcarotidintima—mediathicknessinnon-diabeticindividuals)，Atherosclerosis144:229-35；HanefeldM等，2007“代謝綜合征的挑占戈”(ThechallengeoftheMetabolicSyndrome),HormMetabRes39:625-6)。本發(fā)明的目的是對(duì)象中與代謝綜合征相關(guān)的病癥和/或與心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性相關(guān)的疾病的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)和/或治療追蹤，其中測(cè)定了所述對(duì)象中一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)變化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，胰島素誘導(dǎo)心血管標(biāo)志物、特別是MR-proANP53_9(1的抑制，并且在胰島素靈敏度與利尿鈉肽、特別是MR-ProANP53,的相對(duì)變化之間存在明顯的正相關(guān)性。這種相關(guān)性提供了代謝綜合征中從胰島素抗性到高血壓的直接聯(lián)系。這種相關(guān)性的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步產(chǎn)生了用于對(duì)象中與代謝綜合征相關(guān)的病癥和/或與心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性相關(guān)的疾病的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)和/或治療追蹤的方法。因此，本發(fā)明的主題是用于對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤的體外方法，所述方法包含-提供來自所述對(duì)象的樣品，-測(cè)定所述樣品中一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平，-使用所述一種或多種心血管肽的相對(duì)水平，用于所述對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，測(cè)定了一種或多種心血管標(biāo)志物的餐后相對(duì)水平。根據(jù)本發(fā)明，“相對(duì)水平”被定義為基于基礎(chǔ)值的相對(duì)濃度，其可以通過數(shù)學(xué)表示如下X=IOOx^l[基礎(chǔ)]其中X是以百分?jǐn)?shù)表示的一種或多種心血管標(biāo)志物水平的變化，[餐后]和[基礎(chǔ)]分別是餐后和基礎(chǔ)水平。它也可以指定為濃度相對(duì)于基礎(chǔ)值的變化百分?jǐn)?shù)，其可以通過數(shù)學(xué)表示如下χ=ιοο-|1χοο或X=-^54^x100-100[基礎(chǔ)]在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，測(cè)定一種或多種心血管標(biāo)志物的餐后相對(duì)水。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“餐后”是指食物(營養(yǎng)物)和/或飲料和/或藥物被攝取或施加到對(duì)象后的時(shí)間段，其也可以用于飲食和/或營養(yǎng)療法的上下文中。在葡萄糖耐受性或葡萄糖激惹試驗(yàn)的情形中，也可以測(cè)定餐后水平。例如，可以通過(在禁食過夜后)口服施用75g葡萄糖(通常作為葡萄糖溶液提供)，其應(yīng)該在5分鐘內(nèi)飲下，來進(jìn)行口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)(oGTT)。在基線時(shí)(使用葡萄糖之前)并以不同時(shí)間間隔例如15、30、60、90、120或180分鐘抽取血樣。葡萄糖耐受性也可以使用靜脈內(nèi)葡萄糖耐受性試驗(yàn)(ivGTT)來測(cè)定。在過夜禁食后，將根據(jù)體重調(diào)整的葡萄糖劑量(例如0.3g/kg至最高約25g)通過導(dǎo)管給藥到例如前臂中。在基線時(shí)(施用葡萄糖之前)并以不同時(shí)間間隔例如1、2、3、5、7、10、15、20、30、45、60、90、120或240分鐘抽取血樣。此外，在高胰島素血癥、正常血糖夾試驗(yàn)的情況下也可以測(cè)定餐后水平以對(duì)胰島素抗性進(jìn)行研究和定量。該試驗(yàn)測(cè)量對(duì)增加的胰島素水平進(jìn)行補(bǔ)償以不引起低血糖所需的葡萄糖量。通過外周靜脈，以每m2每分鐘10-120mU的速率灌注胰島素。為了對(duì)胰島素灌注進(jìn)行補(bǔ)償，灌注20%葡萄糖以將血糖水平維持在5至5.5mmol/l之間。葡萄糖灌輸速率通過每5至10分鐘檢查血糖來確定。在試驗(yàn)的最后30分鐘期間葡萄糖灌輸?shù)乃俾蕸Q定胰島素敏感性。如果獲得高的水平(7.5mg/min或更高)，患者對(duì)胰島素敏感。非常低的水平(4.Omg/min或更低)表明身體對(duì)胰島素的作用有抗性。介于4.0和7.5mg/min之間的水平不是決定性的，并表明“受損的葡萄糖耐受性”，是胰島素抗性的早期征兆。在本發(fā)明的上下文中，心血管標(biāo)志物是指為與代謝綜合征相關(guān)的病癥(例如心肌梗塞、冠狀動(dòng)脈疾病、心力衰竭、II型糖尿病、肥胖癥、高血壓)提供診斷和/或預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)的肽和/或蛋白，所述肽和/或蛋白選自利尿鈉肽(例如心房利尿鈉肽、腦利尿鈉肽)、腎上腺髓質(zhì)素、內(nèi)皮素、血管加壓素。心血管標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平取決于多種因素，例如對(duì)象的年齡、體重指數(shù)、對(duì)某些病癥的遺傳易感性/家族史、患者的性別和種族背景，以及與所述對(duì)象的總體健康狀態(tài)相關(guān)的因素。然而，本發(fā)明式基于與此相反的發(fā)現(xiàn)，即從心血管標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平到心血管標(biāo)志物的餐后水平的相對(duì)變化基本上獨(dú)立于這些因素，并且強(qiáng)烈依賴于施用于對(duì)象的食物和/或飲料和/或營養(yǎng)療法和/或用藥。心血管標(biāo)志物優(yōu)選自ANP、BNP、ET-I、ADM、AVP及其片段和激素原以及所述激素原的片段。在本發(fā)明方法的特別優(yōu)選實(shí)施方案中，一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平，使用檢測(cè)下限為lnmol/L或以下、優(yōu)選lOOpmol/L或以下、更優(yōu)選lOpmol/L或以下、更優(yōu)選lpmol/L或以下、最優(yōu)選0.5pmol/L或以下的測(cè)定方法來測(cè)定。此外，測(cè)定方法在正常范圍內(nèi)優(yōu)選具有<30%、更優(yōu)選<20%的測(cè)定間精確度。此外，測(cè)定方法在測(cè)量范圍內(nèi)優(yōu)選具有<10%、更優(yōu)選<5%的測(cè)定內(nèi)精確度。這里的“測(cè)定內(nèi)精確度”是指在具體測(cè)定方法的單批中測(cè)量值之間的偏差，“測(cè)定間精確度”是指在具體測(cè)定方法的多批中測(cè)量值之間的偏差，所述多批測(cè)定可以在不同地點(diǎn)、在不同天或由不同操作者執(zhí)行。因此，上面提到的術(shù)語是指對(duì)使用所討論的測(cè)定方法獲得的結(jié)果的可重復(fù)性的度量?！皽y(cè)量范圍”是指測(cè)定方法的檢測(cè)上限和下限。測(cè)定方法的靈敏性至少足以將變化和變差檢測(cè)為增加和降低。對(duì)于健康對(duì)象來說，給定生物標(biāo)志物的正常范圍對(duì)應(yīng)于高斯分布。此外，本發(fā)明的實(shí)施方案是本發(fā)明的體外方法，所述方法還包含a)測(cè)定所述對(duì)象中一種或多種心血管標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平，b)測(cè)定所述一種或多種心血管標(biāo)志物的餐后水平，c)從步驟a和b中獲得的值計(jì)算一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平。由此，將所述食品和/或飲料和/或飲食和/或營養(yǎng)療法和/或用藥的攝食、攝入或其他施用形式，與它對(duì)所述患者中所述一種或多種心血管標(biāo)志物的水平的影響，通過所述水平的相對(duì)降低關(guān)聯(lián)起來。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“基礎(chǔ)水平”是指在沒有因素例如食品、飲料、飲食、營養(yǎng)療法或用藥的影響時(shí)對(duì)象所具有的某些化合物、分子或代謝物例如心血管肽的個(gè)體水平。所述基礎(chǔ)水平在禁食約12小時(shí)后對(duì)每個(gè)對(duì)象單獨(dú)測(cè)定。此處的禁食是指對(duì)象在一段時(shí)間內(nèi)除了水和/或必不可少的用藥之外，不攝食或消耗食物、飲料或藥物。當(dāng)在本文中提到時(shí)，“測(cè)定方法”或“診斷測(cè)定方法”可以是在診斷學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的任何類型的測(cè)定方法。這樣的測(cè)定方法可以基于待檢測(cè)被分析物與具有一定親和性的一種或多種捕獲探針的結(jié)合。對(duì)于捕獲分子與目標(biāo)靶分子之間的相互作用來說，親和常數(shù)優(yōu)選大于IO8W10在本文中，當(dāng)在激素原或其他肽的上下文中提到時(shí)，術(shù)語“片段”是指可以從較大蛋白或肽得到的較小蛋白或肽，因此其包含較大蛋白或肽的部分序列。所述片段可以從較大蛋白或肽通過其一個(gè)或多個(gè)肽鍵的皂化作用而產(chǎn)生。心血管標(biāo)志物proANP、proBNP、proET-1、proADM和pro-AVP的“片段”優(yōu)選是指長度為至少6個(gè)氨基酸、更優(yōu)選長度為至少12個(gè)氨基酸殘基的片段。這樣的片段優(yōu)選可以用本文描述的免疫測(cè)定方法檢測(cè)。在本發(fā)明的文本中，“捕獲分子”是可用于結(jié)合來自樣品的目標(biāo)靶分子、即被分析物(即在本發(fā)明的情形中是心血管肽)的分子。因此，捕獲分子必須在空間上和表面特征例如表面電荷、疏水性、親水性、路易斯供體和/或受體是否存在等方面適當(dāng)塑造，以特異性結(jié)合目標(biāo)靶分子。因此，結(jié)合可以由例如捕獲分子與目標(biāo)靶分子之間的離子、范德華、JI-JI、δ-JI、疏水或氫鍵相互作用或兩種以上上面提到的相互作用的組合來介導(dǎo)。在本發(fā)明的情形中，捕獲分子可以例如選自核酸分子、糖類分子、RNA分子、蛋白質(zhì)、抗體、肽或糖蛋白。優(yōu)選情況下，捕獲分子是抗體，包括其與目標(biāo)靶或分子具有足夠親和性的片段，并包括重組抗體或重組抗體片段，以及所述抗體或其源自于變體鏈的長度為至少12個(gè)氨基酸的片段的化學(xué)和/或生物化學(xué)修飾的衍生物。優(yōu)選的檢測(cè)方法包括各種格式的免疫測(cè)定法，例如放射免疫測(cè)定法(RIA)、化學(xué)發(fā)光和熒光免疫測(cè)定法、酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)、基于Luminex的珠子陣列、蛋白質(zhì)微陣列測(cè)定法，以及快速檢測(cè)格式例如免疫層析條樣試驗(yàn)。測(cè)定法可以是均相或非均相測(cè)定法、競爭和非競爭性夾心測(cè)定法。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，測(cè)定法采用夾心測(cè)定法形式，其是非競爭性免疫測(cè)定法，其中待檢測(cè)和/或定量分子與第一抗體并與第二抗體結(jié)合。第一抗體可以結(jié)合到固相例如珠子、孔或其他容器的表面、芯片或條上，并且第二抗體是例如用染料、放射性同位素或反應(yīng)性或催化活性組成部分標(biāo)記的抗體。然后通過適合的方法測(cè)量與被分析物結(jié)合的標(biāo)記抗體的量。“夾心測(cè)定法”所涉及的通用組合物和步驟是已確立的，并為專業(yè)技術(shù)人員所公知。(《免疫測(cè)定法手冊(cè)》(TheImmunoassayHandbook),DavidWildElsevierLTD,Oxford；HH(2005年5月)，ISBN-13:978-0080445267；HultschigC等，CurrOpinChemBiol.2006Feb；10(1):4-10.PMID:16376134，在此引為參考)。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，測(cè)定方法包含兩種捕獲分子，優(yōu)選為都作為分散相存在于液體反應(yīng)混合物中的抗體，其中第一種標(biāo)記組分附著在第一種捕獲分子上，其中所述第一種標(biāo)記組分是基于熒光或化學(xué)發(fā)光淬滅或擴(kuò)增的標(biāo)記系統(tǒng)的一部分，并且所述標(biāo)記系統(tǒng)的第二種標(biāo)記組分附著于第二種捕獲分子上，使得當(dāng)兩種捕獲分子與被分析物結(jié)合后產(chǎn)生可測(cè)量信號(hào)，允許檢測(cè)在包含樣品的溶液中形成的夾心復(fù)合物。更優(yōu)選情況下，所述標(biāo)記系統(tǒng)包含稀土穴狀化合物或稀土螯合物與熒光染料或化學(xué)發(fā)光染料、特別是花青素類型染料的組合。在本發(fā)明的情形中，基于熒光的測(cè)定方法包含使用染料，所述染料可以例如選自FAM(5-或6-羧基熒光素)、VIC、NED、熒光素、熒光素異硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、花青染料例如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7、占噸、6-羧基-2’，4’，7’，4，7-六氯熒光素(HEX)、TET、6-羧基-4，，5，-二氯-2，，7，-二甲氧基熒光素(JOE)、N，N，N',N'-四甲基-6-羧基羅丹明(TAMRA)、6-羧基-X-羅丹明(ROX)、5_羧基羅丹明_6G(R6G5)、6_羧基羅丹明_6G(RG6)、羅丹明、羅丹明綠、羅丹明紅、羅丹明110、BODIPY染料例如BODIPYTMR、俄勒岡綠、香豆素類例如傘形酮、苯并亞胺類例如Hoechst33258；菲啶類例如德克薩斯紅、雅吉瓦黃、AlexaFluor、PET、溴化乙錠、吖啶類染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、嚇啉染料、聚甲炔染料等。在本發(fā)明的情形中，基于化學(xué)發(fā)光的測(cè)定方法包含根據(jù)化學(xué)發(fā)光材料的物理原理使用染料，所述原理描述在Kirk-Othmer的《化學(xué)技術(shù)百科全書》(Encyclopediaofchemicaltechnology)第四版，J.I.Kroschwitz執(zhí)行主編，Μ.Howe-Grant編輯，Johnffiley&Sons,1993,vol.15,p.518-562中，在此引為參考，包括在551-562頁中的引用文獻(xiàn)。優(yōu)選的化學(xué)發(fā)光染料是吖啶酯。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，使用免疫測(cè)定法測(cè)定所述患者中所述心血管標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平和所述心血管標(biāo)志物的餐后水平。正如上面所概述的，診斷測(cè)定方法可以是在診斷學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的任何類型的測(cè)定方法，包括但不限于基于酶反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光、熒光或放射性化學(xué)物質(zhì)的測(cè)定方法。優(yōu)選的檢測(cè)方法包括條試驗(yàn)、放射免疫測(cè)定法、化學(xué)發(fā)光和熒光免疫測(cè)定法、免疫印記測(cè)定法、酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)、基于Luminex的珠子陣列和蛋白質(zhì)微陣列測(cè)定法。測(cè)定方法的類型也可以是基于微孔板、基于芯片、基于珠子的，其中生物標(biāo)志物蛋白可以附著于表面或在溶液中。測(cè)定方法可以是均相或非均相測(cè)定法、夾心測(cè)定法、競爭和非競爭性測(cè)定法。(《免疫測(cè)定手冊(cè)〉〉(TheImmunoassayHandbook),DavidWildElsevierLTD,Oxford；第三片反(2005年5月)，ISBN-13:978-0080445267；HultschigC等，CurrOpinChemBiol.2006Feb；10(1):4-10.PMID:16376134)。在本發(fā)明的最優(yōu)選實(shí)施方案中，按照(MorgenthalerNG等，2004ClinChem50:234-6)中的描述使用免疫測(cè)定法。在本發(fā)明的體外方法的特別優(yōu)選實(shí)施方案中，一種心血管標(biāo)志物是proANP。更優(yōu)選情況下，一種標(biāo)志物是中段proANP。最優(yōu)選的是中段ProANP53,。MR-proANP53_90是指中段心房利尿鈉肽原，其包含心房利尿鈉肽原(proANP)的53到90位氨基酸。在本發(fā)明的上下文中，AVP是指精氨酸血管加壓素(=血管加壓素)或其片段或其前體或所述前體的片段。AVP前體的優(yōu)選片段是C-端proAVP(CT-proAVP或和肽素)。在本發(fā)明的情形中，CT-proAVP1Q7_145(或CT-pre-proAVP126_164)是特別優(yōu)選的心血管標(biāo)志物。在本發(fā)明的上下文中，ADM是指腎上腺髓質(zhì)素或其片段或其前體或所述前體的片段。ADM前體的優(yōu)選片段是中段proADM(MR-proADM)。在本發(fā)明的情形中，MR-proADM24_71(或MR-pr印roADM45_92)是特別優(yōu)選的心血管標(biāo)志物。在本發(fā)明的上下文中，ET-I是指內(nèi)皮素1或其片段或其前體或所述前體的片段。ET-I前體的優(yōu)選片段是C-端-proETl(CT-proETl)。在本發(fā)明的情形中，CT-proET-l151_195(或CT-pr印roET-l168_212)是特別優(yōu)選的心血管標(biāo)志物。在本發(fā)明的上下文中，BNP是指腦利尿鈉肽或其片段或其前體或所述前體的片段。BNP前體的優(yōu)選片段是N-端proBNP(NT-proBNP)。在本發(fā)明的情形中，NT-proBNP是特別優(yōu)選的心血管標(biāo)志物。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，一種或多種心血管標(biāo)志物選自proANP或其片段(優(yōu)選為MR-proANP，更優(yōu)選為MR-proANP53_9(1)、pro-BNP或其片段(優(yōu)選為NT-proBNP)、pro-ET-1或其片段(優(yōu)選為CT-proETl、更優(yōu)選為CT-proET-l151_195)、pro-AVP或其片段(優(yōu)選為和肽素，更優(yōu)選為CT-pr0AVP1(17_145)、pro-ADM或其片段(優(yōu)選為MR-proADM、更優(yōu)選為MR-proADM24_71)。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下至少一種標(biāo)志物是選自下列的肽利尿鈉肽、內(nèi)皮素-1、血管加壓素、腎上腺髓質(zhì)素，以及它們的肽原或其至少3個(gè)氨基酸、優(yōu)選5個(gè)以上、更優(yōu)選6個(gè)以上、更優(yōu)選7個(gè)以上、更優(yōu)選10個(gè)以上、更優(yōu)選12個(gè)以上、更優(yōu)選15個(gè)以上、最優(yōu)選20個(gè)或以上氨基酸的片段。在本發(fā)明的非常優(yōu)選實(shí)施方案中，至少一種心血管標(biāo)志物是心房利尿鈉肽(ANP)或肽原及其至少3個(gè)氨基酸、優(yōu)選5個(gè)以上、更優(yōu)選6個(gè)以上、最優(yōu)選7個(gè)以上氨基酸的片段。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，至少一種心血管標(biāo)志物是MR-ProANP53,或其至少3個(gè)氨基酸、優(yōu)選5個(gè)以上、更優(yōu)選6個(gè)以上、最優(yōu)選7個(gè)以上氨基酸的片段。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的體外方法的特定實(shí)施方案，其中附加地測(cè)定對(duì)于所述對(duì)象對(duì)代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)病癥的傾向性的分類具有預(yù)測(cè)價(jià)值的一種或多種其他標(biāo)志物或臨床參數(shù)的水平，其中臨床參數(shù)可以是能夠影響所述傾向性的任何參數(shù)，例如年齡、性別、疾病特別是高血壓、肥胖癥特別是軀干性肥胖癥的既往史、體重指數(shù)、遺傳易感性/家族史、種族背景、患者的影響所述傾向性的嗜好例如吸煙、飲酒、飲食、鍛煉或用藥。在本發(fā)明的體外方法的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在施用所述食物和/或飲料和/或飲食和/或營養(yǎng)療法后4小時(shí)內(nèi)、優(yōu)選2小時(shí)內(nèi)、更優(yōu)選15至60分鐘之間，測(cè)定所述一種或多種心血管標(biāo)志物的餐后水平。在本發(fā)明的體外方法的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在一段延長時(shí)期內(nèi)、優(yōu)選在一周時(shí)期內(nèi)、更優(yōu)選一個(gè)月、更優(yōu)選兩個(gè)月、更優(yōu)選半年、更優(yōu)選在疾病的整個(gè)持續(xù)時(shí)間內(nèi)，監(jiān)測(cè)所述食物和/或飲料和/或飲食和/或營養(yǎng)療法對(duì)一種或多種心血管肽的相對(duì)水平的餐后影響。對(duì)于慢性疾病來說，監(jiān)測(cè)可以執(zhí)行患者的終生。本發(fā)明還可以包含將個(gè)體的心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平與預(yù)定值進(jìn)行比較。預(yù)定值可以采取各種形式。它可以是單一截止值，例如群體的中位數(shù)或平均值或75^90\95&或99th百分位數(shù)。它可以根據(jù)對(duì)比組來建立，例如一個(gè)規(guī)定組中的風(fēng)險(xiǎn)為另一個(gè)規(guī)定組中的風(fēng)險(xiǎn)的兩倍。它可以是范圍，例如將測(cè)試群體等量(或不等量)地分組，例如低風(fēng)險(xiǎn)組、中風(fēng)險(xiǎn)組和高風(fēng)險(xiǎn)組，或分成四等分，最低的四分之一是具有最低風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體，最高的四分之一是是具有最高風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。在所選的特定群體中，預(yù)定值可以隨著他們的嗜好、種族、遺傳等而變化。例如，表觀健康的非吸煙者群體(沒有可檢測(cè)到的疾病、特別是沒有糖尿病)與吸煙群體或其成員患有心血管系統(tǒng)和/或代謝系統(tǒng)疾病的群體相比，可以具有不同的標(biāo)志物“正?！狈秶Ｒ虼?，所選的預(yù)定值可以考慮個(gè)體所屬類別。本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通專業(yè)人員可以使用不超出常規(guī)的實(shí)驗(yàn)來選擇適合的范圍和類別。閾值水平可以從例如Kaplan-Meier分析獲得，其中將疾病的發(fā)生與群體中心血管標(biāo)志物的四分位數(shù)相關(guān)聯(lián)。根據(jù)該分析，心血管標(biāo)志物水平高于75th百分位數(shù)的對(duì)象具有患本發(fā)明的疾病的明顯增加的風(fēng)險(xiǎn)。該結(jié)果得到對(duì)經(jīng)典風(fēng)險(xiǎn)因子進(jìn)行充分調(diào)整的Cox回歸分析的進(jìn)一步支持最高的四分之一與所有其他對(duì)象相比非常明顯地與患本發(fā)明疾病的增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。其他優(yōu)選的截止值是例如正常群體的90th、95th或99th百分位數(shù)。通過使用比75th百分位數(shù)更高的百分位數(shù)，人們可以減少鑒定到的假陽性對(duì)象的數(shù)量，但是人們可能錯(cuò)過鑒定到具有中等、盡管仍然增加的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。因此，人們可以根據(jù)被認(rèn)為更加合適的是以也鑒定到“假陽性”為代價(jià)而鑒定大多數(shù)有風(fēng)險(xiǎn)對(duì)象，還是以錯(cuò)過幾個(gè)具有中等風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象為代價(jià)而主要鑒定高風(fēng)險(xiǎn)對(duì)象，來調(diào)整截止值。通過使用個(gè)體的心血管標(biāo)志物水平值和其他預(yù)后性實(shí)驗(yàn)室和臨床參數(shù)來計(jì)算個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)的其他數(shù)學(xué)可能性是例如NRI(凈重新分類指數(shù))或IDI(綜合鑒別指數(shù))。指數(shù)可以按照Pencina的文獻(xiàn)來計(jì)算(PencinaMJ等“評(píng)估新標(biāo)志物的增加預(yù)測(cè)能力從ROC曲^(EvaluatingtheaddedpredictiveabilityofanewmarkerfromareaundertheROCcurvetoreclassificationandbeyond),StatMed.2008；27:157-172)。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，將所述對(duì)象中所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的5%以上、優(yōu)選10%以上、更優(yōu)選15%以上、更優(yōu)選20%以上的餐后相對(duì)降低，與代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的診斷和不利預(yù)后以及對(duì)象發(fā)生代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)。在本發(fā)明的另一個(gè)特定實(shí)施方案中，將所述對(duì)象中所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的5%以上、優(yōu)選10%以上、更優(yōu)選15%以上、更優(yōu)選20%以上的餐后相對(duì)增加，與代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的有利預(yù)后以及對(duì)象發(fā)生代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)。此外，本發(fā)明的主題是測(cè)定方法的應(yīng)用，所述測(cè)定方法優(yōu)選具有l(wèi)nmol/L或以下、優(yōu)選1OOpmo1/L或以下、更優(yōu)選1Opmo1/L或以下、更優(yōu)選1pmo1/L或以下、最優(yōu)選0.5pmo1/L或以下的靈敏度，用于測(cè)定對(duì)象的一種或多種心血管標(biāo)志物水平相對(duì)于所述對(duì)象的所述標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平的變化，其中測(cè)定方法能夠測(cè)定降低。重要的是注意到，在本發(fā)明中使用的測(cè)定方法測(cè)量所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的降低的能力是至關(guān)重要的，其中降低導(dǎo)致所述一種或多種心血管標(biāo)志物的水平非常低。因此，本文中使用的測(cè)定方法優(yōu)選為超靈敏的，以便能夠在基礎(chǔ)水平位于健康群體中所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的97.5th百分位數(shù)之內(nèi)的對(duì)象中，測(cè)量所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的降低。本發(fā)明的另一個(gè)主題是上面描述的測(cè)定方法的應(yīng)用，用于測(cè)定對(duì)象的一種或多種心血管標(biāo)志物水平相對(duì)于所述對(duì)象的所述標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平的餐后變化。優(yōu)選情況下，測(cè)定方法是免疫測(cè)定法。本發(fā)明的另一個(gè)主題是上面概述的測(cè)定方法的應(yīng)用，其中一種或多種心血管標(biāo)志物水平的所述變化被用于診斷、預(yù)測(cè)和/或監(jiān)測(cè)具有與代謝綜合征相關(guān)的病癥的對(duì)象。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述對(duì)象是具有與代謝綜合征相關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥的人類。在特定實(shí)施方案中，一種或多種心血管標(biāo)志物水平的所述變化被用于糖尿病、特別是2型糖尿病的診斷/預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“代謝綜合征”是指心血管疾病和II型糖尿病的幾種風(fēng)險(xiǎn)因子的集合，正如美國心臟聯(lián)合會(huì)(AmericanHeartAssociation)(AHA)和國家心臟、肺臟和血液研究所(NationalHeart,LungandBloodInstitute)(NHLBI)所定義的(Grundy等，2005.Circulation112:2735-3752)，在此引為參考。代謝綜合征的重要要素包括葡萄糖不耐受性和血脂異常、高血壓和軀干性肥胖癥等。如果下述5個(gè)判據(jù)中的3個(gè)得到滿足，則可以診斷為代謝綜合征粗的腰圍(在男性中彡102cm以及在女性中彡88cm)，高甘油三酯(分別彡150mg/dL/1.7mmOl/L，或用于高甘油三酯的藥物治療)，低HDL膽固醇(在男性中分別<40mg/dL/l.03mmol/L；在女性中分別<50mg/dL/l.3mmol/L；或用于低HDL膽固醇的藥物治療)，高血壓(收縮壓>130mmHg或舒張壓>85mmHg,或在具有高血壓史的患者中進(jìn)行抗高血壓藥物治療)，以及高禁食葡萄糖(>100mg/dL或用于高血糖的藥物治療)。更近些時(shí)候由國際糖尿病聯(lián)盟(InternationalDiabetesFederation)給出了具有一些修改的定義(http://www.idf.orR/webdata/docs/IDFMetadeffinal,pdf)。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，與代謝綜合征相關(guān)的病癥選自心肌梗塞(Ml)、冠脈綜合征、充血性心力衰竭(CHF)、冠狀動(dòng)脈疾病(動(dòng)脈粥樣硬化)、中風(fēng)、短暫性缺血性發(fā)作(TIA)、外周動(dòng)脈疾病、心肌癥、11型糖尿病、腎衰竭和/或具有上面提到的疾病的一種或多種癥狀例如肥胖癥、高血壓、頭痛、胸痛和呼吸困難的患者。胰島素抗性(IR)是其中給定濃度的胰島素產(chǎn)生低于預(yù)期的生物學(xué)效應(yīng)的狀態(tài)。胰島素抗性也已被任意定義為每天需要200以上單位的胰島素才能獲得血糖控制并阻止酮病。由胰島素抗性引起的高血漿胰島素和葡萄糖水平，通常導(dǎo)致代謝綜合征和2型糖尿病，包括其并發(fā)癥dR的癥狀可以包括疲勞、大腦迷糊、注意力無法集中、低血糖、腸膨脹、嗜睡、體重增加、脂肪儲(chǔ)存、減肥困難、高血液甘油三酯水平、高血壓和抑郁。心血管疾病的特征在于心肌或?yàn)樾呐K、腦和其他關(guān)鍵器官供血的血管系統(tǒng)的機(jī)能障礙。術(shù)語“心血管疾病”覆蓋了大范圍的病癥，包括動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病、心臟瓣膜病、心律不齊、心力衰竭、高血壓、立位性低血壓、休克、心內(nèi)膜炎、主動(dòng)脈及其分支的疾病、外周血管系統(tǒng)的病癥、先天性心臟病、中風(fēng)。本發(fā)明的另一個(gè)主題是使用測(cè)定方法測(cè)定對(duì)象的一種或多種心血管標(biāo)志物水平相對(duì)于所述對(duì)象的所述標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平的變化，其中測(cè)定方法能夠檢測(cè)所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的降低，并能夠檢測(cè)所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的增加。在測(cè)定方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，變化是增加或降低，并且其中測(cè)定方法具有l(wèi)nmol/L或以下的靈敏度。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是使用測(cè)定方法測(cè)定對(duì)象的一種或多種心血管標(biāo)志物水平相對(duì)于所述對(duì)象的所述標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平的餐后變化。測(cè)定方法用于對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤。本發(fā)明的另一個(gè)目的是心血管肽的應(yīng)用，用于患者的代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)病癥的診斷、預(yù)后和/或治療追蹤。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“對(duì)象”是指活的人類或非人類生物體。在本文中，優(yōu)選情況下對(duì)象是人類對(duì)象。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“樣品”是指出于對(duì)目標(biāo)對(duì)象例如患者進(jìn)行診斷、預(yù)后或評(píng)估的目的而獲得的體液樣品。優(yōu)選的測(cè)試樣品包括血液、血清、血漿、腦脊液、尿液、唾液、痰液和胸膜腔積液。此外，本
技術(shù)領(lǐng)域：
的專業(yè)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，某些測(cè)試樣品在分級(jí)或純化步驟、例如將全血分離成血清或血漿組分后，可以更容易地分析。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，樣品選自血液樣品、血清樣品、血漿樣品、腦脊液樣品、唾液樣品和尿液樣品，或上面提到的任何樣品的提取物。優(yōu)選情況下，樣品是血液樣品，最優(yōu)選為血清樣品或血漿樣品。通過本發(fā)明的方法或通過使用本發(fā)明的測(cè)定方法獲得的標(biāo)志物的水平，可以本
技術(shù)領(lǐng)域：
的專業(yè)人員熟知的各種方式進(jìn)行分析。例如，可以將獲得的每個(gè)測(cè)定結(jié)果與“正?！敝祷虮砻魈囟膊』蚪Y(jié)果的值進(jìn)行比較。具體的診斷/預(yù)后可以取決于每個(gè)測(cè)定結(jié)果與這種值的比較，所述值可以被稱為診斷或預(yù)后“閾值”。診斷和/或預(yù)后測(cè)試的靈敏度和特異性不僅取決于測(cè)試的分析“質(zhì)量”，而且還取決于構(gòu)成異常結(jié)果的定義。在實(shí)踐中，典型地通過將“正?！?即表觀健康的)和“患病”群體(即患有糖尿病、胰島素抗性和/或代謝綜合征的患者)的變量值對(duì)其相對(duì)頻率進(jìn)行作圖，計(jì)算出受試者工作特征曲線(R0C曲線)。對(duì)于任何特定標(biāo)志物來說，患有或未患疾病的對(duì)象的標(biāo)志物水平分布可能交疊。在這些條件下，測(cè)試不能以100%準(zhǔn)確性絕對(duì)辨別正常與疾病，并且交疊的區(qū)域表示測(cè)試不能辨別正常與疾病的地方。選擇一個(gè)閾值，高于它(或低于它，取決于標(biāo)志物隨著疾病如何變化)時(shí)測(cè)試被認(rèn)為是異常的，低于它時(shí)測(cè)試被認(rèn)為是正常的。ROC曲線下的面積是感覺到的測(cè)量值將允許正確鑒定病癥的概率的度量。即使在測(cè)試結(jié)果不一定給出準(zhǔn)確數(shù)字的情況下，ROC曲線也能使用。只要人們能夠?qū)Y(jié)果排序，人們即能產(chǎn)生ROC曲線。例如，在“患病”樣品上進(jìn)行的測(cè)試的結(jié)果可以按照程度排序(例如1=低，2=正常，3=高)。這種排序可以與“正?！比后w中的結(jié)果相關(guān)聯(lián)，并產(chǎn)生ROC曲線。這些方法在本
技術(shù)領(lǐng)域：
中是公知的。參見例如Hanley等，Radiology143:29-36(1982)。優(yōu)選情況下，所選的閾值能夠提供的ROC曲線面積大于約0.5、更優(yōu)選大于約0.7、更優(yōu)選大于約0.8、更優(yōu)選大于約0.85，并且最優(yōu)選大于約0.9。在該上下文中，術(shù)語“約”是指給定測(cè)量值的+/-5%。ROC曲線的水平軸表示(1-特異性)，其隨著假陽性率而增加。曲線的垂直軸表示靈敏度，其隨著真陽性率而增加。因此，對(duì)于所選的具體截止值來說，可以測(cè)定(ι-特異性)的值，并可以獲得相應(yīng)的靈敏度。ROC曲線下的面積是測(cè)量到的標(biāo)志物水平將允許正確鑒定疾病或病癥的概率的度量。因此，ROC曲線下的面積可用于確定測(cè)試的有效性。在某些實(shí)施方案中，不依賴于組中的一個(gè)或多個(gè)標(biāo)志物的具體閾值來確定從對(duì)象獲得的標(biāo)志物水平分布情況是否指示了特定診斷/預(yù)后。相反，本發(fā)明可以利用標(biāo)志物組“分布情況”作為不可分割的整體進(jìn)行評(píng)估。這種標(biāo)志物組中變化的特定“指紋”組合形式能夠有效用作特定的診斷或預(yù)后指示物。正如在本文中討論的，變化的組合形式可以從單一樣品或組的一個(gè)或多個(gè)成員的當(dāng)時(shí)變化(或組的響應(yīng)值)獲得。這里的組是指一組標(biāo)志物。正如在本文后面所描述的，組的響應(yīng)值優(yōu)選通過對(duì)在各種截止值下特定標(biāo)志物組的靈敏度對(duì)組的1-(特異性)進(jìn)行ROC曲線作圖來確定。在這些方法中，來自對(duì)象的標(biāo)志物測(cè)量值的分布情況合在一起，被認(rèn)為提供了診斷或預(yù)后的全局概率(表示成數(shù)字分值或風(fēng)險(xiǎn)百分率)。在這樣的實(shí)施方案中，標(biāo)志物的某些子集的增加可能足以在一個(gè)患者中指示特定診斷/預(yù)后，而標(biāo)志物的不同子集的增加可能足以在另一個(gè)患者中指示相同或不同的診斷/預(yù)后。也可以向組中的一個(gè)或多個(gè)標(biāo)志物施加權(quán)重因數(shù)，例如，當(dāng)標(biāo)志物在鑒定特定診斷/預(yù)后中效用特別高時(shí)，可以將其權(quán)重成使得在給定水平下，它單獨(dú)即足以傳遞陽性結(jié)果的信號(hào)。同樣，也可以提供權(quán)重因數(shù)，使得特定標(biāo)志物的任何給定水平都不足以傳遞陽性結(jié)果的信號(hào)，而只有當(dāng)另一個(gè)標(biāo)志物也有助于分析時(shí)才傳遞結(jié)果的信號(hào)。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組被選擇成表現(xiàn)出至少約70%的靈敏度、更優(yōu)選至少約80%的靈敏度、更優(yōu)選至少約85%的靈敏度、更優(yōu)選至少約90%的靈敏度以及最優(yōu)選至少約95%的靈敏度，與至少約70%的特異性、更優(yōu)選至少約80%的特異性、更優(yōu)選至少約85%的特異性、更優(yōu)選至少約90%的特異性以及最優(yōu)選至少約95%的特異性的組合。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，靈敏度和特異性兩者均為至少約75%、更優(yōu)選至少約80%、更優(yōu)選至少約85%、更優(yōu)選至少約90%以及最優(yōu)選至少約95%。在這種情況下，術(shù)語“約”是指給定測(cè)量值的+/_5%。在其他實(shí)施方案中，陽性似然比、陰性似然比、機(jī)會(huì)比或風(fēng)險(xiǎn)比被用作測(cè)試的預(yù)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)或診斷疾病的能力的度量。在陽性似然比的情況下，值為1表示在“患病”和“對(duì)照”組二者的對(duì)象中陽性結(jié)果可能性相等；值大于1表示在患病組中陽性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對(duì)照組中陽性結(jié)果可能性更大。在陰性似然比的情況下，值為1表示在“患病”和“對(duì)照”組二者的對(duì)象中陰性結(jié)果可能性相等；值大于1表示在測(cè)試組中陰性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對(duì)照組中陰性結(jié)果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約1.5或以上或約0.67或以下、更優(yōu)選至少約2或以上或約0.5或以下、更優(yōu)選至少約5或以上或約0.2或以下、更優(yōu)選至少約10或以上或約0.1或以下，以及最優(yōu)選至少約20或以上或約0.05或以下的陽性或陰性似然比。在這種情況下，術(shù)語“約”是指給定測(cè)量值的+/_5%。在機(jī)會(huì)比的情況下，值為1表示在“患病”和“對(duì)照”組二者的對(duì)象中陽性結(jié)果可能性相等；值大于1表示在患病組中陽性結(jié)果可能性更大。值小于1表示在對(duì)照組中陽性結(jié)果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約2或以上或約0.5或以下、更優(yōu)選至少約3或以上或約0.33或以下、更優(yōu)選至少約4或以上或約0.25或以下、更優(yōu)選至少約5或以上或約0.2或以下以及最優(yōu)選至少約10或以上或約0.1或以下的機(jī)會(huì)比。在這種情況下，術(shù)語“約”是指給定測(cè)量值的+/_5%。在風(fēng)險(xiǎn)比的情況下，值為1表示在“患病”和“對(duì)照”組二者中終點(diǎn)(例如死亡)的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)相等；值大于1表示在患病組中風(fēng)險(xiǎn)更高；值小于1表示在對(duì)照組中風(fēng)險(xiǎn)更高。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約1.1或以上或約0.91或以下、更優(yōu)選至少約1.25或以上或約0.8或以下、更優(yōu)選至少約1.5或以上或約0.67或以下、更優(yōu)選至少約2或以上或約0.5或以下以及最優(yōu)選至少約2.5或以上或約0.4或以下的風(fēng)險(xiǎn)比。在這種情況下，術(shù)語“約”是指給定測(cè)量值的+/_5%。專業(yè)技術(shù)人員將會(huì)理解，將診斷或預(yù)后指示物與診斷或與將來臨床結(jié)果的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)，是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。例如，標(biāo)志物水平大于X可以傳遞患者與水平低于或等于X的患者相比更可能遭受不利后果的信號(hào)，正如通過統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性水平所確定的。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通常通過比較兩個(gè)或多個(gè)群體并確定置信區(qū)間和/或P值來確定。參見例如Dowdy和Wearden，《用于研究的統(tǒng)計(jì)學(xué)》(StatisticsforResearch),JohnWiley&Sons,NewYork,1983。本發(fā)明的優(yōu)選置信區(qū)間是90%,95%,97.5%,98%,99%,99.5%,99.9%^P99.99%，而優(yōu)選的ρ值是0.1,0.05,0.025,0.02,0.01,0.005,0.001和0.0001。序列腎上腺髓質(zhì)素的前體肽(前腎上腺髓質(zhì)素原)的氨基酸序列提供在SEQIDNO1中。腎上腺髓質(zhì)素是指前腎上腺髓質(zhì)素原序列的22至185位氨基酸殘基。腎上腺髓質(zhì)素原(pro-ADM)的氨基酸序列提供在SEQIDN0.2中。pro-ADMN-端20肽(PAMP)是指pre-proADM的22-41位氨基酸殘基。PAMP的氨基酸序列提供在SEQIDNO3中。MR-pro-腎上腺髓質(zhì)素(MR-pro-ADM)是指pre-pro_ADM的45-92位氨基酸殘基。MR-pro_ADM的氨基酸序列提供在SEQIDN0:4中。成熟的腎上腺髓質(zhì)素(ADM)的氨基酸序列提供在SEQIDNO:5中。ANP的氨基酸序列提供在SEQIDNO:8中。153個(gè)氨基酸的pre-pro_ANP的序列顯示在SEQIDN0:6中。在切掉N-端信號(hào)肽(25個(gè)氨基酸)和兩個(gè)C-端氨基酸(127/128)后，釋放出proANP(SEQIDNO:7)。ANP包含來自前體激素原pro-ΑΝΡ的C-端的99-1位殘基。該激素原被切割成成熟的觀個(gè)氨基酸的肽ANP，也稱為ANP(1-28)或α-ANP，以及氨基端片段ANP(1-98)(NT-proANP，SEQIDNO:9)。中段proANP(MR-proANP)被定義為NT-proANP或其包含proANP的至少53-90位氨基酸殘基(SEQIDNO10)的任何片段。164個(gè)氨基酸的血管加壓素前體肽(前血管加壓素原)的序列提供在SEQIDNO11中。血管加壓素原是指前血管加壓素原序列的四至164位氨基酸殘基。血管加壓素原的氨基酸序列提供在SEQIDNO:12中。血管加壓素原被切割成成熟的血管加壓素、后葉激素運(yùn)載蛋白II和C-端血管加壓素原(CT-proAVP或和肽素)。血管加壓素是指前血管加壓素原的20至觀位氨基酸殘基。血管加壓素的氨基酸序列顯示在SEQIDN0:13中。和肽素是指前血管加壓素原的126至164位氨基酸殘基。和肽素的氨基酸序列提供在SEQIDN0:14中。后葉激素運(yùn)載蛋白II包含前血管加壓素原的32至IM位氨基酸殘基，其序列顯示在SEQIDNO15中。212個(gè)氨基酸的內(nèi)皮素-1的前體肽(前內(nèi)皮素原-1)的序列提供在SEQIDNO16中。Pro-ET-I是指pre-pro-ET_l序列的18至212位氨基酸殘基。pro_ET_l的氨基酸序列提供在SEQIDNO:17中。Pro-ET-I被切割成成熟ET-Ubig-ΕΤ—Ι和C-端proET-1(CT-proET-1)。ET-I是指pre-pro-ET-l的53至73位氨基酸殘基。ET-I的氨基酸序列顯示在SEQIDNO18中。CT-proET-Ι是指pre-pro-ET-l的168至212位氨基酸殘基。CT-proET-Ι的氨基酸序列提供在SEQIDN0:19中。Big-ET-I包含pre-pro-ET-l的53至90位氨基酸殘基，其序列顯示在SEQIDNO20中。134個(gè)氨基酸的腦利尿鈉肽的前體肽(pre-pro-BNP)的序列提供在SEQIDNO21中。Pro-BNP是指pre-pro-BNP的27至1；34位氨基酸殘基。pro-BNP的序列顯示在SEQIDNO22中。Pro-BNP被切割成N-端pro-BNP(NT-pro-BNP)和成熟BNP。NT-pro-BNP包含27至102位氨基酸殘基，其序列顯示在SEQIDNO23中。SEQIDNO24顯示了BNP的序列，其包含pre-pro-BNP肽的103至134位氨基酸殘基。0103]SEQIDNO1(pre-pro-ADM的氨基酸序列)0104]1MKLVSVALMYLGSLAFLGADTARLDVASEFRKKffNKffALSRGKRELRMSS0105]51SYPTGLADVKAGPAQTLIRPQDMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMN0106]101NFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRR0107]151RRSLPEAGPGRTLVSSKPQAHGAPAPPSGSAPHFL0108]SEQIDNO:2(pro-ADM的氨基酸序列)0109]1ARLDVASEFRKKffNKffALSRGKRELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQ0110]51DMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLA0111]101HQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRRRRSLPEAGPGRTLVSSKPQAH0112]151GAPAPPSGSAPHFL0113]SEQIDNO:3(pro-ADMN20的氨基酸序列)0114]1ARLDVASEFRKKffNKffALSR0115]SEQIDNO:4(MR-pro-ADM的氨基酸序列)0116]1ELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQDMKGASRSPEDSS0117]SEQIDNO:5(ADM的氨基酸序列)0118]1YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQ0119]51GY0120]SEQIDNO:6(pre-pro-ANP的氨基酸序列)0121]1MSSFSTTTVSFLLLLAFQLLGQTRANPMYNAVSNADLMDFKNLLDHLEEK0122]51MPLEDEVVPPQVLSEPNEEAGAALSPLPEVPPffTGEVSPAQRDGGALGRG0123]101PffDSSDRSALLKSKLRALLTAPRSLRRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFR0124]151YRR0125]SEQIDNO:7(pro-ANP的氨基酸序列)0126]1NPMYNAVSNADLMDFKNLLDHLEEKMPLEDEVVPPQVLSEPNEEAGAALS0127]51PLPEVPPffTGEVSPAQRDGGALGRGPffDSSDRSALLKSKLRALLTAPRSL0128]101RRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY0129]SEQIDNO:8(ANP的氨基酸序列)0130]1SLRRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY0131]SEQIDNO9(NT-proANP的氨基酸序列)0132]1NPMYNAVSNADLMDFKNLLDHLEEKMPLEDEVVPPQVLSEPNEEAGAALS0133]51PLPEVPPffTGEVSPAQRDGGALGRGPffDSSDRSALLKSKLRALLTAPR0134]SEQIDNO:10(proANP的53-90位氨基酸的氨基酸序列)0135]1PEVPPffTGEVSPAORDGGALGRGPffDSSDRSALLKSKL0136]SEQIDNO:11(pre-pro-AVP的氨基酸序列)0137]1MPDTMLPACFLGLLAFSSACYFQNCPRGGKRAMSDLELRQCLPCGPGGKG0138]51RCFGPSICCADELGCFVGTAEALRCQEENYLPSPCQSGQKACGSGGRCAA0139]101FGVCCNDESCVTEPECREGFHRRARASDRSNATQLDGPAGALLLRLVQLA0140]151GAPEPFEPAQPDAY0141]SEQIDNO:12(pro-AVP的氨基酸序列)0142]1CYFQNCPRGGKRAMSDLELRQCLPCGPGGKGRCFGPSICCADELGCFVGT0143]51AEALRCQEENYLPSPCQSGQKACGSGGRCAAFGVCCNDESCVTEPECREG0144]101FHRRARASDRSNATQLDGPAGALLLRLVQLAGAPEPFEPAQPDAY0145]SEQIDNO13(AVP的氨基酸序列)0146]1CYFQNCPRG0147]SEQIDNO:14(CT-pre-proAVP或和肽素的氨基酸序列)0148]1ASDRSNATQLDGPAGALLLRLVQLAGAPEPFEPAQPDAY0149]SEQIDNO:15(后葉激素運(yùn)載蛋白II的氨基酸序列)0150]1AMSDLELRQCLPCGPGGKGRCFGPSICCADELGCFVGTAEALRCQEENYL0151]51PSPCQSGQKACGSGGRCAAFGVCCNDESCVTEPECREGFHRRA0152]SEQIDNO:16(pre-pro-ET-l的氨基酸序列)0153]1MDYLLMIFSLLFVACQGAPETAVLGAELSAVGENGGEKPTPSPPWRLRRS51KRCSCSSLMDKECVYFCHLDIIWVNTPEHVVPYGLGSPRSKRALENLLPT101KATDRENRCQCASQKDKKCWNFCQAGKELRAEDIMEKDWNNHKKGKDCSK151LGKKCIYQQLVRGRKIRRSSEEHLRQTRSETMRNSVKSSFHDPKLKGKPS201RERYVTHNRAHWSEQIDNO:17(pro-ET-l的氨基酸序列)1APETAVLGAELSAVGENGGEKPTPSPPffRLRRSKRCSCSSLMDKECVYFC51HLDIIffVNTPEHVVPYGLGSPRSKRALENLLPTKATDRENRCQCASQKDK101KCffNFCQAGKELRAEDIMEKDffNNHKKGKDCSKLGKKCIYQQLVRGRKIR151RSSEEHLRQTRSETMRNSVKSSFHDPKLKGKPSRERYVTHNRAHWSEQIDNO:18(ET-1的氨基酸序列)1CSCSSLMDKECVYFCHLDIIWSEQIDNO:19(CT-pro-ET-l的氨基酸序列)1RSSEEHLRQTRSETMRNSVKSSFHDPKLKGKPSRERYVTHNRAHWSEQIDNO:20(Big-ET-l的氨基酸序列)1CSCSSLMDKECVYFCHLDIIffVNTPEHVVPYGLGSPRSSEQIDNO21(pre-pro-BNP的氨基酸序列):1MDPQTAPSRALLLLLFLHLAFLGGRSHPLGSPGSASDLETSGLQEQRNHL51QGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGVffKSREVATEGIRGHRKMVLYTLRA101PRSPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGLGCKV16LRRHSEQIDNO:22(pro_BNP的氨基酸序列)1HPLGSPGSASDLETSGLQEQRNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGV51WKSREVATEGIRGHRKMVLYTLRAPRSPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGL101GCKVLRRHSEQIDNO23(NT-pro-BNP的氨基酸序列)1HPLGSPGSASDLETSGLQEQRNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGV51WKSREVATEGIRGHRKMVLYTLRAPRSEQIDNO:24(BNP的氨基酸序列)1SPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGLGCKVLRRH附圖描述圖1、pre-pro-ADM的序列圖2、pro-ADM的序列圖3、pro-ADMN20的序列圖4、MR-pro-ADM的序列圖5、ADM的序列圖6、pre-pro-ANP的序列圖7、pro-ANP的序列圖8、ANP的序列圖9、NT-proANP的序列圖10、proANP的53-90位氨基酸的序列圖11、pre-pro-AVP的序列圖12、pro-AVP的序列圖13、AVP的序列圖14、CT-pre-proAVP或和肽素的序列圖15、后葉激素運(yùn)載蛋白II的序列圖16、pre-pro-ET_l的序列圖17、pro-ET_l的序列圖18、ET-I的序歹Ij圖19、CT-pro-ET_l的序列圖20、Big-ET-I的序列圖21、pre-pro-BNP的序列圖22、pro-BNP的序列圖23、NT-pro-BNP的序列圖24、BNP的序列圖25、在不肥胖正常血壓對(duì)象(黑色菱形)、具有軀干性肥胖癥的正常血壓對(duì)象(白色菱形)和高血壓對(duì)象(黑色三角形)中，口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)過程中的血漿MR-ProANP53,(A)和血清胰島素(B)不肥胖對(duì)肥胖的正常血壓對(duì)象ρ<0.05；1"肥胖的正常血壓對(duì)高血壓對(duì)象ρ<0.001；高血壓對(duì)不肥胖的正常血壓對(duì)象ρ<0.01。(C)在高胰島素血癥、正常血糖夾中血漿MR-proANP53_9(1水平的抑制。(D)在具有低和高胰島素敏感性的對(duì)象中的ΔMR-proANP53_9(1(0-120min)，分別被測(cè)定為在夾的穩(wěn)定狀態(tài)下低于25th和高于75th百分位數(shù)的葡萄糖灌注速率(GIR)值。數(shù)據(jù)用盒須圖顯示。盒從25th延伸到75th百分位數(shù)，在中位數(shù)處的線指示50th百分位數(shù)。須表示從最低延伸到最高值的范圍。圖洸、在η=10個(gè)對(duì)象中，oGTT后NT-proBNP和MR-proANP53_9(1相對(duì)濃度的比較。圖27、(代謝綜合征)一胰島素敏感性與120分鐘時(shí)相對(duì)MR-proANP變化的相關(guān)性[胰島素敏感性指數(shù)(ISI或SI)]對(duì)于健康人來說，t=0時(shí)ISI>4.5[禁食；-t=30、60、90和120分鐘時(shí)ISI^6；-對(duì)于具有胰島素抗性的人來說，t=30、60、90和120分鐘時(shí)，ISI<6。實(shí)施例研究設(shè)計(jì)與方法研究方案1(0GTT和鉗夾試驗(yàn))研究方案得到波茨坦大學(xué)和德國柏林Charite醫(yī)學(xué)院的倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。在研究之前，從所有參加者獲得了正式書面知情同意書。研究設(shè)計(jì)對(duì)象是正在進(jìn)行中的代謝綜合征和2型糖尿病的病源學(xué)的病例-對(duì)照關(guān)聯(lián)性研究(代謝綜合征柏林-波茨坦研究，MESY-BEP0)的一部分。在德國波茨坦和柏林，從普通人群召集志愿者?；€檢查包括人體測(cè)量值、血液取樣、75g口服葡萄糖耐受性測(cè)試(oGTT)和關(guān)于生活方式、嗜好和醫(yī)療史的個(gè)人面談。該群體的亞組(n=31)經(jīng)歷了高胰島素血、正常血糖鉗夾試驗(yàn)，其在oGTT后的另一天進(jìn)行。對(duì)象研究了108位非高血壓對(duì)象(55位非肥胖和53位軀干性肥胖癥對(duì)象)和M位患有原發(fā)性高血壓的患者。高血壓被定義為收縮壓>140mmHg，舒張壓>90mmHg，或使用抗高血壓治療。所有藥物治療的高血壓對(duì)象在研究前的最近6個(gè)月內(nèi)具有穩(wěn)定的藥物治療。肝臟酶升高到超過相應(yīng)正常上限的兩倍、或具有高血漿肌酸酐濃度(>1.3mg/dl)或具有嚴(yán)重病癥包括全身性炎癥、心力衰竭或晚期惡性腫瘤疾病的對(duì)象，被排除在研究之外。在oGTT和鉗夾試驗(yàn)前3天內(nèi)，所有對(duì)象被指令維持他們的正常體力活動(dòng)并消費(fèi)含有200g糖類的正常飲食。進(jìn)行抗糖尿病治療或新診斷的2型糖尿病的對(duì)象，被排除在檢查之外。葡萄糖代謝紊亂的定義是基于1997年美國糖尿病學(xué)會(huì)(AmericanDiabetesAssociation)的在過夜禁食和2小時(shí)75goGTT后獲得的葡萄糖值的判據(jù)(2000，“專家委員會(huì)關(guān)于糖尿病診斷和分類的報(bào)告，，(ReportoftheExpertCommitteeontheDiagnosisandClassificationofDiabetesMellitus),DiabetesCare23Suppl1:S4_19)。實(shí)驗(yàn)步驟所有測(cè)試在12小時(shí)過夜禁食后的早晨進(jìn)行。BP由經(jīng)過訓(xùn)練的研究護(hù)士使用OmronHEM705CP血壓計(jì)(Omron，Germany)在患者采取坐位時(shí)測(cè)量。以2分鐘的間隔獲得三個(gè)測(cè)量值，并使用平均值確定臨床收縮壓和舒張壓。對(duì)于oGTT來說，在相對(duì)于口服葡萄糖輸入的0、30、60、90、120和180分鐘時(shí)抽取靜脈血樣。正常血糖、高胰島素血鉗夾高胰島素血、正常血糖鉗夾使用每分鐘每m2身體表面IOOmU人類胰島素(Actrapid；NovoNordisk,Bagsvaerd,Denmark)禾口20%葡萄糖(Seragffiessner,Naila,Germany)的可變灌注進(jìn)行120分鐘(DeFronzoRA等，1979“葡萄糖鉗夾技術(shù)一種用于定量姨島素分泌禾口抗性的方法，，(Glucoseclamptechnique:amethodforquantifyinginsulinsecretionandresistance),AmJPhysiol237:E214_23)。在鉗夾的穩(wěn)態(tài)條件下，將毛細(xì)血管血糖調(diào)整到5.5mmol/l至少60分鐘。在假定的穩(wěn)態(tài)條件期間單一毛細(xì)血管葡萄糖濃度的偏差>10%，被定義為非穩(wěn)態(tài)。在整個(gè)鉗夾試驗(yàn)中，每5分鐘監(jiān)測(cè)毛細(xì)血管血糖濃度，并使用它通過調(diào)整葡萄糖的可變灌注來調(diào)節(jié)血漿葡萄糖。分析步驟將所有靜脈血樣立即離心并冷凍在-70°C下直到進(jìn)行分析。毛細(xì)血管血糖濃度使用葡萄糖氧化酶方法在Dr.MUllerG-L葡萄糖分析儀(Dr.MiillerGlucoseanalyzer,Freital,Germany)上測(cè)定。血清甘油三酯、總膽固醇和HDL-膽固醇通過標(biāo)準(zhǔn)的酶測(cè)定法測(cè)定，并從這些數(shù)據(jù)計(jì)算LDL-膽固醇(進(jìn)行臨床化學(xué)分析的認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室)。HbAlc使用Hi-AutoAlCHA-8140系統(tǒng)(MenariniDiagnostics，Germany)測(cè)定。血清胰島素使用商業(yè)化的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(胰島素ELISA，MercodiaAB,Uppsala,Sweden)測(cè)量。穩(wěn)態(tài)模Mi5Fi古月夷^'!(HomeostasisModelAssessmentInsulinResistance)(HOMA-IR)^計(jì)算為禁食胰島素(IU/L)x禁食葡萄糖(mmol/L)/22.5(MatthewsDR等，1985“穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估從人類禁食血漿葡萄糖和胰島素濃度評(píng)估胰島素抗性和β-細(xì)胞功能”(Homeostasismodelassessmentinsulinresistanceandbeta-cellfunctionfromfastingplasmaglucoseandinsulinconcentrationsinman),Diabetologia28:412-9)。人類血漿MR-proANP53-90按照以前的描述測(cè)定(MorgenthalerNG等，2004“用于人類血漿中中段心房利尿鈉肽原的免疫發(fā)光測(cè)定法”(Immimoluminometricassayforthemidregionofpro-atrialnatriureticpeptideinhumanplasma),ClinChem50234-6)。NT-proBNP通過電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(ELICIA,RocheDiagnostics,Basel,Switzerland)測(cè)定。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析我們將研究群體分成三組具有原發(fā)性高血壓的患者(η=Μ)、具有軀干性肥胖癥的非高血壓對(duì)象(n=53)，以及沒有軀干性肥胖癥的非高血壓對(duì)象(n=55)。軀干性肥胖癥按照ATPIII定義的代謝綜合征判據(jù)來診斷(國家膽固醇教育項(xiàng)目(NCEP)成年人高血液膽固醇檢測(cè)、評(píng)估和治療專家委員會(huì)(NationalCholesterolEducationProgram(NCEP)ExpertPanelonDetection,Evaluation,andTreatmentofHighBloodCholesterolinAdults)(成人治療委員會(huì)III)，國家膽固醇教育項(xiàng)目(NCEP)專家委員會(huì)關(guān)于成年人高血液膽固醇的檢測(cè)、評(píng)估和治療的第三次報(bào)告(成人治療委員會(huì)III)最終報(bào)pf(ThirdreportofthenationalCholesterolEducationProgram(NCEP)expertpanelondetection,evaluation,andtreatmentofhighbloodcholesterolinadults(AdultTreatmentPanelIII)Finalreport),Circulation2002;106:3143_3421)。一般特征提供為平均值士SD。所有其他數(shù)據(jù)顯示為平均值士SEM。所有數(shù)據(jù)在分析之前進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。在oGTT中計(jì)算從O到ISOmin的ΔMR-proANP53_9(1。組比較通過ANOVA進(jìn)行，然后進(jìn)行Sidak檢驗(yàn)作為事后多組比較。使用重復(fù)測(cè)量值A(chǔ)NOVA分析來比較三組之間在oGTT期間的MR-proANP53_9(1時(shí)間過程。關(guān)聯(lián)性分析通過Pearson‘s相關(guān)性分析來進(jìn)行。在鉗夾試驗(yàn)中，胰島素敏感性被確定為鉗夾試驗(yàn)的穩(wěn)態(tài)(至少30分鐘)中葡萄糖灌注速率(G^;mg每kg體重·rniiT1)除以穩(wěn)態(tài)中的循環(huán)胰島素濃度(pmol/Ι)。使用用于成對(duì)樣品的非參數(shù)性Wilcoxon's符號(hào)秩次檢驗(yàn)比較來自基線和穩(wěn)態(tài)中的數(shù)據(jù)。在所有分析中，P值<0.05被認(rèn)為是顯著的。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用用于Windows的SPSS第14版(SPSSInc.,Chicago,Illinois)進(jìn)行。結(jié)果研究群體的特征概述在表1中。肥胖的正常血壓對(duì)象與非肥胖正常血壓對(duì)象相比胰島素抗性更高他們具有更高的禁食胰島素和血糖濃度、更低的HDL-膽固醇濃度和甘油三酯水平以及更高的SPB和DBP。除了較高的年齡、HbAlc水平和SBP之外，具有高血壓的肥胖對(duì)象與肥胖的正常血壓對(duì)象在BMI、腰圍和胰島素抗性方面相當(dāng)。在肥胖的正常血壓對(duì)象中，與非肥胖的正常血壓對(duì)象和具有高血壓的肥胖對(duì)象相比，觀察到最低的MR-proANP53_9Q禁食濃度(53.9士沘.Opmo1/1對(duì)64.1士25.6pmol/l和77.5士30.8pmol/l)。在對(duì)年齡和BMI進(jìn)行調(diào)整之后，差異仍然顯著。在正常血壓對(duì)象中，禁食MR-proANP53_9。水平與年齡(r=0.429，ρ<0.0001)、HDL-膽固醇(r=0.270，ρ=0.006)明顯正相關(guān)，并與BMI(r=-0.313，ρ=0.001)、DBP(r=_0·251，ρ=0.009)、禁食胰島素(r=-0·276，p=0.004)和H0MA4R指數(shù)(r=-0.268，ρ=0.005)明顯負(fù)相關(guān)。相反，在具有高血壓的肥胖對(duì)象中，與MR-ProANP53,的正相關(guān)性僅限于年齡(r=0.546,ρ<0.0001)。在所有研究對(duì)象中，MR-ProANP53,水平在口服葡萄糖激惹后30分鐘時(shí)快速降低，并在整個(gè)測(cè)試過程中保持被抑制(P<0.0001；基礎(chǔ)水平對(duì)OGTT后30、60、90、120和ISOmin時(shí)的水平)。在肥胖的正常血壓對(duì)象中，與非肥胖正常血壓對(duì)象和肥胖的高血壓對(duì)象相比，激惹后從90至180分鐘的MR-proANP53_90濃度明顯更低(圖25A)。但是，在180分鐘時(shí)MR-proANPra_9(1的相對(duì)抑制相似(在非肥胖正常血壓對(duì)象中是20.0士13.4%，在肥胖的正常血壓對(duì)象中是21.4士19.5%，在高血壓對(duì)象中是21.2士13.4%，NS)。在肥胖的正常血壓對(duì)象中禁食和葡萄糖激惹后的胰島素水平明顯較低(圖25B)，并與正常血壓對(duì)象中禁食和激惹后從60到180分鐘的MR-proANP53_9Q水平負(fù)相關(guān)(r=-0.198—0.358；ρ<0.0001-0.05)，而這些關(guān)聯(lián)性在高血壓對(duì)象中弱得多。在正常血壓和高血壓對(duì)象中，在oGTT期間在禁食和激惹后血糖水平與MR-ProANP53,水平之間沒有相關(guān)性(數(shù)據(jù)未顯示)。盡管BNP在健康對(duì)象中似乎發(fā)揮次要生理作用，但它通常以與ANP相似的方式被調(diào)控。因此，我們測(cè)試了NT-proBNP水平是否也對(duì)口服葡萄糖激惹做出響應(yīng)而降低。在10個(gè)對(duì)象中評(píng)估了NT-proBNP水平，并與該亞組中的MR-proANP53_9(1進(jìn)行比較。事實(shí)上，NT-proBNP的相對(duì)濃度在葡萄糖激惹后也降低，但是與MR-proANP53_9(1相比響應(yīng)更短暫并且更小(圖26)。31位肥胖個(gè)體(17位正常血壓對(duì)象和14位高血壓對(duì)象)經(jīng)歷了正常血糖-高胰島素血鉗夾試驗(yàn)。正常血壓對(duì)象與高血壓對(duì)象在年齡、BMI、腰圍和胰島素靈敏性方面匹配(平均值士SE；分別為30.6士3.5kg/m2對(duì)32.0士3.4kg/m2，ρ=0.341；101.0士7.3cm對(duì)103.6+8.8cm,ρ=0.526；6.1±1.6mg/kgxmin-1M5.5+2.0mg/kgxmirT1，ρ=0.388)。在正常血壓與高血壓對(duì)象之間禁食血糖、胰島素和MR-proANP53_9(1水平?jīng)]有差異(平均值士SE；分別為5.2士0.5mmol/l對(duì)5.4士0.6mmol/l,ρ=0.147；66.0士40.2pmol/1對(duì)76.2士39.Opmol/1，ρ=0.470;59.5士18.3pmol/l對(duì)61.0士31.5pmol/l，ρ=0.874)。在正常血糖鉗夾試驗(yàn)中，在夾住120分鐘時(shí)，循環(huán)胰島素水平在正常血壓對(duì)象中增加到1223(范圍為708-2106)pmol/l，在高血壓對(duì)象中增加到1247(范圍為430-1476)pmol/1(ρ=0.489)。在兩個(gè)組中，在夾住120分鐘時(shí)，MR-proANP53_9(1水平與基礎(chǔ)值相比顯著降低，但是在兩個(gè)組之間沒有差異(ΔMR-proANP53_900-120min在正常血壓對(duì)象中為11.1(-1.3-25.l)pmol/l，在高血壓對(duì)象中為8.5(-；35.2-34.6)；ρ=0.297)(圖25C)。在具有低和高胰島素靈敏性的對(duì)象中，沒有觀察到MR-ProANP53,抑制(被測(cè)定為分別低于25th和高于75th百分位數(shù)的葡萄糖灌注速率值)的差別(圖25D)。在健康個(gè)體中(n=264)，平均MR-ProADM濃度為0.33nmol/L(標(biāo)準(zhǔn)偏差0.07nmol/L,范圍為0.1-0.64nmol/L,99th百分位數(shù)為0.52nmol/L,97.5th百分位數(shù)為0.49nmol/L,2.5th百分位數(shù)為0.17nmol/L,Ist百分位數(shù)為0.14nmol/L0測(cè)定方法的檢測(cè)下限為0.08nmol/L(Morgenthaler等，2005.ClinChem51(10):1823-1829)。在健康個(gè)體中(n=325)，MR-ProANP濃度的中位數(shù)為45pmol/L，范圍為9.6-313pmol/L，99th百分位數(shù)為197.5pmol/L，97.5th百分位數(shù)為163.9pmol/L，2.5th百分位數(shù)為ISJpmoVLast百分位數(shù)為13.6pmol/L。測(cè)定方法的檢測(cè)下限為6.Opmol/L(Morgenthaler等，2004.ClinChem50(1):234-236)。在健康個(gè)體中(n=359)，CT-ProAVP濃度的中位數(shù)為4.2pmol/L,范圍為1-13.8pmol/L，99th百分位數(shù)為13.5pmol/L，97.5th百分位數(shù)為11.25pmol/L，2.5th百分位數(shù)為1.7pmol/L。測(cè)定方法的檢測(cè)下限為1.7pmol/L(Morgenthaler等，2006.ClinChem52(1):112-119)。359位個(gè)體中的9位具有低于檢測(cè)下限的CT-proAVP值，并被定義為1.Opmol/L。在健康個(gè)體中(n=326)，平均CT-ProETl濃度為44.3pmol/L(標(biāo)準(zhǔn)偏差10.6pmol/L)，范圍為10.5-77.4pmol/L，99th百分位數(shù)為72.8pmol/L，97.5th百分位數(shù)為66.6pmol/L,2.5th百分位數(shù)為24.8pmol/L,Ist百分位數(shù)為17.4pmol/L。測(cè)定方法的檢測(cè)下限為0.4pmol/L(Papassotiriou等，2006.ClinChem52(6):1144-1151)。在健康對(duì)象中(n=2264)，平均NT-proBNP濃度為5.94pmol/l(標(biāo)準(zhǔn)偏差7.36pmol/l)，中位數(shù)是3.25pmol/l，97.5th百分位數(shù)為19.94pmol/l，95th百分位數(shù)為17.58pmol/l。測(cè)定方法的檢測(cè)下限為0.59pmol/l。表1、研究對(duì)象的臨床和生物化學(xué)特征權(quán)利要求1.一種用于對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性的病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤的體外方法，所述方法包含a)提供來自所述對(duì)象的樣品，b)測(cè)定所述樣品中一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平，c)使用所述一種或多種心血管肽的相對(duì)水平，用于所述對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性的病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤。2.權(quán)利要求1的體外方法，其中測(cè)定一種或多種心血管標(biāo)志物的餐后相對(duì)水平。3.權(quán)利要求1或2的體外方法，其中心血管標(biāo)志物選自ANP、BNP,ET-I、ADM、AVP及其片段和激素原和所述激素原的片段。4.權(quán)利要求1到3的體外方法，其中一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平使用靈敏度為lnmol/L或以下、優(yōu)選100pmol/L或以下、更優(yōu)選10pmol/L或以下、更優(yōu)選lpmol/L或以下、最優(yōu)選0.5pmol/L或以下的測(cè)定方法測(cè)定。5.權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)的體外方法，其中相對(duì)水平的測(cè)定包含下列步驟a.測(cè)定所述對(duì)象中一種或多種心血管標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平，b.測(cè)定所述一種或多種心血管標(biāo)志物的餐后水平，c.從步驟a和b中獲得的值計(jì)算一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平。6.權(quán)利要求1到5的體外方法，其中所述對(duì)象中所述心血管標(biāo)志物的水平使用免疫測(cè)定法測(cè)定。7.權(quán)利要求1到6任一項(xiàng)的體外方法，其中一種或多種心血管標(biāo)志物選自proANP或其片段、pro-ΕΤ-Ι或其片段、pro-BNP或其片段、pro-AVP或其片段、pro-ADM或其片段。8.任何測(cè)定方法在測(cè)定對(duì)象的一種或多種心血管標(biāo)志物水平相對(duì)于所述對(duì)象的所述標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平的變化中的應(yīng)用，其中測(cè)定方法能夠檢測(cè)所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的降低并且能夠檢測(cè)所述一種或多種心血管標(biāo)志物水平的升高。9.權(quán)利要求8的任何測(cè)定方法的應(yīng)用，其中變化是升高或降低，并且其中測(cè)定方法具有l(wèi)nmol/L或以下的靈敏度。10.權(quán)利要求8或9的測(cè)定方法的應(yīng)用，用于測(cè)定對(duì)象的一種或多種心血管標(biāo)志物水平相對(duì)于所述對(duì)象的所述標(biāo)志物的基礎(chǔ)水平的餐后變化。11.權(quán)利要求7到10的測(cè)定方法的應(yīng)用，其中測(cè)定方法是免疫測(cè)定法。12.權(quán)利要求7到11的測(cè)定方法的應(yīng)用，用于對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性的病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤。13.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的體外方法，其中附加地測(cè)定一種或多種其他標(biāo)志物或臨床參數(shù)的水平，所述一種或多種其他標(biāo)志物或臨床參數(shù)對(duì)于所述對(duì)象對(duì)代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)的病癥的傾向性的分類具有預(yù)測(cè)價(jià)值，其中臨床參數(shù)可以是能夠影響所述傾向性的任何參數(shù)，例如年齡、性別、疾病的既往史、特別是高血壓，肥胖癥特別是軀干性肥胖癥的既往史、體重指數(shù)、遺傳易感性/家族史、種族背景、患者的影響所述傾向性的嗜好例如吸煙、飲酒、飲食、鍛煉或用藥。14.心血管肽在患者的代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)的病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及用于對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤的體外方法，所述方法包含測(cè)定對(duì)象樣品中一種或多種心血管標(biāo)志物的相對(duì)水平，并將測(cè)定到的所述一種或多種心血管肽的相對(duì)水平用于所述對(duì)象中代謝系統(tǒng)和/或心血管系統(tǒng)和/或胰島素抗性病癥的診斷、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)/治療追蹤。文檔編號(hào)G01N33/50GK102203608SQ200980143858公開日2011年9月28日申請(qǐng)日期2009年10月29日優(yōu)先權(quán)日2008年10月31日發(fā)明者安德烈亞斯·貝格曼申請(qǐng)人:B.R.A.H.M.S有限公司