專利名稱：一種青蒿中青蒿素含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種青蒿中青蒿素含量的測定方法，特別涉及一種采用紫外分光光度分析青蒿中青蒿素含量的測定方法。
背景技術(shù)：
青蒿素以及以青蒿素為原料合成的蒿甲醚、雙氫青蒿素和青蒿琥酯等青蒿素類抗瘧藥已被世界衛(wèi)生組織推薦為目前可能取代奎寧治療瘧疾的最安全有效的藥物。由于不同地區(qū)出產(chǎn)的青蒿藥材所含青蒿素的量差異很大(2‰～12‰)，具顯著的生態(tài)地域性，因此必須對青蒿藥材進(jìn)行質(zhì)量控制，特別是在藥材收購的時候，供、需雙方均需要有方法對青蒿的質(zhì)量進(jìn)行快速評價，即急需快速測定青蒿素含量的方法。
目前國內(nèi)外現(xiàn)有的青蒿素含量測定方法有多種。如高效液相色譜法、薄層色譜法、超臨界流體色譜法、光度酶聯(lián)免疫分析法，這些方法主要用于含量較高、純度較高的青蒿素的測定，但是要求儀器設(shè)備高、操作復(fù)雜、耗時長，不適合現(xiàn)場快速質(zhì)量評價；另外還有紫外分光光度法，主要是針對純度很高的青蒿素檢測，雖然操作簡便，但是耗時長，也不適合直接用于現(xiàn)場快速質(zhì)量評價。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡便、快速檢測青蒿中青蒿含量的方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種青蒿中青蒿素含量的測定方法，其特征在于不完全提取待測青蒿中的青蒿素，采用紫外分光光度分析法測取青蒿素含量數(shù)據(jù)M(mg/g)，代入通過與對青蒿素完全提取后采用液相色譜法測取的青蒿素含量數(shù)據(jù)的對應(yīng)關(guān)系所建立的線性模型，經(jīng)計(jì)算得到所測青蒿中青蒿素的實(shí)際含量X(mg/g)。
上述青蒿素不完全提取采用超聲萃取方法提??；上述青蒿素完全提取采用常規(guī)索氏提取法提取。
上述青蒿素含量數(shù)據(jù)的對應(yīng)關(guān)系所建立的線性模型為X＝(M+0.3995)/0.748。
上述青蒿素不完全提取步驟如下稱量0.5±0.01g，60～80目待測青蒿粉樣品，在其中加入15ml石油醚，在溫度為30～60℃條件下，超聲12～17min，記錄石油醚體積V；精密量取經(jīng)過超聲處理過的石油醚溶液0.3ml于10ml刻度試管中，放入沸水中直至石油醚完全揮發(fā)；再對留存下來的殘?jiān)M(jìn)行衍生加入3ml的95％乙醇進(jìn)行溶解，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，在50±1℃溫度下水浴30min，得待測樣品溶液。
上述紫外分光光度分析法測取青蒿素含量數(shù)據(jù)Mmg/g是以經(jīng)過衍生處理的空白溶液為參比，在紫外分光光度計(jì)檢測波長292nm處，測定經(jīng)過衍生處理的青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和待測樣品溶液吸光度，測得吸光度分別為A標(biāo)準(zhǔn)和A樣品。
以標(biāo)準(zhǔn)對照法計(jì)算青蒿素含量，計(jì)算公式為M＝(A樣品×V×2)/(A標(biāo)準(zhǔn)×3)其中，A樣品為測得的待測樣品的吸光度值；V為超聲后樣品石油醚的體積，以ml計(jì)；A標(biāo)準(zhǔn)為0.1mg/ml青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值。
上述空白溶液的衍生處理將3ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，再在50±1℃溫度下水浴30min；所述青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的衍生將含有青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品0.1mg/mL的1ml溶液中加入2ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，再在50±1℃溫度下水浴30min，然后冷卻至室溫，用0.22μm濾膜過濾而得。
本發(fā)明以超聲快速不完全提取代替?zhèn)鹘y(tǒng)長時間回流(通常需15～30小時)提取青蒿的方式，簡化了操作程序，縮短了提取時間，并用紫外-可見分光光度分析法直接測定青蒿粗提物中青蒿素，在1.5小時內(nèi)就可完成青蒿素的含量測定，所需儀器簡單、操作方便，節(jié)約了試劑、減小了污染由于建立青蒿素的紫外快速檢測數(shù)據(jù)與青蒿素的索氏(完全)提取-高效液相色譜法(HPLC)檢測數(shù)據(jù)的相關(guān)線性模型，保證了計(jì)算處理得到的青蒿素含量數(shù)據(jù)的可靠性，因此，本發(fā)明可以真正實(shí)現(xiàn)在青蒿藥材收購現(xiàn)場進(jìn)行青蒿素含量的快速檢測。


圖1本發(fā)明不完全提取-紫外分光光度分析法與索氏(完全)提取-高效液相色譜法檢測所測青蒿素含量數(shù)據(jù)的線性回歸圖。
圖2不完全提取的提取時間與青蒿素含量的變化曲線。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施列1選取22種不同青蒿素含量的青蒿藥材分為一式兩份，一份采用本發(fā)明不完全提取、紫外分光光度分析法測取青蒿素含量數(shù)據(jù)M，另一份采用索氏液相檢測法測取青蒿素含量數(shù)據(jù)Ms，然后將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)線性回歸分析，得到其相關(guān)線性模型。
1、不完全提取、紫外分光光度分析法的實(shí)施1.1儀器與試劑天平(0.01g)，KQ2200B型超聲波清洗器，具塞150ml錐型瓶，具塞10ml刻度試管，25ml量筒，電爐，恒溫水浴箱，752紫外分光光度計(jì)，0.22μm水性過濾器，石油醚(30～60℃)，95％乙醇，0.2％氫氧化鈉(NaOH)溶液。
1.2試驗(yàn)步驟1.2.1溶液的配制a、青蒿素標(biāo)準(zhǔn)溶液精密稱量青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品10mg于10ml容量瓶中，加入95％乙醇溶解稀釋，定容到10ml，得到1mg/ml的對照品貯備液，4℃冰箱保存；b、0.2％NaOH溶液精密稱量NaOH1g于500ml試劑瓶中，加入500ml蒸餾水溶解，混勻，室溫保存；1.2.2空白、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制a、空白溶液的配制取3ml95％乙醇溶液于10ml刻度試管中用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，即得空白溶液；b、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制吸取貯備液1ml于10ml刻度試管中，混勻，即得0.1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1.2.3青蒿樣品溶液的制備.
a、取青蒿放入粉碎機(jī)粉碎，分別過80和60目篩，得到60～80目青蒿粉；b、稱量0.5±0.01g青蒿樣品(60～80目)于150ml具塞錐加入15ml石油醚(30～60℃)，超聲15min；c、超聲后將石油醚溶液倒入量筒，記錄石油醚體積V；d、精密量取經(jīng)過超聲處理過的石油醚溶液0.3ml于10ml刻度試管中，放入不再加熱的沸水中揮干。
1.2.4青蒿素衍生a、在1.2.3、d揮干的試管中，加入3ml的95％乙醇，溶解殘?jiān)?.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，50±1℃水浴30min；b、空白溶液衍生取空白溶液，50±1℃水浴30min；c、標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生取0.1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml于10ml試管中，加入2ml95％乙醇溶液，0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，50±1℃水浴30min。
衍生后冷水冷卻到室溫，0.22μm濾膜過濾，濾液用于紫外分光光度計(jì)測定吸光度。
1.2.5青蒿素檢測以空白溶液為參比，在檢測波長292nm處，測定青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和青蒿樣品溶液吸光度，測得吸光度分別為A標(biāo)準(zhǔn)和A樣品。
1.3青蒿素含量計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)對照法計(jì)算青蒿素含量，計(jì)算公式為M(mg/g)＝(A樣品×V×2)/(A標(biāo)準(zhǔn)×3)上述公式中A樣品為青蒿樣品溶液測得值；V為超聲后青蒿樣品石油醚的體積，以ml計(jì)，A標(biāo)準(zhǔn)為0.1mg/ml青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光度。
按上述檢測方法所測得的22種不同青蒿藥材的青蒿素含量M數(shù)據(jù)見表1。
表1 樣品的測定結(jié)果

2、索氏液相檢測法的實(shí)施2.1儀器與試劑索氏提取器，美國Agilent 1100高效液相色譜儀，無水乙酸鈉，冰醋酸，乙腈，雙蒸水。
2.2試驗(yàn)步驟2.2.1青蒿索氏提取取1g青蒿樣品，用濾紙包好，至于索氏提取器中，加石油醚(30～60℃)70ml(水浴過程中可酌情加入一定量的石油醚)，65±1℃水浴索式提取30小時，提取完畢后，測量樣品溶液的體積V，取0.5ml樣品溶液，在不加熱的沸水中揮干。
2.2.2青蒿素的衍生在揮干的試管中，加入3ml的95％乙醇，溶解殘?jiān)?.2％NaOH定容到10ml混勻，50±1℃水浴30min。
2.2.3青蒿素的檢測衍生后冷水冷卻到室溫，取定量衍生溶液與0.08mol/l醋酸溶液等體積混合，進(jìn)樣50μl，HPLC檢測。
色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB C8柱(5μm，4.6×150mm)流動相的乙腈∶醋酸緩沖液(調(diào)pH值為5.8)＝23∶77溫度30℃流速1ml/min波長260nm2.3檢測結(jié)果的處理青蒿素含量計(jì)算公式Ms(mg/g)＝(A樣品×V×2)/(A標(biāo)準(zhǔn)×5)其中，A樣品為青蒿樣品峰面積值，V為青蒿樣品的體積，A標(biāo)準(zhǔn)為0.1mg/ml青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品峰面積值。
按上述檢測方法所測得的22種不同青蒿藥材的青蒿素含量Ms數(shù)據(jù)見上表1。
3、不完全提取、紫外分光光度分析法與索氏液相檢測法所測青蒿素含量數(shù)據(jù)的線性模型的建立。
將表1中的兩組數(shù)據(jù)進(jìn)線性回歸分析，得到其相關(guān)線性模型，即青蒿中青蒿素的真實(shí)含量計(jì)算公式為X＝(M+0.3995)/0.748。
公式中X為青蒿中青蒿素的真實(shí)含量，單位為mg/g；M為不完全提取的青蒿素的含量，單位為mg/g。
實(shí)施例2本實(shí)施例中，除對同一種青蒿藥材進(jìn)行不完全提取的時間分別為5、12、15、20、25、30min外，其它的與實(shí)施例1中不完全提取、紫外分光光度分析法的檢測方法相同，所測得的同一種青蒿藥材在不同提取時間條件的青蒿素含量數(shù)據(jù)見表2，不完全提取的提取時間與青蒿素含量的變化曲線見圖2。從圖2中可知，在12～17min的提取時間范圍內(nèi)，所測得的青蒿素含量數(shù)據(jù)基本上是穩(wěn)定的。
表2

權(quán)利要求
1.一種青蒿中青蒿素含量的測定方法，其特征在于不完全提取待測青蒿中的青蒿素，采用紫外分光光度分析法測取青蒿素含量數(shù)據(jù)Mmg/g，代入通過與對青蒿素完全提取后采用液相色譜法測取的青蒿素含量數(shù)據(jù)的對應(yīng)關(guān)系所建立的線性模型，經(jīng)計(jì)算得到所測青蒿中青蒿素的實(shí)際含量Xmg/g。
2.如權(quán)利要求1所述的青蒿中青蒿素含量的測定方法，其特征在于所述青蒿素不完全提取采用超聲萃取方法提?。凰銮噍锼赝耆崛〔捎盟魇咸崛》ㄌ崛?。
3.如權(quán)利要求2所述的青蒿中青蒿素含量的測定方法，其特征在于所述青蒿素含量數(shù)據(jù)的對應(yīng)關(guān)系所建立的線性模型為X＝(M+0.3995)/0.748。
4.如權(quán)利要求1或2所述的青蒿中青蒿素含量的測定方法，其特征在于所述青蒿素不完全提取步驟如下稱量0.5±0.01g，60～80目待測青蒿粉樣品，在其中加入15ml石油醚，在溫度為30～60℃條件下，超聲15min，記錄石油醚體積V；精密量取經(jīng)過超聲處理過的石油醚溶液0.3ml于10ml刻度試管中，放入沸水中直至石油醚完全揮發(fā)；再對留存下來的殘?jiān)M(jìn)行衍生加入3ml的95％乙醇進(jìn)行溶解，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，在50±1℃溫度下水浴30min，得待測樣品溶液。
5.如權(quán)利要求4所述的青蒿中青蒿素含量的測定方法，其特征在于所述紫外分光光度分析法測取青蒿素含量數(shù)據(jù)Mmg/g是以經(jīng)過衍生處理的空白溶液為參比，在紫外分光光度計(jì)檢測波長292nm處，測定經(jīng)過衍生處理的青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和待測樣品溶液吸光度，測得吸光度分別為A標(biāo)準(zhǔn)和A樣品；以標(biāo)準(zhǔn)對照法計(jì)算青蒿素含量，計(jì)算公式為M＝(A樣品×V×2)/(A標(biāo)準(zhǔn)×3)其中，A樣品為測得的待測樣品的吸光度值；V為超聲后樣品石油醚的體積，以ml計(jì)；A標(biāo)準(zhǔn)為0.1mg/ml青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值。
6.如權(quán)利要求5所述的青蒿中青蒿素含量的測定方法，其特征在于所述空白溶液的衍生處理將3ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，再在50±1℃溫度下水浴30min；所述青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的衍生將含有青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品0.1mg/ml的1ml溶液中加入2ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混勻，再在50±1℃溫度下水浴30min，然后冷卻至室溫，用0.22μm濾膜過濾而得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種青蒿中青蒿素含量的測定方法。它是一種不完全提取待測青蒿中的青蒿素，采用紫外分光光度分析法測取青蒿素含量數(shù)據(jù)M(mg/g)，代入通過與對青蒿素完全提取后采用液相色譜法測取的青蒿素含量數(shù)據(jù)的對應(yīng)關(guān)系所建立的線性模型，經(jīng)計(jì)算得到所測青蒿中青蒿素的實(shí)際含量X(mg/g)。本發(fā)明簡化了操作程序，縮短了提取時間，在1.5小時內(nèi)就可完成青蒿素的含量測定，所需儀器簡單、操作方便，節(jié)約了試劑、減小了污染；由于建立了相關(guān)的線性模型，保證了計(jì)算處理得到的青蒿素實(shí)際含量數(shù)據(jù)的可靠性，因此，本發(fā)明可以真正實(shí)現(xiàn)在青蒿藥材收購現(xiàn)場進(jìn)行青蒿素的含量快速檢測。
文檔編號G01N30/86GK1904591SQ20061009501
公開日2007年1月31日 申請日期2006年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月9日
發(fā)明者尚京川, 楊俊卿, 母昭德, 蔣青松, 周歧新 申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)