專利名稱：三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血漿鈣的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血漿鈣的方法，屬于血漿鈣測定領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鈣主要存在于人體的骨骼和牙齒中，細(xì)胞外液中含量很少，但對維持正常的神經(jīng)肌肉應(yīng)激性、腺體分泌以及一些酶系統(tǒng)的活性特別在血凝過程中起重要作用。血鈣濃度通過骨骼、腎臟和腸道之間進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時，甲狀旁腺素(升高血鈣)、降鈣素(降低血鈣)和1，25-二羥維生素D3參與調(diào)節(jié)。當(dāng)骨骼和細(xì)胞外液鈣的動態(tài)平衡被破壞時，就呈現(xiàn)出病態(tài)。準(zhǔn)確測定血中鈣含量，可為人體體癥的表征提供科學(xué)依據(jù)。迄今國內(nèi)外測定血鈣的方法大致有滴定法、比色法、原子吸收光譜法、離子選擇電極法、質(zhì)譜分析法、熒光分析法等。鄰甲酚酞絡(luò)合比色法是臨床應(yīng)用較多的一種方法，但是所用試劑穩(wěn)定性差(＜8小時)，不能排除鎂的干擾且對二氧化碳敏感。原子吸收光譜法最準(zhǔn)確、敏感，但由于儀器價格及其維護(hù)費用非常昂貴，難以在臨床實驗室推廣普及。
三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光是近年來發(fā)展比較迅速的一種分析方法，廣泛用于草酸、氨基酸和脂肪胺等的測定、免疫分析及核酸分析，其中三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光免疫分析及核酸分析已在臨床中應(yīng)用。1977年Chang、Saji和Bard在J.Am.Chem.Soc.第99卷第5399頁首次報道了三聯(lián)吡啶釕和草酸在有機溶液中發(fā)生電化學(xué)反應(yīng)可以產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光；1981年Rubinstein和Bard在J.Am.Chem.Soc.第103卷第512頁報道了三聯(lián)吡啶釕和草酸在水溶液中發(fā)生電化學(xué)反應(yīng)可以產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光，1983年Rubinstein和Bard在Anal.Chem.第55卷第1580頁報道了三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光可以用于直接測定合成尿樣中的草酸，1990年Uchikura等和Egashira等分別在Bunseki Kagaku第39卷第323頁和Anal.Sci.第6卷第903頁報道了三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光可以用于直接測定尿樣中的草酸，1992年Egashira、Kumasako、Kurauchi和Ohga在Anal.Sci.第8卷第713頁報道了三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光可以用于直接測定蔬菜中的草酸。這些研究成果表明三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定草酸具有良好的選擇性和靈敏度。
上面提到的滴定法測定血鈣是通過在血中加入草酸使血鈣與草酸生成沉淀，多次洗滌除去沉淀中剩余草酸和其它雜質(zhì)，再加硫酸和草酸鈣作用生成硫酸鈣沉淀并釋出草酸，用已知濃度高錳酸鉀滴定釋出草酸量，由此計算出鈣含量?？梢姴僮鞅容^復(fù)雜費時，需要相對多的血樣。

發(fā)明內(nèi)容
由于三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定草酸具有良好的選擇性，并且人體中的血漿鈣的濃度一般比較高，正常值在2.25～2.65毫摩爾/升，易于用草酸鹽沉淀，因此三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光可以通過對生成草酸鈣沉淀后剩余草酸量直接進(jìn)行分析而用于血漿鈣的測定。
本發(fā)明的目的是提供一種三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血漿鈣的方法。
本發(fā)明中電化學(xué)發(fā)光試劑三聯(lián)吡啶釕與草酸在中性和弱酸性溶液中發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)時發(fā)光效率高，而血液中氨基酸、抗壞血酸等可以與三聯(lián)吡啶釕發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的干擾物在中性和弱酸性溶液中發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)時發(fā)光效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于三聯(lián)吡啶釕與草酸反應(yīng)的效率；同時血液中固有的草酸的濃度很低；加上血液中的大分子通過離心被除去，因此本方法具有很好的選擇性，可以滿足測定血漿鈣以表征人體生理參數(shù)的需要。電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)發(fā)生在電極表面附近，原則上僅需要不到1微升的發(fā)光溶液，因此可以對很少的血樣進(jìn)行測定。由于直接對生成草酸鈣沉淀后剩余草酸量進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光分析，省去了多次的洗滌和滴定過程，使得分析速度得到明顯提高。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為先在50～100微升血漿中加入過量草酸溶液(濃度大于5毫摩爾/升)，使草酸和血鈣充分反應(yīng)生成草酸鈣，然后通過離心機進(jìn)行離心使草酸鈣和血中的大分子沉至底部，取含有草酸的上層清液與pH在5至7.5之間的三聯(lián)吡啶釕溶液混合，然后進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光分析，即對生成草酸鈣沉淀后剩余草酸量進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光分析測定，可以得到血漿鈣的含量。
所述的三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血漿鈣的方法，用緩沖溶液時可以使用醋酸緩沖液。
所述的三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血鈣的方法，電化學(xué)發(fā)光測定時既可以在靜態(tài)體系中進(jìn)行，也可以在流動體系中進(jìn)行。
本發(fā)明的方法具有選擇性好、分析速度快、需要樣品少和分析儀器相對便宜等優(yōu)點。本發(fā)明的方法與最準(zhǔn)確、敏感的原子吸收光譜法測定的血漿鈣的含量相當(dāng)吻合，差異較小。本發(fā)明的方法可靠性和一致性均較高。
具體實施例方式
實施例1取100微升血漿與100微升濃度為5毫摩爾/升的草酸溶液混合均勻使草酸和血鈣充分反應(yīng)，然后通過離心機進(jìn)行離心使草酸鈣和血中的大分子沉至底部，取含有草酸的上層清液，加入用pH值5的醋酸緩沖溶液配制的三聯(lián)吡啶釕溶液并混合均勻，然后將混合液加入流動注射體系中進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測定。測得鈣含量為2.478(±0.053)毫摩爾/升。
實施例2進(jìn)行對比試驗，取50微升血漿用pH值5.5的醋酸緩沖液稀釋至100微升，與100微升濃度為5毫摩爾/升草酸溶液混合均勻使草酸和血鈣充分反應(yīng)，然后通過離心機進(jìn)行離心使草酸鈣和血中的大分子沉至底部，取含有草酸的上層清液，加入用pH值5.5的醋酸緩沖溶液配制的三聯(lián)吡啶釕溶液并混合均勻，然后將混合液放入容積為0.5毫升的發(fā)光池中進(jìn)行靜態(tài)電化學(xué)發(fā)光測定。測得鈣含量為2.496(±0.054)毫摩爾/升。同樣的血漿樣品用原子吸收光譜法測得鈣含量為2.531(±0.029)毫摩爾/升。兩種方法測定的血漿鈣的含量相當(dāng)吻合，差異較小。
實施例3進(jìn)行回收試驗，在100微升已知鈣量為2.48毫摩爾/升的血漿中，分別加入1.1、1.5和1.9毫摩爾/升的鈣，使血漿鈣的理論值分別成為3.58、3.98和4.39毫摩爾/升，再分別與濃度為5毫摩爾/升草酸溶液混合均勻使草酸和鈣充分反應(yīng)，然后通過離心機進(jìn)行離心使草酸鈣和血中的大分子沉至底部，取含有草酸的上層清液，加入用pH值7.5的醋酸緩沖溶液配制的三聯(lián)吡啶釕溶液并混合均勻，然后將混合液分別放入容積為0.5毫升的發(fā)光池中進(jìn)行靜態(tài)電化學(xué)發(fā)光測定。測得回收率為97.4～102％。
實施例4進(jìn)行重復(fù)性試驗，取100微升血漿與100微升濃度為5毫摩爾/升草酸溶液混合均勻使草酸和血鈣充分反應(yīng)，然后通過離心機進(jìn)行離心使草酸鈣和血中的大分子沉至底部，取含有草酸的上層清液，加入用pH值5.5的醋酸緩沖溶液配制的三聯(lián)吡啶釕溶液并混合均勻，然后將混合液加入流動注射體系中進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測定。一天內(nèi)重復(fù)測定六次的平均值為2.478毫摩爾/升，變異系數(shù)為2.14％，在五天內(nèi)重復(fù)上述測定的平均值為2.459毫摩爾/升，變異系數(shù)為3.33％。事實證明，本發(fā)明的方法可靠性和一致性均較高。
權(quán)利要求
1.一種三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血漿鈣的方法，其特征在于，在血漿中加入過量的草酸(濃度大于5毫摩爾/升)，使草酸和血鈣充分反應(yīng)生成草酸鈣，然后通過離心機進(jìn)行離心使草酸鈣和血中的大分子沉至底部，取含有草酸的上層清液與pH在5至7.5之間的三聯(lián)吡啶釕溶液混合，然后進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光分析，即對生成草酸鈣沉淀后剩余草酸量進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光分析測定，以得到血漿鈣的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血漿鈣的方法，其特征在于，用緩沖溶液時可以使用醋酸緩沖液。
3.如權(quán)利要求1所述的三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血鈣的方法，其特征在于，電化學(xué)發(fā)光測定時既可以在靜態(tài)體系中進(jìn)行，也可以在流動體系中進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明涉及三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光測定血漿鈣的方法，屬于血漿鈣測定技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為先在50～100微升血漿中加入過量草酸溶液(濃度大于5毫摩爾/升)，使草酸和血鈣充分反應(yīng)，然后通過離心機進(jìn)行離心使草酸鈣和血中的大分子沉至底部，取含有草酸的上層清液與pH在5至7.5之間的三聯(lián)吡啶釕溶液混合，然后進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測定以得到血漿鈣的含量。該方法具有選擇性好、分析速度快、需要樣品少和分析儀器相對便宜等優(yōu)點。
文檔編號G01N31/02GK1773259SQ20051001723
公開日2006年5月17日 申請日期2005年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月28日
發(fā)明者徐國寶, 史立紅, 劉曉慶, 牛文新 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所