專利名稱：殼聚糖的改性及其對(duì)重金屬的螯合作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有螯合重金屬能力的印跡改性殼聚糖的制備方法，包括殼聚糖的改性，印跡改性殼聚糖，檢測(cè)螯合重金屬能力，確定印跡改性殼聚糖的毒性，用于螯合體內(nèi)重金屬，降低重金屬含量。
背景技術(shù)：
殼聚糖對(duì)金屬離子有著較強(qiáng)的吸附能力，由于粘度大，分子剛性差，在偏酸性的溶液中，分子中的氨基(-NH2)易質(zhì)子化(-NH3+)而溶解，使其應(yīng)用受到限制，且殼聚糖吸附重金屬缺乏針對(duì)性。改性殼聚糖是利用殼聚糖重復(fù)單元上的羥基和氨基，對(duì)其進(jìn)行交聯(lián)、接枝、酯化、?；⒚鸦然瘜W(xué)改性，制備出具有不同理化特性的殼聚糖衍生物，提高了吸附能力。根據(jù)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜上存在能夠?qū)Ｒ恍宰R(shí)別含有半乳糖或乳糖基化合物的去唾液酸糖蛋白受體，合成了乳糖化殼聚糖。乳糖化殼聚糖與肝細(xì)胞表面去唾液酸糖蛋白受體特異結(jié)合使脂質(zhì)體具有主動(dòng)肝靶向效果。目前，乳糖化殼聚糖已被作為載體，用于治療肝臟疾病。分子印跡技術(shù)可以形象的表述為制備對(duì)目標(biāo)具有特異識(shí)別性的物質(zhì)，就像是容納特定鑰匙的鎖的一種技術(shù)，所得的聚合物具有對(duì)模板分子在功能基團(tuán)、分子尺寸、空間結(jié)構(gòu)具有記憶功能的結(jié)合位點(diǎn)，可以根據(jù)預(yù)定的選擇性和高度識(shí)別性能進(jìn)行分子識(shí)別。分子印跡技術(shù)是二十世紀(jì)八十年代迅速發(fā)展起來的一種化學(xué)分析技術(shù)，屬于泛分子化學(xué)研究范疇。它在化學(xué)仿生傳感器、模擬抗體、模擬酶催化、膜分離技術(shù)、色譜中對(duì)映體和位置異構(gòu)體的分離、固相提取、臨床藥物分析等領(lǐng)域展現(xiàn)了良好的應(yīng)用前景。鉛離子印跡改性殼聚糖可以針對(duì)性的去除肝臟中的鉛離子。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是研制一種具有螯合重金屬能力的印跡改性殼聚糖，有主動(dòng)肝靶向效果，可有效去除肝臟中的重金屬。本發(fā)明的技術(shù)方案是制備印跡乳糖化殼聚糖，通過制備改性殼聚糖，優(yōu)化反應(yīng)條件，檢測(cè)改性殼聚糖的純度，印跡改性殼聚糖，體外條件下檢測(cè)改性殼聚糖去除鉛的能力，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)確定去除鉛的能力，確定印跡改性殼聚糖的毒性實(shí)驗(yàn)，得到具有螯合重金屬能力的改性殼聚糖。


附圖是本發(fā)明所述的印跡改性殼聚糖的制備流程圖。
具體實(shí)施例方式1.改性殼聚糖的制備將Ig殼聚糖，溶于4.8%乳酸溶液中，用水稀釋后，加入6g乳糖，室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入1.3g氰基硼氫化鈉，然后于室溫下反應(yīng)48小時(shí)，透析處理，冷凍干燥即得到純品改性殼聚糖。2.改性殼聚糖中乳糖含量的檢測(cè):
采用苯酚硫酸法測(cè)定乳糖化殼聚糖中乳糖的含量，分光光度計(jì)測(cè)量，采用標(biāo)準(zhǔn)乳糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后進(jìn)行樣品含量測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算乳糖含量。3.鉛離子印跡乳糖殼聚糖的制備
將乳糖殼聚糖與醋酸鉛加水?dāng)嚢璺磻?yīng)30分鐘，使之完全活化?；罨旰蠹尤胭|(zhì)量分?jǐn)?shù)為百分之一的聚乙二醇-10000，在50°C水浴下攪拌反應(yīng)3h，冷卻至室溫。反應(yīng)結(jié)束，向反應(yīng)體系中加入適量無水乙醇，加入適量氫氧化鈉溶液調(diào)劑溶液PH值到12，印跡聚合物成絮狀物沉淀出來，抽濾，將印跡聚合物用蒸餾水洗滌至中性。將產(chǎn)物50°C真空干燥，碾成粉末，備用。

將印跡后產(chǎn)物溶于乙酸溶液中，溶解完全后，加入交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷，在60°C水浴下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)結(jié)束，冷卻至室溫。向反應(yīng)體系中加入適量無水乙醇，加入適量氫氧化鈉溶液調(diào)劑溶液PH值到12，交聯(lián)印記聚合物成絮狀物沉淀出來，抽濾，將交聯(lián)印跡聚合物用蒸餾水洗滌至中性。將產(chǎn)物50°C真空干燥，碾成粉末，備用。鉛離子印跡聚合物的洗脫，將鉛離子印跡聚合物浸泡于EDTA溶液中，攪拌0.5h，后靜置洗脫3h。將洗脫后產(chǎn)物抽濾，真空50°C干燥，碾成粉末，備用。4.鉛離子印跡聚合物的體外條件下去除鉛的能力
配制不同鉛離子濃度的溶液，并用醋酸調(diào)劑溶液的PH為2，加入鉛離子印跡聚合物。將吸附結(jié)束后的溶液抽濾，移取IOml濾液定容，用電感耦合等離子質(zhì)譜法測(cè)定溶液中的鉛離子含量。5.印跡改性殼聚糖家兔體內(nèi)重金屬螯合能力的檢測(cè)
通過灌胃方式將印跡改性殼聚糖注入家兔體內(nèi)，飼喂4周，每周測(cè)定血鉛含量及糞便中鉛含量，飼喂結(jié)束后，用電感耦合等離子質(zhì)譜法測(cè)定其肝臟、腸粘膜、腎、小腸、腦、心臟、肺臟中鉛含量。6.確定改性殼聚糖的毒性
通過血鋅、鈣、銅含量測(cè)定，血紅蛋白(Hb)測(cè)定，小鼠學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試，確定改性殼聚糖的毒性。
權(quán)利要求
1.印跡改性殼聚糖的制備方法，其特征在于針對(duì)性的螯合肝臟中的鉛離子，制備的印記改性殼聚糖安全、無毒，對(duì)鉛的去除度較高，方法如下: 步驟一，制備改性殼聚糖，優(yōu)化反應(yīng)條件； 步驟二，檢測(cè)改性殼聚糖的純度； 步驟三，印跡改性殼聚糖； 步驟四，體外條件下檢測(cè)改性殼聚糖去除鉛的能力； 步驟五，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)確定去除鉛的能力； 步驟六，確定改性殼聚糖的毒性實(shí)驗(yàn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印跡改性殼聚糖的制備方法，其特征是反應(yīng)條件不同，改性殼聚糖中乳糖的含量不同；所述步驟一，改性殼聚糖的反應(yīng)條件要進(jìn)行優(yōu)化，其方法是將Ig殼聚糖，溶于4.8%乳酸溶液中，用水稀釋后，加入6g乳糖，室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入1.3g氰基硼氫化鈉，然后于室溫下反應(yīng)48小時(shí)，透析處理，冷凍干燥即得到純品改性殼聚糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印跡改性殼聚糖的制備方法，其特征是乳糖含量高則肝靶向效果高；所述步驟二，檢測(cè)改性殼聚糖中乳糖含量，其方法是采用苯酚硫酸法測(cè)定改性殼聚糖中乳糖的含量，分光光度計(jì)測(cè)量，采用標(biāo)準(zhǔn)乳糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后進(jìn)行樣品含量測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算乳糖含量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印跡改性殼聚糖的制備方法，其特征是印跡改性殼聚糖反應(yīng)條件需優(yōu)化，所述步驟三， 印跡改性殼聚糖，其方法是鉛離子和殼聚糖的接枝，交聯(lián)印跡改性殼聚糖，洗脫鉛離子印跡改性殼聚糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印跡改性殼聚糖的制備方法，其特征是重金屬去除飽和量需檢測(cè)；所述步驟四，體外條件下檢測(cè)改性殼聚糖去除鉛的能力，其方法是用配制不同鉛離子濃度的溶液，并用醋酸調(diào)劑溶液的PH為2，加入鉛離子印跡聚合物；將吸附結(jié)束后的溶液抽濾，移取IOml濾液定容，用電感耦合等離子質(zhì)譜法測(cè)定溶液中的鉛離子含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印跡改性殼聚糖的制備方法，其特征是生物體內(nèi)環(huán)境較為復(fù)雜，印跡改性殼聚糖效果需檢測(cè)，所述步驟五，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，通過小鼠血鉛，腦、肝、腎、股骨鉛的測(cè)定，確定去除鉛的能力，其方法是通過灌胃方式將印跡改性殼聚糖注入家兔體內(nèi)，飼喂4周，每周測(cè)定血鉛含量及糞便中鉛含量，飼喂結(jié)束后，用電感耦合等離子質(zhì)譜法測(cè)定其肝臟、腸粘膜、腎、小腸、腦、心臟、肺臟中鉛含量。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印跡改性殼聚糖的制備方法，其特征是印跡改性殼聚糖，所述步驟六，確定改性殼聚糖的毒性，其方法是通過血鋅、鈣、銅含量測(cè)定，血紅蛋白(Hb)測(cè)定，小鼠學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試，確定改性殼聚糖的毒性。
全文摘要
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是研制一種具有螯合重金屬能力的印跡改性殼聚糖，有主動(dòng)肝靶向效果，可有效去除肝臟中的重金屬。本發(fā)明制備印跡改性殼聚糖，通過制備改性殼聚糖，優(yōu)化反應(yīng)條件，檢測(cè)改性殼聚糖的純度，印跡改性殼聚糖，體外條件下檢測(cè)改性殼聚糖去除鉛的能力，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)確定去除鉛的能力，確定印記改性殼聚糖的毒性實(shí)驗(yàn)，得到具有螯合重金屬能力的印記改性殼聚糖。
文檔編號(hào)B01J20/30GK103204955SQ201310116528
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月6日
發(fā)明者趙宏坤, 范穎華, 張煒, 滿兆紅, 都啟晶, 姜彥君, 李鳳梅 申請(qǐng)人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)