專利名稱：：一種兩步分離提純柱及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及食品檢測(cè)方法，尤其是食品安全檢測(cè)的前處理方法，具體為一種兩步分離提純柱及其在食品安全檢測(cè)中分離提純鄰苯二甲酸酯類的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：鄰苯二甲酸酯類(phthalicacidesters,PAEs)又稱酞酸酯，在塑料工業(yè)中常用做增塑劑和軟化劑，其含量有時(shí)可高達(dá)高聚體本身的60%，以增大塑料的可塑性和韌性。鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)和鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)均屬于鄰苯二甲酸酯類，是目前應(yīng)用非常廣泛的增塑劑，具有生殖毒性、胚胎毒性和遺傳毒性，它們?cè)谌梭w和動(dòng)物體內(nèi)，發(fā)揮著類似雌性激素的作用，干擾內(nèi)分泌，含量高時(shí)，被認(rèn)為可能損害人體肝臟、腎臟和生殖器官，并有致癌風(fēng)險(xiǎn)。它們與塑料基質(zhì)不以氫鍵和范德華力連接，彼此保持獨(dú)立的化學(xué)性質(zhì)，在包裝食品時(shí)，會(huì)遷移到食品中使食品受到污染。由于食品樣品中PAEs含量較低，且基質(zhì)復(fù)雜，準(zhǔn)確分析測(cè)定有較大的難度，目前分析測(cè)定的難點(diǎn)是樣品的前處理。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種兩步分離提純柱及其在測(cè)定鄰苯二甲酸酯類的應(yīng)用，尤其是在分離提純鄰苯二甲酸二正辛酯和鄰苯二甲酸二正丁酯的應(yīng)用。使用本發(fā)明的方法可以使包裝食品中的鄰苯二甲酸酯類(PAEs)得到富集，便于檢測(cè)。本發(fā)明的一種兩步分離提純柱由上端的活性炭顆粒填料柱和下端的弗羅里硅土填料柱結(jié)合制成。該兩步分離提純柱應(yīng)用于分離提純鄰苯二甲酸酯類。所述鄰苯二甲酸酯類為鄰苯二甲酸二正辛酯或鄰苯二甲酸二正丁酯。固體分離柱的制備采用活性碳柱與弗羅里硅土柱結(jié)合，活性炭柱與弗羅里硅土柱均干法上柱，加壓使填料壓實(shí)。本發(fā)明所說(shuō)的活性炭顆粒，分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；本發(fā)明所說(shuō)的弗羅里硅土(層析用，60-100目)，學(xué)名為硅鎂型吸附劑，英文名flolisil，購(gòu)自溫州市化學(xué)用料廠。以下對(duì)本發(fā)明分案進(jìn)一步描述一、層析柱填料的選取分別用等量中性氧化鋁、酸性氧化鋁、弗羅里硅土、硅藻土、硅膠、活性炭顆粒為填料裝柱，對(duì)鄰苯二甲酸二正辛酯和鄰苯二甲酸二正丁酯進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)。結(jié)果表明活性炭顆粒和弗羅里硅土有較高的吸附率和解吸率，并且除雜效果顯著，因此選用活性炭顆粒和弗羅里硅土分別作為填料，兩柱結(jié)合純化富集鄰苯二甲酸二正辛酯和鄰苯二甲酸二正丁酯。二、上樣液流速對(duì)吸附效果的影響活性炭顆粒柱分別取lmLDNOP和DBP濃度分別為0.00049mg/mL、0.0005235mg/mL的原料液(甲醇為溶劑)，按0.5、1.0、2.0、3.0mL/min的流速通過(guò)裝柱量為0.500g的活性碳顆粒柱，收集流出液，N2吹干后，用甲醇定容至lmL，用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算各吸附率。結(jié)果表明上柱流速的增大，吸附率降低，造成樣品流失。但是流速過(guò)慢，吸附時(shí)間增加，檢測(cè)周期延長(zhǎng)。綜合考慮，上樣液流速選擇lmL/min較為理想。弗羅里硅土柱分別取lmLDNOP和DBP濃度分別為0.00049mg/mL、0.0005235mg/mL的原料液(二氯甲烷為溶劑)，按0.5、1.0、2.0、3.0mL/min的流速通過(guò)裝柱量為l.OOOg的活性碳顆粒柱，收集流出液，N2吹干后，用甲醇定容至lmL，用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算各吸附率。結(jié)果表明上柱流速的增大，吸附率降低，造成樣品流失。但是流速過(guò)慢，吸附時(shí)間增加，檢測(cè)周期延長(zhǎng)。綜合考慮，上樣液流速選擇lmL/min較為理想。三、洗脫體系的確定本發(fā)明中所說(shuō)的丙酮，其濃度百分比均為體積比，其溶劑為水?；钚蕴款w粒柱由于鄰苯二甲酸二正辛酯和鄰苯二甲酸二正丁酯均為弱極性脂溶性物質(zhì)，初選乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷、丙酮、10%丙酮+正己烷、20%丙酮+正己烷、30°/0丙酮+正己烷為備選洗脫體系。將lmLDNOP和DBP濃度分別為0.00049mg/inL、0.0005235mg/mL的原料液(甲醇為溶劑)以lmL/min的流速通過(guò)裝柱量為0.5000g的活性碳顆粒柱，吸附完成后，分別用5mL的乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷、丙酮、10%丙酮+正己垸、20%丙酮+正己垸、30%丙酮+正己垸進(jìn)行洗脫，收集各洗脫液，N2吹干后，用甲醇定容至lmL，用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算各種洗脫劑的洗脫率。結(jié)果顯示，對(duì)于DNOP，乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷、丙酮、10%丙酮+正己烷、20%丙酮+正己垸、30%丙酮+正己烷的洗脫率分別為87.78°/。、77.64%、95.36%、48.76%、53.21%、66.68%、74.70%、63.60%;對(duì)于DBP，洗脫率分別為48.61%、72.78%、92.97%、24.89%、52.60%、41.31%、62.50%、43.74%?？梢钥闯?，二氯甲垸的洗脫率最高，因此選用二氯甲烷為洗脫劑。同樣的操作重復(fù)5次，二氯甲垸作洗脫劑時(shí)，DNOP和DBP的RSD值分別為2.56。/。和2.87。/"弗羅里硅土柱初選甲醇、乙酸乙酯、丙酮、20%丙酮+正己烷、40%丙酮+正己垸為備選洗脫體系。將lmLDNOP和DBP濃度分別為0.00049mg/mL、0.0005235mg/mL的原料液(二氯甲烷為溶劑)以lmL/min的流速通過(guò)裝柱量為l.OOOg的弗羅里硅土柱，吸附完成后，分別用5mL的甲醇、乙酸乙酯、丙酮、20%丙酮+正己烷、40%丙酮+正己烷進(jìn)行洗脫，收集各洗脫液，N2吹干后，用甲醇定容至lmL，用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算各種洗脫劑的洗脫率。結(jié)果顯示，對(duì)于DNOP，甲醇、乙酸乙酯、丙酮、20%丙酮+正己烷、40°/。丙酮+正己垸的洗脫率分別為85.09%、74.87%、84.93%、93.34%、91.86%;對(duì)于DBP，洗脫率分別為42.48°/。、51.57%、81.76%、98.22%、98.06°/。?？梢钥闯觯?0%丙酮+正己烷作為洗脫劑最佳。同樣的操作重復(fù)5次，20%丙酮+正己垸作洗脫劑時(shí)，DNOP和DBP的RSD值分別為3.81%和2.11%。四、洗脫流速的選擇活性炭顆粒柱將lmL濃度為0.00049mg/mL的DNOP，和lmL濃度為0.0005235mg/mL的DBP原料液(均以甲醇為溶劑)以lmL/mhi的流速通過(guò)裝柱量為0.500g的活性碳顆粒柱，吸附完成后，用5mL的二氯甲烷分別以0.5、1.0、2.0、3.0mL/min的流速進(jìn)行洗脫，收集各洗脫液，N2吹干后，用甲醇定容至lmL,用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定DNOP和DBP的含量，計(jì)算各洗脫率。結(jié)果顯示，對(duì)于DNOP,洗脫率分別為94.48%、93.62%、85.86%、82.54%;對(duì)于DBP，洗脫率分別為93.28%、91.97%、90.22%、88.76%。結(jié)果表明，相同體積的洗脫劑洗脫活性炭顆粒柱，流速越慢，洗脫率越高。但是流速慢耗時(shí)長(zhǎng)，不經(jīng)濟(jì)，綜合考慮，選擇洗脫流速為lmL/min。弗羅里硅土柱將lmLDNOP和DBP濃度分別為0.00049mg/mL、0.0005235mg/mL的原料液(二氯甲烷為溶劑)以lmL/min的流速通過(guò)裝柱量為l.OOOg的弗羅里硅土柱，吸附完成后，分別用5mL的20。/。丙酮+正己烷以流速0.5、1.0、2.0、3.0mL/min進(jìn)行洗脫，收集各洗脫液，N2吹干后，用甲醇定容至lmL,用HPLC進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定DNOP和DBP的含量，計(jì)算各洗脫率。結(jié)果顯示，對(duì)于DNOP，洗脫率分別為93.36%、92.06%、卯.13%、89.34%、；對(duì)于DBP，洗脫率分別為95.08%、93.88%、91.46%、88.22%。以上數(shù)據(jù)可以看出，相同體積的洗脫劑洗脫活性碳顆粒柱，流速越慢，洗脫率越高。但是流速慢耗時(shí)長(zhǎng)，綜合考慮，選擇洗脫流速為lmL/min。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集鄰苯二甲酸二正辛酯和鄰苯二甲酸二正丁酯，解決了由于食品樣品中PAEs含量較低，基質(zhì)復(fù)雜，準(zhǔn)確分析測(cè)定有較大難度的問(wèn)題，使分析測(cè)定的樣品前處理難點(diǎn)得以化解。使用本發(fā)明的方法可以使包裝食品中的鄰苯二甲酸酯類(PAEs)得到富集，便于檢測(cè)。采用活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集鄰苯二甲酸二正辛酯和鄰苯二甲酸二正丁酯，可以實(shí)現(xiàn)兩者的檢出限較粗提物的檢出限減小。膜粗提物中DNOP和DBP的檢出限均為經(jīng)過(guò)活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集后的10倍；蘋果粗提物中DNOP和DBP的檢出限分別為經(jīng)過(guò)活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集后的8.3倍和10倍。該富集方法易擴(kuò)大規(guī)模，進(jìn)行大量樣品的檢測(cè)。本發(fā)明對(duì)包裝食品安全的檢測(cè)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。圖l為本發(fā)明的一種兩步分離提純柱結(jié)構(gòu)圖，圖中1、用以加壓的注射器，2、連接器一，3、活性炭顆粒填料，4、隔板一，5、調(diào)節(jié)流速的閥門一，6、連接器二，7、弗羅里硅土填料，8、隔板二，9、調(diào)節(jié)流速的閥門二。具體實(shí)施例方式為驗(yàn)證本發(fā)明的兩步分離提純柱實(shí)際應(yīng)用的效果，特提供以下實(shí)施例兩步分離提純柱處理后提取物回收率及檢出限的比較。實(shí)施例1將聚氯乙烯(PVC)膜剪成0.5cmX0.5cm大小的碎片。稱取0.500g的膜，添加1.96mg/kg的DNOP標(biāo)準(zhǔn)液和2.094mg/kg的DBP標(biāo)準(zhǔn)液。力卩30ml正己烷，超聲30min，殘?jiān)?0ml正己烷分3次洗滌，合并洗漆液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至3-5ml后，進(jìn)行后續(xù)操作。①不過(guò)柱直接氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml，測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率；②過(guò)活性炭柱添加約0.500g活性炭顆粒，先用2ml二氯甲垸預(yù)淋洗柱，再用2ml正己烷預(yù)淋洗柱，然后上樣，用5ml二氯甲烷洗脫，收集洗脫液，氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml，測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率；③過(guò)弗羅里硅土柱添加l.SOOg弗羅里硅土填料，先用5ml按體積比為20%丙酮水溶液+正己烷預(yù)淋洗柱，再用2ml正己垸預(yù)淋洗柱，然后上樣，用5ml按體積比為20。/。丙酮水溶液+正己烷洗脫，收集洗脫液，氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml，測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率；④先過(guò)活性炭柱再過(guò)弗羅里硅土柱柱l(添加約O.SOOg活性炭顆粒)先用2ml二氯甲烷預(yù)淋洗柱，再用2ml正己垸預(yù)淋洗柱，然后上樣，用5ml二氯甲烷洗脫，收集洗脫液I，柱2(添加1.500g弗羅里硅土填料)先用5ml按體積比為20%丙酮水溶液+正己烷預(yù)淋洗柱，再用2mi正己烷預(yù)淋洗柱，將洗脫液I上樣至柱2，用5ml按體積比為20%丙酮水溶液+正己烷洗脫，收集洗脫液，氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml，測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率。液相測(cè)定條件流速lml/min，進(jìn)樣；量20ul，檢測(cè)波長(zhǎng)238mn，流動(dòng)相甲醇水=95:65(DNOP)，甲醇水=80:20(DBP)。重復(fù)5次。表l膜四種處理后提取物回收率及檢出限的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由表l可以看出，回收率在80.07%-98.22。/。之間，表明試驗(yàn)方法可行，且經(jīng)過(guò)4種不同處理的樣品回收率有明顯差異。樣品經(jīng)過(guò)①、②、③處理的樣品目標(biāo)物的回收率差異不大；④處理的目標(biāo)物回收率最高，且經(jīng)過(guò)④處理的檢出限比①處理的減小了10倍。實(shí)施實(shí)例2蘋果洗凈后于高速組織搗碎機(jī)中打碎后，稱取15.00g，添加0.327mg/kg的DNOP標(biāo)準(zhǔn)液和0.2327mg/kg的DBP標(biāo)準(zhǔn)液。加入提取液(V(丙酮)V(正己烷"l:3)50mL，超聲提取lh，抽濾棄渣。用10mL提取液洗滌抽濾瓶和漏斗，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗，收集有機(jī)相，水相用50mL正己烷分兩次萃取后合并有機(jī)相。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至3-5ml后，進(jìn)行后續(xù)操作。①不過(guò)柱直接氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml，測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率；②過(guò)活性炭柱添加約0.500g活性炭顆粒，先用2ml二氯甲烷預(yù)淋洗柱，再用2ml正己垸預(yù)淋洗柱，然后上樣，用5ml二氯甲烷洗脫，收集洗脫液，氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml，測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率；③過(guò)弗羅里硅土柱添加1.500g弗羅里硅土填料，先用5ml按體積比為20%丙酮水溶液+正己垸預(yù)淋洗柱，再用2ml正己烷預(yù)淋洗柱，然后上樣，用5ml按體積比為20。/。丙酮水溶液+正己烷洗脫，收集洗脫液，氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml，測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率；④先過(guò)活性炭柱再過(guò)弗羅里硅土柱柱l(添加約O.SOOg活性炭顆粒)先用2ml二氯甲烷預(yù)淋洗柱，再用2ml正己烷預(yù)淋洗柱，然后上樣，用5ml二氯甲烷洗脫，收集洗脫液I，柱2(添加1.500g弗羅里硅土填料〉先用5ml按體積比為20%丙酮水溶液+正己烷預(yù)淋洗柱，再用2ml正己垸預(yù)淋洗柱，將洗脫液I上樣至柱2，用5ml按體積比為20°/。丙酮水溶液+正己烷洗脫，收集洗脫液，氮吹儀吹干，用甲醇定容至lml,測(cè)定DNOP和DBP濃度，并計(jì)算回收率。表2蘋果四種處理后提取物回收率及檢出限的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表2看出回收率在77.56%-95.18%之間，表明試驗(yàn)方法可行，且經(jīng)過(guò)4種不同處理的樣品回收率有明顯差異。樣品經(jīng)過(guò)①、②、③處理的樣品目標(biāo)物的回收率差異不大；處理的目標(biāo)物回收率最高，且經(jīng)過(guò)④處理的DNOP檢出限是①處理的0.12倍，經(jīng)過(guò)④處理的DBP檢出限比①處理減小了10倍。用活性炭柱和弗羅里硅土柱兩柱結(jié)合對(duì)PAEs純化富集的研究上未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明開(kāi)發(fā)活性炭柱和弗羅里硅土柱兩柱結(jié)合對(duì)PAEs純化富集，可以實(shí)現(xiàn)兩者的檢出限較粗提物的檢出限減小。膜粗提物中DNOP和DBP的檢出限均為經(jīng)過(guò)活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集后的10倍；蘋果粗提物中DNOP和DBP的檢出限分別為經(jīng)過(guò)活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集后的8.3倍和10倍。權(quán)利要求1、一種兩步分離提純柱，其特征在于它由上端的活性碳顆粒填料柱和下端的弗羅里硅土填料柱結(jié)合制成。2、如權(quán)利要求1一種兩步分離提純柱的應(yīng)用，其特征在于該兩步分離提純柱應(yīng)用于分離提純鄰苯二甲酸酯類。3、如權(quán)利要求2—種兩步分離提純柱的應(yīng)用，其特征在于所述鄰苯二甲酸酯類為鄰苯二甲酸二正辛酯或鄰苯二甲酸二正丁酯。全文摘要一種兩步分離提純柱及其應(yīng)用，涉及分離提純柱及其在食品安全檢測(cè)中分離提純鄰苯二甲酸酯類的應(yīng)用。它由上端的活性炭顆粒填料柱和下端的弗羅里硅土填料柱結(jié)合制成。該兩步分離提純柱應(yīng)用于分離提純鄰苯二甲酸酯類。本發(fā)明采用活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)和鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)可以實(shí)現(xiàn)兩者的檢出限較粗提物的檢出限減小。膜粗提物中DNOP和DBP的檢出限均為經(jīng)過(guò)活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集后的10倍；蘋果粗提物中DNOP和DBP的檢出限分別為經(jīng)過(guò)活性炭顆粒柱與弗羅里硅土柱結(jié)合純化富集后的8.3倍和10倍。本發(fā)明易于大規(guī)模，大量樣品的檢測(cè)。文檔編號(hào)B01J20/20GK101530780SQ200910097779公開(kāi)日2009年9月16日申請(qǐng)日期2009年4月21日優(yōu)先權(quán)日2009年4月21日發(fā)明者姜麗佳,施青紅,王向陽(yáng)申請(qǐng)人:浙江工商大學(xué)