本發(fā)明涉及上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，具體地，涉及檸檬酸鹽修飾的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備方法、過氧化氫或尿酸的檢測(cè)方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

尿酸是一種生物分子，也是人體中嘌呤的代謝產(chǎn)物。對(duì)于健康人來說，血清中尿酸的濃度在0.12-0.46mmol/l范圍內(nèi)，若尿酸水平一旦超出該范圍可能導(dǎo)致許多疾病，如痛風(fēng)、高血壓、白血病、腎臟疾病和心血管疾病等。因此，早期檢測(cè)尿酸對(duì)上述疾病的預(yù)防、診斷和治療有著非常重要的臨床意義。目前在已創(chuàng)建的眾多檢測(cè)方法中，熒光法是檢測(cè)尿酸的主要方法。但是，現(xiàn)有的檢測(cè)方法存在檢出限高，靈敏度低，實(shí)驗(yàn)步驟復(fù)雜，耗時(shí)耗力，儀器價(jià)格昂貴等問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備方法及過氧化氫或尿酸的檢測(cè)方法及應(yīng)用，該檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料能夠?qū)τ谶^氧化氫或尿酸的檢測(cè)具有檢出限低、靈敏度高和選擇性好的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)而使得其能夠用于檢測(cè)血清中的尿酸，另外，該制備方法和檢測(cè)方法均工序簡(jiǎn)單且成本低廉。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備方法，該制備方法包括：

1)將堿、水、油酸、c1-c3的醇、錳源、鐿源、釔源、鉺源和naf進(jìn)行攪拌，接著水熱反應(yīng)、離心分離得到oa-nayf4:yb，er/mnucnps；

2)將oa-nayf4:yb，er/mnucnps分散于醇中，接著與三氯甲烷和檸檬酸鹽溶液進(jìn)行配位體交換反應(yīng)得到檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb，er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料。

本發(fā)明也提供了一種檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，該檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料通過上述方法制備而得。

本發(fā)明還提供了一種過氧化氫或者尿酸的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括：

1)將如上述檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液中；

2)將已知濃度的檢測(cè)底物和二價(jià)鐵鹽溶液加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測(cè)熒光強(qiáng)度，然后以檢測(cè)底物的濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線或者計(jì)算出工作曲線方程；

3)將未知濃度的檢測(cè)底物和二價(jià)鐵鹽溶液加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測(cè)熒光強(qiáng)度，然后根據(jù)工作曲線或者工作曲線方程計(jì)算出檢測(cè)底物的濃度；其中，檢測(cè)底物為過氧化氫，或者尿酸與過量的尿酸氧化酶的混合物。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種如上述的檢測(cè)方法在檢測(cè)血清中尿酸上的應(yīng)用。

在上述技術(shù)方案中，本發(fā)明首先制備了水溶性好且能夠應(yīng)用于生物體內(nèi)的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。

檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料在fenton試劑的作用下，可發(fā)生熒光淬滅現(xiàn)象，如圖9所示，該材料對(duì)于過氧化氫和尿酸的檢測(cè)原理如下：1)在底物為過氧化氫時(shí)，過氧化氫能夠與fe²⁺發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成羥基自由基，該自由基具有非常強(qiáng)的氧化能力，從而與上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料作用并使其熒光強(qiáng)度降低。2)在底物為尿酸與過量的尿酸氧化酶的混合物時(shí)，首先尿酸與尿酸氧化酶發(fā)生酶促反應(yīng)生成過氧化氫和尿囊素，接著過氧化氫能夠與fe²⁺發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成羥基自由基，進(jìn)而使得體系熒光強(qiáng)度降低；并且熒光強(qiáng)度的強(qiáng)弱與過氧化氫的濃度呈線性的關(guān)系，因此能夠利用體系的熒光強(qiáng)度檢測(cè)過氧化氫以及尿酸的濃度；進(jìn)一步地，便可利用檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料檢測(cè)血清中尿酸的含量。

本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說明。

附圖說明

附圖是用來提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1a是檢測(cè)例1中的上轉(zhuǎn)換材料發(fā)光強(qiáng)度的統(tǒng)計(jì)圖；

圖1b是檢測(cè)例1中的熒光強(qiáng)度曲線圖；

圖2是檢測(cè)例2的透射電鏡圖；

圖3是檢測(cè)例3的元素分析圖；

圖4是檢測(cè)例4的熒光強(qiáng)度曲線圖；

圖5是檢測(cè)例5的熒光強(qiáng)度曲線圖；

圖6a是檢測(cè)例6中的熒光強(qiáng)度曲線圖；

圖6b是在圖6a基礎(chǔ)上的熒光強(qiáng)度對(duì)過氧化氫濃度的工作曲線圖；

圖7a是檢測(cè)例7中的熒光強(qiáng)度曲線圖；

圖7b是在圖7a基礎(chǔ)上的熒光強(qiáng)度對(duì)尿酸濃度的工作曲線圖；

圖8是應(yīng)用例2的干擾檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖；

圖9是本發(fā)明的原理圖。

具體實(shí)施方式

以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。

本發(fā)明提供了一種檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備方法，該制備方法包括：

1)將堿、水、油酸、c1-c3的醇、錳源、鐿源、釔源、鉺源和naf進(jìn)行攪拌，接著水熱反應(yīng)、離心分離得到oa-nayf4:yb，er/mnucnps(油酸包覆的nayf4:yb，er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料)；

2)將oa-nayf4:yb，er/mnucnpsoa-nayf4:yb，er/mn上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于醇中，接著與三氯甲烷和檸檬酸鹽溶液進(jìn)行配位體交換反應(yīng)得到檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb，er/mnucnps上轉(zhuǎn)換納米粒子。

在本發(fā)明的步驟1)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟1)中，相對(duì)于0.3g的堿，水的用量為6-12ml，油酸的用量為2-8ml，醇的用量為5-15ml，錳源的用量為0.04-0.08g，釔源的用量為0.1-0.3g，鐿源的用量為0.04-0.08g，鉺源的用量為6-10mg，naf的用量為0.05-0.3g。

在本發(fā)明的步驟1)中，攪拌的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟1)中，攪拌至少滿足以下條件：攪拌溫度為15-35℃，攪拌時(shí)間為5-20min。

在本發(fā)明的步驟1)中，接觸反應(yīng)的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟1)中，水熱反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為180-220℃，反應(yīng)時(shí)間為6-10h。

在本發(fā)明的步驟1)中，鉺源、錳源、鐿源、釔源、堿和醇的種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，鉺源選自五水合硝酸鉺、氧化鉺、無水氯化鉺和八水合硫酸鉺中的至少一者，錳源選自四水合氯化錳、無水氯化錳、無水硫酸錳、一水合硫酸錳中的至少一者，鐿源選自氯化鐿、五水硝酸鐿、氧化鐿和碳酸鐿中的至少一者，釔源選自硝酸釔、氧化釔、六水合氧化釔和硝酸釔中的至少一者，醇選自甲醇、乙醇和丙醇中的至少一者，所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀或氨水中的至少一者；

在本發(fā)明的步驟2)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟2)中，相對(duì)于30mg的oa-nayf4:yb，er/mnucnps，醇的用量為1-4ml，三氯甲烷的體積為1-4ml，檸檬酸鹽溶液中檸檬酸鹽的用量為0.05-0.15g。

在本發(fā)明的步驟2)中，配位體交換反應(yīng)的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟2)中，配位體交換反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為20-40℃，反應(yīng)時(shí)間為10-15h。

在本發(fā)明的步驟2)中，添料順序可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟2)中，添料順序?yàn)椋合葘a-nayf4:yb，er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料溶于醇中，然后向該將該上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料溶液中依次加入三氯甲烷溶液和檸檬酸鹽溶液進(jìn)行配位體交換反應(yīng)。

在本發(fā)明的步驟2)中，檸檬酸鹽的種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，檸檬酸鹽選自檸檬酸一鈉、檸檬酸二鈉和檸檬酸三鈉中的至少一者。

本發(fā)明還提供了一種過氧化氫或者尿酸的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括：

1)將如上述檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液中；

2)將已知濃度的檢測(cè)底物和fe²⁺溶液加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測(cè)熒光強(qiáng)度，然后以檢測(cè)底物的濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線或者計(jì)算出工作曲線方程；

3)將未知濃度的檢測(cè)底物和fe²⁺溶液加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測(cè)熒光強(qiáng)度，然后根據(jù)工作曲線或者工作曲線方程計(jì)算出檢測(cè)底物的濃度；

其中，檢測(cè)底物為過氧化氫，或者尿酸與過量的尿酸氧化酶的混合物。

在上述檢測(cè)方法的步驟2)以及步驟3)中，檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的濃度以及單次檢測(cè)的fe²⁺、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液的用量和ph可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高檢測(cè)的靈敏度，優(yōu)選地，在步驟2)和3)的檢測(cè)體系中，fe²⁺的濃度為60-100μmol/l，所述磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液的用量為3-8ml，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液的ph為4.8-5.2，nayf4:yb，er/mnucnps的濃度為0.05-0.15mg/ml。

在上述檢測(cè)方法中，孵育的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高檢測(cè)的靈敏度，優(yōu)選地，孵育滿足以下條件：孵育溫度為20-40℃，檢測(cè)底物為過氧化氫時(shí)的孵育時(shí)間為15-25min，檢測(cè)底物為尿酸與過量的尿酸氧化酶的混合物時(shí)的孵育時(shí)間為25-40min。

在上述檢測(cè)方法中，測(cè)體系中尿酸氧化酶的濃度可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高檢測(cè)的靈敏度，優(yōu)選地，在檢測(cè)底物為尿酸與過量的尿酸氧化酶的混合物的情況下，檢測(cè)體系中尿酸氧化酶的濃度為0.2-0.3mg/ml。

在上述檢測(cè)方法中，熒光檢測(cè)波長(zhǎng)可以在寬的范圍內(nèi)選擇，在不同波長(zhǎng)的情形下，工作曲線以及工作曲線方程存在差異，但是為了提高檢測(cè)的靈敏度，優(yōu)選地，熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為650-680nm，在檢測(cè)底物為尿酸與過量的尿酸氧化酶的混合物的情況下，工作曲線方程為i0-i＝90.26+102.65c；其中，i0未加檢測(cè)底物時(shí)的體系的熒光強(qiáng)度，i為添加檢測(cè)底物時(shí)體系的熒光強(qiáng)度，c為檢測(cè)底物的濃度。

同理，在上述檢測(cè)方法中，熒光檢測(cè)波長(zhǎng)可以在寬的范圍內(nèi)選擇，在不同的波長(zhǎng)的情形下，工作曲線以及工作曲線方程存在差異，但是為了提高檢測(cè)的靈敏度，優(yōu)選地，熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為650-680nm，優(yōu)選地，在檢測(cè)底物為尿酸與過量的尿酸氧化酶的混合物的情況下，工作曲線方程為i0-i＝98.72+1216.72lgc；其中，i0未加檢測(cè)底物時(shí)的體系的熒光強(qiáng)度，i為添加檢測(cè)底物時(shí)體系的熒光強(qiáng)度，c為檢測(cè)底物的濃度。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種如上述的檢測(cè)方法在檢測(cè)血清中尿酸上的應(yīng)用。

以下將通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料是通過文獻(xiàn)(tian,g.,etal.,mn²⁺dopant-controlledsynthesisofnayf4:yb/erupconversionnanoparticlesforinvivoimaginganddrugdelivery.advancedmaterials,2012.24(9)：p.1226-1231.)中記載的方法制備而得。

實(shí)施例1

1)oa-nayf4:yb，er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料(oa-nayf4:yb，er/mnucnps)的制備：

首先，稱量0.300g的naoh置于50ml燒杯中，隨后加入1.50ml超純水、5.00ml油酸、10.0ml乙醇，攪拌均勻后依次加入0.500mlmncl2溶液(0.600mol/l)，1.00mly(no3)3溶液(0.500mol/l)，0.900mlybcl3溶液(0.200mol/l)和0.100mler(no3)3溶液(0.200mol/l)。接著，逐滴加入4.00mlnaf溶液(1.00mol/l)并在25℃下溫和攪拌15min，再將其轉(zhuǎn)移至50ml反應(yīng)釜中，在200℃下反應(yīng)8h。自然冷卻至25℃后，離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min)，最后用超純水和乙醇反復(fù)洗滌幾次后分離得到oa-nayf4:yb，er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料。

2)檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：

將30.0mg油酸包覆的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料溶于2.00ml乙醇中，接著在攪拌下依次加入2.00ml三氯甲烷和2.00ml檸檬酸三鈉溶液(濃度為0.2mol/l)于25℃條件下攪拌12h。最后，離心(10,000rmp,10min)分離出產(chǎn)品，并用超純水和乙醇多次洗滌后得到檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1。

實(shí)施例2

按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a2，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.4mol/l。

實(shí)施例3

按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a3，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.5mol/l。

實(shí)施例4

按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a4，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.7mol/l。

實(shí)施例5

按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a5，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.8mol/l。

實(shí)施例6

按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a6，所不同的是，將鉺源換為氯化鉺，錳源換為二水合氯化錳，鐿源換為硝酸鐿，釔源換為硝酸釔，醇換為乙醇。

實(shí)施例7

按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a7，所不同的是，將鉺源換為氧化鉺，錳源換為六水合氯化錳，鐿源換為醋酸鐿，釔源換為醋酸釔，醇換為丙醇。

檢測(cè)例1

通過牌號(hào)為hitachif-4600的熒光儀對(duì)nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料進(jìn)行發(fā)光檢測(cè)，結(jié)果如圖1a所示，當(dāng)摻雜錳離子的物質(zhì)的量達(dá)到30％時(shí)，上轉(zhuǎn)換納米材料的熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值。圖1b中a曲線是nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料的熒光強(qiáng)度曲線圖，b曲線分別是nayf4:yb,er上轉(zhuǎn)換納米材料的熒光強(qiáng)度曲線圖，由圖可知，錳離子的摻雜可增強(qiáng)上轉(zhuǎn)換納米材料在紅區(qū)的發(fā)光強(qiáng)度。

檢測(cè)例2

通過牌號(hào)為jeol2010的透射電子顯微鏡對(duì)a1進(jìn)行形貌表征，檢測(cè)結(jié)果如圖2。由圖2可知，nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料呈立方相。

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

檢測(cè)例3

利用牌號(hào)為hitachis-4800的掃描電子顯微鏡對(duì)a1進(jìn)行元素分析，結(jié)果如圖3。由圖3可知，成功制備了nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料。

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

檢測(cè)例4

利用牌號(hào)為hitachif-4600的熒光儀記錄fenton反應(yīng)體系中各物質(zhì)與a1共存時(shí)的熒光強(qiáng)度，結(jié)果如圖4所示。圖4中，a曲線是檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料在磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液(ph＝5.0)中有很強(qiáng)的上轉(zhuǎn)換發(fā)光，b,曲線是nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料與fe²⁺單獨(dú)存在時(shí)的發(fā)光強(qiáng)度譜圖，c曲線是nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料與fe³⁺單獨(dú)存在時(shí)的發(fā)光強(qiáng)度譜圖，d曲線是nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料與h2o2單獨(dú)存在時(shí)的發(fā)光強(qiáng)度譜圖，結(jié)果顯示無明顯變化。但是，當(dāng)nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料、fe²⁺與不同濃度過氧化氫同時(shí)存在時(shí)體系的熒光強(qiáng)度明顯降低，如曲線f,g所示(f曲線表示的過氧化氫濃度為30μmol/l；g曲線表示的過氧化氫濃度為60μmol/l)；若向上述溶液中加入適量硫脲，可以發(fā)現(xiàn)體系的熒光強(qiáng)度有所恢復(fù)，如曲線e所示。因而可以證明fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥基自由基可使nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料的熒光淬滅。

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

檢測(cè)例5

利用牌號(hào)為hitachif-4600的熒光儀記錄酶促反應(yīng)體系中各物質(zhì)與上轉(zhuǎn)換材料共存時(shí)的熒光強(qiáng)度，結(jié)果如圖5所示。圖5中，a曲線是檸檬酸鹽修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換納米材料的熒光曲線圖，曲線b,c,d分別是上轉(zhuǎn)換材料與尿酸、fe²⁺及尿酸酶單獨(dú)存在時(shí)的熒光圖，曲線b是上轉(zhuǎn)換材料與尿酸單獨(dú)存在時(shí)的熒光圖，曲線c是上轉(zhuǎn)換材料與fe²⁺單獨(dú)存在時(shí)的熒光圖，曲線別是上轉(zhuǎn)換材料與尿酸酶單獨(dú)存在時(shí)的熒光圖，由圖可知熒光強(qiáng)度基本不變。但是，當(dāng)上轉(zhuǎn)換材料、fe²⁺以及尿酸酶與不同濃度的尿酸同時(shí)存在時(shí)體系的熒光強(qiáng)度明顯降低，如曲線e,f所示(e曲線表示尿酸濃度為4μmol/l；f曲線表示的尿酸濃度為10μmol/l)，由此可以說明體系中所使用的各種物質(zhì)單獨(dú)存在時(shí)對(duì)尿酸的檢測(cè)均無影響，并且只有當(dāng)這些物質(zhì)同時(shí)存在時(shí)，尿酸與尿酸酶反應(yīng)產(chǎn)生過氧化氫，隨后在亞鐵離子的作用下發(fā)生上述芬頓反應(yīng)，使得上轉(zhuǎn)換材料熒光發(fā)生淬滅，從而證明該方法用于檢測(cè)尿酸是可行的。

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

檢測(cè)例6

h2o2的檢測(cè)：

在檢測(cè)h2o2的過程中，檸檬酸鹽修飾nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1溶液(100μl，0.100mg/ml)、fe²⁺溶液(80.0μl，1.00mmol/l)和不同濃度的h2o2加入到磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液(ph為5.0，10.0ml)，在25℃、黑暗下孵育20min后，利用牌號(hào)為hitachif-4600的熒光儀進(jìn)行熒光測(cè)定。并繪制工作曲線，結(jié)果見圖6b，工作曲線方程為i0-i＝90.26+102.65c，過氧化氫濃度與熒光強(qiáng)度淬滅△i(△i＝i0-i,i0與i分別為體系中不加過氧化氫和加過氧化氫的熒光強(qiáng)度值)之間具有較好的線性關(guān)系。由6a可知，隨著過氧化氫濃度的增加，其熒光強(qiáng)度逐漸降低。

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

檢測(cè)例7

尿酸的檢測(cè)：

在檢測(cè)尿酸的過程中，首先將尿酸氧化酶(100μl，2.5mg/ml)和不同濃度的尿酸加入到磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液(ph為5.0，10.0ml)，在37℃下反應(yīng)30min，然后依次加入fe²⁺溶液(80.0μl，1.00mmol/l)和檸檬酸鹽修飾nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1溶液(100μl，0.100mg/ml)，在25℃、黑暗下孵育20min，利用牌號(hào)為hitachif-4600的熒光儀進(jìn)行熒光測(cè)定。并繪制工作曲線，結(jié)果見圖7b，工作曲線方程為i0-i＝98.72+1216.72lgc，尿酸的濃度與熒光強(qiáng)度淬滅△i(△i＝i0-i,i0與i分別為體系中不加尿酸和加尿酸的熒光強(qiáng)度值)之間具有較好的線性關(guān)系。由7a可知，隨著尿酸濃度的增加，其熒光強(qiáng)度逐漸降低。

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

應(yīng)用例1

采用與標(biāo)準(zhǔn)加入法對(duì)處理過的血清進(jìn)行檢測(cè)：

血清純化，然后按照檢測(cè)例7的方法對(duì)血清中的尿酸進(jìn)行檢測(cè)，再向血清中加入已知濃度的尿酸，再次測(cè)定。其中加入表示通過標(biāo)準(zhǔn)加入法向體系中加入標(biāo)準(zhǔn)尿酸樣品，發(fā)現(xiàn)表示在尿酸加入后，測(cè)得的熒光強(qiáng)度值，再根據(jù)工作曲線，得出的濃度值。具體結(jié)果見表1，其中rsd為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表1

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

應(yīng)用例2

干擾檢測(cè)(mm代表mmol/l)：

將含有0.250mg/ml尿酸氧化酶與各種干擾物質(zhì)混合，37℃條件下于緩沖液中孵育30min，隨后依次加入80.0μmfe²⁺，0.100mg/ml上轉(zhuǎn)換材料，加入干擾物質(zhì)為(k⁺：10.0mm,na⁺：10.0mm,zn²⁺：10.0mm,cl^-：10.0mm,so4^2-：100mm,br^-：10.0mm,多巴胺：10.0mm，牛血清蛋白：1.00mg/ml,谷胱甘肽：1.00mm,半胱氨酸：1.00mm，丙氨酸：10.0mm,賴氨酸：1.00mm,甘氨酸：1.00mm)在25℃下震蕩20min,用熒光儀對(duì)其發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)所得的熒光強(qiáng)度值，繪制柱狀圖，結(jié)果見圖8，由圖可知各種干擾物對(duì)體系均無影響。第一條柱狀圖為標(biāo)準(zhǔn)尿酸樣品，可以看出熒光強(qiáng)度淬滅效果良好。

其中，da表示多巴胺，bsa表示牛血清蛋白，gsh表示谷胱甘肽，cys表示半胱氨酸，ala表示丙氨酸，lys表示賴氨酸，gly表示甘氨酸,ua表示尿酸。

按照相同的方法對(duì)a2-a7進(jìn)行表征，表征結(jié)果與a1的表征結(jié)果基本保持一致。

以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

另外需要說明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說明。

此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。