一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加組分，其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基；所述添加組分及其濃度如下：D?葡萄糖，5?10g/L；L?谷氨酰胺，5?7g/L；HEPES，5?7g/L；丙酮酸鈉，6?10g/L。本發(fā)明的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，采用DMEM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及特定的添加組分的組合，尤其是D?葡萄糖、L?谷氨酰胺和丙酮酸鈉三者同時(shí)滿足特定的濃度范圍時(shí)，能夠滿足細(xì)胞快速、大量的增殖所需要的營養(yǎng)需求，特別適合高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系。
【專利說明】
-種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，屬于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個(gè)領(lǐng)域，成為最重要的基礎(chǔ) 科學(xué)之一。
[0003] 關(guān)于體外細(xì)胞培養(yǎng)體系，現(xiàn)有技術(shù)中除了常規(guī)的培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等二維的 細(xì)胞培養(yǎng)體系，現(xiàn)在已研發(fā)出=維培養(yǎng)體系，例如目前市售的高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶，是一種既 可W適用于貼壁細(xì)胞，又可W適用于懸浮細(xì)胞的=維培養(yǎng)體系，可W快速地培養(yǎng)大量細(xì)胞， 且可W進(jìn)行為期半年W上的長期細(xì)胞培養(yǎng)，不需要經(jīng)常更換耗材，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿 和培養(yǎng)瓶相比，更方便、成本更低，因此受到本領(lǐng)域研發(fā)人員的廣泛關(guān)注。
[0004] 然而，現(xiàn)有技術(shù)中的傳統(tǒng)的培養(yǎng)基大多適用于中等規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)體系，一般來 說無法適用于大規(guī)模的、高密度的細(xì)胞培養(yǎng);另一方面，現(xiàn)有的培養(yǎng)基僅適用于培養(yǎng)板、培 養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等二維的細(xì)胞培養(yǎng)體系，無法適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶運(yùn)樣的=維培養(yǎng)體系； 當(dāng)傳統(tǒng)的培養(yǎng)基應(yīng)用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶培養(yǎng)時(shí)，傳統(tǒng)培養(yǎng)基營養(yǎng)不能滿足細(xì)胞的快速增 殖，細(xì)胞生長緩慢，培養(yǎng)效果不佳。
[0005] 現(xiàn)在亟待開發(fā)專用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 鑒于相關(guān)技術(shù)的上述問題和/或其他問題，本發(fā)明一方面提供了一種適用于高密 度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加組分，其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM培 養(yǎng)基;所述添加組分及其濃度如下:D-葡萄糖，5-lOg/L;k谷氨酷胺，5-7g/l;皿陽S，5-7g/ L丙酬酸鋼，6-10g/l;各添加組分的濃度W所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的總 體積為基準(zhǔn)。
[0007] 優(yōu)選的，W所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)，所述DMEM 培養(yǎng)基的干粉量為17~22g/L。
[000引優(yōu)選的，W所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)，所述DMEM 培養(yǎng)基的干粉量為19.5g/L。
[0009] 優(yōu)選的，所述D-葡萄糖的濃度為7.5g/L，所述k谷氨酷胺的濃度為6g/L，所述丙酬 酸鋼的濃度為8g/L。
[0010] 優(yōu)選的，所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的pH值為7.2~7.6;所述添加 組分還包括酪紅鋼，所述酪紅鋼的濃度為15-20mg/L。
[0011] 優(yōu)選的，所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的滲透壓為320-360m0sm/L。
[0012] 本發(fā)明另一方面提供了上述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基在高密度細(xì)胞 培養(yǎng)體系中的應(yīng)用。
[0013] 優(yōu)選的，所述高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系為高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶。
[0014] 本發(fā)明的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，采用DMEM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基W及特 定的添加組分的組合，尤其是D-葡萄糖谷氨酷胺和丙酬酸鋼S者同時(shí)滿足特定的濃度 范圍時(shí)，能夠滿足細(xì)胞快速、大量的增殖所需要的營養(yǎng)需求，特別適合高密度細(xì)胞培養(yǎng)體 系。
【具體實(shí)施方式】
[0015] W下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明并不限于運(yùn)些具體實(shí)施方 式。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] 實(shí)施例1的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的配制過程如下:
[0018] 步驟1):在無菌條件下將合成的DMEM干粉在電子天平上稱取195g后置于消毒容器 內(nèi)，力的L重蒸水稀釋后攬拌均勻獲得基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0019] 步驟2):將添加組分:75g D-葡萄糖、60gレ谷氨酷胺、64g皿陽S、8g丙酬酸鋼、 170mg酪紅鋼依次加入步驟1)獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻；
[0020] 步驟3):過濾滅菌，再調(diào)節(jié)抑值至7.4±0.2，最后加入重蒸水將體積調(diào)節(jié)至lOL
[0021] 步驟4):培養(yǎng)基配制完成后，過濾滅菌，分裝、封口，最后冷藏(+4°C環(huán)境)備用。
[00剖實(shí)施例2
[0023] 實(shí)施例2的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的外周血細(xì)胞培養(yǎng)基的配制過程如下：
[0024] 步驟1):在無菌條件下將合成的DMEM干粉在電子天平上稱取195g后置于消毒容器 內(nèi)，力的L重蒸水稀釋后攬拌均勻獲得基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[00巧]步驟2):將添加組分:70g D-葡萄糖、62g k谷氨酷胺、66g肥陽S、7.8g丙酬酸鋼、 180mg酪紅鋼依次加入步驟1)獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻；
[0026] 步驟3):過濾滅菌，再調(diào)節(jié)pH值至7.4±0.2，最后加入重蒸水將體積調(diào)節(jié)至lOL
[0027] 步驟4):培養(yǎng)基配制完成后，過濾滅菌，分裝、封口，最后冷藏(+4°C環(huán)境)備用。
[002引應(yīng)用例1
[00巧]采用市售的FiberCell品牌C2025型號(hào)的高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶（參見FiberCell細(xì)胞 培養(yǎng)系統(tǒng)產(chǎn)品銷售網(wǎng)頁），W及本發(fā)明實(shí)施例1獲得的無血清培養(yǎng)基進(jìn)行293T細(xì)胞的培養(yǎng)。
[0030] 將293T細(xì)胞轉(zhuǎn)移至高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶中，細(xì)胞接種密度為2.5 X 106個(gè)/ml，加液量 50ml左右;具體地，儲(chǔ)液瓶中的培養(yǎng)基通過硅膠管與細(xì)胞培養(yǎng)桶連接，在蠕動(dòng)累的作用下， 持續(xù)循環(huán)流動(dòng)，培養(yǎng)基通過細(xì)胞培養(yǎng)桶的中空纖維進(jìn)行交換，給細(xì)胞培養(yǎng)桶內(nèi)的細(xì)胞不斷 的提供營養(yǎng)物質(zhì);將整個(gè)高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶放入5%C02,37°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)1天，2 天，3天，4天，5天后記錄細(xì)胞數(shù)量。
[0031] 對比例1:采用市售的FiberCell品牌C2025型號(hào)的高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶（參見 門berCell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)產(chǎn)品銷售網(wǎng)頁），W及市售的BI品牌(01-055-1A)常規(guī)DMEM培養(yǎng)基， 培養(yǎng)過程與應(yīng)用例1相同，具體不再寶述。
[0032] 檢測細(xì)胞增殖速率
[0033] 應(yīng)用例1與對比例1，均在培養(yǎng)1、2、3、4和5天后，分別取樣培養(yǎng)液，進(jìn)行細(xì)胞濃度的 檢測，檢測結(jié)果參見下表1。）
[0034] 表 1
[0035]
'[0036]將上述的結(jié)果進(jìn)行對比可W看出，本發(fā)明應(yīng)用例1的細(xì)胞增殖速率遠(yuǎn)高于對比例1胃 的，運(yùn)說明：本發(fā)明實(shí)施例的細(xì)胞培養(yǎng)基相比常規(guī)的DMM培養(yǎng)基更適合于高密度細(xì)胞培養(yǎng) 體系。
[0037] 應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加 W描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一 個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的運(yùn)種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說 明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施方式中的技術(shù)方案也可W經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可 W理解的其他實(shí)施方式。
[0038] 上文所列出的一系列的詳細(xì)說明僅僅是針對本發(fā)明的可行性實(shí)施方式的具體說 明，它們并非用W限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實(shí)施方式 或變更均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加組分，其中， 所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基； 所述添加組分及其濃度如下： D-匍萄糖，5-lOg/L; L_谷氨酰胺，5-7g/L; HEPES，5-7g/L; 丙酮酸鈉，6-10g/L; 各添加組分的濃度以所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)。2. 如權(quán)利要求1所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其特征在于： 以所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)，所述DMEM培養(yǎng)基的干粉 量為17~22g/L。3. 如權(quán)利要求2所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其特征在于： 以所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)，所述DMEM培養(yǎng)基的干粉 量為 19.5g/L。4. 如權(quán)利要求1所述的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其特征在于： 所述D-葡萄糖的濃度為7.5g/L，所述L-谷氨酰胺的濃度為6g/L，所述丙酮酸鈉的濃度 為8g/L。5. 如權(quán)利要求1至4中任意一項(xiàng)所述的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其特征在 于： 所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的pH值為7.2~7.6; 所述添加組分還包括酚紅鈉，所述酚紅鈉的濃度為15_20mg/L。6. 如權(quán)利要求1至4中任意一項(xiàng)所述的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基，其特征在 于： 所述適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基的滲透壓為320-360m0sm/L。7. 如權(quán)利要求1至6中任意一項(xiàng)所述的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)基在高密度 細(xì)胞培養(yǎng)體系中的應(yīng)用。8. 如權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于：所述高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系為高密度細(xì)胞培養(yǎng) 桶。
【文檔編號(hào)】C12N5/00GK106047788SQ201610702787
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月22日
【發(fā)明人】顏學(xué)恒, 周艷
【申請人】上海逍鵬生物科技有限公司