一種齊墩果烷衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物化學和藥物治療學領域,涉及一種齊墩果烷衍生物,具體涉及一種γ?谷氨酰轉肽酶(GGT)選擇激活的CDDO?Me前?前藥I的制備方法以及含有它們的藥物組合;該類化合物可用于二型糖尿病引起的慢性腎病。
【專利說明】
一種齊墩果烷衍生物
技術領域
[0001 ]本發(fā)明涉及藥物化學和藥物治療學領域,涉及一種齊墩果烷衍生物,具體涉及一 種γ -谷氨酰轉肽酶(GGT)選擇激活的CDDO-Me前-前藥設計、合成及抗糖尿病腎病活性評 價。該類化合物可用于二型糖尿病引起的慢性腎病。本發(fā)明還涉及這類化合物的制備方法 以及含有它們的藥物組合。
【背景技術】
[0002] 糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常見的并發(fā)癥之一,發(fā)生率高 達20-40%。在世界范圍內,糖尿病影響著超過3億人民。糖尿病患者的數量將會繼續(xù)增加, 特別是像中國和印度這樣人口老齡化的國家。例如,在中國,年齡超過65歲占總人口比例不 到7%。截至2030年,這個比例將會超過20%。年齡的增長和城市化導致了糖尿病和其并發(fā) 癥的產生。
[0003] 齊墩果酸(oleanolic acid,0A)及其衍生物是一類重要的五環(huán)三萜化合物,具有 抗炎、抗腫瘤和抗病毒等多種生物活性。通過對0A進行結構改造,合成了 A環(huán)含α-氰基-α,β_ 不飽和酮(a-cyan〇-a ,β-unsaturated ketone,CUK)的衍生物CDDO-Me。該化合物顯不了極 強的生物活性,已對其進行了多種疾病的臨床試驗。遺憾的是,在治療糖尿病慢性腎病 (diabetic nephropathy,DN)的III期臨床試驗中,發(fā)現CDDO-Me對心臟有嚴重毒副作用。其 后不久,經過方案改進,治療DN的臨床研究重新在日本開展。盡管臨床研究還在繼續(xù),但 ⑶D〇-Me的安全性已受到嚴重關注。因此,保留或增強⑶D〇-Me的藥效,降低其毒副作用是一 個亟需解決的挑戰(zhàn)性難題。
[0004] α,β_不飽和酮是許多活性天然產物和化學合成小分子中的藥效團,可以作為邁克 爾受體與體內多種生物大分子親核性基團(如半胱氨酸殘基的巰基)發(fā)生加成反應,通過共 價結合,調節(jié)細胞內眾多信號通路,發(fā)揮及其廣泛的生物學活性及疾病治療作用。研究表 明,CDD〇-Me通過激活ARE-Nrf2-Keapl信號通路產生抗炎活性,究其分子機理,主要是⑶D0-Me的A環(huán)α-氛基-α,β-不飽和酮(a-cyan〇-a,β-unsaturated ketone,CUK)與Keapl蛋白BTB 區(qū)域151位CYS的巰基發(fā)生邁克爾加成反應所致。
[0005] γ -谷氨酰轉肽酶(gamma-glutamyl transferase,GGT)是體內谷胱甘肽代謝的相 關酶之一,主要分布在腎臟組織。由于GGT具有組織分布特異性及能夠選擇性地水解谷氨酰 胺鍵的特點,故其常被用于腎靶向的前藥設計。然而,一般對α,β_不飽和酮保護的前藥策略 并不適用于⑶D〇-Me這樣一個具有⑶Κ結構的化合物。有鑒于此,我們采用前-前藥(pro-prodrug)策略,用4-谷氨酰胺芐基保護CUK的1,4加成物即前藥1中的烯醇羥基,得到了可 以在腎臟部位選擇性釋放CDDO-Me的前-前藥2,并對其進行了較為深入的生物活性評價。
【發(fā)明內容】
[0006] 本發(fā)明公開了一種齊墩果烷衍生物,其特征在于:一種γ-谷氨酰轉肽酶(GGT)選 擇激活的CDDO-Me前-前藥設計、合成及抗糖尿病腎病活性評價。藥理實驗證明,該類化合物 具有良好的抗糖尿病活性,因此,它們可用于預防和治療糖尿病腎病。
[0007] 本發(fā)明公開了一種齊墩果烷衍生物,其特征在于:通式I所示的化合物或其旋光異 構體,對映體、非對映體、外消旋體或外消旋混合物,或其藥學上可接受的鹽或酯:
[0008]
[0009] 其中:
[0010] R1代表氫原子,C1-C10直鏈或直鏈烷基,或者(C1-C10直鏈或支鏈亞烷基)-Q,其中 Q代表羥基或鹵素;
[0011] R2代表氫原子、或C1-C10直鏈或支鏈烷基、或者取代芳香基,Y代表氧(0)或硫(S);
[0012] R3代表氫原子或C1-C10直鏈或支鏈烷基;
[0013] 式I中標明的兩個手性中心(分別用* 1和*2表示)為R構型或S構型。
[0014]進一步地,通式1所示的化合物,其特征在于:
[0015] R1代表氫原子、甲基、乙基或丙基;
[0016] R2代表氫原子、甲基或乙基,Y代表氧原子;
[0017] R3代表氫原子或甲基;
[0018] 式I中手性中心*1為S構型,手性中心*2為R構型;
[0019] 具體來說,通式I所示化合物優(yōu)選自下列化合物:
[0020] 1-羥基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3),9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(化合物編號:1 1,下同):
[0021]
[0022] 1-甲氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷- 2(3),9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯(12)
[0023]
[0024] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2(3),9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯(1 3)
[0025]
[0026]下面藥理實驗中化合物的代號等同于此處代號所對應的化合物。
[0027] 本發(fā)明的另一目的在于提供本發(fā)明通式I所述化合物的制備方法,其特征為在于, 包括如下步驟:
[0028] 以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2_二氫喹啉(EEDQ)存在下與 4_氨基芐醇(III)縮合,生成酰胺化合物(IVKIV在三溴化磷的作用下,得到溴代物V。與此 同時,⑶D〇-Me經DMF/堿處理,得到烯醇化合物VI。烯醇VI與化合物V經醚化反應,得到烯醇 醚(VII)。最后脫去VII的Fmoc保護基,得到目標化合物I;合成路線如下:
[0029]
[0030] 這些化合物可按照常規(guī)分離技術加以純化。
[0031] 本發(fā)明的再一目的是提供本發(fā)明化合物I在制備預防或治療糖尿病腎病中的應 用。
[0032] 本文采用前-前藥策略,對⑶D〇-Me藥效團⑶K進行保護,再在腎臟高表達的GGT作 用下釋放⑶D〇-Me,這種策略好比在⑶D〇-Me的A環(huán)藥效團按上一個保護面具,在一定程度上 掩蓋和降低了其對非靶部位的攻擊性,但在靶部位則暴露出活性藥效團
[0033] 本發(fā)明化合物I抗糖尿病腎病的藥理實驗方法與結果如下:
[0034]實驗方法:10周齡的db/db 2型糖尿病小鼠適應性飼養(yǎng)一周,自由飲食飲水,隨機 分組,分為模型組(Model組),Q)D0-Me(0.6mg/kg)組,Ii(lmg/kg)組,Ii(2mg/kg),每組6只,6 只C57BLKs/Jdb/m作為正常對照組。每日上午腹腔注射給藥,正常組和模型組給予等容量的 蒸餾水,連續(xù)12周。實驗開始所有小鼠稱重編號,每兩天稱重記錄體重,共12周。小鼠每三只 一籠,每兩天記錄每籠飲水量和進食量。每日觀察各組小鼠毛色、神態(tài)、尿量和行為活動等。 在實驗11周,禁食不禁水12小時后,采用歐姆龍血糖儀HEA-232型,歐姆龍血糖試紙HEA-STP30,測定每只小鼠的12小時空腹血糖。在實驗進行至11周時,用代謝籠分別收集每只小 鼠24小時尿液標本。所有小鼠于前一晚7點開始禁食,飲水不限,24小時后結束尿液收集,準 確稱量每只鼠的尿液體積,高速離心取上清液用于尿蛋白,尿肌酐等含量測定,并于_78°C 保存尿液樣本。實驗12周,將所有實驗動物用10%水合氯醛麻醉,眼球取血處死。剪斷靜脈, 用頭皮針插進左心室,用PBS緩慢沖洗,直到流出的液體由紅色變?yōu)闊o色,在換成多聚甲醛 固定組織。用手術刀片輕輕切下腎臟兩端的組織完整薄切片(參照TEM樣品制備方法),切 片迅速保存于3%戊二醛溶液中,以備電鏡檢查。摘取其它重要臟器如心、肝、肺等,3只保存 于4%甲醛溶液中,3只用液氮速凍,于-78°C冰凍保存。
[0035] 表1中列出了本發(fā)明化合物h對小鼠體重和飲水體重的影響:
[0036] 表1.本發(fā)明化合物I對小鼠體重和飲水進食的影響(n = 6j ±SEM)
[0037]
[Oujb」 Data tor body weight are meanzt^KM. statistic significance was calculated with One-way AN0VA,Tukey's test.*,p<0.05,**,p<0.01,***,p<0.001.
[0039] 表2中列出了本發(fā)明化合物^對小鼠血漿尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐 (Creatinine)水平的影響:
[0040] 表2 ·本發(fā)明化合物Ii對小鼠血漿尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Creatinine)水 平的影響(n = 6,x ±SEM)
[0041]
[0042] 表3中列出了本發(fā)明化合物Ιι對小鼠尿白蛋白對肌酐比值(urine albumin to creatinine ratios,UACR)的影響:
[0043] 表3中列出了本發(fā)明化合物I i對小鼠 UACR的影響
[0044]
[0046] 糖尿病腎病是糖尿病損害腎臟而發(fā)生的病理改變,是糖尿病最常見的微血管病變 之一。隨著糖尿病發(fā)病率逐年上升,糖尿病腎病已成為導致終末期腎病的主要原因,嚴重影 響了人類的生命健康及生存質量。在上述體內實驗完成后,取動物的腎臟切片后進行不同 的組織染色(HE,Mass 〇n以及PAS),并采用電鏡檢測腎臟組織的微結構,以考察化合物1丄以 及⑶D〇-Me對腎臟組織的保護作用。
[0047] HE染色(Figure 1)
[0048] 與正常組相比,模型組腎小球中重度纖維化,纖維化處細胞數明顯減少,彌漫性腎 小球系膜區(qū)增寬,毛細血管壁增厚明顯,結構不清;球囊壁增厚及球囊黏連,并可見腎小管 擴張伴上皮細胞空泡樣改變,腎間質纖維化并伴明顯炎性細胞浸潤。CDDO-Me組腎小球纖維 化程度,腎小球系膜增厚,毛細血管壁增厚,球囊壁增厚及球囊黏連均有所改善;腎小管中 度擴張伴上皮細胞空泡樣改變,間質輕中度纖維化伴輕度炎性細胞浸潤未見明顯改善。Ii 的藥效與CDDO-Me組基本相近。結論:病理切片數據顯示,^對糖尿病小鼠的腎臟結構具有 與⑶D〇-Me接近的保護作用。
[0049] Masson染色(Figure 1)
[0050] 在糖尿病腎病發(fā)病過程中,隨著疾病的發(fā)展,腎小球會出現不同程度的纖維化病 變,影響腎小球的結構和正常生理功能,我們通過Masson染色評價腎臟組織的纖維化病變 的情況。模型組:腎小球中被苯胺藍所染的纖維化組織重度堆積,表明纖維化程度嚴重。 CDD〇-Me組及I i處理的db/db小鼠腎小球Mas son所染的纖維化組織顯著減少,表明,CDD〇-Me 和化合物Ιι均能有效改善糖尿病小鼠腎臟的纖維化病變,其中Ii(lmg/kg)與CDDO-Me相當, I! (2mg/kg)對纖維化病變的改善略優(yōu)于CDDO-Me組。
[0051] PAS染色(Figure 1)
[0052] 在糖尿病腎病發(fā)展過程中,糖蛋白會在腎小管和毛細血管沉積,加劇腎臟的炎癥 反應,我們通過PAS染色觀察腎臟組織系膜基質、基底膜形態(tài)改變。模型組:腎小球與腎小管 細胞內大量糖原蛋白沉積,可見結節(jié)。CDDO-Me與低劑量組均明顯改善腎小球與腎小管細 胞內糖原蛋白沉積,仍可見少量結節(jié),^高劑量組:腎小球與腎小管細胞內只有少量糖原蛋 白沉積,不見結節(jié)。腎臟組織的PAS染色結果表明,化合物IjPCDDO-Me均能有效改善糖尿病 小鼠腎臟的糖原沉積,其中Ii (lmg/kg)與CDDO-Me相當,Ii( 2mg/kg)對糖原沉積的降低優(yōu)于 CDDO-Me 組。
[0053]電鏡下小鼠腎臟變化(Figure 2)
[0054] 足細胞位于腎小球毛細血管壁最外層,其與基底膜和內皮細胞共同組成腎小球血 液濾過屏障。足細胞在維持腎小球正常形態(tài)結構和濾過膜選擇通透性中起重要作用。在糖 尿病腎病發(fā)生過程中,足細胞有明顯的形態(tài)變化,發(fā)生融合或者脫落,最終導致球囊粘連和 腎小球硬化,影響腎臟的基本功能。為此考察了化合物IjPCDDO-Me組電鏡下小鼠腎臟變 化。
[0055] 與正常組相比,模型組腎小球基底膜明顯增厚,足細胞足突廣泛融合、脫落明顯, 基底膜結構不完整。CDDO-Me:腎小球小球基底膜輕度增厚,足細胞足突局部融合,結構較完 整。iKlmg/kg)組:腎小球基底膜輕度增厚,足細胞足突偶見局部融合,結構尚可。hUmg/ kg)組:腎小球基底膜輕度增厚,足細胞足突偶見局部融合,結構基本完整。電鏡結果表明, IjPCDDO-Me均能有效緩解糖尿病腎病基底膜增厚的情況,改善足細胞的融合和脫落,保證 使腎臟能夠更好的發(fā)揮濾過功能。
[0056] UPCDD〇-Me對腎上皮細胞(293T)和心肌細胞(H2C9)的毒性試驗 [0057]由于GGT表達的差異,1!在心臟組織和腎臟釋放原藥⑶D〇-Me應該存在較大差異。 而高濃度的⑶D〇-Me存在細胞毒作用,因此我們通過MTT試驗評價I!和⑶D〇-Me對心肌細胞 和腎上皮細胞毒性差異。結果表明,I^H2C9和293T的毒性均遠低于CDD〇-Me。因293T細胞 有GGT表達,因此在293T細胞中,1!最終會轉化為⑶D〇-Me,從而產生細胞毒作用,但I!釋放 CDD〇-Me需要時間,因此Id#293T細胞的毒性也低于CDD〇-Me。Id#H2C9中的毒性極低,可能 心臟細胞中缺乏GGI 1酶,h不易轉化為⑶D〇-Me有關。由此可以推斷前-前藥h具有顯著下降 的心肌細胞毒性。
[0058] 表4 Antiproliferative Activity of Compounds
[0059]
[0060] Ii和⑶D〇-Me對小鼠的急毒試驗
[0061] 我們采用ICR小鼠進行IjPCDDO-Me的急毒實驗,采用雌性小鼠,隨機分組,每組10 只,采用腹腔注射,單次大劑量給藥,其中CDDO-Me劑量為200,400,500,600mg/kg,I!的劑 量為400,600,800,lOOOmg/kg。給藥后觀察7天,每天記錄小鼠的活動情況和存活率,采用 SPSS軟件分析數據計算LD5Q。結果表明,h在整體動物水平急性毒性略低于CDDO-Me。
[0062]表5.Acute toxicity of Ii and CDDO-Me in mice
[0063;
[0064] UPCDD〇-Me 對 hERG 作用的差異。
[0065] HERG(humanetherago-gorelatedgene)編碼心肌快速激活的延遲整流鉀通道 (IKr)的α亞基,HERG鉀通道在復極化的過程中發(fā)揮重要的作用,是抗心律失常藥物作用的 一個重要靶點。HERG鉀通道檢測結果表明(圖3),化合物I!和⑶D〇-Me對hERG通路的毒性均 較小,而在最高濃度200μΜ時,CDD〇-Me的抑制率略高于h,提示IdthERG的毒性略低于CDD0- Me〇
[0066] db/db小鼠心臟組織TUNEL原位凋亡檢測
[0067] 為了評價小鼠心肌組織的細胞凋亡情況,我們對心肌組織切片進行了 TUNEL原位 凋亡檢測,用以評價Ii和⑶D〇-Me對心肌細胞凋亡情況的影響。結果如圖4顯示,CDD〇-Me的 凋亡情況與模型組相似,無顯著性差異,而Ii(lmg/kg)和Ii(2mg/kg)能改顯著降低db/db小 鼠心肌凋亡程度。這一結果表明,在整體動物水平,iKlmg/kg)和I^mg/kg)對心臟組織的 毒性低于CDD〇-Me。
[0068]以上藥理學數據顯示,本發(fā)明涉及的γ_谷氨酰轉肽酶(GGT)選擇激活的⑶D〇-Me 前-前藥1!能夠發(fā)揮顯著的腎臟保護作用,其效果與⑶D〇-Me相當,并且毒性小于⑶D〇-Me。
【附圖說明】
[0069] 圖1:各組腎組織染色。
[0070]圖2:各組腎組織電鏡超微結構。
[0071] 圖3:HERG鉀通道檢測結果。
[0072]圖4:對心肌細胞凋亡情況的影響。
[0073]圖1-4的具體解釋
[0074] 圖 1:各組腎組織染色:Control group ;Model group (db/db mice); CDD〇-Me (0.65mg/kg)treated db/db mice ; Ii(lmg/kg)treated db/db mice;Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
[0075] 圖 2:各組腎組織電鏡超微結構:(A)Control group;(B)Model group(db/db mice);(C)CDDO-Me(O.65mg/kg)treated db/db mice;(D)Ii(lmg/kg)treated db/db mice;(E)Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
[0076] 圖4:對心肌細胞凋亡情況的影響:(A)Control group;(B)Model group(db/db mice);(C)CDDO-Me(O.65mg/kg)treated db/db mice;(D)Ii(lmg/kg)treated db/db mice;(E)Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
【具體實施方式】
[0077] 為了進一步闡明本發(fā)明,下面給出一系列實施例,這些實施例完全是例證性的,它 們僅用來對本發(fā)明具體描述,不應當理解為對本發(fā)明的限制。
[0078] 實施例1
[0079] N2-(芴甲氧羰基)-N5-(4-(甲基)苯基)-L_谷氨酸-甲酯(IV)
[0080] 11
[0081 ]將Fmoc_Glu-〇Me(II,425mg,1mmo1)和4-氣基節(jié)醇(TTT,123mg,lmmol)溶于20ml二 氯甲燒,加入2-乙氧基-1-乙氧碳?;?1,2-二氫喹啉(2-ethoxy-1-ethoxy carbonyl-12-dihydroquinoline,EEDQ) (296mg,1 · 2mmol),氮氣保護,室溫下反應攪拌12小時。反應液用 50ml二氯甲烷稀釋,加入1N的稀鹽酸終止反應。有機層依次用飽和碳酸氫鈉、和飽和食鹽 水、各洗3次,無水硫酸鈉干燥,過濾,濃縮,硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 2:1)得淡黃固 體 IV(424mg,80%)。
[0082] mp:193-194〇C;1H NMR(300MHz,DMS0):δ9.90(s,ΙΗ,ΝΗ),7.90(d,2H,Ar H),7.85 (m,NH Fmoc),7.74(d,2H,Ar H),7.54(d,2H,Ar H),7.42(m,2H,Ar H),7.34(m,2H,Ar H), 7.23(d,2H,Ar H),5.10(t,lH,0H),4.43(d,2H,Fmoc CH2),4.33(m,2H,benzyl-CH2),4.23 (m,lH,Glu-a),4.12(m,lH,Fmoc CH),3.65(s,3H,0CH3),2.44(m,2H,Glu-y ),2.10(m,lH, l/2Glu-0),1.9O(m,lH,l/2Glu-0) ;13C NMR(75MHz,CDC13)J172.7,169.9,156.1,143.7, 140·7,137·8,137·1,127·6,127·0,127·9,126·9,125·2,120·1,118·7,65·7,62·6,53·4, 46.6,40.3,32.4,26.2; ESI-MS(m/z):524.2[M+Na]+;HRMS(m/z):[M+Na]+calculated C 28H28N2〇6Na 511.1845,found 511.1855,PPM error 2.0.
[0083] N2-(芴甲氧羰基)-N5-(4-(溴甲基)苯基)-L_谷氨酸-甲酯(V)
[0084]
[0085] 將中間體IV(530mg,lmmol)溶于10mL無水四氫咲喃,冰浴條件下滴加三溴化磷 (410mg,1.5mmol),0°C攪拌反應30分鐘,加入飽和碳酸氫鈉淬滅反應,加入乙酸乙酯50ml稀 釋,有機層用飽和食鹽水洗三次,無水硫酸鈉干燥,過濾,濃縮,硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙 酯=2:1)得淡黃色固體V( 467mg,85 % )。
[0086] 1^:156-1581^? 匪R(300MHz,CDCl3)J8.25(s,lH,NH),7.75(d,2H,ArH),7.55 (m,4H,Ar H),7.38(m,2H,Ar H),7.29(m,4H,Ar H),5.70(d,lH,NH Fmoc),4.39(m,5H,Fmoc CH2,benzyl-CH2,Glu-aH),4.17(t,lH,Fmoc CH),3.72(s,3H,0CH3),2.35(m,3H,Glu-y , Glu-0),1.97(m,lH,l/2Glu-0);13C 匪R(75MHz,CDC13)J172.2,170.3,156.7,143.7, 143.5,141.3,141.2,138.1,133.4,129.7,127.7,127.0,125.0,124.9,112·0,67·1,53·3, 52.6,47.4,33.7,33.3,29.4;IR(neat,cm-l):1735(s),1700(s),1662(s),1555(s),1273 (m).
[0087] 丨-羥基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰?;? a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]- 12-雙氧代齊墩果烷-2(3),9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(VIIi)
[0088]
[0089] 將CDD0-Me(298mg,0 · 59mmol)溶解于 10ml的DMF中,加入純水(106mg,5 · 9mmol), K2C03 (162 · 8mg,1 · 18mmol)室溫攪拌過夜,加入化合物V( 325mg,0 · 59mol)繼續(xù)攪拌0 · 5h,加 入IN的稀鹽酸5ml終止反應。反應液加入適量二氯甲燒(50mL)稀釋,飽和碳酸氫鈉溶液和飽 和食鹽水各洗滌3次。有機層用無水硫酸鈉干燥,過濾,濾液濃縮得淡黃色固體,經快速硅膠 柱層析制得白色固體VII(305mg,53% )。
[0090] πιρ:167-16%~;1Η NMR(300MHz,CDC13):S8.38(s,lH,NH),7.77(d,2H,Ar Η),7·59 (m,4H,Ar H),7.40(m,2H,Ar H),7.31(m,4H,Ar H),5.87(s,lH,CDD0 CllH),5.70(d,lH, NHFmoc),5.43(m,2H,benzyl-CH2),4.51(d,2H,Fmoc CH2),4.43(m,2H,Glu-a,CDD0 C1H), 4.20(m,lH,Fmoc CH),3.75(s,3H,0CH3),3.69(s,3H,0CH3),2.38(m,2H,Glu-y),2.00(m, 3H),1.88(m,2H),1.28(s,3H),1.16(s,6H),1.06(s,3H),1.01(s,3H),0.99(s,3H),0.89(s, 3H);13C NMR(75MHz,CDC13):Sl99.1,177.8,175.1,172.9,171.8,169.9,156.3,143.2, 143·0,137.9,130.7,128.5,127.3,126.6,124.6,124.2,119.7,119.5,119.2,84.1,73.9, 73·3,66·7,59·9,52·8,52·3,51·4,49·4,46·8,46·6,45·0,44·0,41·9,40·4,40·2,35·4, 33.9,33.2,32.8,32.3,31.0,30.2,29.2,28.9,28.1,27.7,23.4,23.2,22.6,22.2,21.1, 20.6,19.9,17.8,13.7;IR(neat,cm-l):2949(w),2206(s),1718(s),1660(s),1519(s), 1217(m),l〇62(m);ESI-MS(m/z):1016.5[M+Na]+;HRMS(m/z):[M+Na]+calculated C60H71N3010Na 1016.5037,found 1016.5062,PPM error 2.5.
[0091] 丨-羥基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯- L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3),9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯(1〇
[0092]
[0093] 化合物VII (720mg,0.72mmo 1)溶于1 OmL無水CH2C12,加入2ml二乙胺,室溫攪拌1小 時。反應液〇°C下用5%稀鹽酸調節(jié)至近中性,二氯甲烷(100mL)稀釋,有機層用飽和碳酸氫 鈉溶液、飽和食鹽水各洗滌3次,無水硫酸鈉干燥,過濾,濾液濃縮得淡黃色固體,經快速硅 膠柱層析制得白色固體11 (396mg,71 % )。
[0094] 1^:158-1601^? 匪R(300MHz,Me0D):δ7·59(2Η,ΑΓ H),7.38(2H,Ar H),5.87(s, 1H,CDD0 CiiH),5.42(m,2H,benzyl-CH2),3.72(s,3H,0CH3),3.69(s,3H,0CH3),3.01(m,2H), 2.5(m,2H,Glu-y),1.96(m,3H),1.68(m,3H),1.27(s,3H),1.17(s,6H),1.10(s,3H),1.05 (s,3H),0.97(s,3H),0.89(s,3H);13C 匪R(75MHz,MeOD):δ202·1,179·9,178·7,176·9, 176.2.172.5.140.6.132.9.132.8.130.1.129.4.126.3.121.1.88.5.75.2.75.0. 53.8, 53·5,52·4,51·0,46·7,45·8,43·8,42·4,41·8,37·2,35·4,34·0,33·7,33·3,33·0,31·9, 31.5,30.8,29.4,28.7,24.7,24.3,23.8,23.5,21.6,20.8,19.4;IR(neat,cm-l):2978(s), 2945(s),2208(s),1720(s),1662(s),1521(s),1219(m),1064(m);ESI-MS(m/z):772.5[M+ H] +;HRMS(m/z):[M+H]+calculated C45H6iN3〇8Na 772.4537,found 772.4551,PPM error 1.8.
[0095] 卜甲氧基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰?;? a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧 基]-12-雙氧代齊墩果烷-2(3),9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(VII 2)
[0096] 參照VII1的合成方法,將CDD〇-Me(298mg,0 · 59mmo 1)溶解于10ml的DMF中,加入無 水甲醇(188mg,5.9mmol),K2C〇3(162.8mg,1 · 18mmol)室溫攪拌過夜,加入化合物V(325mg, 0.59mol)繼續(xù)攪拌0.5h,加入IN的稀鹽酸5ml終止反應。反應液加入適量二氯甲烷(50mL)稀 釋,飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水各洗滌3次。有機層用無水硫酸鈉干燥,過濾,濾液濃縮 得淡黃色固體,經快速硅膠柱層析制得白色固體VII 2(269mg,38% )。h-NMlK300MHz, CDC13),S(ppm):8.36(s,lH),7.76(d,2H,J=7.44Hz),7.58(m,5H),7.42,7.40,7.37(m, each lH),7.33,7.31,7.26,7.19(m,each lH),5.78(s,lH),5.72(d,lH,J=7.98Hz),5.44 (q,3H),4.44(d,4H,J=6.57Hz),4.19(t,lH),4.01(s,lH),3.74(s,3H),3.69(s,3H),3.49 (s,4H),3.06(d,lH,J=13.38Hz),2.92(d,lH,J = 4.38Hz),2.39(d,2H,J = 5.49Hz),2.33 (m,2H,J=11.7Hz),2.01,1.98,1.91,1.86,1.85,1.82(m,each 1Η),1·23,1·13,1·11, 1.04,1.01,0.91,0.88,0.83,0.80(s,each 3H);13C-NMR(75MHz,CDC13),S199.33,177.85, 176.29.172.46.171.72.169.85.143.23.143.00. 140.86.137.87.130.77.128.47.127.30, 126.60,124.49,123.89,120.66,119.56,119.54,119.23,83.053,82.80,76.96,76.54, 76.12,73.39,66.68,57.73,52.80,52.21,51.33,49.35,46.87,46.66,44.90,43.72, 42.08,41.11,40.15,35.48,34.03,33.29,32.76,32.38,31.42,31.10,30.32,30.19, 29·11,28·81,27·89,27·80,23·40,23,20,22·60,22·24,20·51,20·17,17·95,13·61·
[0097] 1-甲氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2(3),9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯(1 2)
[0098] 將化合物VII2(720mg,(h72mmol)溶于10mL無水CH2C12,加入2ml二乙胺,室溫攪拌1 小時。反應液〇°C下用5%稀鹽酸調節(jié)至近中性,二氯甲烷(100mL)稀釋,有機層用飽和碳酸 氫鈉溶液、飽和食鹽水各洗滌3次,無水硫酸鈉干燥,過濾,濾液濃縮得淡黃色固體,經快速 硅膠柱層析制得白色固體12(24311^,41^)01^:156-1681^4-^^(3001^,1^00,)57.60((1, 2H,J = 7.71Hz),7.38(d,2H,J = 7.77Hz),5.87(s,lH),5.43(m,2H),4.45(s,lH),3.72(d, 3H,J=11.7Hz),3.01(s,2H),2.52(m,2H),2.15(m,lH),1.97(m,lH),1.63(s,2H),1.53(d, 3H,J=1.44Hz),1.41(m,3H),1.17(s,6H),1.10(s,3H),1.05(s,3H),0.97(s,3H),0.89(s, 6H); 13C-匪R(75MHz,Me0D):δ199·46,177·87,176·18,172·77,171·76,169·96,156·29, 143.23, 143.01,140.82,137.88,130.81,128.45,127.30,126.60,124.54,123.86, 120.72,119.56,119.23,83.35,81.40,76.99,76.57,76.15,73.33,66.69,65.12,52.95, 52.84,52.22,51.35,49.37,46.87,46.63,44.91,43.67,41.76,41.06,40.13,36.08, 35.40,34.04,33.26,32.77,32.38,31.42,31.10,30.93,30.31,30.19,29.94,29.69, 29.19,28.86,27.84,26.71,26.58,24.35,23.36,22.97,21.29.
[0099] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(N_9-芴甲氧羰?;?a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧 基]-12-雙氧代齊墩果烷-2(3),9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(VII 3)
[0100] 參照VII1的合成方法,將CDD〇-Me(298mg,0 · 59mmo 1)溶解于10ml的DMF中,加入無 水乙醇(271.4mg,5.9mmol),K2C〇3(162.8mg,1 · 18mmol)室溫攪拌過夜,加入化合物V(325mg, 0.59mol)繼續(xù)攪拌0.5h,加入IN的稀鹽酸5ml終止反應。反應液加入適量二氯甲烷(50mL)稀 釋,飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水各洗滌3次。有機層用無水硫酸鈉干燥,過濾,濾液濃縮 得淡黃色固體,經快速硅膠柱層析制得白色固體VII 3(295mg,39% )。h-NMlK300MHz, CDC13):S8.31(s,lH),7.77(d,2H,J=7.5Hz),7.59(m,4H),7.41(t,2H),7.32(t,3H),5.76 (s,lH),5.64(d,lH,J=10.5Hz),5.44(q,2H),4.46(m,3H),4.45(m,3H),4.20(t,lH),4.09 (s,lH),3.90(t,lH),3.76(s,lH,J=4.56Hz),2.38(m,3H),2.05(m,2H),1.85(m,2H),1.70 (m,2H,),1.60(s,10H),1.48(m,2H),1.25(s,12H),1.23(s,7H),1.13(s,5H),1.09(m,4H), 1.07(s,lH),1.05(s,3H),1.01(d,6H,),0.88(m,6H); 13C-MMR(75MHz,CDC13):Sl99.46, 177.87,176.18,172.77,171.76,169.96,156.29,143.23,143.01,140.82,137.88,130.81, 128.45,127.30,126.60,124.54,123.86,120.72,119.56,119.23,83.35,81.40,76.99, 76·57,76·15,73.33,66.69,65.12,52.95,52.84,52.22,51.35,49.37,46.87,46.63, 44.91,43.67,41.76,41.06,40.13,36.08,35.40,34.04,33.26,32.77,32.38,31.42, 31·10,30.93,30.31,30.19,29.94,29.69,29.19,28.86,27.84,26.71,26.58,24.35, 23.36,22.97,21.29.
[0101] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2(3),9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯(1 3)
[0102] 化合物VII3 (7 20mg,0.72mmo 1)溶于1 OmL無水CH2C12,加入2ml二乙胺,室溫攪拌1小 時。反應液〇°C下用5%稀鹽酸調節(jié)至近中性,二氯甲烷(100mL)稀釋,有機層用飽和碳酸氫 鈉溶液、飽和食鹽水各洗滌3次,無水硫酸鈉干燥,過濾,濾液濃縮得淡黃色固體,
[0103] 經快速硅膠柱層析制得白色固體13(3051^,56^)01^:153-1651:/11-^^(30010^, Me0D),S7.60(d,2H,J = 8.25Hz),7.39(d,2H,J = 8.25Hz),5.82(s,lH),5.45(m,2H),4.82 (s,3H),4.17(s,lH),3.90(m,lH),3.72(d,6H,J=13.77Hz),3.64,3.59(s,each 1Η),3·52 (m,2H), 3.03(s,2H),2.53(t,2H),2.16(m,2H),2.04(m,3H),1.95(m,2H),1.81(m,2H), 1.72(s,lH),1.65(s,5H),1.53(3H),1.42(3H),1.17(m,6 Η),1·12,1·09,1·06,0·97,0·91 (s,each 3H) ;13C-匪R(75MHz,Me0D):Sl99.46,176.97,175.63,173.81,170.29,137.44, 129·83,127·89,122·45,119·11,118·19,83·06,80·41,72·37,63·93,51·55,49·93,49·56, 48.19,46.98,46.70,46.41,46.13,45.84,45.73,45.56,45.28,43.96,42.79,41.13, 40.29,38.94,34.31,32.55,31.12,30.83,30.15,29.19,28.70,27.86,27.64,27.57, 27.39,26.63,25.93,21.60,21.24,20.93,20.84,20.63,18.97,18.21,16.57,15.49, 13·10,11·56〇
【主權項】
1. 一種齊墩果烷衍生物,其特征在于:通式I所示的化合物或其旋光異構體,對映體、非 對映體、外消旋體或外消旋混合物,或其藥學上可接受的鹽或酯:其中: Rl代表氫原子,Cl-Cio直鏈或直鏈烷基,或者(C1-C10直鏈或支鏈亞烷基)-Q,其中Q代 表羥基或鹵素; R2代表氫原子、或Cl-ClO直鏈或支鏈烷基、或者取代芳香基,Y代表氧(O)或硫(S); R3代表氫原子或Cl-ClO直鏈或支鏈烷基; 式I中標明的兩個手性中心,分別用*1和*2表示,為R構型或S構型。2. 根據權利要求1的一種齊墩果烷衍生物,其特征在于:所述的通式I化合物或其對映 體、非對映異構體及其藥學上可接受的鹽,Rl代表氫原子、甲基、乙基或丙基; R2代表氫原子、甲基或乙基,Y代表氧原子; R3代表氫原子或甲基; 式I中手性中心*1為S構型,手性中心*2為R構型。3. 根據權利要求1的一種齊墩果烷衍生物,其特征在于:所述化合物選自: 1-羥基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷_2(3),9 (11)-雙烯-28-羧酸甲酯 1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3),9 (11)-雙烯-28-羧酸甲酯 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3),9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯。4. 根據權利要求1的一種齊墩果烷衍生物,其特征在于:其特征在于: 通式I所示化合物的制備方法包括如下步驟: 以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳?;?1,2-二氫喹啉(EEDQ)存在下與4-氨 基芐醇(III)縮合,生成酰胺化合物(IV)tJV在三溴化磷的作用下,得到溴代物V。與此同時, CDDO-Me經DMF/堿處理,得到烯醇化合物VI。烯醇VI與化合物V經醚化反應,得到烯醇醚 (VII)。最后脫去VII的Fmoc保護基,得到目標化合物I;合成路線如下: UUU-IVIO其中,R的定義如前所述。5. -種藥物組合物,其中含有治療有效量的權利要求1所述的通式I化合物、或其對映 體和非對映異構體或其藥學上可接受的鹽及載體。6. 權利要求1的通式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備預防或治療糖尿病腎病有 關的疾病的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P13/12GK106008650SQ201610329985
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月13日
【發(fā)明人】張奕華, 黃張建, 徐曉軍, 牟伊
【申請人】中國藥科大學