一種基于Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域的雙重抗腫瘤多肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于Eps8?SH3結(jié)合域的雙重抗腫瘤多肽，該多肽的氨基酸序列為L(zhǎng)ys?Tyr?Ala?Lys?Ser?Lys?Tyr?Asp?Phe(SEQ ID No：1)。本發(fā)明所述的雙重抗腫瘤多肽既能夠誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞，有效殺傷HLA?A*2402陽性、Eps8陽性腫瘤，又能夠直接抑制HLA?A*2402陽性、Eps8陽性腫瘤細(xì)胞增殖，可用于制備雙重抗腫瘤的藥物。
【專利說明】
一種基于Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域的雙重抗腫瘤多肽
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及來自哺乳動(dòng)物的多肽，該多肽具有抗腫瘤活 性，適用于制備抗腫瘤藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 多肽藥物在臨床應(yīng)用上具有非常重要的開發(fā)價(jià)值。部分多肽藥物具有促進(jìn)機(jī)體免 疫功能的作用，稱為多肽疫苗。誘導(dǎo)強(qiáng)且特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答的新型腫瘤抗原的鑒定保 證了針對(duì)各種類型腫瘤的多肽疫苗的開發(fā)和臨床應(yīng)用（Reche P，et al.J Immunol Res 2015；2015:349049；Jazirehi AR,et al.Cancer Res 2011；71(4):1406-1417；Andersen RS,et al.Cancer Immunol Immunother 2011;60(2):227-234;Gritzapis AD,et al.Cancer Res 2010；70(7):2686-2696；Klepin HD,et al.Oncologist 2009；14(3):222-232.)。迄今為止，已有許多實(shí)用腫瘤相關(guān)抗原衍生多肽的臨床試驗(yàn)，均在不同程度上誘導(dǎo) 出抗腫瘤免疫應(yīng)答(Walter S，et al .Nat Med2012; 18(8): 1254-1261 ;Bae J，et al .Clin Cancer Res 2012；18:485〇-60；Slingluff CJ,et al.Clin Cancer Res 2007；13:6386-95；Slingluff CJ,et al.Clin Cancer Res 2009；15:7036-44；Slingluff CJ,et al.J Clin Oncol 2011;29:2924-32.)
[0003] 由于治療驅(qū)動(dòng)的免疫選擇會(huì)導(dǎo)致腫瘤抗原的刪除、突變或下調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì) 胞免疫逃逸，因此，對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展必不可少的腫瘤相關(guān)抗原是免疫療法的理想靶標(biāo)， 可將腫瘤免疫逃逸的風(fēng)險(xiǎn)降至最低。
[0004] Eps8,即表皮生長(zhǎng)因子受體通路底物8(Epidermal growth factor receptor Pathway Substrate 8，Eps8)，是表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR，Epidermal Growth Factor Receptor)重要的激酶活性底物之一。已經(jīng)證實(shí)，Eps8在許多腫瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，包括宮 頸癌（Chen YJ，et al .Mol Cancer Ther 2008;7:1376-85.)、結(jié)直腸癌（Maa MC，et al.J Biol Chem2007;282:19399-409.)、垂體瘤（Xu M，et al.Endocrinology 2009;150:2064-71.)、口腔鱗癌（Chu PY，et al.Asia Pac J Clin Oncol 2012;8:e77-81.)、胰腺導(dǎo)管癌 (Welsch T，et al.Cancer Lett 2007;255:205-18.)、乳腺癌（Yao J，et al.Cancer Res 2006;66:4065-78.)、甲狀腺癌（Griffith 0L，et al.J Clin Oncol 2006;24:5043-51.)、 食管癌（Bashir M，et al .Cell Commun Signal 2010;8:13.)及惡性膠質(zhì)瘤（Ding X，et al.Oncol Rep 2013 ; 29 : 697-703 .)等實(shí)體腫瘤，及多發(fā)性骨髓瘤（李玉華等.山東醫(yī)藥 2011;51:9-11.)、白血?。↙i YH，et al.Clin Lab 2013 ； 59( 11~12): 1261-1269 ；Li YH,et al.Leuk Res 2015;39(6):575-581 ;Kang H,et al.Blood2012; 119:1872-81.)等血液系統(tǒng) 腫瘤。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Eps8表達(dá)上調(diào)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，降低 藥物敏感性，與腫瘤患者預(yù)后差密切相關(guān)(胃618〇111'，6丨31.〇311〇61'1^1^ 2007;255:205-18；Chen YJ,et al.Mol Cancer Ther 2008；7:1376-85；Ding X,et al.Oncol Rep 2013； 29:697~703；Li YH,et al .Future Oncol 2013;9( 10): 1587-1594?)。以上研究說明Eps8是 腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵分子和預(yù)后因子。
[0005]另有部分多肽藥物發(fā)揮抑制腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)活性的作用，稱為多肽抑制 劑。這類多肽藥物以阻斷促瘤相關(guān)信號(hào)通路為目的。近十年已有多個(gè)抗腫瘤多肽藥物被批 準(zhǔn)上市，如應(yīng)用于前列腺癌的促性腺激素釋放激素(GnRH)詰抗劑abarelix(Abarelix: abarelix-depot-F,abarelix-depot-M,abarelix-L,PPI 149,R 3827.Drugs R D 2003；4 (3): 161-166.)和degarelix(Frampton JE,et al .Drugs 2009;69(14): 1967-1976.)，及應(yīng) 用于多發(fā)性骨髓瘤的蛋白酶體抑制劑carfilzomib (McCormack PL .Drugs 2012;72(15): 2023-2032. )〇
[0006] 公開號(hào)為CN 103694333A的專利申請(qǐng)公開了一種EPS8抗腫瘤CTL表位肽，并驗(yàn)證了 其促進(jìn)CTL細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的效果。但是，本發(fā)明人的后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，上述CTL表位肽的腫 瘤細(xì)胞增殖抑制效果不理想，抑制率均低于50%。
[0007] 因此，開發(fā)雙重抗腫瘤效應(yīng)的多肽，即，該多肽既可促進(jìn)CTL細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，又 可直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖、克隆形成，對(duì)抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)具有重大意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題的提供一種基于Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域的雙重抗腫瘤多肽， 該多肽既可引發(fā)相應(yīng)分子特異性的CTL，又可阻斷Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域相關(guān)信號(hào)通路，抑制腫瘤 細(xì)胞的增殖。
[0009] 本發(fā)明解決上述問題的技術(shù)方案為：
[0010] 一種基于EPS8-SH3結(jié)構(gòu)域的雙重抗腫瘤多肽，該多肽的氨基酸序列為1^8-17^ Ala-Lys-Ser-Lys-Tyr-Asp-Phe(SEQ ID No：l)〇
[0011] 上述雙重抗腫瘤多肽可按SEQ ID NO: 1所示序列采用固相合成法合成得到。
[0012] 上述雙重抗腫瘤多肽位于Eps8-SH3結(jié)合域上，既具有免疫原性，又可阻斷Eps8- SH3結(jié)構(gòu)域相關(guān)的信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，因此可用于制備免疫抑制和殺傷腫瘤細(xì) 胞的雙重抗腫瘤的藥物。
[0013] 本發(fā)明所述的雙重抗腫瘤多肽能夠誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答，表現(xiàn)為刺激特異 性T細(xì)胞分泌高水平IFN-y并對(duì)Eps8陽性腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生特異性殺傷效應(yīng)。本發(fā)明所述的雙 重抗腫瘤多肽還可阻斷Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域相關(guān)的信號(hào)通路，直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖、克隆形 成，因此可與常規(guī)化療藥物聯(lián)用。
【附圖說明】
[0014] 圖1為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽的質(zhì)譜圖。
[0015] 圖2為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽誘導(dǎo)的特異性CTL分泌IFN-y能力的檢測(cè)結(jié)果 圖，其中，圖A為誘導(dǎo)CTL分泌IFN- Y顯微照片；圖B誘導(dǎo)CTL分泌IFN- Y斑點(diǎn)數(shù)的條形圖。 [0016]圖3為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽誘導(dǎo)的特異性CTL對(duì)Eps8陽性、HLA-A$2402陽性 結(jié)腸癌細(xì)胞SW620體外殺傷能力的曲線圖，圖中的橫坐標(biāo)表示效應(yīng)細(xì)胞（CTL)與靶細(xì)胞 (SW620)的比值(效靶比），縱坐標(biāo)表示殺傷率（％)。
[0017]圖4為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽誘導(dǎo)的特異性CTL對(duì)Eps8陽性、HLA-A*2402陽性 結(jié)腸癌細(xì)胞C〇1〇320體外殺傷能力的曲線圖，圖中的橫坐標(biāo)表示效應(yīng)細(xì)胞(CTL)與靶細(xì)胞 (C〇1〇320)的比值(效靶比），縱坐標(biāo)表示殺傷率（％)。
[0018]圖5為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽誘導(dǎo)的特異性CTL對(duì)Eps8陽性、HLA-A$2402陽性 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549體外殺傷能力的曲線圖，圖中的橫坐標(biāo)表示效應(yīng)細(xì)胞(CTL)與革巴細(xì) 胞(A549)的比值(效靶比），縱坐標(biāo)表示殺傷率（％ )。
[0019]圖6為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽誘導(dǎo)的特異性CTL對(duì)Eps8陽性、HLA-A*2402陽性 肝癌細(xì)胞HepG2體外殺傷能力的曲線圖，圖中的橫坐標(biāo)表示效應(yīng)細(xì)胞（CTL)與祀細(xì)胞 (IfepG2)的比值(效靶比），縱坐標(biāo)表示殺傷率（％ )。
[0020]圖7為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽作用48h對(duì)Eps8陽性、HLA-A$2402陽性腫瘤細(xì)胞 增殖抑制率的曲線圖，圖中的橫坐標(biāo)表示多肽濃度，縱坐標(biāo)表示增殖抑制率（％ )。
[0021]圖8為本發(fā)明所述雙重抗腫瘤多肽對(duì)Eps8陽性、HLA-A4402陽性腫瘤細(xì)胞克隆形 成的抑制率的條形圖，圖中的橫坐標(biāo)表示多肽濃度，縱坐標(biāo)表示克隆形成抑制率（％ )。"#" 表示與相應(yīng)的溶劑對(duì)照組(〇虛)相比，P〈〇.〇l; 表示與相應(yīng)的溶劑對(duì)照組(〇處)相比，P〈 0.001。
[0022] 圖9為公開號(hào)為CN 103694333A的專利申請(qǐng)所述CTL表位肽對(duì)Eps8陽性、HLA-A* 0201陽性的SW480細(xì)胞增殖抑制率的曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]實(shí)施例l(Eps8_SH3結(jié)合域多肽的篩選）
[0024]本發(fā)明所述的Eps8_SH3結(jié)構(gòu)域來源的抗腫瘤多肽，是根據(jù)抗原的一級(jí)結(jié)構(gòu)，采用 免疫信息學(xué)手段，運(yùn)用在線生物學(xué)軟件SYFPEITHI (http : //www .syfpeithi.de/bin/ MHCServer.dll/EpitopePrediction.htm)(該算法記載于Rammensee H，et al?Immunogenetics 1999;50(3-4):213-219?)和BIMAS(http://www-bimas?cit.nih.gov/ molbio/hla_bind/)(該算法記載于Parker KC，et al .J Immunol 1994； 152(1): 163-175.) 對(duì)Eps8分子SH3結(jié)構(gòu)域的HLA-A*2402限制性進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，篩選出氨基酸序列為SEQ ID No: 1所示的多肽，并記為Eps8-534。SEQ ID No: 1所示的多肽由杭州中肽生化有限公司根據(jù) 本發(fā)明人所提供的序列，采用Fmoc固相肽合成法合成。采用反相高壓液相色譜儀對(duì)其合成 的目標(biāo)產(chǎn)物進(jìn)行純化和純度分析，結(jié)果顯示其純度>95%，再采用質(zhì)譜法進(jìn)行鑒定和分子量 測(cè)定，得到如圖1所示的質(zhì)譜圖。
[0025]下述實(shí)施例2-7分別對(duì)本例所得到的多肽Eps8-534(SEQ ID N〇:l)的雙重抗腫瘤 效果進(jìn)行驗(yàn)證。
[0026]實(shí)施例2[體外致敏抗原呈遞細(xì)胞(APC)的誘導(dǎo)]
[0027]使用外周血單個(gè)核細(xì)胞衍生的樹突狀細(xì)胞(DC)作為APC，參考別處所述(Nakahara S，et al.Cancer Res 2003Jul 155,63(14) :4112-8)在體外誘導(dǎo)DC。具體而言，利用 Ficoll-Plaque密度梯度法分離健康志愿者(HLA-A4402陽性）外周血中分離單個(gè)核細(xì)胞 (PBMCs)，通過貼壁法分離原始DC，在含有10%FBS的PRMI-1640、1000U/ml粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞 集落刺激因子(GM-CSF)和1000U/ml白介素4(IL-4)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。在培養(yǎng)第7天，在含3y g/ml02-微球蛋白的培養(yǎng)基中，利用每一種合成肽(20μg/ml)沖激經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的DC 3小 時(shí)。所生成的細(xì)胞在細(xì)胞表面表達(dá)DC相關(guān)分子，如⑶80、⑶83、⑶86和HLA- II分子(數(shù)據(jù)未顯 示)。
[0028]實(shí)施例3(體外CTL的誘導(dǎo)）
[0029] 上述經(jīng)多肽沖激的DC用絲裂霉素 C(MMC)滅活(30μg/ml，30min)，以1:20比例與自 體⑶8+T細(xì)胞（由⑶8陽性分離試劑盒通過正選擇獲得)混合，于含IL-7 10ng/ml的培養(yǎng)基中 培養(yǎng)。第3天，在培養(yǎng)基中加入IL-2至終濃度為20U/ml。在第7天和第14天，用經(jīng)肽沖激的、滅 活的自體DC進(jìn)一步刺激T細(xì)胞。第21天收集細(xì)胞檢測(cè)CTL功能（Olson BM，et al.Cancer Immunol Immunother 2011；60(6):781-792；Andersen RS,et al.Cancer Immunol Tmmunother 2011；60(2):227-234.)〇 [0030] 實(shí)施例4(CTL分泌IFN- y功能）
[0031]利用IFN-y-ELISPOT檢測(cè)上述CTL活性。具體而言，按試劑盒操作說明，于96孔硝 酸纖維素膜培養(yǎng)板預(yù)孵育捕獲抗體過夜，次日計(jì)數(shù)并調(diào)整上述效應(yīng)細(xì)胞至1 X 106/ml，接種 于培養(yǎng)板，每孔l〇〇yl，孵育24h，洗板，分別孵育一抗、二抗，顯色，最后用ELISP0T讀板器對(duì) 斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。分組包括:正對(duì)照組:效應(yīng)細(xì)胞+l〇yl PHA，終濃度1~4μg/ml;實(shí)驗(yàn)組:效應(yīng) 細(xì)胞;背景負(fù)對(duì)照組：l〇〇y 1的Lympho-Spot無血清培養(yǎng)基。
[0032] 結(jié)果:如圖2所示，與溶劑對(duì)照組相比，Eps8-534誘導(dǎo)的T細(xì)胞分泌IFN-y數(shù)顯著增 加，P〈0.001〇
[0033]實(shí)施例5(CTL殺傷腫瘤細(xì)胞功能）
[0034]利用乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測(cè)CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。具體而言，按照Cyto Tox96 KNon_Radioactive Cytotoxicity Assay試劑盒操作說明，以上述CTL為效應(yīng)細(xì)胞， 以各腫瘤細(xì)胞(SW620、C〇1〇320、A549和HepG2)為靶細(xì)胞，檢測(cè)特異性T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺 傷能力。設(shè)置實(shí)驗(yàn)組、效應(yīng)細(xì)胞自發(fā)釋放組、靶細(xì)胞自發(fā)釋放組、靶細(xì)胞最大釋放組、背景對(duì) 照組和體積校正組。將效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞共孵育，反應(yīng)4h后加入底物顯色30min，終止反應(yīng) 后，酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)490nm的吸光度(A)值，計(jì)算CTL對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率。殺傷率（％ )= [(實(shí)驗(yàn)組的相對(duì)A值-靶細(xì)胞自發(fā)釋放組的相對(duì)A值-效應(yīng)細(xì)胞自發(fā)釋放組的相對(duì)A值)/(靶 細(xì)胞最大釋放組的相對(duì)A值-靶細(xì)胞自發(fā)釋放組的相對(duì)A值）]X 100%。其中，實(shí)驗(yàn)組、靶細(xì)胞 自發(fā)釋放組及效應(yīng)細(xì)胞自發(fā)釋放組分別減去培養(yǎng)基對(duì)照組A值獲得其相應(yīng)的相對(duì)A值;靶細(xì) 胞最大釋放組減去體積控制組獲得其相應(yīng)的相對(duì)A值。
[0035] 結(jié)果:如圖3-圖6所示，與溶劑對(duì)照組相比較，來源于Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域的多肽Eps8-534誘導(dǎo)的特異性T細(xì)胞顯著殺傷Eps8陽性、HLA-A$2402陽性的腫瘤細(xì)胞SW620、C〇1〇320(結(jié) 腸癌）、A549(非小細(xì)胞肺癌)及HepG2(肝癌）.
[0036]實(shí)施例6[抑制腫瘤細(xì)胞增殖(CCK-8法）]
[0037] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用roS洗滌，計(jì)數(shù)后重懸于含體積分?jǐn)?shù)10 %胎牛血清RPMI 1640 培養(yǎng)基中至密度為5X104/ml，以lOOiil/孔接種于96孔板，置于孵箱過夜，待細(xì)胞貼壁后換 成無血清培養(yǎng)基進(jìn)行4h饑餓處理，棄培養(yǎng)液，用PBS洗兩遍，然后加入配制好的相應(yīng)濃度 (25、50、75、100、125、150、175虛)的多肽溶液，分別培養(yǎng)4811后每孔加入1(^100(-8溶液，培 養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)3h。置于酶標(biāo)儀中，讀取450nm波長(zhǎng)處吸光度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，均設(shè)3個(gè)復(fù) 孔，取平均值為最終結(jié)果。
[0038] 結(jié)果：如圖7所示，源自Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域的多肽Eps8-534顯著抑制HLA-A*2402和 Eps8陽性的結(jié)腸癌細(xì)胞SW620、HT-29和非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖。在24h，Eps8-534對(duì) HT-29 的半數(shù)抑制濃度（IC5Q)為 175.1虛(95%(：1:149.1-205.6);在3611，￡口88-534對(duì)4549細(xì) 胞的IC5Q為 151 ? lyM(95%CI: 138 ? 0-165 ? 4);在48h，Eps8-534對(duì)SW620細(xì)胞的IC5Q為21 ? 36yM (95%CI：20.09-22.71)〇
[0039] 實(shí)施例7[抑制腫瘤細(xì)胞克隆形成(平板克隆實(shí)驗(yàn)）]
[0040] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期各腫瘤細(xì)胞，含10 %FBS的完全培養(yǎng)液重懸，加入候選多肽至終濃度 為100yM、200yM，以500個(gè)細(xì)胞/孔接種于6孔板，置37°C、5%⑶ 2孵箱中培養(yǎng)7-14天，形成肉 眼可見克隆后(含50個(gè)細(xì)胞以上），用PBS緩沖液漂洗細(xì)胞一次，吸盡殘余液體。加入4%多聚 甲醛室溫固定20min，棄固定液，PBS緩沖液漂洗細(xì)胞一次，加入0.5 %結(jié)晶紫染液，室溫染色 10-20min，棄染色液，蒸餾水沖洗后晾干，計(jì)算細(xì)胞克隆形成率=(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）X 100%〇
[0041 ] 結(jié)果：如圖8所示，源自Eps8-SH3結(jié)構(gòu)域的多肽Eps8-534抑制SW620、C〇1〇320、 IfepG2及A549細(xì)胞克隆形成。
[0042] 實(shí)施例8(對(duì)比實(shí)驗(yàn)）
[0043]本例采用CCK-8法對(duì)公開號(hào)為CN 103694333A的專利申請(qǐng)所述的四個(gè)CTL表位肽 EPS8-101、EPS8-276、EPS8-360和EPS8-455抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力進(jìn)行驗(yàn)證，具體步驟如 下：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期31480細(xì)胞用1^3洗滌，計(jì)數(shù)后重懸于含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清1?^1640 培養(yǎng)基中至密度為5X10 4/ml，以lOOiil/孔接種于96孔板，置于孵箱過夜，待細(xì)胞貼壁后換 成無血清培養(yǎng)基進(jìn)行4h饑餓處理，棄培養(yǎng)液，用PBS洗兩遍，然后加入配制好的相應(yīng)濃度的 多肽溶液，分別培養(yǎng)48h后每孔加入10y 1 CCK-8溶液，培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)3h。置于酶標(biāo)儀中， 讀取450nm波長(zhǎng)處吸光度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，取平均值為最終結(jié)果。
[0044]結(jié)果：如圖 9 所示，四個(gè) CTL 表位肽 EPS8-101、EPS8-276、EPS8-360 和 EPS8-455 在 0-100yM濃度區(qū)間對(duì)SW480細(xì)胞增殖沒有抑制作用，僅在高濃度150-200yM區(qū)間表現(xiàn)出抑制作 用，但其抑制率仍低于50%。將圖9與圖7比較可見，四個(gè)(：孔表位肽￡?38-1014?38-276、 EPS8-360和EPS8-455抑制SW480細(xì)胞增殖的能力明顯弱于本發(fā)明所述多肽Eps8-534(SEQ ID No：1)〇
[0045]總之，本發(fā)明鑒定了源自Eps8_SH3結(jié)合域的新型多肽，這些多肽一方面可以誘導(dǎo) CTL殺傷腫瘤細(xì)胞，另一方面可以顯著抑制腫瘤增殖、克隆形成和轉(zhuǎn)移，具有雙重抗腫瘤效 應(yīng)，適用于腫瘤免疫療法和腫瘤靶向療法。
[0046] 上述實(shí)施例2-8說明，本發(fā)明所述多肽本發(fā)明所述多肽Eps8-534(SEQ ID N〇:l)與 公開號(hào)為CN 103694333A的專利申請(qǐng)所述的四個(gè)CTL表位肽EPS8-101、EPS8-276、EPS8-360 和EPS8-455的功能和作用具有下述不同：1、本發(fā)明所述多肽為HLA-A$2402限制性多肽，適 用于HLA-A*2402陽性人群；公開號(hào)為CN 103694333A的專利申請(qǐng)所述的四個(gè)CTL表位肽為 HLA-AM201限制性多肽，適用于HLA-AM201陽性人群;2、本發(fā)明所述多肽除了激活抗腫瘤免 疫反應(yīng)外，還具有直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖、克隆形成等生物學(xué)活性的作用，而公開號(hào)為CN 103694333A的專利申請(qǐng)所述的四個(gè)CTL表位肽僅能激活抗腫瘤免疫反應(yīng)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種基于Eps8-SH3結(jié)合域的雙重抗腫瘤多肽，該多肽的氨基酸序列為 Lys-Tyr-Ala-Lys-Ser-Lys-Tyr-Asp-Phe(SEQ ID No：1)〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于Eps8-SH3結(jié)合域的雙重抗腫瘤多肽，其特征在于，該 雙重抗腫瘤多肽是采用固相合成法合成的。3. 權(quán)利要求1所述的多肽在制備促進(jìn)抗腫瘤免疫應(yīng)答和抑制腫瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的雙 重抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105968181SQ201610293860
【公開日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月5日
【發(fā)明人】李玉華, 周煒均, 謝曉靈
【申請(qǐng)人】南方醫(yī)科大學(xué)