[0400] (6)化合物A的合成
[0401 ]取攬拌子和樹(shù)脂化合物（30.7mg)至10ml的玻璃試管中，加入1,2-二氯乙燒 (2.0ml)，溫和地進(jìn)行攬拌，使樹(shù)脂溶脹。攬拌5分鐘后，利用己斯德吸管除去溶劑。接著使用 冰浴將試管冷卻，加入另外在30ml的Ξ角燒瓶中制備的化晚(7.3μ1)、硫酷氯（1化1)、1，2- 二氯乙燒（1.99ml)的混合液，在冰冷卻下溫和地?cái)埌?。攬?.5小時(shí)后，使用己斯德吸管除 去溶液，加入脫水二氯甲燒(2ml)對(duì)樹(shù)脂化合物進(jìn)行清洗。利用己斯德吸管除去清洗液后， 再次加入二氯甲燒，進(jìn)行5次同樣的清洗，由此得到化合物A。
[040引[實(shí)施例2]
[0403] 作為本發(fā)明的化合物的一例，W下示出化合物B的合成。
[0404] 化合物B(5-((6-(甲基氨基樹(shù)脂)-6-氧代己基)氨基)-6-氧代己基)幾基)-3-硝基 化晚-2-次橫酷氯)的合成
[0405] 通過(guò)如下的路線(xiàn)合成化合物B。
[0406] [化 68]
[0407]
[0408] 樹(shù)脂:聚乙二醇的交聯(lián)物(16地71化61111曰付1^(注冊(cè)商標(biāo))樹(shù)脂）
[0409] (1)化合物8的合成
[0410] 在15ml的聚丙締制管中依次添加9-巧基甲氧基幾基氨基己酸(化合物7、632.4mg、 1.79mmol)、（0-(7-氮雜苯并Ξ挫-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脈鐵六氣憐酸鹽）（540.6mg、 1.76111111〇1)、01。(161111)、二異丙基乙胺(257.化1、1.79111111〇1)，進(jìn)行1分鐘振蕩攬拌。在另外準(zhǔn) 備的60ml聚丙締制帶過(guò)濾忍的管中取511.7mg的氨基甲基-化emMatrix樹(shù)脂(式中的出N-樹(shù) 月旨、官能團(tuán)取代率〇.70mmol/g)，向其中一次性添加上述15ml管內(nèi)的溶液，安裝到振蕩攬拌 固相合成機(jī)KMS-3(國(guó)產(chǎn)化學(xué)株式會(huì)社制造）中，進(jìn)行振蕩攬拌。1.5小時(shí)后停止攬拌，濾去溶 劑，利用5ml的二甲基甲酯胺清洗10次，由此得到樹(shù)脂化合物8,將其直接用于接下來(lái)的反 應(yīng)。另取Img所得到的樹(shù)脂，對(duì)其進(jìn)行巧Ξ酬檢測(cè)(利用苯酪-乙醇溶液、氯化鐘水溶液-化晚 溶液、巧Ξ酬-乙醇溶液的混合液進(jìn)行的游離氨基顯色反應(yīng)試驗(yàn)），確認(rèn)為陰性。
[0411] (2)化合物9的合成
[0412] 在裝有化合物8的60ml聚丙締制帶過(guò)濾忍的管中加入20%贓晚DMF溶液16ml，進(jìn)行 振蕩攬拌。20分鐘后停止攬拌，濾去溶劑，利用5ml的二甲基甲酯胺清洗10次，由此得到樹(shù)脂 化合物9,將其直接用于接下來(lái)的反應(yīng)。
[0413] (3)化合物10的合成
[0414] 在裝有化合物9的60ml聚丙締制帶過(guò)濾忍的管中依次添加9-巧基甲氧基幾基氨基 己酸（化合物7、632.4111旨、1.79111111〇1)、01。（161111)、二異丙基碳化二亞胺（201.0111邑、 1.79mmol)、徑基苯并Ξ挫水合物（274.2mg、1.79mmo 1)，進(jìn)行振蕩攬拌。1.5小時(shí)后停止攬 拌，濾去溶劑，利用5ml的二甲基甲酯胺清洗10次，由此得到化合物10,將其直接用于接下來(lái) 的反應(yīng)。另取Img所得到的樹(shù)脂，對(duì)其進(jìn)行巧Ξ酬檢測(cè)(利用苯酪-乙醇溶液、氯化鐘水溶液- 化晚溶液、巧Ξ酬-乙醇溶液的混合液進(jìn)行的游離氨基顯色反應(yīng)試驗(yàn)），確認(rèn)為陰性。
[0415] (4)化合物11的合成
[0416] 在裝有化合物10的60ml聚丙締制帶過(guò)濾忍的管中加入20%贓晚DMF溶液16ml，進(jìn) 行振蕩攬拌。20分鐘后停止攬拌，濾去溶劑，利用5ml的二甲基甲酯胺清洗10次，由此得到化 合物11，將其直接用于接下來(lái)的反應(yīng)。
[0417] (5)化合物12的合成
[041引在15ml的聚丙締制管中依次添加化合物5(519.9mg、1.79mmol)、（0-(7-氮雜苯并 S挫-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脈鐵六氣憐酸鹽）（540.6mg、1.76mmol)、DMF(16ml)、二異丙 基乙胺(257.0μ1、1.79mmol)，進(jìn)行1分鐘振蕩攬拌。將該溶液一次性添加到裝有化合物11的 60ml聚丙締制帶過(guò)濾忍的管中，進(jìn)行振蕩攬拌。1.5小時(shí)后停止攬拌，濾去溶劑，依次利用 5ml的二甲基甲酯胺清洗10次、利用甲醇清洗5次、利用乙酸清洗3次后，將所得到的樹(shù)脂在 減壓下干燥，由此得到化合物12(623.4mg)。另取Img所得到的樹(shù)脂，對(duì)其進(jìn)行巧Ξ酬檢測(cè)， 確認(rèn)為陰性。
[0419] (6)化合物B的合成
[0420] 取攬拌子和化合物12(17.6mg)至10ml的玻璃試管中，加入1,2-二氯乙燒(2.0ml)， 溫和地?cái)埌?，使?shù)脂溶脹。攬拌5分鐘后，利用己斯德吸管除去溶劑。接著使用冰浴將試管冷 卻，加入另外在30ml的Ξ角燒瓶中制備的化晚(3.7μ1)、硫酷氯(5μ1)、1，2-二氯乙燒(995μ 1)的混合液，在冰冷卻下溫和地?cái)埌?。攬?.5小時(shí)后，使用己斯德吸管除去溶液，加入脫水 二氯甲燒（2ml)對(duì)樹(shù)脂化合物進(jìn)行清洗。利用己斯德吸管除去清洗液后，再次加入二氯甲 燒，進(jìn)行5次同樣的清洗，由此得到化合物B。
[0421] [實(shí)施例3]
[0422] 通過(guò)W下的合成路線(xiàn)進(jìn)行使用化合物A對(duì)具有SH基的化合物甲琉丙脯酸(化合物 13)的八精氨酸衍生物修飾。
[042引[化 69]
[0424]
[0425] 樹(shù)脂:聚乙二醇的交聯(lián)物(16地71化61111曰付1義(注冊(cè)商標(biāo))樹(shù)脂）
[0426] 在裝有化合物A和攬拌子的10ml玻璃試管中，在利用冰浴冷卻的條件下加入90% 甲酸水溶液(2ml)，溫和地?cái)埌?，由此進(jìn)行溶劑的置換。利用己斯德吸管除去清洗液后，再次 加入90%甲酸水溶液，反復(fù)進(jìn)行5次同樣的清洗。在另外準(zhǔn)備的30πι1Ξ角燒瓶中將由10個(gè)殘 基構(gòu)成的含有八精氨酸的膚Ac-Arg8-Acp-切s(tBu)-N出· TFA鹽（143.37mg)溶解在90%甲 酸（1ml)中，在冰冷卻下將所得到的水溶液加入到裝有上述化合物A的10ml玻璃試管中。在 冰冷卻下溫和地?cái)埌?小時(shí)后，使用己斯德吸管抽吸溶液，并進(jìn)行冷凍干燥處理，由此回收 未反應(yīng)的含八精氨酸的膚。在殘留的樹(shù)脂中加入超純水(2ml)對(duì)樹(shù)脂化合物進(jìn)行清洗，利用 己斯德吸管除去清洗液后，再次加入超純水，反復(fù)進(jìn)行5次同樣的清洗，由此得到進(jìn)行了固 相負(fù)載的含有八精氨酸的膚化合物0。撤去冰浴，在所得到的化合物0中于室溫下加入甲琉 丙脯酸(化合物13、0.99mg)的水溶液(500μ1)，溫和地進(jìn)行攬拌。自反應(yīng)開(kāi)始起30分鐘后，過(guò) 濾出固相載體，利用反相HPLC對(duì)W濾液形式得到的溶液進(jìn)行分析時(shí)，確認(rèn)到來(lái)自于作為原 料的甲琉丙脯酸的峰基本消失，W95%的HPLC純度轉(zhuǎn)化為經(jīng)八精氨酸修飾的甲琉丙脯酸 (化合物Τ)。進(jìn)一步利用T0F-MS對(duì)所得到的溶液進(jìn)行分析，確認(rèn)得到了所期待的化合物Τ。
[0427] (HRMS(ES+)C6曲33N36O14S2計(jì)算值[Μ+3扣3+580.6748.實(shí)測(cè)值m/z 580.6728.)。
[042引[實(shí)施例4]
[0429] 通過(guò)W下的合成路線(xiàn)進(jìn)行使用化合物A的二硫化物膚的新合成。
[0430] [化 70]
[0431]
[0432] 樹(shù)脂:聚乙二醇的交聯(lián)物(Me thy 1化emMatr i X (注冊(cè)商標(biāo))樹(shù)脂）
[0433] 在裝有化合物A(0.023mmol)和攬拌子的10ml玻璃試管中，在利用冰浴冷卻的條件 下加入90%乙酸水溶液（1.5ml)，溫和地?cái)埌?，由此進(jìn)行溶劑的置換。利用己斯德吸管除去 清洗液后，再次加入90%乙酸水溶液，反復(fù)進(jìn)行5次同樣的清洗。在另外準(zhǔn)備的30πι1Ξ角燒 瓶中將由6個(gè)殘基構(gòu)成的膚Ac-Se;r-A;rg-Gly-Asp-Phe-切s(tBu)-NH2 · TFA鹽（6.18mg)溶解 在90%乙酸(0.75ml)中，將所得到的水溶液3等分，在冰冷卻下每隔1小時(shí)共計(jì)3次添加到裝 有上述化合物A的10ml玻璃試管中。在冰冷卻下溫和地?cái)埌?小時(shí)后，使用己斯德吸管抽吸 除去溶液。在殘留的樹(shù)脂中加入超純水(2ml)對(duì)樹(shù)脂化合物進(jìn)行清洗，利用己斯德吸管除去 清洗液后，再次加入超純水，反復(fù)進(jìn)行10次同樣的清洗，由此得到進(jìn)行了固相負(fù)載的乙酷基 六膚化合物W。撤去冰浴，在所得到的化合物W中于室溫下加入由7個(gè)殘基構(gòu)成的膚Ac-切S- Ser-A 巧-Gly-Asp-Phe-切 s(tBu)-畑2(化合物 13，1.53mg)的水溶液（0.25ml)，溫和地進(jìn)行 攬拌。自反應(yīng)開(kāi)始起30分鐘后，過(guò)濾出固相載體，利用反相HPLC對(duì)W濾液形式得到的溶液進(jìn) 行分析時(shí)，確認(rèn)到來(lái)自于作為原料的乙酷基屯膚的峰基本消失，W71%的HPLC純度轉(zhuǎn)化為 由13個(gè)殘基構(gòu)成的膚(化合物V)。進(jìn)一步利用TOF-MS對(duì)所得到的溶液進(jìn)行分析，確認(rèn)得到了 所期待的化合物V。
[0434] (HRMS化S+)C6出 100化 1O21S3計(jì)算值[M巧扣2+803.8322.實(shí)測(cè)值m/z 803.8383.)。
[043引[實(shí)施例引
[0436] 通過(guò)W下的合成路線(xiàn)進(jìn)行使用化合物A對(duì)具有SH基的化合物甲琉丙脯酸(化合物 13)的乙酷基半脫氨酸修飾。
[0437] [化71]
[0438]
[0439] 樹(shù)脂:聚乙二醇的交聯(lián)物(化emMatr i X (注冊(cè)商標(biāo))樹(shù)脂）
[0440] 在裝有化合物A(0.OlSmmol)和攬拌子的10ml玻璃試管中，在利用冰浴冷卻的條件 下加入90%甲酸水溶液（1.5ml)，溫和地?cái)埌瑁纱诉M(jìn)行溶劑的置換。利用己斯德吸管除去 清洗液后，再次加入90%甲酸水溶液，反復(fù)進(jìn)行5次同樣的清洗。在另外準(zhǔn)備的2ml聚丙締管 中將N-乙酷基半脫氨酸（15. Omg)溶解在90 %甲酸（1ml)中，在冰冷卻下加入到裝有上述化 合物A的10ml玻璃試管中。在冰冷卻下溫和地?cái)埌?小時(shí)后，使用己斯德吸管抽吸除去溶液。 在殘留的樹(shù)脂中加入超純水(2ml)對(duì)樹(shù)脂化合物進(jìn)行清洗，利用己斯德吸管除去清洗液后， 再次加入超純水，反復(fù)進(jìn)行10次同樣的清洗，由此得到進(jìn)行了固相負(fù)載的N-乙酷基半脫氨 酸膚化合物X。撤去冰浴，在室溫下加入甲琉丙脯酸(化合物13、1. OOmg)的水溶液(900μ1)， 溫和地進(jìn)行攬拌。自反應(yīng)開(kāi)始起48小時(shí)后，過(guò)濾出固相載體，利用反相HPLC對(duì)W濾液得到的 溶液進(jìn)行分析時(shí)，確認(rèn)到來(lái)自于作為原料的甲琉丙脯酸的峰基本消失，W92%的HPLC純度 轉(zhuǎn)化為乙酷基半脫氨酸-甲琉丙脯酸二硫化物(化合物Υ)。進(jìn)一步利用T0F-MS對(duì)所得到的溶 液進(jìn)行分析，確認(rèn)得到了所期待的化合物Υ。
[0441 ] (HRMS化S+)Ci4H22化OsSsNa計(jì)算值[M+Na]+401.0817.實(shí)測(cè)值m/z 401.0801.)。
[044引[實(shí)施例6]
[0443] 作為本發(fā)明化合物的一例，通過(guò)W下的合成路線(xiàn)進(jìn)行利用了基于化合物A的二硫 化物連接的、作為生理活性膚的催產(chǎn)素(化合物Z)的合成。
[0444] [化 72]
[0445]
[0446] 樹(shù)脂:聚乙二醇的交聯(lián)物(化emMatr i X (注冊(cè)商標(biāo))樹(shù)脂）
[0447] 首先，如下所述進(jìn)行化合物Zi的合成。在裝有化合物A(0.012mmol)的3ml聚丙締制 帶過(guò)濾器的柱中，在利用冰浴冷卻的條件下加入90%甲酸水溶液(0.5ml)，溫和地?cái)埌瑁?此進(jìn)行溶劑的置換。通過(guò)過(guò)濾除去清洗液后，再次加入冰冷的90%甲酸水溶液(0.5ml)，反 復(fù)進(jìn)行5次同樣的清洗。接著，在利用冰浴冷卻的條件下加入膚H-Asn-切s(tBu)-Pr〇-Leu- Gly-N出（1.54mg、0.0023mmol)的90%甲酸水溶液(0.248ml)，在冰冷卻下溫和地?cái)埌?小時(shí) 后，通過(guò)反相冊(cè)LC(梯度：milliQ(0.1%TFA)/C出CN = 95:5至45:55,25分鐘W上；流速： 0.9mL/分鐘；UV: 230nm;柱：Sunf ire? C18 5皿，4.6 X 150mmn柱）確認(rèn)到與H-Asn-切s(tBu)- Pro-Leu-Gly-N出對(duì)應(yīng)的峰消失。
[0448] 反應(yīng)中使用的膚護(hù)4311-〔73(*811)斗'〇-1^611-617-畑2的90%甲酸水溶液的反相 HPLC譜圖示于圖2，另外，從反應(yīng)開(kāi)始起經(jīng)過(guò)2小時(shí)后的反應(yīng)溶液的反相HPLC譜圖示于圖3。
[0449] 通過(guò)過(guò)濾除去反應(yīng)溶液，加入冰冷卻的超純水(0.5ml)，溫和地?cái)埌瑁纱诉M(jìn)行樹(shù) 脂的清洗。通過(guò)過(guò)濾除去清洗液后，再次加入冰冷卻的超純水(0.5ml)，反復(fù)進(jìn)行5次同樣的 清洗，由此得到化合物Zi。接著直接使用所得到的化合物Zi，如下所述進(jìn)行化合物Z2的合成。 從反應(yīng)體系中撤去冰浴，在室溫下加入膚Fmoc-切s-Tyr-I le-Gln-〇H( 1.43mg，0.0019mmol) 的50%N，N-二甲基甲酯胺水溶液(415μ1)，溫和地進(jìn)行攬拌。自反應(yīng)開(kāi)始起30分鐘后，根據(jù) 反相冊(cè) LC(梯度:milliQ(0.1%TFA)/C出CN = 80:20至30:70,25分鐘W上；流速：0.9mL/分 鐘；UV: 230nm;柱：Sunf ire? C18 5皿，4.6 X 150mmn 柱），與 Fmoc-切 s-Tyr-Ile-Gln-OH 對(duì)應(yīng) 的峰消失，W97%的純度觀察到新的峰。
[0450] 反應(yīng)中使用的膚Fmoc-切s-Tyr-Ile-Gln-OH的50%N，N-二甲基甲酯胺水溶液的反 相HPLC譜圖示于圖4,另外，從反應(yīng)開(kāi)始起經(jīng)過(guò)30分鐘后的反應(yīng)溶液的反相HPLC譜圖示于圖 5。
[0451] 過(guò)濾出固相載體，通過(guò)TOF-MS對(duì)所得到的溶液進(jìn)行分析，由此確認(rèn)得到了所期待 的二硫化膚化合物Z2(HRMS化S+)C5sH79化2O15S2計(jì)算值[Μ+ΗΓ1247.5229.實(shí)測(cè)值m/z 1247.5229.)0
[0452] 接著使用所得到的化合物Z2,進(jìn)行化合物Z3的合成。在冰冷卻攬拌下向化合物Z2(1.50mg，1.1 化mo 1)的N，N-二甲基甲酯胺溶液（1.12ml)中加入HATU(0.514mg，1.6化mo 1)、 N，N-二異丙基乙胺(0.474化，2.79皿〇1)，在室溫下攬拌過(guò)夜。攬拌過(guò)夜后，將反應(yīng)溶液的一 部分利用反相冊(cè)LC(梯度:milliQ(0.1%TFA)/C曲CN = 80:20至30:70,25分鐘W上；流速： 0.9mL/分鐘；UV:230nm;柱：Sunfire? C18 5皿，4.6X150mmn柱）進(jìn)行分析，由此，與Z2對(duì)應(yīng) 的峰消失，觀察到的新峰。過(guò)夜反應(yīng)后的反應(yīng)溶液的反相HPLC譜圖示于圖6。利用T0F-MS對(duì) 作為主峰的在15.99分鐘檢測(cè)到的級(jí)分進(jìn)行分析，由此確認(rèn)得到了所期待的化合物Z3化RMS 化S+)Cs姐77化2〇mS2計(jì)算值[M+H] + 1229.5124.實(shí)測(cè)值m/z 1229.5181.)。
[0453] 接著使用所得到的化合物Z3,進(jìn)