一種鑒定玉米品種純度的成套引物及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定玉米品種純度的成套引物及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 玉米目前是全球第一大作物，也已躍升為我國第一大作物。玉米產(chǎn)量的提高主要 得益于雜種優(yōu)勢的利用及優(yōu)良雜交種的普及。而優(yōu)良雜交種的推廣應(yīng)用需要大量優(yōu)質(zhì)的種 子。種子的品種純度是評價種子質(zhì)量的最重要的指標(biāo)之一。近年來據(jù)市場統(tǒng)計，玉米種子 純度在國家標(biāo)準(zhǔn)以下每下降1%，將造成減產(chǎn)214kg/hm，即3%左右。目前品種純度鑒定主 要有傳統(tǒng)種植形態(tài)學(xué)鑒定法、同功酶和種子貯藏蛋白、分子標(biāo)記純度鑒定方法。
[0003] 傳統(tǒng)種植鑒定方法種植周期長、費用高，同功酶和種子貯藏蛋白鑒定法實驗結(jié)果 隨發(fā)育時期、取樣部位和環(huán)境條件而變化，而且同功酶和種子貯藏蛋白法對于親緣關(guān)系較 近的材料沒有區(qū)分能力，使得這兩種方法在品種純度鑒定應(yīng)用上受到一定的限制。SSR標(biāo)記 具有快速、準(zhǔn)確，信息含量高、呈共顯性遺傳、易于分析、重復(fù)可靠等特點，為品種純度鑒定 提供了準(zhǔn)確、可靠、快速、方便的方法。
[0004]SSR引物的選擇直接影響到SSR純度鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，對于承擔(dān)委 托檢驗及市場鑒定抽查檢驗的種子檢測中心，在進(jìn)行純度鑒定時，在不了解制種親本一致 性、制種隔離條件等情況下，要獲得準(zhǔn)確的純度鑒定結(jié)果需要進(jìn)行引物篩選、小樣本實驗等 繁瑣步驟，不能滿足純度快速鑒定的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個目的是提供一種鑒定玉米品種純度的成套引物。
[0006] 本發(fā)明提供的鑒定玉米品種純度的成套引物為由引物對（1)_(8)組成：
[0007] (1)為由SEQIDNo.1所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo. 2所示的單鏈DNA分子 組成的引物對1 ;
[0008] (2)為由SEQIDNo. 3所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo. 4所示的單鏈DNA分子 組成的引物對2;
[0009] (3)為由SEQIDNo. 5所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo.6所示的單鏈DNA分子 組成的引物對3;
[0010] (4)為由SEQIDNo.7所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo. 8所示的單鏈DNA分子 組成的引物對4 ;
[0011] (5)為由SEQIDNo. 9所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo. 10所示的單鏈DNA分子 組成的引物對5 ;
[0012] (6)為由SEQIDNo. 11所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo. 12所示的單鏈DNA分 子組成的引物對6;
[0013] (7)為由SEQIDNo. 13所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo. 14所示的單鏈DNA分 子組成的引物對7;
[0014] (8)為由SEQIDNo. 15所示的單鏈DNA分子和SEQIDNo. 16所示的單鏈DNA分 子組成的引物對8。
[0015] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種鑒定玉米品種純度的PCR試劑組。
[0016] 本發(fā)明提供的鑒定玉米品種純度的PCR試劑組由PCR試劑1、PCR試劑2、PCR試劑 3、PCR試劑4、PCR試劑5、PCR試劑6、PCR試劑7和PCR試劑8組成；
[0017] 所述PCR試劑1包括上述成套引物中的引物對1 ;
[0018] 所述PCR試劑2包括上述成套引物中的引物對2;
[0019] 所述PCR試劑3包括上述成套引物中的引物對3;
[0020] 所述PCR試劑4包括上述成套引物中的引物對4 ;
[0021] 所述PCR試劑5包括上述成套引物中的引物對5 ;
[0022] 所述PCR試劑6包括上述成套引物中的引物對6 ;
[0023] 所述PCR試劑7包括上述成套引物中的引物對7 ;
[0024] 所述PCR試劑8包括上述成套引物中的引物對8。
[0025] 上述PCR試劑組中，每個所述引物對中的各條引物的物質(zhì)的量相同。
[0026] 本發(fā)明還有一個目的是提供一種鑒定玉米品種純度的試劑盒。
[0027] 本發(fā)明提供的鑒定玉米品種純度的試劑盒包括上述成套引物或上述PCR試劑組。
[0028] 上述成套引物或上述PCR試劑組或上述試劑盒在鑒定玉米品種純度中的應(yīng)用也 屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0029] 上述應(yīng)用中，所述玉米品種為鄭單958、先玉335、浚單20、魯單981、金海5號、中 科11、蠡玉16、中單909、登海605、偉科702、京科968、東單80、農(nóng)華101、德美亞1號、京科 糯2000、KWS2564、良玉88號或龍單59。
[0030] 本發(fā)明的最后一個目的是提供一種鑒定待測玉米品種純度的方法。
[0031] 本發(fā)明提供的鑒定待測玉米品種純度的方法包括如下步驟：
[0032] 1)用上述成套引物中的引物對1、引物對2、引物對3、引物對4、引物對5、引物對 6、引物對7和引物對8分別對待測玉米的籽粒群中每個個體進(jìn)行PCR擴增，分別得到引物 對1、引物對2、引物對3、引物對4、引物對5、引物對6、引物對7和引物對8對應(yīng)的PCR擴 增產(chǎn)物；電泳檢測所述引物對1、引物對2、引物對3、引物對4、引物對5、引物對6、引物對7 和引物對8對應(yīng)的PCR擴增產(chǎn)物；
[0033] 若所述籽粒群中某個個體的PCR擴增產(chǎn)物滿足如下條件：所述引物對1、引物對2、 弓丨物對3、引物對4、引物對5、引物對6、引物對7和引物對8對應(yīng)的PCR擴增產(chǎn)物帶型均為 目標(biāo)品種的特征帶型，則該個體為或候選為目標(biāo)品種；
[0034] 若所述籽粒群中某個個體的PCR擴增產(chǎn)物不滿足上述條件，則該個體為或候選為 非目標(biāo)品種；
[0035]2)用如下公式計算所述待測玉米品種純度：
[0036] 品種純度=待測玉米的籽粒群中屬于目標(biāo)品種的個體數(shù)/待測玉米的籽粒群個 體數(shù)X100%。
[0037] 上述方法中，所述PCR擴增的模板為待測玉米品種的基因組DNA。
[0038] 上述方法中，所述目標(biāo)品種為鄭單958或先玉335。
[0039] 上述方法中，若所述目標(biāo)品種為鄭單958時，
[0040] 所述引物對1的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為322bp和354bp的DNA片段；
[0041] 所述引物對2的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為364bp和380bp的DNA片段；
[0042] 所述引物對3的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為202bp和213bp的DNA片段；
[0043] 所述引物對4的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為221bp和237bp的DNA片段；
[0044] 所述引物對5的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為393bp和413bp的DNA片段；
[0045] 所述引物對6的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為185bp的DNA片段；
[0046] 所述引物對7的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為266bp的DNA片段；
[0047] 所述引物對8的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為265bp和269bp的DNA片段；
[0048] 若所述目標(biāo)品種為先玉335時，
[0049] 所述引物對1的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為350bp的DNA片段；
[0050] 所述引物對2的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為364bp和382bp的DNA片段；
[0051] 所述引物對3的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為191bp和208bp的DNA片段；
[0052] 所述引物對4的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為237bp的DNA片段；
[0053] 所述引物對5的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為408bp和413bp的DNA片段；
[0054] 所述引物對6的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為185bp和190bp的DNA片段；
[0055] 所述引物對7的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為253bp和267bp的DNA片段；
[0056] 所述引物對8的PCR擴增產(chǎn)物含有大小為263bp和275bp的DNA片段。
[0057] 本發(fā)明建立了一套適用于目前國內(nèi)審定推廣品種純度鑒定引物組合，在進(jìn)行玉米 品種純度鑒定時，只需要8個引物組成的成套引物直接進(jìn)行品種純度鑒定，而且鑒定結(jié)果 準(zhǔn)確、穩(wěn)定。通過實驗證明：本發(fā)明的成套引物具有雜合度高、品種識別率高、檢測效率高和 檢測成本低等特點，能快速、準(zhǔn)確的獲得種子純度鑒定結(jié)果。在對玉米單交種進(jìn)行純度鑒定 時無需再做品種純度鑒定引物的篩選工作及小樣本實驗等步驟，而且該成套引物不再局限 于只能鑒定個別品種純度，可適用于國內(nèi)絕大部分品種純度快速鑒定。
【具體實施方式】
[0058] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0059] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0060] 實施例1、鑒定玉米品種純度的成套引物
[0061] 一、鑒定玉米品種純度的成套引物的篩選
[0062] 本發(fā)明以表1所示的能代表目前我國