一種治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病 的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是危害人類健康的常見病、多發(fā)病，近幾十年來(lái)，有關(guān)腫瘤的研宄取得了一定 的突破和進(jìn)展，但是腫瘤的發(fā)病率和死亡率仍處于上升趨勢(shì)。腫瘤的治療方法有手術(shù)治療、 放射治療和藥物治療等，其中化學(xué)治療為目前的主要治療手段。但是，目前的腫瘤藥物對(duì)癌 癥細(xì)胞的殺滅率較低或需要較高的濃度，隨之帶來(lái)許多毒副反應(yīng)。因此發(fā)現(xiàn)新的、高效抗腫 瘤化合物顯得尤為迫切。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物。
[0004] 本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：
[0005] -種治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物，有效成分包括二茂鐵烯烴衍生 物，其具有如下的結(jié)構(gòu)通式：
[0006]
[0007] 其中R為氫、烷基、鹵素、硝基或羥基。
[0008] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述二茂鐵烯烴衍生物的結(jié)構(gòu)式為：
[0009]
[0010] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述涉及異常細(xì)胞增殖疾病為癌癥。
[0011] 一種二茂鐵烯烴衍生物在制備用于治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物中 的應(yīng)用，該二茂鐵烯烴衍生物具有如下的結(jié)構(gòu)通式：
[0012]
[0013] 其中R為氫、烷基、鹵素、硝基或羥基。
[0014] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述二茂鐵烯烴衍生物的結(jié)構(gòu)式為：
[0015]
[0016]

[0017] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該二茂鐵烯烴衍生物通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn) 生，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病。
[0018] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述涉及異常細(xì)胞增殖疾病為癌癥。
[0019] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的藥物可通過(guò)阻滯腫瘤細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋 亡和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有良好的效果。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例2的凋亡和細(xì)胞周期分布情況分析結(jié)果圖；
[0021] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2的細(xì)胞熒光強(qiáng)度及分布情況結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下通過(guò)【具體實(shí)施方式】結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的說(shuō)明和描述。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] -種治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物，有效成分包括二茂鐵烯烴衍生 物，其具有如下的結(jié)構(gòu)通式：
[0025]
[0026] 其中R為氫、烷基、鹵素、硝基或羥基。
[0027] 所述涉及異常細(xì)胞增殖疾病為癌癥。
[0028] 該二茂鐵稀徑衍生物的制備方法參見Redox of ferrocene controlled asymmetric dehydrogenative Heck reaction via palladium-catalyzed dual C-H bond activation. Chao Pi, Ying Li, Xiuling Cui, Hao Zhang, Yanbing Han and Yangjie ffu. Chem. Sci. , 2013, 4, 2675-2679.
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 本實(shí)施例涉及的二茂鐵烯烴衍生物的結(jié)構(gòu)式為：
[0031]
[0032] 上述二茂鐵烯烴衍生物溶液的配制：分別先用少量的DMSO將化合物溶解，再用 1640培養(yǎng)液配制成濃度為lmg/mL的原溶液。再根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要分別配制不同的終濃度，分別 避光保存于4°C冰箱備用。
[0033] 1、體外抗癌活性檢測(cè)
[0034] DLD-1，MCF-7, A549, HUVEC 細(xì)胞使用 1640 培養(yǎng)基，10%胎牛血清，5% C02,37°C細(xì) 胞培養(yǎng)箱孵育。收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入l〇〇uL，鋪板，使待測(cè)細(xì)胞調(diào) 密度至10000個(gè)/孔，邊緣孔用無(wú)菌PBS填充。5% CO2，37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育，至細(xì)胞單層鋪 滿孔底（96孔平底板），加入濃度梯度的藥物，設(shè)置6個(gè)梯度，分別為1、3、9、27、81、100 μ g/ mL，每孔100uL，設(shè)5個(gè)復(fù)孔。5% C02,37°C孵育48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 含100 μ L培養(yǎng)基的96孔板培養(yǎng)孔中每孔加入10 μ L，濃度為5mg/mL的MTT溶液，放回培養(yǎng) 箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h。4h后小心并充分吸除孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入100 μ L DMS0,于震板機(jī)中充 分震蕩l〇min，以充分溶解紫色結(jié)晶。并立即用酶標(biāo)儀以630nm做參比波長(zhǎng)，檢測(cè)490nm處 的吸光值。以不加細(xì)胞而其他條件相同的孔來(lái)調(diào)零。采用SPSS軟件計(jì)算IC50值。
[0035] 腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（％) = (1-實(shí)驗(yàn)孔測(cè)定值/對(duì)照孔測(cè)定值）X 100%
[0036] 結(jié)果參見表1，上述二茂鐵烯烴衍生物有較好的抗腫瘤活性。
[0037] 表 1
[0038]
[0039] . 2、阻滯肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞周期檢測(cè)（采用化合物4、化合物5、化合物7和化合 物8進(jìn)行）
[0040] 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞，常規(guī)消化制成單細(xì)胞懸 液，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為10000個(gè)/ml，以每孔2mL接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于37°C、 5 % 0)2濃度飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后，棄去原培養(yǎng)液，將細(xì)胞分為正常對(duì)照組、化合物 4組、化合物5組、化合物7組、化合物8組和順鉑組，每組設(shè)兩個(gè)復(fù)孔，置于37°C、5% 0)2濃 度飽和濕度培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h后，終止培養(yǎng)。按照試劑盒進(jìn)行染色。流式細(xì)胞儀觀察 細(xì)胞周期的分布特征，采用ModiFit軟件進(jìn)行凋亡和細(xì)胞周期分布情況分析。
[0041] 分析結(jié)果如圖1所示，結(jié)果表明化合物4、化合物5、化合物7和化合物8能夠?qū)е?細(xì)胞周期阻滯，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
[0042] 3、誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生檢測(cè)（采用化合物4、化合物5、化合物 7和化合物8進(jìn)行）
[0043] 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞，常規(guī)消化制成單細(xì)胞 懸液，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為10000個(gè)/ml，以每孔2ml接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于37°C、 5% C02濃度飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后，棄去原培養(yǎng)液，將細(xì)胞分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性 對(duì)照組（Rosup組、順鉑組）、化合物4組、化合物5組、化合物7組和化合物8組，每組設(shè)兩 個(gè)復(fù)孔，置于37°C、5% C02濃度飽和濕度培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h后，終止培養(yǎng)。按照1:1000 用無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋陽(yáng)性對(duì)照Rosup，使其終濃度為50 μ g/mL，加入Rosup刺激30min。用 無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，按照1:1000用無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為 lOymol/L。去除細(xì)胞培養(yǎng)液，每孔加入1毫升稀釋好的DCFH-DA。37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 20分鐘。用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。胰酶 消化，收集細(xì)胞后流式細(xì)胞儀檢測(cè)，使用488nm激發(fā)波長(zhǎng)，525nm發(fā)射波長(zhǎng)，上機(jī)檢測(cè)并觀察 細(xì)胞熒光強(qiáng)度及分布情況。
[0044] 結(jié)果如圖2所示，結(jié)果表明化合物4、化合物5、化合物7和化合物8能夠誘導(dǎo)細(xì)胞 內(nèi)活性氧的產(chǎn)生。
[0045] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可知，當(dāng)結(jié)構(gòu)通式：
[0046]
[0047] R為其他烷基、鹵素、硝基或羥基時(shí)，也能得到與上述實(shí)施例2相同或相近的技術(shù) 效果。
[0048] 以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即 依本發(fā)明專利范圍及說(shuō)明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物，其特征在于：有效成分包括二茂鐵 烯烴衍生物，其具有如下的結(jié)構(gòu)通式：其中R為氫、烷基、鹵素、硝基或羥基。2. 如權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于：所述二茂鐵烯烴衍生物的結(jié)構(gòu)式為：3. 如權(quán)利要求1或2所述的藥物，其特征在于：所述涉及異常細(xì)胞增殖疾病為癌癥。4. 一種二茂鐵烯烴衍生物在制備用于治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物中的 應(yīng)用，其特征在于：該二茂鐵烯烴衍生物具有如下的結(jié)構(gòu)通式：其中R為氫、烷基、鹵素、硝基或羥基。5. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述二茂鐵烯烴衍生物的結(jié)構(gòu)式為：6. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：該二茂鐵烯烴衍生物通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性 氧產(chǎn)生，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病。7. 如權(quán)利要求4至6中任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于：所述涉及異常細(xì)胞增 殖疾病為癌癥。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療或預(yù)防涉及異常細(xì)胞增殖疾病的藥物，有效成分包括二茂鐵烯烴衍生物，其具有如下的結(jié)構(gòu)通式：其中R為氫、烷基、鹵素、硝基或羥基。本發(fā)明的藥物可通過(guò)阻滯腫瘤細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有良好的效果。
【IPC分類】A61P35/00, A61K31/295, C07F17/02
【公開號(hào)】CN104961776
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510385334
【發(fā)明人】崔秀靈, 孫愛靜, 許瑞安
【申請(qǐng)人】華僑大學(xué)
【公開日】2015年10月7日
【申請(qǐng)日】2015年7月3日