一種具有抑制腸道炎癥活性的燕麥蛋白肽的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品生物技術領域，具體涉及一種具有抑制腸道炎癥活性的燕麥蛋白 肽的制備方法。
【背景技術】
[0002] 燕麥Oats (Avena sativa)，就是中國的莜麥，俗稱油麥、玉麥，是一種低糖、高營 養(yǎng)、高能食品。其招牌營養(yǎng)素不但含量高，而且質量優(yōu)，是較受現(xiàn)代人歡迎的食物之一。
[0003] 燕麥一般分為帶稃型和裸粒型兩大類。世界各國栽培的燕麥以帶稃型的為主，常 稱為皮燕麥。中國栽培的燕麥以裸粒型的為主，常稱裸燕麥。據(jù)中國醫(yī)學科學院衛(wèi)生研宄 所綜合分析，中國裸燕麥含粗蛋白質達15. 6%，脂肪8. 5%，還有淀粉釋放熱量以及磷、鐵、 鈣等元素，與其它8種糧食相比，均名列前茅。燕麥中水溶性膳食纖維分別是小麥和玉米的 4. 7倍和7. 7倍。燕麥中蛋白質的氨基酸組成比較全面，人體必需的8種氨基酸的含量均居 首位，尤其是含賴氨酸高達〇. 68克。
[0004] 目前針對燕麥有效成分的提取多集中在對各個組分的分離。如Collins etal U. S. Pat. No. 5169660采用一定濃度的乙醇水溶液從燕麥中提取活性成分，并對提取殘渣采 用離子交換色譜處理回收殘渣中的活性成分。該方法由于沒有進行PH調節(jié)導致總體提取 率低下。
[0005] Redmod etal U. S. Pat. No. 7887823B2采用有機溶劑提取后，經過離心沉降后，對 上層提取液進行調節(jié)PH，加入乙醇溶液后采用超濾膜過濾的方法分步提取燕麥中的有效成 分，經過該處理后的提取物穩(wěn)定性強，大大拓廣了提取物的使用范圍。
[0006] Targan U. S. Pat. No. 5468491采用酶法對燕麥進行水解，再通過過濾、濃縮等處理 得到含糖80%的產物，該產物可作為甜味劑和結構改良劑、調味劑。
[0007] 如CN101649003A中采用有機溶劑萃取提取油脂之后，再根據(jù)等電點沉淀法對蛋 白質和多糖類物質進行分離。該方法由于使用有機溶劑，容易導致蛋白質變性，降低蛋白質 的回收率。
[0008] 如CN1974602A則采用稀堿再輔以酶法對蛋白質和淀粉成分進行分離和純化，該 方法雖然能夠避免蛋白質變性，但是該法直接提取出的為蛋白質。
[0009] 關于燕麥功能性產品，據(jù)國外文獻報告，燕麥產品廣泛使用在日化和藥物、食品等 領域。Paton(1995)Cosmetics and Toiletries 110:63闡述了采用有機溶劑提取后活性 炭澄清等工藝制備可以使用于化妝品中的產品。但該產品穩(wěn)定性不足，限制其使用范圍。
[0010] Roger etal U. S. Pat. No. 5026548公開了一種可廣泛作為食品添加劑用途的產品 的制備方法，該產品可以作為泡沫穩(wěn)定劑、乳化劑、表面活性劑添加到食品中。主要步驟涉 及采用乙醇或者丙醇從燕麥中提取后，再用甲醇從上述提取物中進一步萃取、蒸干有機溶 劑后可得到目標產品。
[0011] 關于蛋白肽的制備，CN101709321A采用酶法提取后用樹脂分離的方法制備具ACE 活性的燕麥蛋白肽。CNlO 1805774A采用超濾膜-酶法耦合的方法同時制備燕麥葡聚糖和燕 麥多肽。采用該法雖然能夠有效分離出燕麥葡聚糖，但是純度較低，另外所使用膜的膜效也 會影響分離效果。

【發(fā)明內容】

[0012] 本發(fā)明的第一個目的在于提供一種具有抑制腸道炎癥活性的燕麥蛋白肽的制備 方法，該方法不使用有機溶劑，穩(wěn)定性好，燕麥蛋白肽的回收率和純度高，工藝簡便易于大 規(guī)模生產。
[0013] 本發(fā)明的第二個目的在于提供一種利用上述方法制成的燕麥蛋白肽，該燕麥蛋白 狀具有抑制腸道炎癥和提尚細胞免疫活性的功效。
[0014] 本發(fā)明的最后一個目的在于提供上述燕麥蛋白肽在制備具有抑制腸道炎癥反應 的食品添加劑中應用。
[0015] 本發(fā)明的第一個目的是通過以下技術方案來是實現(xiàn)的：一種具有抑制腸道炎癥活 性的燕麥蛋白肽的制備方法，含有以下步驟：
[0016] (1)蛋白質提取：取燕麥粉，加水配成乳液，調整好乳液的pH值和溫度進行提取后 離心，所得上清液即為燕麥粗蛋白溶液；
[0017] (2)蛋白質純化：在燕麥粗蛋白溶液中加入糖酶進行酶解，酶解完成后調整pH值 并靜置，離心沉降，所得沉淀即為燕麥蛋白；
[0018] (3)復溶：在燕麥蛋白中加入水，并調節(jié)pH值，得燕麥蛋白溶液；
[0019] (4)酶解：在燕麥蛋白溶液中加入細菌源蛋白酶和動物源蛋白酶的復合酶進行酶 解，得到酶解液；
[0020] (5)干燥：將酶解液滅酶、濃縮和干燥后，所得產物即為燕麥蛋白肽。
[0021 ] 本發(fā)明燕麥蛋白肽的制備方法中，首先將燕麥粉配制成乳液后、經離心分離出上 層蛋白粗液；經過糖酶酶解除去淀粉雜質后、重新離心分離得到蛋白質沉淀；將蛋白質沉 淀再經過復溶配制成蛋白質溶液后；再經過復配蛋白酶酶解后得到酶解液，將酶解液經含 濃縮、干燥即得到目標產品燕麥蛋白肽。
[0022] 在上述具有抑制腸道炎癥活性的燕麥蛋白肽的制備方法中：
[0023] 步驟⑴中水的用量優(yōu)選為燕麥粉總質量的1~15倍；乳液的pH值優(yōu)選為8~ 11，溫度優(yōu)選為30~60°C，提取時間優(yōu)選為120~150min ;離心時離心機轉速優(yōu)選為 3000~lOOOOrpm，離心機溫度優(yōu)選為L 5~5°C，離心時間優(yōu)選為10~30min。
[0024] 步驟（1)中pH值和溫度的選擇視糖酶的作用條件而定。
[0025] 步驟（1)中采用水提取，不容易造成蛋白質變形凝集沉淀，降低后續(xù)成品得率；另 外采用水提取可以減少有機溶劑的使用，減少溶劑排放。
[0026] 進一步的，步驟（1)所述的乳液pH調節(jié)可以采用質量百分含量大約為1%的氫氧 化鈉、碳酸氫鈉或者氫氧化鉀進行調節(jié)。
[0027] 步驟（2)中所述的糖酶優(yōu)選為中溫淀粉酶、耐熱淀粉酶和糖化酶中的一種或幾 種，糖酶與燕麥粗蛋白溶液的用量關系優(yōu)選為〇. 5~5 yL/L，酶解溫度優(yōu)選為55~95°C， 酶解時間優(yōu)選為〇. 5~5h。
[0028] 步驟⑵中采用糖酶酶解可以對淀粉進行降解，以達到去除雜質，提高蛋白肽純 度的效果。
[0029] 步驟（2)中pH值優(yōu)選為2~5,離心時離心機轉速優(yōu)選為3000~lOOOOrpm，離心 機溫度優(yōu)選為1. 5~5°C，離心時間優(yōu)選為10~30min。
[0030] 步驟⑵中調整pH為2~5是蛋白肽的等電點，可以保證蛋白肽盡可能多的沉淀。
[0031] 步驟（3)中水的用量優(yōu)選為燕麥蛋白總質量的1~5倍，pH值優(yōu)選為5. 5~7. 5。
[0032] 步驟（3)中對蛋白質進行復溶是為了保證得到水化面積最大的燕麥蛋白底物，調 整pH可以增加復合蛋白酶的酶解效果。
[0033] 步驟（4)中所述的細菌源蛋白酶優(yōu)選為alcalase或枯草桿菌蛋白酶；所述的動物 源蛋白酶優(yōu)選為胰蛋白酶、胃蛋白酶或胰酶，所述細菌源蛋白酶和動物源蛋白酶的復合酶 的用量優(yōu)選占燕麥眼白溶液總質量的〇. 5~1. 5%。，酶解溫度優(yōu)選為40~65°C，pH值優(yōu)選 為3. 5~8,酶解時間優(yōu)選為3~15h。
[0034] 選擇不同來源的蛋白酶可以增加酶切位點，提高酶的酶解效率。
[0035] 步驟（5)中濃縮采用真空濃縮，真空濃縮至固形物含量優(yōu)選為20~60%，干燥 優(yōu)選采用噴霧干燥，噴霧干燥進料口溫度優(yōu)選為170~200°C，出料口溫度優(yōu)選為70~ KKTC0
[0036] 根據(jù)GB/T 22492-2008中肽含量測試方法進行測試，結果表明步驟（5)中所得產 物中燕麥蛋白肽的質量百分含量在50%以上。
[0037] 本發(fā)明的第二個目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：采用上述具有抑制腸道炎癥 活性的燕麥蛋白肽的制備方法制成的燕麥蛋白肽。
[0038] 本發(fā)明的第三個目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：上述燕麥蛋白肽在制備具有 抑制腸道炎癥反應的食品添加劑中應用。
[0039] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
[0040] (1)本發(fā)明方法中將蛋白質直接降解為蛋白肽，提高了蛋白質的溶解性；
[0041] (2)本發(fā)明燕麥蛋白的提取率高，本發(fā)明針對燕麥蛋白特性，根據(jù)不同蛋白酶酶切 位點不同，在對燕麥蛋白酶解過程中使用了兩種不同來源的蛋白酶進行復配，提高了燕麥 蛋白的利用率和蛋白酶的酶解效率；
[0042] (3)本發(fā)明制備方法設備要求簡單，方便實現(xiàn)大規(guī)模生產，整個過程沒有使用有機 溶劑，可以減少環(huán)境負荷；
[0043] (4)本發(fā)明以燕麥蛋白為原料，以制備抑制腸道炎癥功能的蛋白狀為目的，有效拓 展了燕麥蛋白新的使用范圍。
【附圖說明】
[0044] 圖1是本發(fā)明實施例1制備的燕麥蛋白肽的分子量分布圖譜。
【具體實施方式】
[0045] 下面結合實施例及附圖對本發(fā)明做進一步詳細說明，但本發(fā)明的實施方式不限于 此。
[0046] 第一部分具有抑制腸道炎癥活性的燕麥蛋白肽的制備方法
[0047] 實施例1
[0048] 取500克（粗蛋白含量28% )燕麥粉，按照1 :10的質量比加入去離子水，調整pH 至10,溫度60