一種黃芪多糖磷酸酯制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸藥合成領(lǐng)域，具體涉及一種黃芪多糖磷酸酯制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，其味甘、性溫，有補氣升陽、固表 止汗、利尿托毒、排膿、斂痛生肌等功效，是臨床常用中藥。藥理研宄證明，其中黃芪多糖是 黃芪的主要活性成分之一，可作為免疫促進劑或調(diào)節(jié)劑，具有增強機體抵抗力、促進抗體合 成、雙向調(diào)節(jié)血糖和保護心血管系統(tǒng)等作用。
[0003] 糖的磷酸酯類也是一類比較重要的糖類衍生物，在自然界中也較多見。某些多糖 磷酸酯化后也會產(chǎn)生顯著的生物活性。通過制備磷酸酯化的牛膝多糖，藥理實驗表明其具 有抗S180肉瘤和小鼠 Lewis肺癌的作用。磷酸酯化試劑有磷酰氯、磷酸酐、磷酸或其鹽。磷 酸及磷酸酐或兩者的混合物是最早采用的磷?；噭话闾擒真I在酸性條件下極易水 解，而此反應又是在高溫下進行，此條件下糖易降解，從而使產(chǎn)物收率和含量均不高，大大 限制了該法的應用。但一些對酸穩(wěn)定的多糖或寡糖，用此法進行磷?；捅容^簡單易行。 磷酸鹽廉價、易得，但反應活性極低，不易獲得高含量的產(chǎn)物。與磷酸相比其優(yōu)點是一般不 會引起多糖的降解。常用的磷酸鹽有磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、三聚磷酸鈉、偏磷酸鈉或它們 的混合鹽。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種黃芪多糖磷酸酯制備方法，本發(fā)明實現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方 案如下：一種黃芪多糖磷酸酯制備方法，多聚磷酸與黃芪多糖在堿性條件下，發(fā)生酯化反應 獲得了高含量的黃芪多糖單酯。
[0005] 所述的黃芪多糖與多聚磷酸的體積比I : (1. 5至3. 0)。
[0006] 所述的酯反應時，pH為6至12。
[0007] 所述的酯反應時，反應溫度為70°C至100°C。
[0008] 所述的酯反應時，反應時間為8h至24h。
[0009] 本發(fā)明具有如下的積極效果：本發(fā)明為獲取磷酸化多糖，提高中藥多糖的生物活 性，可用磷酸化的方法進行修飾；黃芪多糖是黃芪的主要有效成分，在調(diào)節(jié)免疫、抗病毒、 抗衰老等方面具有重要的作用；本發(fā)明采用多聚磷酸對多糖進行磷酸化修飾，用正交設(shè)計 法對修飾條件進行優(yōu)選，得到了磷酸修飾的最佳條件；并測定了修飾產(chǎn)物的抗抗豬生殖與 呼吸綜合征病毒（PRRSV)活性，獲得較好的結(jié)果。
【具體實施方式】
[0010] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。本發(fā)明提供一種黃芪多糖磷酸酯制 備方法，該方法是在新制的多聚磷酸和黃芪多糖，在堿性條件下，發(fā)生酯化反應得到黃芪多 糖磷酸酯。 toon] 一種黃芪多糖磷酸酯制備方法，多聚磷酸與黃芪多糖在堿性條件下，發(fā)生酯化反 應獲得了高含量的黃芪多糖單酯。
[0012] 所述的黃芪多糖與多聚磷酸的體積比I : (1. 5至3. 0)。所述的酯反應時，pH為 6至12。所述的酯反應時，反應溫度為70°C至100°C。所述的酯反應時，反應時間為8h至 24h〇
[0013] 多糖的制備：取80° C烘干及粉碎后的黃芪1000g，加入足量的80%乙醇加熱回 流脫脂3次，向藥渣加10倍體積的水煎煮3次，第一次3h，第二次2h，第三次Ih;抽濾藥 渣，合并3次濾液后濃縮。向濃縮液加入95%乙醇到乙醇體積分數(shù)為80%，于4°C靜置12h 后，以3000r/min離心，收集沉淀部分，真空干燥后復溶，加 90%乙醇到乙醇體積分數(shù)為80% 后，離心，收集沉淀，凍干，重復此操作3次，至凍干物呈白色后復溶，加入相對于粗多糖質(zhì) 量分數(shù)為1%的胃蛋白酶，于室溫放置12h后，用Savede法除去蛋白質(zhì)，然后用截留分子質(zhì) 量為3. 5ku的透析袋處理，得到黃芪多糖。
[0014] 黃芪多糖的含量測定： 標準溶液的制備：取經(jīng)105°c干燥至恒重的葡萄糖100毫克，置100毫升容量瓶中加水 溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取十毫升，置100毫升容量瓶中，加水至刻度，搖勻，配成 0. 1毫克/毫升的葡萄糖標準溶液。
[0015] 標準曲線的繪制：準確吸取葡萄糖標準溶液0. 1-0. 6毫升共6份，分別置25毫升 容量瓶中，加蒸餾水補充至2. 5毫升，再加入5%苯酚溶液I. 0毫升，搖勻，迅速加濃硫酸5. 0 毫升，搖勻，放置5. 0Μ/Ν置80°C水浴中加熱15分鐘，取出，迅速冷卻至室溫。另以2. 0毫 升蒸餾水同上平衡操作作為空白對照，在490納米波長處測定吸光度，并求出回歸方程。
[0016] 經(jīng)計算的標準回歸方程為：C=0. 216A-6. 38 X ΚΓ3, R=O. 998。
[0017] 黃芪多糖含量測定：取提取并經(jīng)105°C干燥至恒重的黃芪多糖50毫克，置于50毫 升容量瓶中，加蒸餾水溶解至刻度，搖勻，準確吸取10毫升，置100毫升容量瓶中，加蒸餾水 稀釋至刻度，搖勻，配成0. 1毫克/毫升的黃芪多糖溶液。吸取上述溶液0. 5毫升，置25. 0 毫升容量瓶中，加蒸餾水補充至2毫升，依法測定吸光度值，并代入回歸方程計算，求得黃 芪多糖的相對含量。
[0018] 黃芪多糖的含量測定結(jié)果： 下表葡萄糖標準溶液測定結(jié)果：
【主權(quán)項】
1. 一種黃芪多糖磷酸酯制備方法，其特征在于：多聚磷酸與黃芪多糖在堿性條件下， 發(fā)生酯化反應獲得了高含量的黃芪多糖單酯。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述黃芪多糖磷酸酯制備方法，其特征在于：所述的黃芪多糖與多 聚磷酸的體積比I :(1. 5至3.0)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述黃芪多糖磷酸酯制備方法，其特征在于：所述的酯反應時， pH為6至12。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述黃芪多糖磷酸酯制備方法，其特征在于：所述的酯反應時，反應 溫度為70 °C至100°C。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述黃芪多糖磷酸酯制備方法，其特征在于：所述的酯反應時，反應 時間為8h至24h。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種黃芪多糖磷酸酯制備方法，多聚磷酸與黃芪多糖在堿性條件下，發(fā)生酯化反應獲得了高含量的黃芪多糖單酯，黃芪多糖與多聚磷酸的體積比1：（1.5至3.0）。所述的酯反應時，pH為6至12。所述的酯反應時，反應溫度為70℃至100℃。所述的酯反應時，反應時間為8h至24h；本發(fā)明采用多聚磷酸對多糖進行磷酸化修飾，用正交設(shè)計法對修飾條件進行優(yōu)選，得到了磷酸修飾的最佳條件；并測定了修飾產(chǎn)物的抗豬生殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)活性，獲得較好的結(jié)果。
【IPC分類】C08B37-00
【公開號】CN104877036
【申請?zhí)枴緾N201510219408
【發(fā)明人】郭建釗, 梁劍平, 陶蕾, 楚公甫, 趙鳳舞, 賈忠, 李春慧, 張梅
【申請人】河南黑馬動物藥業(yè)有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月4日