一種新的具有抗Xa因子活性的磺酸化五糖化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種新的化合物，具體涉及一種新的具有抗Xa因 子活性的磺酸化五糖化合物。 技術(shù)背景
[0002] 血栓性疾病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，根據(jù)血栓形成部位、條件與性質(zhì)，主要分 為動(dòng)脈血栓與靜脈血栓。動(dòng)脈血栓形成是從動(dòng)脈血管壁動(dòng)脈粥樣硬化病變與血小板激活開 始，其導(dǎo)致的嚴(yán)重臨床疾病主要為急性心肌梗死、腦卒中；靜脈血栓由靜脈血管中多種原因 誘發(fā)形成，可導(dǎo)致靜脈血栓栓塞，其主要臨床表現(xiàn)為深靜脈血栓形成和肺栓塞。大規(guī)模臨床 試驗(yàn)證據(jù)顯示，抗凝治療可阻止血栓的蔓延和復(fù)發(fā)，并進(jìn)一步降低腦卒中、肺栓塞等的發(fā)生 率和死亡率。因此，抗凝治療已成為目前臨床預(yù)防和治療血栓栓塞性疾病的核心和基礎(chǔ)，而 抗凝藥物的研發(fā)也始終是新藥研發(fā)的熱點(diǎn)。
[0003] 目前，正在研發(fā)或已經(jīng)上市的新型抗凝藥物主要包括直接凝血酶抑制劑、Xa因子 抑制劑、IX因子抑制劑、組織因子抑制劑以及新型維生素 K拮抗劑。其中，直接凝血酶抑制 劑和Xa因子抑制劑是最具代表性的抗凝新藥。
[0004] 磺達(dá)肝癸鈉是一種人工合成的選擇性活化因子（Xa)抑制劑，通過與AT III的選 擇性結(jié)合，增強(qiáng)了 AT III對(duì)因子Xa固有的中和作用，因子Xa的中和作用可干擾凝血級(jí)聯(lián) 系統(tǒng)，并能同時(shí)抑制凝血酶形成和血栓發(fā)展，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下（用D、E、F、G、H分別表示 從左至右5個(gè)單糖）：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有抗Xa因子活性的磺酸化五糖化合物A，其結(jié)構(gòu)式如下：
2. 權(quán)利要求1所述的化合物A，其特征在于，該化合物抗Xa因子效價(jià)為612IU/mg。
3. 權(quán)利要求1所述的化合物A的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟I，D的制備： 將Dl以適量無水二氯甲烷溶解，加入三氯乙腈，加入DBU，室溫反應(yīng)0.5h，得產(chǎn)品D ; 步驟2, DEF的制備： ，將D和EF溶于適量無水二氯甲烷中，加入適量干燥4A分子篩，室溫下攪拌30分鐘后， 于氮?dú)獗Ｗo(hù)、-20°C下加入三氟甲磺酸三甲基硅酯的二氯甲烷溶液，反應(yīng)30分鐘，得DEF1， 將DEFl溶于適量乙酸酐中，于氮?dú)獗Ｗo(hù)、(TC下加入三氟甲磺酸三甲基硅酯的二氯甲烷溶 液，室溫反應(yīng)3小時(shí)；再加入氨水，室溫反應(yīng)4小時(shí)；最后加入適量三氯乙腈和DBU，氮?dú)獗?護(hù)，室溫反應(yīng)3小時(shí)，得產(chǎn)品DEF ; 步驟3, GH的制備： ，將G、BSP和4A分子篩溶于無水二氯甲烷，氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?0min，降溫至-60°C， 緩慢滴加Tf20,滴畢后，溫度升至-40°C，加入用無水二氯甲烷溶解稀釋后的H，-40°C反應(yīng) lh，得產(chǎn)品GHl，將GHl溶于適量無水二氯甲烷中，在室溫下加入三乙胺，反應(yīng)3h，得產(chǎn)品 GH ； 步驟4, DEFGH的制備： ，將DEF和GH溶于適量無水二氯甲烷中，加入適量干燥4A分子篩，室溫?cái)嚢?0分鐘 后，于氮?dú)獗Ｗo(hù)、-20°C下加入適量三氟甲磺酸三甲基硅酯的二氯甲烷溶液，反應(yīng)1小時(shí)，加 入適量三乙胺，攪拌30分鐘，過濾，濾液濃縮至干，加入適量二氯甲烷溶解，依次用水洗，無 水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮至干，過硅膠柱，得產(chǎn)品DEFGH ; 步驟5,化合物A的制備 ，將DEFGH溶于THF，加入純化水，之后滴加NaOH溶液，反應(yīng)18小時(shí)，滴加鹽酸中和，然 后加入三氯甲烷萃取，取有機(jī)相，減壓濃縮至干，所得樣品溶于DMF，加入三氧化硫三甲胺絡(luò) 合物，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)18小時(shí)，減壓濃縮，濾液上樣至葡聚糖凝膠LH-20層析柱除鹽，將收集 的產(chǎn)品液減壓蒸餾，并上樣至732鈉型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂層析柱，將收集的產(chǎn)品液減 壓濃縮至干，將所得樣品、純化水和10%鈀碳加入氫化釜中，釜內(nèi)加氫至I. 5MPa，反應(yīng)68小 時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，將濾液減壓濃縮，將濃縮剩余物移至反應(yīng)釜中，加入純化水，將三氧 化硫吡啶絡(luò)合物分批加入反應(yīng)釜中，反應(yīng)7小時(shí)，至溶液澄清透明后，過濾，上樣至葡聚糖 凝膠G-25層析柱脫鹽，將收集的產(chǎn)品液減壓蒸餾，并上樣至732鈉型強(qiáng)酸性陽離子交換樹 脂層析柱，將收集的產(chǎn)品液減壓濃縮至干，經(jīng)制備純化后得化合物A。
4. 權(quán)利要求1所述的化合物A的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟I，D的制備： 將Dl (18. 0g，42. lmmol)溶于90ml無水二氯甲燒中，加入三氯乙腈（21ml，209. 4mmol)， 加入DBU(1. 3ml，8. 7mmol)，室溫反應(yīng)0. 5h，減壓濃縮至干，過硅膠柱，得產(chǎn)品D(22. 6g， 39. 6mmol)， 步驟2, DEF的制備： 將 D(22. 6g，39. 6mmol)和 EF(17. 5g，29. 2mmol)溶于 200ml 無水二氯甲烷中，加入 40g 干燥4A分子篩，室溫下攪拌30分鐘后，于氮?dú)獗Ｗo(hù)、-20°C下加入TBSOTf (2. 7ml，11. 8mmoI) 的二氯甲烷溶液，反應(yīng)30分鐘，過硅膠柱，得DEFl (19. 0g，18. 8mmol)，將DEFl (19. 0g， 18. 8mmol)溶于95ml乙酸酐中，于氮?dú)獗Ｗo(hù)、(TC下加入TBSOTf (0. 9ml，3. 9mmol)的二氯甲 烷溶液，室溫反應(yīng)3小時(shí)；再加入氨水2ml，室溫反應(yīng)4小時(shí)；最后加入三氯乙腈（11. 3ml， 113. Ommol)和DBU (0. 4ml，2. 7mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，室溫反應(yīng)3小時(shí)，過硅膠柱，得產(chǎn)品 DEF (11. lg, 9. 2mmol), 步驟3, GH的制備： 將 G (30. 0g，41. 8mmol)、BSP (11. 4g，54. 6mmol)和 30g 干燥的 4A 分子篩溶于 150ml 無水 二氯甲烷，氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?0min，降溫至-60°C，緩慢滴加Tf2O (9. 6ml，58. 5mmol)，滴 畢后，溫度升至_40°C，加入用無水二氯甲燒溶解稀釋后的H(23. lg，50. 4mmol)，-40°C反應(yīng) lh，過硅膠柱，得產(chǎn)品 GHl (16. 5g，15. 8mmol)，將 GHl (16. 5g，15. 8mmol)溶于 150ml 無水二 氯甲烷中，在室溫下加入三乙胺（55ml，294. 7mmol)，反應(yīng)3h，過硅膠柱，得產(chǎn)品GH (I I. 8g， 14. Ommol)， 步驟4, DEFGH的制備： 將 DEF(11. lg，9.2mmol)和 GH(9.3g，11.0mmol)溶于 100mL 無水二氯甲烷中，加入 20g 干燥的4A分子篩，室溫?cái)嚢?0分鐘后，于氮?dú)獗Ｗo(hù)、-20 °C下加入TMSOTf (0. 7ml，3. 9mmol) 的二氯甲烷溶液，反應(yīng)1小時(shí)，加入適量三乙胺，攪拌30分鐘，過濾，濾液濃縮至干，加入 適量二氯甲烷溶解，依次用水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮至干，過硅膠柱，得產(chǎn)品 DEFGH(12. 2g,6. 4mmol), 步驟5,化合物A的制備： 將DEFGH (12. 2g，6. 4mmol)溶于150ml四氫呋喃中，加入80ml純化水，之后滴加IN氫 氧化鈉溶液120ml，室溫反應(yīng)18小時(shí)，滴加IN鹽酸中和，然后加入三氯甲烷萃取，取有機(jī) 相，減壓濃縮至干，所得樣品溶于100mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入三氧化硫三甲胺絡(luò)合物 (15. 5g，112. Ommol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，60°C反應(yīng)18小時(shí)，減壓濃縮，濾液上樣至葡聚糖凝膠LH-20 層析柱除鹽，將收集的產(chǎn)品液減壓蒸餾，并上樣至732鈉型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂層析柱， 將收集的產(chǎn)品液減壓濃縮至干，將所得樣品、360ml純化水和10. Sg 10%鈀碳加入氫化釜 中，釜內(nèi)加氫至I. 5MPa，30°C反應(yīng)68小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，將濾液減壓濃縮，將濃縮剩余 物移至反應(yīng)釜中，加入純化水，將三氧化硫吡啶絡(luò)合物（9. 5g，59. 7mmol)分批加入反應(yīng)釜 中，KTC反應(yīng)7小時(shí)，至溶液澄清透明后，過濾，上樣至葡聚糖凝膠G-25層析柱脫鹽，將收集 的產(chǎn)品液減壓蒸餾，并上樣至732鈉型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂層析柱，將收集的產(chǎn)品液減 壓濃縮至干，經(jīng)制備純化后得化合物A(2. 6g，I. 5mmol)。
5. 權(quán)利要求1所述的化合物A在制備具有抗Xa因子活性的藥物中的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求1所述的化合物A在制備治療血栓性疾病的藥物中的應(yīng)用，所述血栓性疾 病主要分為動(dòng)脈血栓與靜脈血栓性疾病。
7. 含有權(quán)利要求1所述化合物A的藥物組合物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，可以制備成任何藥用劑型。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為注射劑，單位制 劑中化合物A的含量為I. 5mg-6. 5mg。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，注射劑的制備方法包括以下步 驟： 步驟1，在無菌條件下，取處方量80%注射用水，加入處方量氯化鈉溶解，以0.1 M氫氧 化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至5. 0-8. 0 ; 步驟2,在無菌條件下，取處方量化合物A加入上述溶液中，攪拌，使溶解； 步驟3,在無菌條件下，向上述所得溶液中加入注射用水至全量； 步驟4,在無菌條件下，向上述所得溶液加入0. 1 %藥用炭，保溫，攪拌30分鐘； 步驟5,在無菌條件下，將上述所得溶液分裝至玻璃安瓿中，即得成品。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種具有抗Xa因子活性的磺酸化五糖化合物及其制備方法和用途，此化合物為具有抗凝血作用的五糖化合物的衍生物，具有顯著的抗Xa因子活性。
【IPC分類】A61K31-7028, C07H1-00, C07H15-12, A61P7-02
【公開號(hào)】CN104876979
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510345307
【發(fā)明人】干浩, 韓健, 韓芙蓉, 李振重, 孫福亮, 周喜澤, 侯文鋒, 閆建合, 姚小青
【申請(qǐng)人】天津紅日藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年6月19日