一種茶樹菇多糖的提取分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于提取分離領(lǐng)域，涉及一種多糖的提取分離方法，尤其是涉及一種茶樹菇多糖的提取分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多糖(Polysaccharide)是由單糖之間脫水形成糖苷鍵，并以糖苷鍵線性或分枝連接而成的鏈狀聚合物。一般將多于20個(gè)糖基的糖鏈則稱為多糖。近年來，糖類結(jié)構(gòu)測(cè)定和生物活性研宄取得了明顯的進(jìn)展，大量實(shí)驗(yàn)事實(shí)揭示糖類是重要信息分子，參與許多生理和病理過程，有關(guān)研宄已滲誘到生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。研宄表明，中藥多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖等多種功能。多糖可以促進(jìn)抗體的生成。文獻(xiàn)報(bào)道香菇多糖能增加人體中外周單核細(xì)胞抗體的產(chǎn)生，裂褶菌多糖能促進(jìn)患者脾臟形成抗體的細(xì)胞增加。云芝多糖能使抗體下降的患者產(chǎn)生抗體，使其免疫能力恢復(fù)到正常水平。目前多糖的提取方法主要有水提醇沉法、膜過濾法、柱層析法、微波提取法等多種方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]要解決的技術(shù)問題:茶樹菇多糖作為一種活性成分，目前關(guān)于茶樹菇多糖的分離純化方法也較多，但是多數(shù)方法純化得到的多糖純度較低，純度能夠滿足需要的茶樹菇多糖的得率又較低，不能在保證得率的同時(shí)還能提高茶樹菇多糖的純度，因此需要一種新的茶樹菇多糖的提取分離方法。
[0004]技術(shù)方案:針對(duì)上述問題，本發(fā)明公開了一種茶樹菇多糖的提取分離方法，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法步驟如下:(1)將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥；(2)冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入乙醇水溶液，進(jìn)行超聲攪拌提取，提取后將提取液進(jìn)行離心，離心后取上清液；(3)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；(4)將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；(5)截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；(6)將步驟(5)的截留液濃縮至無溶劑；(7)將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，結(jié)晶時(shí)間為3h，結(jié)晶后過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
[0005]優(yōu)選的，所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法步驟如下:
(I)將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥，冷凍干燥溫度為-20°C，冷凍干燥時(shí)間為12h-20h ; (2)冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入20wt%-30wt%的乙醇水溶液，乙醇水溶液與茶樹菇的重量比為5:1-10:1，進(jìn)行超聲攪拌提取，超聲功率為200w-400w，攪拌轉(zhuǎn)速為lOOrpm，提取時(shí)間為2h_5h，提取溫度為45°C，提取后將提取液進(jìn)行離心，離線轉(zhuǎn)速為3500rpm，離心后取上清液；(3)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；(4)將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；(5)截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；(6)將步驟(5) 的截留液濃縮至無溶劑；(7)將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，乙醇重量為濃縮物重量的3-5倍，結(jié)晶溫度為5°C，結(jié)晶時(shí)間為3h，結(jié)晶后過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
[0006]優(yōu)選的，所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法中乙醇重量為濃縮物重量的4倍。
[0007]優(yōu)選的，所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法中超聲功率為300w。
[0008]優(yōu)選的，所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法中乙醇水溶液與茶樹菇的重量比為 7:1。
[0009]優(yōu)選的，所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法中乙醇水溶液濃度為20wt%。
[0010]優(yōu)選的，所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法中提取時(shí)間為4h。
[0011]有益效果:本發(fā)明的茶樹菇多糖的提取分離方法，對(duì)茶樹菇的提取工藝和分離工藝進(jìn)行了改良，采用乙醇水溶液對(duì)茶樹菇多糖進(jìn)行提取，在保證提取率的同時(shí)還可以進(jìn)行除雜，另外通過膜過濾對(duì)茶樹菇多糖進(jìn)行了進(jìn)一步分離，最后通過乙醇結(jié)晶純化的方式，在保證得率的同時(shí)還提高了制備得到的茶樹菇多糖的純度。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例1
(I)將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥，冷凍干燥溫度為-20°C，冷凍干燥時(shí)間為20h ; (2)冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入20wt%的乙醇水溶液，乙醇水溶液與茶樹菇的重量比為7:1，進(jìn)行超聲攪拌提取，超聲功率為300w，攪拌轉(zhuǎn)速為lOOrpm，提取時(shí)間為4h，提取溫度為45°C，提取后將提取液進(jìn)行離心，離線轉(zhuǎn)速為3500rpm，離心后取上清液；(3)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；(4)將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；(5)截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；(6)將步驟(5)的截留液濃縮至無溶劑；(7)將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，乙醇重量為濃縮物重量的4倍，結(jié)晶溫度為5°C，結(jié)晶時(shí)間為3h，結(jié)晶后過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
[0013]實(shí)施例1最終得到的茶樹菇多糖純度為95%，最終得率為73%。
[0014]實(shí)施例2
(I)將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥，冷凍干燥溫度為-20°C，冷凍干燥時(shí)間為20h ; (2)冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入20wt%的乙醇水溶液，乙醇水溶液與茶樹菇的重量比為10:1，進(jìn)行超聲攪拌提取，超聲功率為400w，攪拌轉(zhuǎn)速為lOOrpm，提取時(shí)間為2h，提取溫度為45°C，提取后將提取液進(jìn)行離心，離線轉(zhuǎn)速為3500rpm，離心后取上清液；(3)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；(4)將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；(5)截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；(6)將步驟(5)的截留液濃縮至無溶劑；(7)將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，乙醇重量為濃縮物重量的3倍，結(jié)晶溫度為5°C，結(jié)晶時(shí)間為3h，結(jié)晶后過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
[0015]實(shí)施例1最終得到的茶樹菇多糖純度為89%，最終得率為77%。
[0016]實(shí)施例3
(I)將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥，冷凍干燥溫度為-20°C，冷凍干燥時(shí)間為12h ;(2)冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入30wt%的乙醇水溶液，乙醇水溶液與茶樹菇的重量比為5:1，進(jìn)行超聲攪拌提取，超聲功率為200w，攪拌轉(zhuǎn)速為10rpm，提取時(shí)間為5h，提取溫度為45°C，提取后將提取液進(jìn)行離心，離線轉(zhuǎn)速為3500rpm，離心后取上清液；(3)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；(4)將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；(5)截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；(6)將步驟(5)的截留液濃縮至無溶劑；(7)將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，乙醇重量為濃縮物重量的5倍，結(jié)晶溫度為5°C，結(jié)晶時(shí)間為3h，結(jié)晶后過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
[0017]實(shí)施例1最終得到的茶樹菇多糖純度為91%，最終得率為76%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種茶樹菇多糖的提取分離方法，其特征在于，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法步驟如下:(1)將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥；(2)冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入乙醇水溶液，進(jìn)行超聲攪拌提取，提取后將提取液進(jìn)行離心，離心后取上清液；(3)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；(4)將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；(5)截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；(6)將步驟(5)的截留液濃縮至無溶劑；(7)將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，結(jié)晶時(shí)間為3h，結(jié)晶后過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法，其特征在于，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法步驟如下: (I)將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥，冷凍干燥溫度為_20°C，冷凍干燥時(shí)間為12h-20h ; (2)冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入20wt%-30wt%的乙醇水溶液，乙醇水溶液與茶樹菇的重量比為5:1-10:1，進(jìn)行超聲攪拌提取，超聲功率為200w-400w，攪拌轉(zhuǎn)速為lOOrpm，提取時(shí)間為2h_5h，提取溫度為45°C，提取后將提取液進(jìn)行離心，離線轉(zhuǎn)速為3500rpm，離心后取上清液；(3)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；(4)將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；(5)截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；(6)將步驟(5) 的截留液濃縮至無溶劑；(7)將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，乙醇重量為濃縮物重量的3-5倍，結(jié)晶溫度為5°C，結(jié)晶時(shí)間為3h，結(jié)晶后過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法，其特征在于，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法中乙醇重量為濃縮物重量的4倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法，其特征在于，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法中超聲功率為300w。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法，其特征在于，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法中乙醇水溶液與茶樹菇的重量比為7:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法，其特征在于，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法中乙醇水溶液濃度為20wt%。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種茶樹菇多糖的提取分離方法，其特征在于，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法中提取時(shí)間為4h。
【專利摘要】本發(fā)明屬于多糖的提取分離領(lǐng)域，公開了一種茶樹菇多糖的提取分離方法，所述的茶樹菇多糖的提取分離方法步驟如下：（1）將新鮮的茶樹菇切成片后進(jìn)行預(yù)冷，待茶樹菇凍結(jié)后再進(jìn)行冷凍干燥；（2）冷凍干燥后將茶樹菇片進(jìn)行迅速粉碎，粉碎后往茶樹菇粉中加入乙醇水溶液，進(jìn)行超聲攪拌提取，提取后將提取液進(jìn)行離心，離心后取上清液；（3）將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮至重量為茶樹菇重量的2倍；（4）將茶樹菇濃縮液進(jìn)行膜過濾，通過分子量為1000的膜，收集截留液；（5）截留液通過分子量為200的膜，收集截留液；（6）濃縮至無溶劑；（7）將濃縮物用乙醇進(jìn)行結(jié)晶純化，過濾，過濾后自然干燥，為茶樹菇多糖。
【IPC分類】C08B37-00
【公開號(hào)】CN104844721
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510186384
【發(fā)明人】吳雷
【申請(qǐng)人】蘇州經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年4月20日