甘油分解代謝缺陷型大腸桿菌菌株中的絲氨醇生產的制作方法
【專利說明】甘油分解代謝缺陷型大腸桿菌菌株中的絲氨醇生產
[0001] 本申請要求申請?zhí)朎P 12184582. 0和US 61/700956的優(yōu)先權，所述文獻均通過引 用的方式完整并入作為參考。
[0002] 本發(fā)明涉及在大腸桿菌菌株中的絲氨醇生產。更具體地，用于此目的的大腸桿菌 菌株是甘油分解代謝缺陷的。
[0003] 絲氨醇（2-氨基-1，3-丙二醇；圖1)屬于氨基醇類并且是氨基酸絲氨酸的結構類 似物。
[0004] 圖1:絲氨醇的結構式
【主權項】
1. 一種用于產生絲氨醇的方法，包括 i) 培養(yǎng)無磷酸丙糖異構酶活性和有磷酸二羥丙酮氨基轉移酶活性的大腸桿菌宿主細 胞以將甘油轉化成絲氨醇， ii) 通過向細胞培養(yǎng)物至少添加甘油，誘導從甘油轉化成絲氨醇， iii) 從細胞培養(yǎng)物分離絲氨醇。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中大腸桿菌宿主細胞額外地無甲基乙二醛合酶活 性。
3. 根據權利要求1和2所述的方法，其中在大腸桿菌宿主細胞中額外地失活glpDNA 結合轉錄阻遏蛋白。
4. 根據任一前述權利要求所述的方法，其中通過將表達載體導入包含轉基因的宿主細 胞中實現(xiàn)活性磷酸二羥丙酮氨基轉移酶的表達，所述轉基因編碼具有轉化甘油成絲氨醇的 活性的磷酸二羥丙酮氨基轉移酶。
5. 分離的重組表達載體，其包含轉基因，所述轉基因編碼具有轉化甘油成絲氨醇的活 性的磷酸二羥丙酮氨基轉移酶并且其中磷酸二羥丙酮氨基轉移酶的表達是可誘導的。
6. 根據權利要求4所述的分離的重組表達載體，其中載體是pCOLADuet-1。
7. 根據權利要求5和6所述的分離的重組表達載體，其中重組表達載體選自 a. pCOLADuet-1::rtxA、 b. pCOLADuet-1::rtxD::rtxA、 c. pCOLADuet-1::rtxEFG::rtxA和 d. pCOLADuet-1::rtxDEFG::rtxA? 其中rtxA編碼具有轉化甘油成絲氨醇的活性的磷酸二羥丙酮氨基轉移酶。
8. 具有能夠將甘油轉化成絲氨醇的磷酸二羥丙酮氨基轉移酶活性的重組大腸桿菌菌 株，其中在大腸桿菌宿主細胞中磷酸丙糖異構酶是失活的。
9. 根據權利要求8所述的重組大腸桿菌菌株，其中在大腸桿菌宿主細胞中甲基乙二醛 合酶是額外地失活的。
10. 根據權利要求8和9所述的重組大腸桿菌菌株，其中在大腸桿菌宿主細胞中glp DNA結合轉錄阻遏蛋白是額外地失活的。
11. 根據權利要求8至10所述的重組大腸桿菌菌株，其中通過使用權利要求5至7中 定義的表達載體，將活性磷酸二羥丙酮氨基轉移酶導入所述菌株中。
12. 重組大腸桿菌菌株，其選自 a. 大腸桿菌菌株MG1655AtpiA、 b. 大腸桿菌菌株MG1655AtpiAAmgsA、 c. 大腸桿菌菌株MG1655AtpiAAglpR和 d. 大腸桿菌菌株MG1655AtpiAAmgsA， 其中rtxA受tpiA的天然啟動子調節(jié)并且其中rtxA編碼具有轉化甘油成絲氨醇的活 性的磷酸二羥丙酮氨基轉移酶。
13. 重組大腸桿菌菌株，其選自 a. 大腸桿菌菌株HMS174(DE3)AtpiA、 b. 大腸桿菌菌株HMS174(DE3)AtpiAAmgsA、 c. 大腸桿菌菌株HMS174(DE3)AtpiAAglpR、 d. 大腸桿菌菌株HMS174(DE3)AtpiAAmgsAAglpR，且 其中菌株用pCOLADuet-1: :rtxA轉化并且其中rtxA編碼具有轉化甘油成絲氨醇的活 性的磷酸二羥丙酮氨基轉移酶。
14. 根據權利要求13所述的重組大腸桿菌菌株，其中菌株用 pCOLADuet-1: :rtxD::rtxA轉化。
15. 根據權利要求13所述的重組大腸桿菌菌株，其中菌株用 pCOLADuet-1: :rtxEFG::rtxA轉化。
16. 根據權利要求13所述的重組大腸桿菌菌株，其中菌株用 pCOLADuet-1: :rtxDEFG::rtxA轉化。
17. 根據權利要求8-16所述的任一大腸桿菌菌株的用途，用于將甘油轉化成絲氨醇。
【專利摘要】本發(fā)明涉及能夠將甘油轉化成絲氨醇的大腸桿菌宿主細胞。另外，公開了一種用于產生絲氨醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)無磷酸丙糖異構酶活性和有磷酸二羥丙酮氨基轉移酶活性的大腸桿菌宿主細胞以將甘油轉化成絲氨醇，通過向細胞培養(yǎng)物至少添加甘油誘導從甘油轉化成絲氨醇，和從細胞培養(yǎng)物分離絲氨醇。DSM 2633520120817 DSM 2630320120817 DSM 2630220120817 DSM 2630120120817 DSM 2630020120817 DSM 2633620120817
【IPC分類】C12N15-52, C12N9-10, C12P7-02
【公開號】CN104769105
【申請?zhí)枴緾N201380047177
【發(fā)明人】L·馬克西姆, A·施泰因比歇爾, B·安德森
【申請人】巴斯夫歐洲公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2013年9月4日
【公告號】EP2708598A1, EP2895603A1, WO2014040888A1