一種核酸檢測反應(yīng)管及其使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及核酸分析檢測領(lǐng)域，特涉及一種用于基于核酸擴(kuò)增反應(yīng)的核酸檢測反應(yīng)管及其使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]2003年SARS在中國大部分地區(qū)爆發(fā)，2005年禽流感的流行性傳播以及2014年在非洲肆虐高致死率的埃博拉疫情，這一系列由病毒引起的傳染病告訴我們在人類的發(fā)展史上一直受到病毒帶來的致命性威脅。病毒的傳播與變異大大超出了人類的預(yù)計，及時準(zhǔn)確地診斷病毒對于提高患者存活率，控制疫情傳播以及有效疾病治療有著非常重大的意義。
[0003]常規(guī)的病原微生物檢測方法是采用體外培養(yǎng)技術(shù)，但是，僅有約I %的細(xì)菌或病毒可以培養(yǎng)，以及培養(yǎng)過程的復(fù)雜性和漫長的培養(yǎng)時間，大大限制了這樣技術(shù)的普及。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，核酸檢測被應(yīng)用于病毒檢測之中，不僅縮短了檢測時間還提高了檢測的靈敏度和特異性。核酸分子是所有病原體包括病毒在內(nèi)的遺傳載體，通過對特異性的核酸進(jìn)行檢測，可以判斷樣本中是否存在相應(yīng)的病毒。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是最常見的核酸檢測方法，該技術(shù)的出現(xiàn)使核酸水平的醫(yī)學(xué)檢測進(jìn)入了一個全新的階段。PCR技術(shù)通過在不同溫度之間的循環(huán)實現(xiàn)DNA分子的復(fù)制，該技術(shù)需要對溫度精確控制，因此依賴于精密的溫控裝置和專業(yè)的人員進(jìn)行操作。在資源與人力相對匱乏的地區(qū)，PCR方法是難以用于病毒檢測的。為了克服對溫控裝置的依賴，一系列等溫擴(kuò)增方法應(yīng)運而生，比如環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)等。環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增可以在60-65°C下對目標(biāo)核酸進(jìn)行擴(kuò)增。等溫擴(kuò)增方法不僅可以是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確的核酸檢測方式，同時對溫控和檢測設(shè)備要求簡單，大幅降低了設(shè)備成本的投入。采用DNA熒光指示劑配合光學(xué)檢測或者基于焦磷酸鎂副產(chǎn)物的濁度檢測，可對樣品進(jìn)行定量分析。
[0004]在臨床病例中，同一種病癥可能由多種不同的病原體產(chǎn)生，造成醫(yī)生診斷與對癥開藥的困難。采用核酸擴(kuò)增方法，無論是PCR還是等溫擴(kuò)增，如何同時檢測多種病原體或者目標(biāo)基因一直是臨床檢測中的一個重大挑戰(zhàn)。因此，發(fā)明一種操作簡單、準(zhǔn)確度高、靈敏度高的核酸檢測產(chǎn)品，實現(xiàn)多種病原體或者目標(biāo)基因的同時檢測具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對【背景技術(shù)】的不足，本發(fā)明提供了一種核酸檢測反應(yīng)管及其使用方法，包括管蓋、管體、反應(yīng)孔、包埋有核酸擴(kuò)增反應(yīng)試劑的凝膠、防止溶液揮發(fā)的有機(jī)相以及配套使用的光學(xué)檢測儀。打開管蓋，將裂解過的病原體樣本或核酸樣本加入到多個封裝有反應(yīng)試劑的反應(yīng)孔中，在防止溶液揮發(fā)的有機(jī)相保護(hù)下，進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)的結(jié)果可通過配套使用的光學(xué)檢測儀進(jìn)行定性與定量分析。本發(fā)明采用一個單反應(yīng)管，通過核酸擴(kuò)增，實現(xiàn)對單一樣本中的多種病原體或者目標(biāo)基因進(jìn)行同時檢測，檢測耗時短，準(zhǔn)確度和靈敏度高，適用于實驗研宄、臨床檢測、食品安全檢測等領(lǐng)域。本發(fā)明具有攜帶方便、操作簡單且樣品消耗量少的特點。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種核酸檢測反應(yīng)管，包括:管體(1)，管蓋(2)，反應(yīng)孔
(3)，包埋有核酸擴(kuò)增反應(yīng)試劑的凝膠(4)，其特征在于:所述的反應(yīng)孔(3)位于管體(I)底部、管體(I)側(cè)壁或者位于管蓋(2)內(nèi)部，所述的凝膠(4)封存于對應(yīng)的反應(yīng)孔(3)內(nèi)。
[0007]進(jìn)一步的，它還包括防止溶液揮發(fā)的固體有機(jī)相(5)，所述的固體有機(jī)相(5)位于管蓋⑵內(nèi)部或管體⑴底部。
[0008]進(jìn)一步的，所述的凝膠⑷為固化的凝膠或經(jīng)過冷凍干燥后的凝膠壓片。
[0009]進(jìn)一步的，所述的管蓋(2)、管體(I)和反應(yīng)孔(3)為一體成型的或者由獨立組件組裝成型的，其材質(zhì)為玻璃或塑料。
[0010]進(jìn)一步的，所述的反應(yīng)孔(3)為一個或者多個。
[0011]進(jìn)一步的，所述凝膠(4)所包埋的核酸擴(kuò)增反應(yīng)試劑包括引物、核酸擴(kuò)增反應(yīng)所需的酶、緩沖液、三磷酸脫氧核苷酸以及熒光指示劑。
[0012]進(jìn)一步的，所述的凝膠為多糖類或者明膠類物質(zhì)。
[0013]本發(fā)明還公開了一種核酸檢測反應(yīng)管的使用方法，反應(yīng)管為如上所述的反應(yīng)管，其特征在于:包括樣品處理的步驟；
[0014]采用移液槍或一次性吸管將樣品裂解液加入反應(yīng)孔(3)后，再將將液體有機(jī)相
(7)再加入反應(yīng)管內(nèi)；
[0015]在合適的溫度條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；
[0016]采用配套使用的光學(xué)檢測儀檢測反應(yīng)結(jié)果。
[0017]本發(fā)明還公開了一種核酸檢測反應(yīng)管的使用方法，反應(yīng)管為如上所述的反應(yīng)管，其特征在于:包括樣品處理的步驟，
[0018]采用移液槍或一次性吸管將樣品裂解液加入反應(yīng)孔(3)后；
[0019]在合適的溫度條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，固體有機(jī)相(5)熔解覆蓋所有反應(yīng)孔(3);
[0020]采用配套使用的光學(xué)檢測儀檢測反應(yīng)結(jié)果。
[0021]本發(fā)明的技術(shù)效果體現(xiàn)在:本發(fā)明將多個核酸擴(kuò)增反應(yīng)體系預(yù)存與反應(yīng)管內(nèi)，通過一次進(jìn)樣，實現(xiàn)對單一樣本中的多種病原體或者目標(biāo)基因進(jìn)行同時檢測；核酸擴(kuò)增的結(jié)果可通過光學(xué)檢測或者濁度檢測進(jìn)行定性與定量分析。
【附圖說明】
[0022]圖1A為反應(yīng)孔位于管體底部的示意圖:
[0023]圖1B為反應(yīng)孔位于管體側(cè)壁的示意圖:
[0024]圖1C為反應(yīng)孔位于管蓋內(nèi)部；
[0025]圖2A為加入核酸樣品后進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)時的反應(yīng)管示意圖(反應(yīng)孔位于管體底部)；
[0026]圖2B為加入核酸樣品后進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)時的反應(yīng)管示意圖(反應(yīng)孔位于管體側(cè)壁)；
[0027]圖2C為加入核酸樣品后進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)時的反應(yīng)管示意圖(反應(yīng)孔位于管蓋內(nèi)部)；
[0028]圖3為采用本反應(yīng)管進(jìn)行特異性核酸檢測結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0029]附圖標(biāo)記說明:1 一管體，2—管蓋，3—反應(yīng)孔，4一凝膠，5—固體有機(jī)相；6—核酸樣品、7—液體有機(jī)相，8—陽性孔、9一陰性孔、10—HlNl孔、11 一H2N3孔、12—H5N1孔。
[0030]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步地詳細(xì)說明。
[0031]如附圖1A、圖1B、圖1C所示，一種核酸檢測反應(yīng)管，包括:管體1，管蓋2，反應(yīng)孔3，包埋有核酸擴(kuò)增反應(yīng)試劑的凝膠4，防止溶液揮發(fā)的固體有機(jī)相5。反應(yīng)孔3的位置可以位于管體I底部(圖1A)、管體I側(cè)壁(圖1B)或者位于管蓋2內(nèi)部(圖1C)，反應(yīng)孔3可以是一個或者多個。防止溶液揮發(fā)的有機(jī)相的密度小于