本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物，具體的，涉及一組特異性結(jié)合呼吸道合胞病毒(rsv)的核酸適配體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、呼吸道合胞病毒(respiratory?syncytial?virus,以下簡(jiǎn)稱：rsv)是肺炎病毒科正形肺炎病毒屬中唯一感染人類的病毒。rsv是引起嬰幼兒下呼吸道感染的主要病原，也是免疫缺陷患者和老年人群重要的呼吸道感染病原。與其他呼吸道病毒相比，自然感染rsv不能產(chǎn)生持久的免疫力，容易反復(fù)感染同一亞型rsv。因此，rsv感染產(chǎn)生了世界范圍內(nèi)重大的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)負(fù)擔(dān)，科研人員對(duì)rsv疫苗和治療藥物進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)探索。至今，僅有一款rsv疫苗“arexvy”(葛蘭素史克)于2023年5月被美國(guó)fda批準(zhǔn)上市，且被限制用于60歲以上年齡段或者高危嬰兒預(yù)防rsv感染導(dǎo)致的下呼吸道疾病。而針對(duì)rsv的治療藥物也僅有利巴韋林噴劑與1998年6月fda批準(zhǔn)上市的synagis(pavizumab)。目前，仍然缺乏高效、快速響應(yīng)的遏制rsv感染的藥物與治療策略。rsv預(yù)防與治療藥物的研發(fā)仍然存在巨大挑戰(zhàn)與需求。

2、核酸適配體(aptamer，以下簡(jiǎn)稱適配體)是指通過(guò)指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(systematic?evolution?of?ligands?by?exponential?enrichment,selex)體外篩選獲得的可與靶標(biāo)高特異性和高親和力結(jié)合的單鏈dna或rna。適配體的靶標(biāo)范圍廣，包括蛋白質(zhì)、多肽、小分子、細(xì)胞、細(xì)菌乃至組織。適配體因其單鏈核酸的堿基序列多樣性及結(jié)構(gòu)多樣性，可通過(guò)形成發(fā)卡、莖環(huán)、g-四鏈體等二級(jí)/三級(jí)結(jié)構(gòu)與靶標(biāo)的空間結(jié)構(gòu)匹配，形成高親和力和特異性結(jié)合。適配體可通過(guò)化學(xué)方法合成，與抗體相比，適配體具有成本低、易修飾、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。此外，適配體有較好的組織滲透性，易進(jìn)入細(xì)胞，且無(wú)免疫原性。近年來(lái)，以蛋白質(zhì)為靶標(biāo)的核酸適配體在分子生物學(xué)、生物技術(shù)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域廣受關(guān)注?；谶m配體的靶向診療方法開(kāi)發(fā)大致可分為以下四類：適配體直接作為治療劑通過(guò)與靶標(biāo)的相互作用阻斷其功能，參與相關(guān)疾病的治療；適配體作為激動(dòng)劑，激活其靶標(biāo)功能，間接參與疾病治療；適配體作為靶向元件構(gòu)成其他治療劑的遞送載體；適配體作為靶向元件，用于開(kāi)發(fā)檢測(cè)系統(tǒng)或裝備。

3、適配體在感染性疾病診療領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用前景。感染性疾病的病情進(jìn)展快，明確的診斷是實(shí)施有效治療的重要前提。適配體因其對(duì)靶標(biāo)高親和力與特異性的靶向性特征，可同時(shí)具備抑制感染與病原診斷的應(yīng)用潛能。目前，文獻(xiàn)中尚無(wú)針對(duì)呼吸道合胞病毒g蛋白的適配體報(bào)道。

4、基于此，提出本申請(qǐng)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明首先涉及一組特異性結(jié)合呼吸道合胞病毒(rsv)的核酸適配體，所述的核酸適配體為單鏈dna(ssdna)，具體為，

2、rsv-g-a1，序列如seq?id?no.1所示，

3、seq?id?no.1：

4、5'-agcagcacagaggtcagatgccgcaggcagctgccattagtctctatccgtgacggtatgcctatgcgtgctaccgtgaa-3'

5、rsv-g-a2，序列如seq?id?no.2所示，

6、seq?id?no.2：

7、5'-agcagcacagaggtcagatggccatccccccgtccgatgagtggtgctcctatgcgttcccctatgcgtgctaccgtgaa-3'

8、rsv-g-a5，序列如seq?id?no.3所示，

9、seq?id?no.3：

10、5'-agcagcacagaggtcagatgcgacttgcctatcggcatgacacaatcttttggagcgtaacctatgcgtgctaccgtgaa-3'

11、rsv-g-a10，序列如seq?id?no.4所示，

12、seq?id?no.4：

13、5'-agcagcacagaggtcagatgccgcaggcagctgccattagtctctatccgtggcggtatgcctatgcgtgctaccgtgaa-3'

14、rsv-g-a21771，序列如seq?id?no.5所示，

15、seq?id?no.5：

16、5'-agcagcacagaggtcagatgtagtgttccctgttggggtctgaacgaacatgacgcgattcctatgcgtgctaccgtgaa-3'

17、rsv-g-a90945，序列如seq?id?no.6所示，

18、seq?id?no.6：

19、5'-agcagcacagaggtcagatggagcaggcagcgcggactcgcagttctaattactcgggaccctatgcgtgctaccgtgaa-3'；

20、優(yōu)選的，所述的核酸適配體特異性結(jié)合呼吸道合胞病毒的g蛋白。

21、本發(fā)明還涉及所述的核酸適配體的如下應(yīng)用：

22、(1)制備檢測(cè)呼吸道合胞病毒的檢測(cè)試劑；優(yōu)選的，所述的檢測(cè)試劑靶向呼吸道合胞病毒的g蛋白；

23、(2)制備預(yù)防或治療呼吸道合胞病毒感染的藥物；優(yōu)選的，所述的藥物或藥物組合物抑制呼吸道合胞病毒的復(fù)制；

24、本發(fā)明還涉及包含所述核酸適配體的藥物或藥物組合物，其包含治療有效量的所述核酸和必要的藥用輔料。

25、本發(fā)明還涉及包含所述核酸適配體的檢測(cè)試劑或檢測(cè)試劑盒，其用于檢測(cè)呼吸道合胞病毒；

26、優(yōu)選的，所述檢測(cè)試劑或檢測(cè)試劑盒檢測(cè)呼吸道合胞病毒的g蛋白；

27、優(yōu)選的，所述的檢測(cè)試劑盒為膠體金顯色試劑盒。

28、本發(fā)明的有益效果在于，

29、1、本發(fā)明提供的適配體能劑量依賴性降低細(xì)胞內(nèi)rsv的rna水平、病毒蛋白水平。

30、2、本發(fā)明提供的適配體通過(guò)結(jié)合rsv?g蛋白，降低病毒的吸附結(jié)合發(fā)揮抗病毒作用。

31、3、本發(fā)明提供的適配體能夠作為識(shí)別探針，檢測(cè)rsv?g蛋白、rsv模擬病毒與rsv真病毒。

技術(shù)特征：

1.一組特異性結(jié)合呼吸道合胞病毒(rsv)的核酸適配體，所述的核酸適配體為單鏈dna(ssdna)，具體為，

2.權(quán)利要求1所述的所述的核酸適配體的如下應(yīng)用：

3.包含權(quán)利要求1所述的核酸適配體的藥物或藥物組合物，其包含治療有效量的所述核酸和必要的藥用輔料。

4.包含權(quán)利要求1所述的核酸適配體的檢測(cè)試劑或檢測(cè)試劑盒，其用于檢測(cè)呼吸道合胞病毒；

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的檢測(cè)試劑盒為膠體金顯色試劑盒。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一組特異性結(jié)合呼吸道合胞病毒(RSV)的核酸適配體及其應(yīng)用，具體的，所述的核酸適配體為單鏈DNA(ssDNA)，具體為，RSV?G?A1，序列如SEQ?ID?NO.1所示，RSV?G?A2，序列如SEQ?ID?NO.2所示，RSV?G?A5，序列如SEQ?ID?NO.3所示，RSV?G?A10，序列如SEQ?ID?NO.4所示，RSV?G?A21771，序列如SEQ?ID?NO.5所示，RSV?G?A90945，序列如SEQ?ID?NO.6所示。本發(fā)明還涉及所述核酸適配體在制備藥物或檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員：李玉環(huán),楊歌,蔣建東,蔣光宇,吳碩,王輝強(qiáng),顏海燕,王琨
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/17