本發(fā)明涉及一種雙水相綜合提取蛹蟲草中蟲草素和蟲草多糖的方法，屬于天然產(chǎn)物有效成分的分離純化領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蟲草是我國的傳統(tǒng)中藥，尤其以冬蟲夏草最為著名，但至今為止冬蟲夏草還未能規(guī)?；厝斯ぴ耘?，而市場上不斷增加的需求和高昂的價格導(dǎo)致人們對野生冬蟲夏草的過度采集，使野生資源日益稀缺?，F(xiàn)代科學研究證明，蛹蟲草具有與冬蟲夏草相類似的作用，有些活性成分含量甚至比冬蟲夏草還要高。由于蛹蟲草容易培養(yǎng)，因此普遍用其來生產(chǎn)蟲草子實體和菌絲體以開發(fā)蟲草的系列產(chǎn)品，以滿足市場和人民健康之需要。
蛹蟲草所含的蟲草素、蟲草多糖具有獨特的藥理及保健功效：蟲草素具有抗病毒、抑菌、明顯抑制腫瘤生長，與環(huán)磷酰胺有明顯的協(xié)同作用，并有降血糖的作用；蟲草多糖具有提高機體免疫功能，抑制腫瘤作用。
雙水相萃取技術(shù)是近幾十年來研究并發(fā)展起來的一項極具發(fā)展前景的新型萃取分離技術(shù)。由于其條件溫和，質(zhì)量傳輸快，成本低，易操作，可調(diào)節(jié)，容易放大，可連續(xù)操作等特點，與傳統(tǒng)的有機溶劑萃取體系相比較，在生物物質(zhì)的分離中有獨到的優(yōu)越之處。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種雙水相綜合提取蛹蟲草中蟲草素和蟲草多糖的方法，該方法為蛹蟲草的深加工提供了一種新的途徑。
具體技術(shù)方案如下：
（1）、原料預(yù)處理：將蛹蟲草子實體于65℃干燥至恒重，粉碎，過100目篩，得蛹蟲草粉末；
（2）、配制PEG/(NH4)2SO4雙水相體系：PEG/(NH4)2SO4雙水相按重量百分比由35％的聚乙二醇6000、25％的(NH4)2SO4、18％的NaCl和余量的去離子水組成；
（3）、將10g蛹蟲草粉末加入至400ml的PEG/(NH4)2SO4雙水相體系中，采用微波輔助提取，靜置分相，得到上相和下相；
（4）、所得雙水相中的上層液相，在轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心2分鐘，去其沉淀物得上層清液，依次用乙酸乙酯和石油醚洗滌后，真空干燥，得蟲草素；
（5）、所得雙水相中的下層液相，加入3倍量乙醇使其沉淀，沉淀再加少量水溶解，加入2倍量乙醇使其沉淀，得到蟲草多糖。
上述方法中，步驟（3）中，微波輔助提取的提取溫度為40℃，提取時間為20-40分鐘，微波功率為200W。
上述方法中，步驟（3）中，靜置分相為靜置10-20分鐘，分相溫度為室溫。
上述方法中，步驟（5）中，所加乙醇溶液的體積分數(shù)為50%。
本發(fā)明利用雙水相綜合提取蛹蟲草中蟲草素和蟲草多糖的方法，為蛹蟲草產(chǎn)品深加工提供一條新的途徑，適合國家“十二五”規(guī)劃產(chǎn)業(yè)政策，產(chǎn)品前景非常廣闊。本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
（1）本發(fā)明方法獨特，工藝流程簡單，操作方便，成本低。
（2） 本發(fā)明的雙水相綜合提取蛹蟲草中蟲草素和蟲草多糖，方法簡單、易操作、分相快、萃取率高、不需要揮發(fā)性有機溶劑、環(huán)境污染小、萃取系統(tǒng)的萃取液可循環(huán)利用、節(jié)省資源、具有較高的選擇性和專一性。
（3）本發(fā)明可同時提取蛹蟲草中蟲草素和蟲草多糖，有效避免單一提取造成的資源浪費，降低蛹蟲草的深加工成本。
具體實施方式
下面通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對其進行限定。如無特別說明，下述實施例中出現(xiàn)的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。
實施例1
1、將蛹蟲草子實體于65℃干燥至恒重，粉碎，過100目篩，得蛹蟲草粉末。
2、PEG/(NH4)2SO4雙水相按重量百分比由35％的聚乙二醇6000、25％的(NH4)2SO4、18％的NaCl和余量的去離子水組成。
3、將10g蛹蟲草粉末加入至400ml的PEG/(NH4)2SO4雙水相體系中，采用微波輔助提取，微波輔助提取的提取溫度為40℃，提取時間為20分鐘，微波功率為200W。室溫下靜置分相10分鐘，得到上相和下相。
4、所得雙水相中的上層液相，在轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心2分鐘，去其沉淀物得上層清液，依次用乙酸乙酯和石油醚洗滌后，真空干燥，得蟲草素，蟲草素提取率為50.3％。
5、所得雙水相中的下層液相，加入3倍量50%乙醇使其沉淀，沉淀再加少量水溶解，加入2倍量50%乙醇使其沉淀，得到蟲草多糖，其提取率為33.4%。
實施例2
1、將蛹蟲草子實體于65℃干燥至恒重，粉碎，過100目篩，得蛹蟲草粉末。
2、PEG/(NH4)2SO4雙水相按重量百分比由35％的聚乙二醇6000、25％的(NH4)2SO4、18％的NaCl和余量的去離子水組成。
3、將10g蛹蟲草粉末加入至400ml的PEG/(NH4)2SO4雙水相體系中，采用微波輔助提取，微波輔助提取的提取溫度為40℃，提取時間為40分鐘，微波功率為200W。室溫下靜置分相20分鐘，得到上相和下相。
4、所得雙水相中的上層液相，在轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心2分鐘，去其沉淀物得上層清液，依次用乙酸乙酯和石油醚洗滌后，真空干燥，得蟲草素，蟲草素提取率為52.4％。
5、所得雙水相中的下層液相，加入3倍量50%乙醇使其沉淀，沉淀再加少量水溶解，加入2倍量50%乙醇使其沉淀，得到蟲草多糖，其提取率為34.1%。
實施例3
采用實施例1的方法利用雙水相綜合提取蛹蟲草中蟲草素和蟲草多糖，不同的是：步驟3中，微波輔助提取時間為30分鐘，室溫下靜置分相20分鐘。最后，蟲草素提取率為51.5％，蟲草多糖的提取率為33.8%。