專利名稱：一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法。
背景技術(shù)：
獨(dú)活素是一種呋喃香豆素類化合物，為淺黃色細(xì)針晶，mp. 108_109°C，分子式為C16H14O5，分子量為286. 28，廣泛分布于蕓香科和傘形科多種植物中。近代研究表明，獨(dú)活素具有抗炎作用；大鼠給藥l_2mg/kg時(shí)，有刺激呼吸的作用；具有增加動(dòng)脈壓和心肌收縮力的作用；另外，對大鼠離體腸有解痙活性。Appendino G等研究表明獨(dú)活素還具有細(xì)胞毒性，且進(jìn)隊(duì)生長細(xì)胞有凋亡作用，獨(dú)活素通過下調(diào)細(xì)胞周期進(jìn)程，使細(xì)胞停于有絲分裂G2/M期，致DNA片段化和凋亡。 目前從天然植物中提取獨(dú)活素的方法報(bào)道較少，有報(bào)道通過半合成制備得到獨(dú)活素，即由13-0-Glucosyl-heraclenol水解生成Heraclenol,再將其鄰二醇脫水形成環(huán)氧丙烷得到獨(dú)活素，或?qū)愇煜〈纪ㄟ^Sharpless不對稱環(huán)氧化反應(yīng)，合成支鏈結(jié)構(gòu)，再與Imperatorin水解后得到的母核相接，得到獨(dú)活素。所得獨(dú)活素其生物活性受到限制，收率低、純度低。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述問題，本發(fā)明提供一種從天然植物白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法，該方法制備量大、樣品損失少、產(chǎn)品純度高，易于規(guī)?；１景l(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法，其特征在于包括以下步驟
A.將白亮獨(dú)活藥材粉碎，用5-8倍體積量的甲醇作為提取溶媒進(jìn)行超聲提取，提取2-6次，提取液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到浸膏；
B.將上述浸膏通過乙酸乙酯-水雙相分散，取乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯；
C.將上述所得萃取濃縮物采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，根據(jù)檢測器譜圖接收目標(biāo)流分，并用制備液相色譜對流分進(jìn)一步純化，得到獨(dú)活素。所述步驟A中超聲提取時(shí)間每次為20_40min。所述步驟C中高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-7jC，體積比為(3-7) :(3-5):(4-8):(2-5)。所述步驟C中制備液相色譜分離條件為流動(dòng)相為甲醇-水(90:10)，流速為10_20ml/mino本發(fā)明的有益效果在于采用乙酸乙酯-水雙相溶劑系統(tǒng)萃取，提高了白亮獨(dú)活中香豆素的保留率，采用高速逆流色譜和制備液相色譜結(jié)合進(jìn)行分離純化，分離效果好，溶劑消耗少，可連續(xù)制備大量獨(dú)活素單體產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
具體實(shí)施例方式 下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。實(shí)施例I :
將白亮獨(dú)活藥材粉碎加5倍體積量的甲醇超聲提取3次，每次30min，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到棕褐色浸膏，用乙酸乙酯和水(1:1)雙相萃取，取上層乙酸乙酯有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏。將體積比5:4:7:3的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合，振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對其超聲脫氣40min后冷卻備用；取乙酸乙酯萃取浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑中，過濾，得樣品溶液；將配制好的固定相以4ml/min的流速充滿高速逆流色譜儀的螺旋管中，開啟制備型高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測譜圖收集獨(dú)活素流分，減壓濃縮后再應(yīng)用高效液相色譜分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水(90:10)，流速15ml/min，根據(jù)檢測器譜圖收集目標(biāo)成分，減壓濃縮得到純度98. 4%的獨(dú)活素。 實(shí)施例2:
將白亮獨(dú)活藥材粉碎加7倍體積量的甲醇超聲提取6次，每次20min，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到棕褐色浸膏，用乙酸乙酯和水(1:1)雙相萃取，取上層乙酸乙酯有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏。將體積比7:5:4:5的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合，振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對其超聲脫氣40min后冷卻備用；取乙酸乙酯萃取浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑中，過濾，得樣品溶液；將配制好的固定相以5ml/min的流速充滿高速逆流色譜儀的螺旋管中，開啟制備型高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測譜圖收集獨(dú)活素流分，減壓濃縮后再應(yīng)用高效液相色譜分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水(90:10)，流速20ml/min，根據(jù)檢測器譜圖收集目標(biāo)成分，減壓濃縮得到純度98. 8%的獨(dú)活素。實(shí)施例3:
將白亮獨(dú)活藥材粉碎加8倍體積量的甲醇超聲提取4次，每次35min，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到棕褐色浸膏，用乙酸乙酯和水(1:1)雙相萃取，取上層乙酸乙酯有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏。將體積比3:5:5:2的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合，振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對其超聲脫氣40min后冷卻備用；取乙酸乙酯萃取浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑中，過濾，得樣品溶液；將配制好的固定相以5ml/min的流速充滿高速逆流色譜儀的螺旋管中，開啟制備型高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測譜圖收集獨(dú)活素流分，減壓濃縮后再應(yīng)用高效液相色譜分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水(90:10)，流速10ml/min，根據(jù)檢測器譜圖收集目標(biāo)成分，減壓濃縮得到純度98. 6%的獨(dú)活素。實(shí)施例4:
將白亮獨(dú)活藥材粉碎加6倍體積量的甲醇超聲提取2次，每次40min，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到棕褐色浸膏，用乙酸乙酯和水(1:1)雙相萃取，取上層乙酸乙酯有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏。將體積比5:3:8:3的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合，振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對其超聲脫氣40min后冷卻備用；取乙酸乙酯萃取浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑中，過濾，得樣品溶液；將配制好的固定相以4ml/min的流速充滿高速逆流色譜儀的螺旋管中，開啟制備型高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測譜圖收集獨(dú)活素流分，減壓濃縮后 再應(yīng)用高效液相色譜分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水(90:10)，流速12ml/min，根據(jù)檢測器譜圖收集目標(biāo)成分，減壓濃縮得到純度99. 2%的獨(dú)活素。
權(quán)利要求
1.一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法，其特征在于包括以下步驟 A.將白亮獨(dú)活藥材粉碎，用5-8倍體積量的甲醇作為提取溶媒進(jìn)行超聲提取，提取2-6次，提取液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到浸膏； B.將上述浸膏通過乙酸乙酯-水雙相分散，取乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯； C.將上述所得萃取濃縮物采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，根據(jù)檢測器譜圖接收目標(biāo)流分，并用制備液相色譜對流分進(jìn)一步純化，得到獨(dú)活素。
2.如權(quán)利要求I所述的一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法，其特征在于所述步驟A中超聲提取時(shí)間每次為20-40min。
3.如權(quán)利要求I所述的一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法，其特征在于所述步驟C中高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-7K，體積比為(3-7) : (3-5) : (4-8):(2-5)。
4.如權(quán)利要求I所述的一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法，其特征在于所述步驟C中制備液相色譜分離條件為流動(dòng)相為甲醇-水(90:10)，流速為10-20ml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從白亮獨(dú)活中提取獨(dú)活素的方法，方法步驟如下a.取白亮獨(dú)活藥材粉碎，加甲醇超聲提取，提取液濃縮得到浸膏，再通過乙酸乙酯-水雙相分散萃取，取乙酸乙酯有機(jī)相濃縮，經(jīng)高速逆流色譜和版制備液相色譜進(jìn)行分離純化，得到高純度獨(dú)活素。本發(fā)明方法具有產(chǎn)品損失少、純度高、制備量大等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號C07D493/04GK102838611SQ20121035018
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者劉東鋒 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司