專利名稱：早孕因子中具有免疫抑制作用的關(guān)鍵活性肽段的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及動(dòng)物繁殖免疫學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及哺乳動(dòng)物早孕因子的部分肽段。
二背景技術(shù)：
早孕因子(early pregnancy factor, EPF)是雌性哺乳動(dòng)物受精后，所發(fā)現(xiàn)的 一種最早能在血清中檢測(cè)到的具有免疫抑制和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)作用的妊娠相關(guān)蛋白。 1974年，澳大利亞學(xué)者M(jìn)orton在進(jìn)行玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)(RIT)時(shí)，首次在妊 娠小鼠血清中檢測(cè)到了 EPF活性，由于EPF在小鼠受精后4 6h即可檢測(cè)到， 便將其命名為"早孕因子"。該發(fā)現(xiàn)引起了世界各國(guó)專家學(xué)者的關(guān)注，隨后在妊
娠婦女、羊、豬、牛等妊娠哺乳動(dòng)物母體血清中均檢測(cè)到了 EPF活性，發(fā)現(xiàn)EPF 對(duì)妊娠母體具有很高的特異性。小鼠受精后4h，兔受精后16h，大鼠、綿羊、 牛、豬受精后24h，人受精后48h，均可在血清中檢測(cè)到EPF活性；EPF活性在 小鼠血清中可持續(xù)至分娩前4d，在綿羊、豬血清中幾乎持續(xù)整個(gè)孕期，在人可 持續(xù)至妊娠第6個(gè)月， 一旦妊娠終止，血清中EPF立即消失。
EPF能抑制T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，抑制玫瑰花環(huán)的形成，防止母體 對(duì)胚胎乃至胎兒發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，也是惡性腫瘤細(xì)胞分泌的一種免疫抑制劑， 在燒傷、潰瘍及類風(fēng)濕等傷口愈合中，有著生長(zhǎng)因子的作用特點(diǎn)。
EPF對(duì)溫度和酸堿度的耐受性較強(qiáng)，低于56。C時(shí)很穩(wěn)定，超過72X:時(shí)容易 失活，EPF由102個(gè)氨基酸殘基的糖蛋白分子組成，人、豬和牛的EPF氨基酸 序列完全相同，分子量均為10.93kD，等電點(diǎn)約為6.5;小鼠EPF氨基酸序列和 人的純合度為97%，分子量為10.96kD，等電點(diǎn)約為6.8。 EPF與熱休克蛋白家 族成員伴侶蛋白10(cpnl0)高度同源，但與cpn10在細(xì)胞定位和功能上又不同， EPF是cpn10在細(xì)胞外發(fā)揮的效應(yīng)。cpnl0在細(xì)胞內(nèi)與cpn60特異性結(jié)合，輔助
蛋白質(zhì)的正確折疊，但在細(xì)胞外則表現(xiàn)EPF的活性。
EPF的生物學(xué)特性主要體現(xiàn)在抑制免疫和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)兩方面。首先，具有抑 制母體的免疫反應(yīng)而使精子、胚胎免受免疫排斥的作用，也是目前最早確認(rèn)妊 娠的生化標(biāo)志之一；其次是EPF能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，也能促進(jìn)燒傷、潰瘍 等傷口的愈合。由于EPF能增強(qiáng)抗淋巴細(xì)胞血清(ALS)抑制T細(xì)胞花環(huán)的形成， 因此，玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)(RIT)為檢測(cè)EPF活性的經(jīng)典方法。EPF在動(dòng)物繁殖領(lǐng) 域可用于動(dòng)物的早期、超早期妊娠診斷，在妊娠中斷的檢測(cè)、胚胎生物技術(shù)在 胚胎移植后的成活情況，以及評(píng)價(jià)雄性繁殖力和繁殖免疫疾病的治療等方面有 著重要價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題提供一種哺乳動(dòng)物早孕因子的部分合成肽段，
該肽段在免疫抑制上具有EPF的生物學(xué)活性。
本發(fā)明的技術(shù)方案是
本發(fā)明是根據(jù)人的EPF / HsplO (H-Met-Ala-Gly-Gln-Ala-Phe-Arg-Lys-Phe-Leu-Pro-Leu-Phe-Asp-Arg-Val-Leu-V al-Glu-Arg-Ser-Ala-Ala畫Glu-Thr匪Val國(guó)Thr-Lys-Gly-Gly-Ile-Met-Leu-Pro畫Glu-Lys-Se r-Gln-Gly國(guó)Lys-Val-Leu-Gln-Ala-Thr-Val-Val-Ala-Val-Gly國(guó)Ser-Gly-Ser-Lys-Gly-Ly s-Gly-Gly畫Glu-Ile-Gln-Pro-Val-Ser-Val-Lys-Val-Gly-Asp-Lys-Val-Leu-Leu-Pro-Glu -Tyr-Gly-Gly-Thr-Lys-Val-Val-Leu畫Asp-Asp-Lys國(guó)Asp-Tyr-Phe-Leu-Phe-Arg-Asp-G ly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH)，采用多肽合成的方法，分段合成不
同長(zhǎng)度的肽段，再對(duì)各個(gè)肽段進(jìn)行免疫抑制活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)
H-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-OH和含有該段肽的肽段具有
抑制玫瑰花環(huán)的形成，在免疫抑制上，具有EPF的生物學(xué)活性。
本發(fā)明的哺乳動(dòng)物的具有免疫抑制作用的關(guān)鍵活性肽段的氨基酸序列為 Phe Arg Asp Gly Asp lie Leu Gly Lys Tyr Val 。
該肽段為早孕因子的部分合成多肽。 編碼所述的活性肽段的核苷酸序列。
本發(fā)明的積極有益效果
(1) 本發(fā)明首次合成了哺乳動(dòng)物早孕因子EPF的部分肽段，通過玫瑰花環(huán) 抑制試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該肽段能抑制玫瑰花環(huán)的形成，通過家兔皮膚移 植檢測(cè)，也表明EPF在免疫抑制上具有生物學(xué)活性。
(2) 本發(fā)明的EPF部分肽段為免疫抑制作用的關(guān)鍵肽段，為進(jìn)一步研究早 孕因子EPF及其臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一采用多肽合成儀合成EPF/Hsp10 (H畫Met-Ala-Gly-Gln國(guó)Ala-Phe-Arg國(guó)Lys-Phe-Leu誦Pro-Leu隱Phe-Asp-Arg-Val國(guó)Leu-Val -Glu畫Arg-Ser-Ala-Ala-Glu-Thr-Val-Thr國(guó)Lys國(guó)Gly-Gly畫Ile-Met-Leu-Pro-Glu-Lys-Ser-Gln-Gly-Lys-Val-Leu-Gln國(guó)Ala-Thr-Val-Val國(guó)Ala-Val-Gly-Ser畫Gly-Ser-Lys-Gly-Lys-Gly-Gly-Glu-Ile-Gln-Pro-Val-Ser-Val-Lys-Val國(guó)Gly-Asp-Lys國(guó)Val國(guó)Leu-Leu-Pro-Glu-Tyr-Gly-Gly-Thr-Lys-Val誦Val-Leu-Asp-Asp-Lys-Asp-Tyr-Phe-Leu-Phe-Arg-Asp誦Gl y-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH)的肽段如下
H-Cys-Met-Ala-Gly-Gln-Ala-Phe-Arg畫Lys國(guó)Phe-Leu-Pro-Leu-Phe-Asp-Arg-Val-Leu-Val-Glu-Arg-OH
-Pro扁Glu-OH
H-Cys-Ile-Met-Leu-Pro-Glu-Lys-Ser-Gln-Gly-Lys-Val-Leu-Gln-Ala-Thr-Val-Val-Ala -Val-Gly-OH
H畫Cys-Val-Val-Ala-Val-Gly-Ser-Gly畫Ser-Lys-Gly-Lys-Gly-Gly佳-Ile-Gln-Pro國(guó)Val-Ser國(guó)Val-OH
H國(guó)Cys-Gln-Pro-Val-Ser-Val-Lys-Val國(guó)Gly-Asp-Lys畫Val-Leu-Leu-Pro-Glu-Tyr-Gly-Gl y-Thr-Lys-OH
H-Cys-Tyr畫Gly畫Gly-Thr-Lys畫Val-Val-Leu-Asp-Asp-Lys-Asp-Tyr-Phe-Leu-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-OH
H國(guó)Cys-Phe-Arg-Asp誦Gly-Asp-Ile-Leu國(guó)Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH H-Asp-Lys-Asp-Tyr畫Phe誦Leu-Phe-Arg國(guó)Asp-Ser-Asp-Ile-Leu-Gly國(guó)Lys-Tyr-Val-Asp-O H
H-Lys畫Asp-Tyr-Phe畫Leu-Phe-Arg-Asp-Ser隱Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH
H-Asp-Tyr扁Phe+eu-Phe-Arg-Asp-Ser-Asp國(guó)Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr畫Val-Asp-OH
H-Phe-Leu-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu隱Gly國(guó)Lys-Tyr-Val畫Asp-OH
H-Leu-Phe國(guó)Arg-Asp-Gly-Asp畫Ile國(guó)Leu-Gly-Lys誦Tyr-Val-Asp-OH
H-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu國(guó)Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH
H-Arg-Asp-Gly畫Asp-Ile-Leu-Gly誦Lys-Tyr-Val-Asp-OH
H-Asp-Gly-Asp畫Ile畫Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH
H-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys畫Tyr-Val-OH
H-Phe-Arg-Asp-Gly陽Asp國(guó)Ile-Leu-Gly陽Lys-Tyr-OH。
根據(jù)EPF的氨基酸序列，應(yīng)用peptide程序分析合成難度特性，設(shè)計(jì)多肽合 成程序，采用多肽合成儀進(jìn)行自動(dòng)合成和手工合成相結(jié)合的方法合成多肽序列。 具體流程如下
設(shè)計(jì)合成多肽序列—peptide程序分析—設(shè)計(jì)合成程序—按樹脂的取代值計(jì) 算并稱取Fmoc-AA-Wang-resin或Rink resin—DMF溶漲樹脂—*加20% piperidine/DMF脫Fmoc保護(hù)，攪動(dòng)6min—*加下一位氨基酸和HBTU進(jìn)行酰化 反應(yīng)，N2攪動(dòng)反應(yīng)30min—*用Kaiser法或TNBS法測(cè)試反應(yīng)的完成情況—*DMF 洗5次，每次lmin—重復(fù)帶有*的步驟，在樹脂上連接下一位氨基酸，直到該多 肽序列合成完成—根據(jù)組成肽鏈氨基酸的不同，選取適當(dāng)?shù)脑噭┯肨FA法裂解 肽鏈與樹脂的連接—冷乙醚沉淀TFA多肽—Sephadex G-25脫鹽純化—LC一MS 和HPLC分析鑒定和純化多肽。
在合成多肽時(shí)可以在多肽序列的N末端添加一個(gè)半胱氨酸。 以氨基酸序列FRDGDILGKY為例，合成5pmo1多肽所需試劑和操作流程 如下
主要試劑N， N—二甲基甲酰胺(DMF);脫保護(hù)試劑I : 20% Piperidine/DMF;脫保護(hù)劑II: 二氯甲烷(DCM);縮合、活化試劑2—(1H
一苯并三唑)一N,N，N，，N，—四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)溶于NMM (氮甲基 嗎啡啉)/DMF;切割試劑94%三氟乙酸(TFA) ; 20種Fmoc保護(hù)氨基酸
(每種氨基酸的濃度均為25pmol/L) ; Fmoc-Ala-OH; Fmoc-Cys (Trt) -OH; Fmoc-Asp (OtBu) -OH; Fmoc誦Glu (OtBu)國(guó)OH; Fmoc國(guó)Phe誦OH; Fmoc-Gly-OH; Fmoc-His (Trt)國(guó)OH; Fmoc-Ile畫OH; Fmoc-Lys (Boc) -OH; Fmoc-Leu-OH; Fmoc隱Met-OH; Fmoc-Asn (tBu) -OH; Fmoc畫Pro誦OH; Fmoc-Gln (Trt) -OH; Fmoc國(guó)Arg(Pbf)-OH; Fmoc畫Ser (tBu)國(guó)OH; Fmoc-Thr (tBu)-OH; Fmoc-Val-OH; Fmoc-Trp (Boc) -OH; Fmoc國(guó)Tyr (tBu) -OH。
主要樹脂F(xiàn)mooLeu-Wang-Resin; Symphony多肽合成儀，由美國(guó)Protein Technology公司生產(chǎn)。
多肽合成中氨基酸偶聯(lián)步驟根據(jù)目的肽鏈產(chǎn)量，稱取10mg Fmoc-Leu-Wang-Resin放入反應(yīng)瓶；(1)加入1.25ml DMF，混合10min，用 N2吹掉DMF，重復(fù)3次；(2)加入1.25ml 20%piperidine/DMF，混合5min， 用N2吹掉液體，加入1.25ml 20%piperidine/DMF，混合15min; (3)重復(fù)步驟
(1) ; (4)加入1.25ml 25nM的Fmoc-Met-OH;加入1.25ml 0.4NMM / DMF， 混合反應(yīng)45min，用N2吹掉液體；(5)重復(fù)步驟(1) ; (6)重復(fù)步驟(1)
(5) ，依次加入Fmoc-Met-OH、 Fmoc-Gln (Trt) -OH，完成多肽序列中每個(gè)氨 基酸的偶聯(lián)；(7)用N2吹干樹脂。
已合成的肽切割基本步驟如下(1)加入1.25ml DMF，混合10min，用 N2吹掉DMF，重復(fù)3次以上；(2)加入1,25ml 20%piperidine/DMF，混合5min， 用N2吹掉液體，加入1.25ml 20%piperidine/DMF，混合15min; (3)重復(fù)步驟 (1); (4)用DCM洗滌三次以上；(5)加入94XTFA混合反應(yīng)2小時(shí)以上；
(6) 收集切割產(chǎn)物。
多肽合成產(chǎn)物粗提將無水乙醚緩慢加入到收集的產(chǎn)物中，冰浴10min， 300rpml0min，留沉淀，棄上清，重復(fù)3次，沉淀物用凍干機(jī)干燥，-2(TC保存 備用。取少量樣品用于HPLC和GC—MS檢測(cè)。
實(shí)施例二采用液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行合成肽段的鑒定及純度分析
純化和鑒定多肽用Waters Quattro Micro液質(zhì)聯(lián)用儀(LC-MS)。 洗脫系統(tǒng)為①A液50 mL/L乙腈氾20溶液；②B液950 mL/L乙腈/ 20 溶液。手動(dòng)進(jìn)樣，每次lmL，流速4mL/min;線性梯度45 min內(nèi)，B液從50mL/L 升到500mL/L，然后5min內(nèi)從500mL/L升到950mL/L， B液做最后洗脫。220 nm處檢測(cè)紫外吸收，按峰收集組分，用于質(zhì)譜檢測(cè)，質(zhì)譜檢驗(yàn)多肽采用電噴霧 電離解析質(zhì)譜鑒定多肽，數(shù)據(jù)分析軟件為Masslynx4.0，方法嚴(yán)格按照操作手冊(cè) 進(jìn)行，檢測(cè)合成多肽的分子質(zhì)量，將分子質(zhì)量檢測(cè)正確的組分收集，凍干，成 為需要的純品，備用。
實(shí)施例三玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)檢測(cè)合成物的免疫抑制活性
1. 人淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備靜脈采集人血液，0.1%肝素鈉抗凝，加入等體積 D-Hanks平衡鹽溶液，混勻，按每管2 3ml輕輕疊加于盛有等量淋巴細(xì)胞分離 液的10ml離心管中，2000rpm20min，離心結(jié)束后，吸取分離液與血漿交界部 位的灰白層，用5倍體積的D-Hanks液以1000rpm離心10 15min，洗滌2次， 取l滴細(xì)胞懸液，用臺(tái)盼蘭拒染法鏡檢計(jì)數(shù)細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞活率，活率應(yīng)在95% 以上，用含20%犢牛血清的D-Hanks液將細(xì)胞調(diào)整到4xl(^個(gè)/mL。
2. 綿羊紅細(xì)胞懸液(SRBC)的準(zhǔn)備用常規(guī)方法自綿羊頸靜脈采血，0.1% 肝素鈉抗凝，分離紅細(xì)胞，用D-Hanks液洗3次，配成終濃度為"108個(gè)/ mL的紅 細(xì)胞懸液，供當(dāng)日使用。
3. 犢牛血清除去犢牛血清中對(duì)綿羊紅細(xì)胞的嗜異性抗體，經(jīng)56T:30min 加熱滅活，加半量壓積綿羊紅細(xì)胞，混合后，37'C水浴20min。水浴后，2000rpm 10min，吸取上清液。
4. 玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)取500pL淋巴細(xì)胞懸液(4xl(^個(gè)/mL)與100iiL待測(cè)樣 品混合，37。C孵育30min。分別取9份孵育液，每份50iiL，在9份孵育液中分別加
入D-Hanks液100nL和ALG系列稀釋液(l: 2、103、 2、103.......、 216xl03) 100pL，
37X:孵育60mim力BD-Hanks液清洗2次；再加入l %綿羊紅細(xì)胞懸液50^和含20 W犢牛血清的D-Hanks液50nL，充分混勻800rpm 5min，棄去大部分上清液，重 懸細(xì)胞；再加入l 2滴0.8X戊二醛固定10min，涂片，姬姆薩-瑞氏復(fù)合染液染色，
記錄每200個(gè)淋巴細(xì)胞中的花環(huán)數(shù)目。RIT值按花環(huán)數(shù)低于陰性對(duì)照組75^時(shí) ALS的最高稀釋度計(jì)算，即以ALS的最高稀釋倍數(shù)的倒數(shù)xlO-s后取對(duì)數(shù)表示，其 計(jì)算公式為
RIT=log2(l(T3 / ALS最高稀釋倍數(shù))。
5.對(duì)每個(gè)肽段采用玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果有活li的肽段為 H-Cys-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu畫Gly-Lys誦Tyr-Val-Asp-OH， H-Asp-Lys畫Asp-Tyr-Phe畫Leu-Phe-Arg-Asp-Ser畫Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-O H，
H-Lys-Asp-Tyr-Phe-Leu-Phe-Arg-Asp-Ser-Asp-Ile-Leu-Gy-Lys-Tyr-Val-Asp-OH,
H-Asp-Tyr畫Phe-Leu-Phe-Arg-Asp-Ser誦Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val腸Asp-OH，
H國(guó)Phe-Leu-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val陽Asp-OH，
H國(guó)Leu-Phe-Arg-Asp-Gly隱Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-Asp-OH，
H-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile國(guó)Leu-Gly-Lys-Tyr-Val腳Asp-OH,
H國(guó)Phe-Arg-Asp誦Gly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-OH。
上述各肽段的免疫抑制活性相同。
實(shí)施例四家兔皮膚移植檢測(cè)肽段的免疫抑制活性
1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同種家兔20只，2只間進(jìn)行相互的皮膚移植，每只家兔在其 臀部一側(cè)作為受體部位，另一側(cè)作為供體部位。各移植一處。
2. 造創(chuàng)將家兔放于多功能手術(shù)臺(tái)上保定，對(duì)其左、右臀部分別進(jìn)行剃毛、 清洗。用0.1%新潔爾滅消毒，將3%普魯卡因注射液于臀部做局部扇形浸潤(rùn)麻醉，
手術(shù)切去一塊包括皮膚全層的皮瓣，面積為lcmX3cm，徹底止血。
3. 創(chuàng)面處理對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行充分止血后，用青霉素溶解于生理鹽水清洗創(chuàng)面， 去除血污、滲出液及組織碎片。用云南白藥覆于創(chuàng)面，外蓋上紗布，用膠帶固 定。到第12天，肉芽面分泌物減少，肉芽覆蓋了整個(gè)創(chuàng)面，肉芽顆粒致密、堅(jiān) 實(shí)、無水腫，呈粉紅色，有光澤。此時(shí)，切除螯生肉芽組織。用含青霉素的生 理鹽水清洗肉芽面，除去膿汁，創(chuàng)緣及創(chuàng)圍用75%酒精消毒，然后用浸有生理鹽 水的紗布覆蓋創(chuàng)面，保護(hù)肉芽組織，準(zhǔn)備進(jìn)行皮膚移植。
4. 皮膚移植取同種異體家兔另一側(cè)臀部全層的皮瓣，用生理鹽水清洗， 移植于另一只家兔的創(chuàng)面，縫合并固定包扎。
5. 移植后處理將20只家兔分為2組，IO只作為試驗(yàn)組，IO只為對(duì)照。每
天觀察移植部位的愈合情況。
試驗(yàn)組分別在移植后的4天、8天、12天、16天和20天靜脈注射肽段 (H-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile丄eu-Gly-Lys-Tyr-Val-OH，用PBS按1 mg/ml稀釋)， 每只每次靜脈注射50(HiL。對(duì)照組用PBS等量注射。
6. 植皮成活標(biāo)準(zhǔn)判斷^皮片與肉芽面完全融合，肉芽面老化；皮片色素逐 漸向四周擴(kuò)散；皮片上的被毛迅速生長(zhǎng)；植皮后l月以上未發(fā)現(xiàn)免疫排斥反應(yīng)， 認(rèn)為被移植的皮膚成活。
7. 結(jié)果
試驗(yàn)組(IO只)3只移植不成功；7只移植成功，愈合時(shí)間為21 27天，平 均25天。
對(duì)照組(IO只)3只未移植成功；4只在移植后的第9 14天，植皮被排斥 掉，植床凹面輪廓光滑，植皮無毛；2只在移植后第18天出現(xiàn)排斥，植皮脫落， l只成功，愈合時(shí)間為26天。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)可以看出，試驗(yàn)組10只家兔中有7只移植成功， 表明H-Phe-Arg-Asp-Gly-Asp-Ile-Leu-Gly-Lys-Tyr-Val-OH為EPF免疫抑制作用的 活性關(guān)鍵肽段。
序列表
<110> 河南省動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
<120>早孕因子中具有免疫抑制作用的關(guān)鍵活性肽段
<130>多肽合成的方法
<160> 1
< 170> Patentln version 3.4
<210> 1
<211> 11
<212> PRT <213>人工序列
<400> 1
Phe Arg Asp Gly Asp lie Leu Gly Lys Tyr Val 1 5 10
權(quán)利要求
1.哺乳動(dòng)物中具有免疫抑制作用的關(guān)鍵活性肽段，其特征在于該肽段的氨基酸序列為Phe Arg Asp Gly Asp Ile Leu Gly Lys Tyr Val。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性肽段，其特征在于所述的肽段為早孕因子的部分肽段。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性肽段，其特征在于所述的肽段為合成多肽。
4. 編碼權(quán)利要求1所述活性肽段的核苷酸序列。
全文摘要
本發(fā)明涉及動(dòng)物繁殖免疫學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及哺乳動(dòng)物早孕因子的部分肽段，該肽段的氨基酸序列為Phe Arg Asp Gly Asp Ile Leu Gly Lys Tyr Val。該肽段為早孕因子的部分合成肽段。本發(fā)明首次合成了哺乳動(dòng)物早孕因子EPF的部分肽段，通過玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該肽段能抑制玫瑰花環(huán)的形成，通過家兔皮膚移植檢測(cè)，也表明EPF在免疫抑制上具有生物學(xué)活性。本發(fā)明的EPF部分肽段為免疫抑制作用的關(guān)鍵肽段，為進(jìn)一步研究早孕因子EPF及其臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C07K7/00GK101367866SQ20081014155
公開日2009年2月18日 申請(qǐng)日期2008年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日
發(fā)明者喬松林, 張改平, 凱 權(quán), 李清洲, 楊蘇珍, 柴書軍, 王愛萍, 王選年, 肖曙光, 東 趙, 趙旭永, 鄧瑞廣, 邢廣旭, 郅玉寶, 陳其新, 陳理盾 申請(qǐng)人:河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院